半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8、受体作用蛋白及核因子-κBp65在口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的 探讨口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(caspase-8)、受体作用蛋白(receptor interacting protein,RIP)、核因子-KB(nuclear factor-kB,NF-kB)p65的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)、SP免疫组化法检测30例OLP及15例正常口腔黏膜(正常黏膜组)中caspase-8、RIP、NF-kBp65的表达及细胞凋亡情况.结果 OLP中上皮细胞凋亡指数(6.76±2.32)明显高于正常对照组(2.10±0.42),而固有层的凋亡指数(1.75±0.74)明显低于正常对照组(6.10±0.96),差异均有统计学意义(P<0.05).OLP的上皮层角质细胞caspase-8、RIP、NF-kBp65的阳性率分别为97%(29/30)、87%(26/30)及93%(28/30),均显著高于正常黏膜组(P<0.01).固有层淋巴细胞caspase-8、RIP、NF-p65的阳性率分别为100%(30/30)、90%(27/30)及80%(24/30),均明显高于正常黏膜组(P<0.01).OLP的上皮角质细胞和固有层淋巴细胞caspase-8、RIP、NF-kB065表达水平分别与其自身凋亡指数(apototic index,AI)正相关.OLP上皮层中RIP、NF-kBp65和caspase-8的表达均互为正相关关系,三者在固有层的表达亦互为正相关关系,固有层淋巴细胞NF-kB阳性表达强弱与上皮细胞AJ呈正相关.结论 OLP中同时存在角质细胞凋亡亢进及固有层淋巴细胞凋亡的减少,这种凋亡的异常可能与OLP的发生、发展密切相关.OLP中caspase-8、RIP和NF-kBp65高表达,提示caspase-8、RIP和NF-kB065在口腔扁平苔藓的发病中起一定作用.     

口腔肿瘤中蛋白酶抑制剂Maspin的研究进展

Maspin为一种新发现的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因，在乳腺、口腔等多种肿瘤中表现出抑瘤作用。本文从该基因及其蛋白产物的结构特点、抑瘤作用及机制、临床诊疗作用等方面予以综述。     

口腔扁平苔藓及口腔鳞状细胞癌Caspase-3及Bcl-2表达的研究

口腔扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)是一种皮肤黏膜联发疾病，1972年世界卫生组织将OLP归入癌前状态。口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)为口腔中最常见的肿瘤之一。大量研究认为肿瘤的产生与细胞凋亡受阻有关，细胞凋亡和细胞增殖相辅相承，很多肿瘤正是由于细胞增殖与死亡的速度平衡失调造成的，失调的程度决定着肿瘤的发生和发展。     

心理应激对大鼠髁突软骨中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9表达的影响

目的探讨心理应激对大鼠髁突软骨中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（caspase-9）表达的影响。 方法将48只雄性SD大鼠用随机数表法随机分为6组：心理应激组（1、5和9周）及空白对照组（1、5和9周），每组各8只。应激组大鼠予以慢性不可预见性应激相应周数，应激完成后经旷场实验及糖水偏嗜度实验观察大鼠抑郁情况，数据通过重复测量的方差分析进行处理，随后处死相应时间点对照组及应激组大鼠，采用免疫组织化学染色及蛋白免疫印迹法了解髁突软骨细胞中caspase-9的表达情况，两对应时间点的数据通过两独立样本t检验进行分析。 结果实验中，心理应激组大鼠应激1周后即已开始出现总移动距离减少（t = 8.676，P = 0.011）、中间格停留时间缩短（t = 5.091，P = 0.041）、糖水偏嗜度降低（t = 10.150，P<0.001）等抑郁样改变，且大鼠髁突表面不整、出现了细胞胶原纤维松解的病理表现；应激5周时大鼠髁突胶原破坏持续存在，应激9周时大鼠髁突内软骨细胞减少，出现了无细胞的空白区域；且各时间点应激组髁突中caspase-9的表达均高于相应时间点的空白对照组，差异具有统计学意义（P<0.001）。 结论心理应激可导致大鼠出现活动减少、糖水偏嗜度降低等抑郁样改变，且大鼠髁突软骨中caspase-9的表达明显升高，这可能是应激导致颞下颌关节损伤的机制之一。     

