手霉素抗肿瘤及诱导细胞凋亡作用的实验研究

目的 研究手霉素(manumycin)的体外抗肿瘤及其诱导肿瘤细胞凋亡的作用,初步探讨手霉素抗肿瘤作用机制,为将来这种新型药物的抗肿瘤作用开发提供理论基础和临床应用提供试验依据.方法 MTT法检测药效动力学特征;采用Gimsa染色技术、透射电镜技术、流式细胞技术、DNA提取及琼脂糖凝胶电泳技术测定和观察癌细胞凋亡的情况;流式细胞技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax表达水平.结果 手霉素抑制细胞生长呈时效和量效关系;Gimsa染色、透射电镜结果 显示手霉素诱导人乳腺癌细胞株MCF-7出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析的DNA直方图上可见G1期峰出现细胞凋亡峰亚G1期峰,乳腺癌细胞的周期也发生了改变,多数细胞被阻滞在G2/M期;琼脂糖凝胶电泳可观察到具有凋亡特征的梯形条带;流式细胞仪分析的实验结果 显示手霉素作用MCF-7细胞前后bcl-2和bax蛋白表达水平无明显改变.结论 (1)手霉素体外具有很强的抗肿瘤作用,可以抑制多种细胞增殖.(2)诱导肿瘤细胞凋亡是手霉素发挥抗肿瘤作用的一条重要途径.经手霉素作用后,肿瘤细胞bcl-2和bax蛋白表达水平无明显变化,手霉素诱导肿瘤细胞凋亡作用并非通过调控bcl-2和bax的表达水平实现.     

ADAM17-siRNA抑制人MCF-7乳腺癌细胞体外侵袭能力的研究

目的:观察人MCF-7乳腺癌细胞中解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)的表达受抑制后对肿瘤细胞体外侵袭能力的影响。方法:构建可以表达针对ADAM17的小干扰RNA(siRNA)的干涉载体,转染人乳腺癌细胞系MCF-7。利用real-time PCR法检测肿瘤细胞内ADAM17 mRNA的表达水平,Western blot法检测ADAM17蛋白的表达,Transwell方法检测肿瘤细胞的体外侵袭能力。结果:ADAM17 mRNA及蛋白在MCF-7细胞中呈高表达,转染特异性ADAM17-siRNA后,其表达显著被抑制,同时细胞的体外侵袭能力也明显受到抑制。结论:ADAM17及特异性的siRNA有望成为抗肿瘤侵袭治疗的新方法。     

小干扰RNA逆转人乳腺癌细胞MCF-7多药耐药的体外研究

目的研究以多药耐药相关蛋白(MRP)为靶标的小干扰RNA(siRNA)抑制相应蛋白表达,对人乳腺癌细胞MCF-7药物敏感性的影响。方法以MRP基因为靶标的siRNA转入MCF-7细胞,检测对MRP mRNA和蛋白表达水平的影响及其对抗肿瘤药物IC50的影响。结果经siRNA干扰后,MRP基因的mR-NA和蛋白的表达均有明显降低,肿瘤细胞对相关化疗药物的敏感性明显增加。结论以MRP基因为靶标的siRNA一定程度上逆转了肿瘤细胞的多药耐药性。     

Bcl-2基因反义寡核苷酸对乳腺癌细胞株药物敏感性的影响

目的:探讨bcl-2基因反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的bcl-2蛋白的表达和药物敏感性的影响.方法:用人工合成bcl-2基因反义寡核苷酸预培养人乳腺癌细胞株MCF-7,以免疫组化法检测细胞bcl-2蛋白的表达水平;以MTT法检测bcl-2反义寡核苷酸、阿霉素单独及联合应用对MCF-7细胞生长的抑制情况,比较bcl-2蛋白表达与肿瘤细胞药物敏感性之间的相关性.结果:联合应用bcl-2反义寡核苷酸与阿霉素能够明显增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性,细胞存活率明显下降.免疫组化结果显示MCF-7细胞bcl-2表达水平与细胞药物敏感性有相关性.结论:bcl-2反义寡核苷酸能够抑制MCF-7乳腺癌细胞bcl-2基因的表达,提高MCF-7细胞对阿霉素的敏感性.     

