JNK通路及HSP70在热化疗抑制人小细胞肺癌细胞生长中的作用

目的:研究热化疗对小细胞肺癌生长的影响及其可能的机制.方法:参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120 μg/L紫杉醇及20μmol/L JNK特异抑制剂SP600125(热化联合 SP600125组)、单纯43℃加热(单纯热疗组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照.应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测各处理方式下细胞增殖率的变化,通过Western印迹法检测JNK、磷酸化JNK(pJNK)和HSP70的表达并对数据进行统计学分析.结果:热化联合组细胞增殖率低于对照组、单纯化疗、单纯热疗及热化联合 SP600125组(P＜0.05);p-JNK表达水平在热化联合组中表达明显增高(P＜0.05),但SP600125可抑制其表达,使热化联合 SP600125组细胞的增殖率相应增高(P ＜0.05);HSP70在热化联合组的表达低于单纯热疗组(P<0.05),细胞增殖率也发生了相应变化.结论:热疗可以明显增加紫杉醇对H446细胞生长的抑制作用,且这种作用可能是通过激活JNK信号转导通路或抑制HSP70的表达完成的.     

热疗与紫杉醇联合应用对H446细胞生长和MMP-2 mRNA表达的影响

目的：探讨单纯热疗、单纯化疗以及热化疗联合应用对H446细胞生长及MMP-2mRNA表达的影响。方法：以不同温度（39℃、40℃、41℃、42℃、43℃和44℃）、不同剂量紫杉醇（30μg／L、60μg／L、120μg／L、240μg／L和480μg／L）及热化疗联合的方法处理H446细胞，同时设对照组（0μg／L紫杉醇，37℃），每组又分为3个热疗时间（30min、60min和90min），观察热疗、化疗和热化疗联合对H446细胞生长抑制率的影响；另取H446细胞，分为单纯热疗组（43℃，90min），单纯紫杉醇化疗组（60μg／L、120μg／L和240μg／L），43℃热疗90min联合紫杉醇组（60μg／L、120μg／L和240μg／L），对照组（0μg／L、37℃），采用RT—PCR检测各组细胞MMP-2mRNA的表达。结果与结论：单纯热疗与紫杉醇均可抑制H446细胞的生长，热疗不同程度地增强了紫杉醇对H446细胞的增殖抑制率，热化疗联合对H446细胞生长抑制的最优组合是43℃热疗90min联合120μg／L紫杉醇化疗，在此条件下，H446细胞MMP-2mRNA的表达明显降低，提示热化疗联合对H446细胞增殖的抑制作用可能是通过降低MMP-2mRNA的表达，从而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移而实现。     

不同温度热疗联合紫杉醇化疗对肺癌A549细胞增殖及Akt蛋白表达的影响

目的:探讨不同温度热疗联合紫杉醇化疗对肺癌A549细胞增殖的抑制作用及可能机制.方法:采用不同温度(39 ℃,41 ℃,43 ℃, 45 ℃)热疗联合化疗(50 μg/L紫杉醇)处理A549细胞,以未处理的A549细胞作空白对照,应用MTT法检测各组细胞的增殖率,Western Blotting观察各组细胞Akt磷酸化水平(p-Akt)的变化;在43 ℃热疗联合化疗组加入Akt抑制剂Wortmannin预处理30 min,同上方法分别检测细胞的增殖率和p-Akt.结果:A549细胞的增殖率有随温度的升高而降低的趋势,并以43 ℃组最低(F＝18.26,P<0.05);p-Akt亦随温度升高而降低,并以43 ℃组最低(F=14.25,P<0.05).加入抑制剂Wortmannin后,与未加抑制剂相比,43 ℃热疗联合化疗组p-Akt降至最低,细胞增殖率降低(P<0.05).结论:不同温度热疗联合紫杉醇化疗对肺癌A549细胞增殖均有抑制作用,并以43 ℃为最佳,这种抑制作用可能与抑制Akt信号转导通路的激活有关.     

热化疗对Raji细胞生长、JNK通路及热休克蛋白70表达的影响

目的:观察热化疗对淋巴瘤Raji细胞生长的影响及其可能机制.方法:Raji细胞随机分为单纯化疗组(采用3.00 mg/L阿霉素处理细胞)、单纯热疗组(采用43℃加热处理细胞)、热化疗组(采用43℃加热联合阿霉素处理细胞)和对照组(细胞不作任何处理).应用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用Western Blot检测磷酸化JNK(p-JNK)和热休克蛋白70(HSP70)的表达.结果:对照组、单纯化疗组、单纯热疗组及热化疗组细胞增殖率分别为(100.00 ± 0.00)96、(66.19 ± 2.67)%、(63.44 4 ± 2.43)%和(58.93 ± 3.66)%,p-JNK的表达量分别为(0.45 ± 0.05)、(0.49 ± 0.04)、(0.48 ± 0.03)和(0.67 4 ± 0.13),HSP70的表达量分别为(0.55 ± 0.09)、(1.06 ±0.84)、(8.23 ± 2.12)和(6.46 ± 2.22),化疗(a)和热疗(b)及热化疗(a × b)均对以上指标有影响(Fa分别为83.294、17.586和25.176,Fb分别为62.351、14.411和18.553,F(a×b),分别为94.178,25.153和32.189,P均<0.05).结论:热化疗联合可抑制Raji细胞增殖,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路或部分抑制HSP70蛋白的表达完成的.     