基质金属蛋白酶在口腔鳞癌侵袭和转移中的作用

基质金属蛋白酶在癌细胞侵袭和转移过程中，通过破坯基质的降解平衡。本文就ＭＭＰｓ的活性机理及其在腔鳞癌侵袭转移中的作用进行综述。     

金属蛋白酶,金属蛋白酶组织抑制因子及其在口腔鳞状细胞癌中的意义

金属蛋白酶（Ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ;简称ＭＭＰ）通过对基质降解而促进癌细胞对周围组织的浸润,并通过进入脉管而达远隔部位的转移;金属蛋白酶抑制因子（ｔｉｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,简称ＴＩＭＰ）对...     

MMP1、TIMP1和TIMP3在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌组织及配对正常口腔黏膜组织中基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP1）及基质金属蛋白酶抑制剂3（TIMP3）蛋白和mRNA表达及临床意义。方法研究对象为2005年6月～2008年11月在河北医科大学第四医院口腔科首诊的51例口腔鳞状细胞癌患者。应用免疫组化及RT-PCR法检测癌组织和配对正常口腔黏膜组织MMP1、TIMP1和TIMP3的蛋白和mRNA表达。结果在口腔鳞状细胞癌组织和癌旁正常口腔黏膜组织中MMP1蛋白的阳性表达率分别为82.4%（42/51）和17.6%（9/51）,两者比较有统计学意义（P〈0.05）,mRNA的相对表达量为高于正常口腔黏膜组织的相对表达量（P〈0.05）;TIMP1蛋白的阳性表达率分别为72.5%（37/51）和94.1%（48/51）,差异有统计学意义（P〈0.05）,mRNA的相对表达量差异有统计学意义（P〈0.05）;TIMP3蛋白的阳性表达率分别为78.4%（40/51）和100%（51/51）,差异有统计学意义（P〈0.05）,mRNA的相对表达量差异有统计学意义（P〈0.05）。在肿瘤组织中MMP1/TIMP1/TIMP3蛋白的表达率和mRNA的相对表达量与组织病理学分级﹑有无淋巴结转移差异有统计学意义（P〈0.05）,而与患者的年龄无关（P〉0.05）。结论 MMP1的高表达与TIMP1、TIMP3低表达与口腔鳞状细胞癌的发生、组织病理学分级﹑淋巴结转移有关,可用于判断预后及评估转移风险。     

凋亡蛋白Bcl-2、Bax在白斑、口腔扁平苔藓中的表达

目的:观察凋亡蛋白Bcl-2、Bax在白斑、口腔扁平苔藓上皮细胞中的表达,探讨其在口腔白斑、口腔扁平苔藓癌变过程中的作用机制。方法:采用免疫组化法检测10例正常口腔黏膜上皮、18例口腔扁平苔藓、23例白斑、22例口腔鳞癌上皮组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平。结果:Bcl-2在白斑、口腔扁平苔藓上皮细胞层无异常表达,但在口腔扁平苔藓淋巴细胞浸润带过度表达。Bcl-2在鳞癌组织中呈高表达,与正常黏膜相比有显著性差异(P<0.05)。Bax在上皮单纯增生、轻度、中度不典型增生和低分化鳞癌及糜烂型口腔扁平苔藓组织中呈过度表达,与正常黏膜相比有显著性差异(P<0.05)。结论:Bax参与了口腔白斑癌变的早期事件,而Bcl-2在不典型增生转化为鳞癌的阶段并未发生作用。口腔扁平苔藓的发病机制可能与Bcl-2抑制淋巴细胞凋亡,使细胞免疫亢进,从而刺激上皮细胞Bax过度表达,诱导角朊细胞凋亡有关。     