siRNA抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞株VEGF基因表达的实验研究

目的研究siRNA(small interfering,RNA)对乳腺癌细胞SK-BR-3的VEGF基因表达的抑制作用,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法体外合成一条针对VEGF基因的siRNA,使用脂质体转染的方法导入细胞,观察转染后乳腺癌细胞SK-BR-3的增殖变化,MTT法检测细胞存活率,RT-PCR检测转染后VEGFmRNA表达水平的变化,ELISA检测蛋白表达的下降效果。结果所设计的siRNA能有效抑制乳腺癌细胞的生长;降低了VEGFmRNA的表达;蛋白表达水平也显著降低。作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有这种效果,不起作用。结论 siRNA可以有效抑制细胞株SK-BR-3中VEGF的表达,从而抑制细胞生长。应用RNA干扰技术可以有效抑制肿瘤细胞的增殖。     

土槿皮乙酸B不通过Fas途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和M期周期阻滞

目的初探土槿皮乙酸B(PAB)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和周期阻滞。方法MTT法测定PAB对MCF-7细胞的生长抑制情况;相差显微镜观察细胞形态变化;荧光显微镜观察经Hoechst33258染色的DNA变化;流式细胞仪检测用PI染色后MCF-7细胞的周期分布;免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。结果PAB时间剂量依赖性的抑制MCF-7细胞生长。4μmol.L-1PAB在24h使DNA皱缩,在36和48h使DNA皱缩的细胞死亡。4μmol.L-1PAB时间依赖性的促进PARP〔poly-(ADP-ribose)polymerase〕的剪切。在36hPAB剂量依赖性的增加cdc2和核内cyclinB1的表达。Fas拮抗性抗体UB2不影响PAB诱导的凋亡,但Fas激动性抗体CH11促进PAB诱导的凋亡。并且UB2不影响PAB诱导的细胞周期阻滞,Fas激动性抗体CH11不影响G1和S期,但促进凋亡特征性的亚二倍体峰生成。结论4μmol.L-1的PAB通过凋亡方式可明显地抑制MCF-7细胞生长,并促进M期阻滞。Fas途径不参与PAB诱导的凋亡和周期阻滞。     

siRNA沉默CD147基因对肝癌细胞的影响

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默CD147基因在肝癌细胞HepG2中的表达,探讨CD147基因对肝癌细胞生长、凋亡的影响.方法 根据CD147 cDNA序列设计具有短发夹结构的两条DNA序列,与载体pSileneerTM4.1-CMV neo构建重组表达载体,鉴定后转染至HepG2细胞,Western blotting法检测抑制效果,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 成功构建了针对CD147基因表达的干扰质粒,有效抑制了HepG2细胞增殖,促进了HepG2细胞凋亡.结论 CD147靶向RNA干扰重组表达栽体为肝癌的基因治疗提供了可能.     

小分子Pin1抑制剂XP08075的抗肿瘤作用研究

目的：本研究旨在观察小分子肽脯氨酰顺反异构酶Pin1抑制剂XP08075的体外抗肿瘤作用及其对细胞周期及Pin1相关信号通路的影响。方法：WesternBlot法检测多种肿瘤细胞株的Pin1蛋白表达水平,选定相对低表达Pin1的HepG2细胞,脂质体法稳定转染pCMV-Pin1质粒构建高表达Pin1的肝癌细胞模型,MTT检测XP08075对不同肿瘤细胞、亲本HepG2细胞以及高表达Pin1HepG2细胞的生长抑制作用;生长曲线及流式细胞术检测XP08075对肿瘤细胞倍增时间及细胞周期的影响：WesternBlot分析XP08075对Pin1蛋白水平以及Pin1相关信号通路的影响。结果：MTT实验显示XP08075能显著抑制各种肿瘤细胞的增殖,IC50在微摩尔水平,且抑制水平与肿瘤细胞Pin1表达水平有-定相关性：成功构建并鉴定Pin1高表达的HepG2肝癌细胞模型,MTT实验显示,高表达Pin1的HepG2细胞较亲本株更敏感;生长曲线结果显示,XP08075能明显降低HepG2及MCF-7细胞的倍增时间;流式细胞术结果显示,XP08075对MCF-7细胞的周期无显著影响;Westernblot结果显示,XP08075可以呈时间依赖的抑制Pin1的蛋白水平,抑制Pin1下游相关蛋白CyclinB1,β—catenin的表达。结论：小分子Pin1抑制剂XP08075可以通过抑制Pin1表达从而抑制肿瘤细胞的增殖,Pin1抑制剂有望成为新型的抗肿瘤治疗靶点。     