热化联合对肺癌患者A549细胞生长、c-Jun N-末端激酶磷酸化及热休克蛋白70表达的影响

目的观察热化联合对肺癌患者A549细胞生长的影响及机制探讨。方法对A549细胞分别进行单独热疗、单独化疗,热化联合干预及热化联合并SP600125干预,同时选取未做任何处理的A549细胞作为对照组。观察各组细胞增殖率、细胞侵袭力的变化。同时采用蛋白免疫印记法(Western Bolt)检测JNK磷酸化以及热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果热化联合组的A549细胞增值率明显低于单独热疗、单独化疗和热化联合并SP600125组(P<0.05)。热化联合组JNK磷酸化表达明显高于对照组及单独化疗组(P<0.05),热化联合组HSP70表达明显低于单独热疗组(P<0.05)。热化联合干预下,p-JNK表达水平出现上升,与对照组、单独热疗组和单独化疗组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);热化联合并SP600125组的p-JNK的表达水平较热化联合组显著下降(P<0.05)。结论热化联合抑制A549细胞增殖的效果优于单独热疗或单独化疗,作用机制可能与激活JNK信号通路或抑制HSP70表达有关。     

紫花牡荆素对 H446细胞系肺癌干样细胞球形成能力和 p-Akt蛋白表达的影响

目的：研究紫花牡荆素（canstin,CAS）抑制人小细胞肺癌 H446细胞系肺癌干细胞样细胞球形成作用,探讨其作用机制是否涉及降低 Akt 磷酸化蛋白表达水平。方法：肿瘤球形成法获得 H446细胞系第2代球形成细胞,并检定 CAS、及与 LY294002合用对肿瘤球形成率的影响。Western blot 分析 p-Akt、Akt 蛋白表达。结果：CAS以浓度依赖方式降低 H446细胞系第2代球形成细胞肿瘤球形成率和 Akt 蛋白磷酸化水平。LY294002（5.0μmol/L）增强 CAS 抑制球形成以及下调 p-Akt 蛋白表达作用。结论：CAS 具有抑制 H446细胞系干细胞样细胞球形成作用;Akt 特异性抑制剂有效增强 CAS 抑制肺癌干细胞样细胞球形成与 Akt 蛋白磷酸化。     

JNK与Akt通路在夏枯草抑制人淋巴瘤细胞生长中的作用

目的研究夏枯草对淋巴瘤细胞(Raji细胞)生长的影响及可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用50g/L夏枯草(夏枯草组)、50g/L夏枯草+20μmol/LJNK特异抑制剂SP600125(SP600125组)、50g/L夏枯草+1μmol/LAkt特异抑制剂Wortmannin(Wortmannin组)处理Raji细胞,以同体积生理盐水作为对照组,应用MTT法检测各组的细胞增殖率,蛋白免疫印迹法检测各组的JNK和Akt磷酸化水平。结果夏枯草组细胞增殖率低于对照组(P0.05),SP600125组细胞增殖率比夏枯草组增高(P0.05),Wortmannin组细胞增殖率比夏枯草组降低(P0.05);JNK磷酸化水平在夏枯草组中明显升高(P0.05),SP600125可以抑制其磷酸化(P0.05),Wortmannin不能抑制其磷酸化(P0.05);Akt磷酸化水平在夏枯草组中降低(P0.05),SP60015及Wortmannin均可抑制其磷酸化(P0.05)。结论夏枯草可以明显抑制Raji细胞的生长,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路,抑制Akt通路激活实现的。     