口腔黏膜癌前病变和口腔鳞状细胞癌中Stat3的表达及意义

目的研究口腔黏膜癌前病变和口腔鳞状细胞癌(OSCC)中细胞信号传导和转录激活因子(Stat3)的表达及意义。方法采用免疫组化方法分别检测9例正常口腔黏膜,口腔扁平苔藓(OLP)和白斑(OLK)共8例,OLP、OLK伴异常增生22例,OSCC19例中Stat3的表达。结果Stat3阳性表达分布于细胞质和细胞核内。正常口腔黏膜、单纯增生、异常增生和OSCC中Stat3阳性表达率分别为11.11%(1/9)、12.50%(1/8)、59.09%(13/22)和84.21%(16/19)。OSCC与正常口腔黏膜、单纯增生、异常增生相比,差异有显著性(P<0.05);异常增生与正常口腔黏膜、单纯增生相比,差异有显著性(P<0.05);而单纯增生和正常口腔黏膜相比差异无显著性(P>0.05)。结论Stat3与口腔黏膜癌变的发生发展有着密切关系,对Stat3表达的研究将有助于口腔黏膜癌前病变癌变的检测和OSCC的早期诊断。     

核仁素和Ki-67在口腔鳞癌与癌前病变中的表达及意义

目的：探讨核仁素和ki-67在口腔正常黏膜（Normal oral mucosa,NOM）、口腔黏膜白斑（Leukoplakia,LK）和口腔鳞状细胞癌组织（Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC）中表达的变化,研究核仁素在口腔癌发病中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学PV法检测10例NOM、34例LK伴异常增生上皮和47例OSCC组织中核仁素及Ki-67的表达。采用SPSS17.0进行统计分析。结果：光镜下核仁素和Ki-67的阳性部位为细胞核,但核仁素在OSCC的部分细胞的胞浆和/或胞膜亦有阳性表达。核仁素和Ki-67在NOM,LK,OSCC的表达强度依次增高,差异有显著性（P〈0.05）。核仁素和Ki-67随着LK和OSCC的病理分级升高表达强度逐渐升高;核仁素和Ki-67在OSCC的分化（高分化比中低分化）差异均有显著性（P〈0.05）。其中,核仁素在NOM和OSCC,NOM和LK,OSCC浸润肌层差异均有显著性（P〈0.05）。Ki-67在NOM和OSCC,LK与OSCC差异有显著性（P〈0.05）。核仁素和Ki-67在淋巴结转移,性别,年龄,民族,吸烟,饮酒表达差异无显著性。经Spearman相关分析,核仁素和Ki-67在NOM,LK和OSCC病理分级表达的阳性率中分布呈正相关（r=0.90,P〈0.05）。结论：核仁素可能参与OSCC的发生、发展,且与其亚细胞定位的变化有一定关系,在OSCC发生浸润方面有较高的敏感性。其与Ki-67一样可以作为细胞增殖的一个指标。     

存活蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 探讨存活蛋白(survivin)与口腔鳞状细胞癌发生和预后的相关性.方法 收集口腔鳞状细胞癌21例(试验组)及良性肿物10例(对照组)的口腔脱落细胞、唾液、血清及组织,应用酶联免疫吸附测定和实时定量聚合酶链式反应技术检测标本中存活蛋白及mRNA表达.结果 试验组脱落细胞的存活蛋白表达质量浓度[(43.93±33.30) ng/L]显著高于对照组[(8.49±3.73)ng/L] (P＜0.01);口腔脱落细胞存活蛋白表达浓度随淋巴结转移而升高(P＜0.05);口腔鳞状细胞癌组织存活蛋白mRNA的表达通过相对定量倍数关系比较,为正常组织的3.3倍,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 存活蛋白在口腔癌的发生过程中起重要作用,口腔脱落细胞的存活蛋白检测可早期诊断口腔鳞状细胞癌并判断预后.     