丹参活性单体XH-14类似物的抗肿瘤活性

目的:对14个合成的丹参水溶性单体类似物进行抗肿瘤活性筛选,并研究其抗肿瘤相关机制。方法:MTT法检测化合物的抗肿瘤细胞增殖活性;流式细胞术检测目标化合物对细胞周期的影响;Gi-emsa染色观察化合物对细胞有丝分裂的影响;Western Blot检测化合物对细胞周期蛋白表达的影响。结果:14个化合物中,化合物ERJT-12对多种人肿瘤细胞株均有生长抑制作用,ERJT-12使人乳腺癌细胞株MCF-7阻滞于G2/M期,并使其有丝分裂指数明显提高;ERJT-12作用下,MCF-7细胞中G2/M期相关蛋白质CDK1的活性下降,CyclinB1蛋白表达下调。结论:化合物ERJT-12能抑制肿瘤细胞的生长并引起细胞周期改变,具有较好的抗肿瘤活性。     

水溶性紫杉醇衍生物PLT抗肿瘤活性的实验研究

目的观察水溶性紫杉醇衍生物(Peg-Leu-Taxol,PLT)的抗肿瘤活性及机制.方法以MTT还原法检测PLT对肿瘤细胞生长的抑制作用,以相差显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变,免疫组化方法检测细胞生长相关基因p21wafl表达.结果PLT能明显抑制乳腺癌(MCF-7)、非小细胞肺癌(PG-49)和红白血病(K562)细胞的生长.细胞形态呈凋亡特征性改变,细胞皱缩,核染色质凝缩、碎裂、亮珠状浓染.细胞p21wafl蛋白表达显著增高.结论PLT具有明显的抗肿瘤活性,其诱导肿瘤细胞凋亡与p21wafl基因表达上调有关.     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。     

不同方法治疗慢性宫颈炎的疗效分析

目的慢性宫颈炎是妇科最常见的疾病之一,可引起盆腔脏器炎症,并且与宫颈癌的发生关系密切。本文诣在探讨不同方法在慢性宫颈炎中的疗效。方法回顾性分析新乡市中心医院收治的210例宫颈炎患者,采用药物保妇康栓、聚焦超声治疗及宫腔镜下宫颈电切术的临床效果进行统计分析。结果宫颈电切术治疗有效率为97.9%,明显高于另外两组,差异有统计学意义。结论宫腔镜下宫颈电切术治愈慢性宫颈炎,并且切除宫颈移行带,减少宫颈癌发生。     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

The effect of temperature and of cetrimide on the rate of loss of refractility of spores of Bacillus megaterium

The rate of germination of spores of Bacillus megaterium at 30° is not significantly different from the rate at 37° but the onset of germination is delayed; outgrowth is normal. At 45° germination of some spores occurs but the rate is much slower than at 37°, and there is no lag; emergence occurs from only a proportion of the germinated spores and after 3 or 4 vegetative cells have been produced, replication ceases. A single regression equation can represent the germination rate of the spores at 37° in the presence of from 0.0005 to 0.02% w/v of cetrimide and in its absence. In 0.0005% w/v of cetrimide, germ cells emerge from some of the germinated spores but many of them become swollen and disintegrate. Concentrations of 0.00125% w/v or more progressively inhibit swelling and completely inhibit emergence.     

经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果对比

目的 对比分析经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果.方法 将本院2011年3月～2013年2月收治的90例前列腺增生症患者随机分为观察组（n=45）和对照组（n=45）,观察组患者采用经尿道前列腺汽化电切术治疗,对照组患者采用尿道前列腺电切术治疗,比较两组患者的疗效.结果 观察组的手术时间、术中出血量、术后冲洗时间、术后留置导尿管时间、住院时间少于对照组（P＜0.05）,残余尿量、国际前列腺症状评分和生活质量评分优于对照组（P＜0.05）,但是两组患者的并发症发生率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺增生症具有疗效更确切、出血少、恢复快等优势,可以作为治疗前列腺增生症的首选方法.     

甲巯咪唑治疗甲状腺功能亢进症致白细胞减少12例临床分析

目的探讨甲巯咪唑治疗甲状腺功能亢进症引起白细胞减少的规律及治疗对策。方法回顾分析本院2007年2月至2012年2月使用甲巯咪唑治疗甲状腺功能亢进症致白细胞减少12例的临床资料。结果 75%（9/12）的病例白细胞减少发生在治疗开始的第2～3个月;全部病例白细胞减少均发生在甲巯咪唑15～45mg/d治疗阶段;口服抗白细胞减少药物及皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子治疗的有效率为83.3%（10/12）。结论甲巯咪唑药物可导致白细胞减少、粒细胞减少;用药前后应密切监测血常规,掌握白细胞减少的情况,如明显减少应及时停药,予以升白细胞药物对症治疗,必要时给予重组人粒细胞集落刺激因子皮下注射治疗。