紫杉醇联合5-Aza-dC对非小细胞肺癌细胞NCI-H446生长抑制作用的研究

目的探讨紫杉醇（PAC）联合DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-d C）对非小细胞肺癌细胞NCI-H446增殖迁徙及侵袭能力的影响。方法将人小细胞肺癌细胞NCI-H446给予紫杉醇及5-Aza-d C干预处理,根据药物干预方式的不同分为对照组、紫杉醇组及联合用药组;应用CCK-8法检测各组NCI-H446细胞增殖能力的差异;划痕实验和Transwell实验检测各组NCI-H446细胞迁移和侵袭能力的差异。结果 CCK-8结果显示PAC及5-Aza-d C均可抑制NCI-H446细胞的增殖活性,且呈时间依赖性。48 h后紫杉醇组及联合用药组NCI-H446细胞的增殖能力较对照组明显减弱（P〈0.01）;划痕实验结果显示划痕形成24 h后,对照组划痕愈合率为（69.15±0.837）%。而在紫杉醇组划痕处愈合率为（47.30±0.783）%;联合用药组划痕愈合率为（43.45±0.862）%。紫杉醇组及联合用药组NCI-H446细胞在迁移能力方面较对照组差异有统计学意义（P〈0.01）;Transwell实验结果显示对照组NCI-H446细胞转染穿过基质胶的细胞数量为（151.4±6.88）个,紫杉醇组为（66.8±5.17）个,联合用药组为（40.2±4.55）个。紫杉醇组及联合用药组NCI-H446细胞的侵袭能力较对照组差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 5-Aza-d C作为化疗增敏剂可增加非小细胞肺癌细胞NCI-H446对紫杉醇的敏感性,从而提高紫杉醇对非小细胞肺癌的化疗效果。     

布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂联合硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞的作用及其机制

目的 探讨布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton,s tyrosine kinase,BTK)抑制剂依鲁替尼(ibrutinib)和AVL-292单药及联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞系H929和RPMI8226的作用及其机制.方法 用不同浓度的依鲁替尼、AVL-292单药以及联合硼替佐米处理H929、RPMI8226细胞.采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测药物处理前后细胞内BTK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平.结果 依鲁替尼和AVL-292均可抑制H929、RPMI8226细胞增殖,其抑制作用呈浓度依赖性,依鲁替尼对H929、RPMI8226细胞48 h的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC50)分别为(10.41±3.29) μmol/L和(51.65±13.58) μmol/L,AVL-292对H929、RPMI8226细胞48 h的IC50分别为(7.77±2.99) μmol/L和(6.44±1.06) μmol/L.不同浓度的依鲁替尼(5、10 μmol/L)和AVL-292(5、10 μmol/L)分别与不同浓度的硼替佐米(5、10、20、50 nmol/L)联合应用对H929、RPMI8226细胞增殖的抑制率均高于相应浓度单药组(P＜0.05,P＜0.01),不同组合的协同系数R均＞1.0.10 μmol/L依鲁替尼、10 μmol/L AVL-292和20 nmol/L硼替佐米单独作用48 h后,H929细胞的凋亡率分别为(15.12±1.59)％、(18.23±6.38)％和(10.71±1.62)％,均高于对照组[(6.46±1.18)％;P＜0.05,P＜0.01];RPMI8226细胞的凋亡率分别为(9.29±1.44)％、(15.01±4.99)％和(7.58±1.13)％,10 μmol/L依鲁替尼和10 μmol/L AVL-292单药组与对照组[(5.54±1.61)％]比较差异均有统计学意义(P＜0.05);10μmol/L依鲁替尼和10 μmol/L AVL-292分别与20 nmol/L硼替佐米联合后,H929细胞凋亡率分别为(40.31±3.94)％和(51.55±6.39)％,RPMI8226细胞凋亡率分别为(31.86±1.93)％和(43.23±4.03)％,均高于相应单药组(P＜0.01).10 μmol/L依鲁替尼单药和10 μmol/L AVL-292单药作用24 h后,H929细胞内BTK、NF-κB p65、Akt和ERK的磷酸化水平及Bcl-XL蛋白表达水平均较对照组降低(P＜0.05),cleaved caspase-3表达水平均较对照组升高(P＜0.01);两药分别联合20 nmol/L硼替佐米后,对上述蛋白的调节作用均较相应单药组增强(P＜0.05,P＜0.01).结论 BTK抑制剂依鲁替尼和AVL-292对多发性骨髓瘤细胞系H929、RPMI8226有增殖抑制和凋亡诱导作用,并与蛋白酶体抑制剂硼替佐米有协同作用,其机制可能与抑制细胞内BTK活性及下游NF-κB、Akt、ERK信号通路活性,下调抗凋亡蛋白Bcl-xL表达、激活caspase-3依赖的凋亡途径有关.     

(-)-epigallocatechin-3-gallate enhances low-dose cisplatin cytotoxicity to human small cell lung cancer cell line H446

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]联合顺铂(Cisplatin,DDP)对小细胞肺癌细胞株H446的细胞毒作用及其机制.方法 采用MTT法检测EGCG及DDP影响H446细胞增殖的量效和时效关系.采用流式细胞仪检测不同浓度EGCG、DDP及二者联合作用于H446细胞对细胞周期及凋亡的影响.结果 EGCG和DDP均可抑制H446细胞增殖,该增殖抑制作用呈浓度及时间依赖模式.不同浓度的EGCG(80、160 μmol/L)与DDP(1.0μg/nl)联合应用时,可使H446细胞阻滞于G2/M期.EGCG可诱导H446细胞凋亡,并能增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用.结论 EGCG能够抑制H446细胞增殖,诱导H446细胞凋亡,增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用,其机制可能与G2/M期阻滞有关.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。