自噬在Tca83细胞中的作用及自噬相关基因的表达

目的 探讨自噬与口腔癌发生、发展的关系及其在口腔癌Tca83细胞中的作用,以期为口腔癌的治疗提供新的靶点.方法 采用免疫组织化学方法,观察自噬相关基因Beclin-1和MAP1LC3在口腔癌和癌旁组织中的表达;在口腔癌Tca83细胞株中加入顺铂(cisplatin),甲基噻唑基四唑(methy thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞生存率的变化,激光共聚焦显微镜检测自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ的表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素流式细胞术检测细胞凋亡率的变化.结果 Beclin-1在口腔癌组织和癌旁组织中的表达率分别为40％(19/47)和12/16;MAP1LC3在口腔癌组织和癌旁组织中的表达率分别为30％(14/47)和10/16,Beclin-1和MAP1LC3在癌组织中的表达率明显低于癌旁组织,两组间差异均有统计学意义(P＜0.05).MTT结果显示,与对照组相比,使用顺铂作用于Tca83细胞,随时间的延长细胞生存率不断降低,P＜0.05;细胞免疫荧光结果显示,对照组荧光染色强度(213±20)显著低于2、6、12、24、48 h组(分别为233±16、315±27、298±46、259±36、225±27),P＜0.05;流式细胞术结果显示,对照组细胞凋亡率(0.68％)显著低于2、6、12、24、48 h组(分别为2.25％、3.08％、5.23％、7.56％、9.46％),P＜0.05.结论 自噬可能与口腔癌的发生、发展相关,不同水平的自噬对口腔癌Tca83细胞的作用不同,Tca83细胞自身基础水平的自噬可以保护Tca83细胞的生存,过度激活的自噬作为一种细胞程序性死亡与凋亡一起促进细胞死亡.     

口腔鳞癌和癌前病变中端粒酶活性的检测

目的 探讨端粒酶活化在口腔粘膜鳞癌、癌前病变中的表达状况以及癌变过程中的作用。方法 采用端粒酶（ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ）聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）、酶联免疫吸附法和端粒重复放大（ｔｅｌｏｍｅｒｅ ｒｅｐｅａｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌ,ＴＲＡＰ）电泳法对２０例口腔粘膜鳞癌、１０例口腔粘膜白斑、２０例口腔粘膜扁平苔藓和１０例正常口腔粘     

survivin在口腔鳞状细胞癌中的表达及其与 bcl-2,P53,bax表达之间的关系

目的初步探讨口腔鳞状细胞癌中凋亡抑制蛋白survivin的表达和临床意义,以及survivin的表达与bcl-2,P53,bax表达之间的关系。方法采用免疫组化二步法,DAB染色。27例口腔鳞癌和1例乳腺癌阳性对照病例手术前均未进行放疗、化疗或生物治疗。结果27例口腔鳞癌组织中survivin阳性表达率为88.89%(24/27),11例正常组织中survivin没有表达。在口腔鳞癌不同的临床病理分级survivin的表达有差异(P<0.05),其表达随着临床病理分级的增加而增加。Survivin在有淋巴结转移者阳性表达率(100%)高于无淋巴结转移者(82.35%),但统计学比较无差异(P>0.05)。口腔鳞癌中survivin的表达在不同的年龄组和性别间无差异(P>0.05),而在不同部位的鳞癌中表达有差异(P<0.05)。口腔鳞癌中survivin的表达和bcl-2,突变型P53的表达成正相关,(P<0.05),而与bax的表达成负相关,(P<0.05)。结论①Survivin可作为口腔鳞癌诊断的一项重要指标;②Survivin可作为口腔鳞癌基因治疗和免疫治疗的靶分子;③在口腔鳞癌基因治疗方面可以考虑协同抑制突变型P53和bcl-2的表达,或者提高bax的表达来提高疗效。     

口腔粘膜癌前病变和鳞癌组织细胞增殖和凋亡的原位观察

目的研究自口腔正常粘膜上皮向异常增生和鳞癌组织演变过程中细胞增殖和凋亡的变化,阐明口腔癌发病机制.方法采用免疫组织化学S-P法和原位末端标记法检测10例正常口腔粘膜上皮、48例异常增生上皮和42例鳞癌组织中增殖细胞数和凋亡数.结果异常增生上皮细胞增殖和凋亡数均明显高于正常组(P＜0.05),但随着增生程度的加重,伴随着细胞增殖能力逐级增强,细胞凋亡数无明显提高(P＞0.05).鳞癌组织中,随着组织学分级的增加,增殖数明显增多,凋亡数逐级减少.结论癌前病变中,细胞凋亡速度增加跟不上增殖速度,导致向鳞癌转变.癌细胞增殖不断加强,凋亡不断下降,两者共同作用的结果导致鳞癌的发展.     

口腔鳞癌组织中bFGF的表达与血管生成的关系

目的:观察口腔鳞癌组织中碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的表达及其与微血管密度(microvesseldensity,MVD)之间的关系,探讨bFGF对口腔鳞癌血管生成的作用及意义。方法:收集口腔鳞癌标本42例(其中有淋巴结转移者14例)和10例正常口腔黏膜组织,用免疫组织化学染色法探测bFGF和CD34的表达情况并计数微血管密度(MVD)。结果:口腔鳞癌中bFGF表达阳性率为69. 05% (29 /42),显著高于正常口腔组织30% (3 /10),口腔鳞癌中MVD显著高于正常组织,且随病理分化不良而增高(P< 0. 05),有淋巴结转移组MVD显著高于无淋巴结转移组(P< 0. 05),bFGF表达阳性组中MVD明显高于bFGF表达阴性组(P< 0. 05 ),bFGF的表达与MVD呈正相关(P< 0. 01 )。结论:bFGF在口腔鳞癌组织中的高度表达在口腔鳞癌发生发展中起重要作用,并与其血管生成和淋巴结转移有关。     

P16蛋白在口腔疣状癌组织中的表达及意义

目的 :研究P16蛋白在口腔疣状癌中的表达状况并与其在口腔黏膜鳞状细胞癌的表达对比 ,探讨其在口腔疣状癌发生发展中的生物学意义。方法 :采用SP免疫组化方法分别检测 8例正常口腔黏膜、13例疣状癌、10例高分化鳞癌、10例低分化鳞癌组织中P16蛋白的表达。结果 :疣状癌P16蛋白表达缺失率为 2 3 .1% ( 3 /13 ) ,过度表达率为 69.2 % ( 9/13 ) ,其平均染色强度高于高分化鳞癌和低分化鳞癌组 (P <0 .0 5 )。结论 :P16基因变异在口腔疣状癌的发生过程中起一定作用 ,疣状癌中P16蛋白过度表达提示疣状癌可能与HPV关系密切。     

生存素基因诱导人黏液表皮样癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究生存素(survivin)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人黏液表皮样癌高转移细胞株Mc3细胞的生长抑制效应及可能的作用机制,探讨生存素基因作为黏液表皮样癌基因治疗靶点的可行性.方法 设计合成靶向生存素特异性ASODN,转染Mc3细胞.将转染的Mc3细胞分为4组:空白对照组、脂质体转染组、生存素正义寡核苷酸(sense oligodeoxynucleotide,SODN)转染组、生存素ASODN转染组.转染后24、48及72 h倒置显微镜观察Mc3细胞形态学变化,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察转染前后对细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法分析细胞凋亡指数,半定量反转录聚合酶链反应分别检测生存素mRNA的表达.结果 生存素ASODN转染组的Mc3细胞数量明显少于其他组,脱壁悬浮细胞明显增多,可见典型凋亡改变,并呈时间依赖性.生存素ASODN转染组Mc3细胞G1～G0期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,Mc3细胞的凋亡率在转染后24、48及72 h分别为12.96%、14.43%及22.69%,明显高于其他组(P＜0.01),并呈时间依赖性(P＜0.05).生存素ASODN对Mc3细胞增殖抑制率分别为22.35%、39.04%、43.46%,明显高于其他组(P＜0.01),并呈时间依赖性(P＜0.05).生存素ASODN转染组在细胞转染后24、48及72 h Mc3的凋亡指数分别为11.038%、12.172%及18.900%,明显高于其他组(P＜0.01),并呈时间依赖性(P＜0.05).生存素ASODN转染组Mc3细胞生存素mRNA在24、48及72 h的相对表达量分别为0.739±0.008、0.668±0.007、0.500±0.006,相对抑制率分别为18.21%、26.06%、44.82%,明显低于其他组(P＜0.01),并呈时间依赖性(P＜0.01).结论 生存素ASODN可抑制人黏液表皮样癌高转移细胞株Mc3的生长增殖,诱导其凋亡,同时亦可抑制Mc3细胞生存素mRNA的表达,并呈时间依赖性.生存素可作为黏液表皮样癌基因治疗研究的一个靶点.     

口腔鳞癌发生过程中Survivin促血管生成作用的研究

目的探讨口腔鳞癌发生过程中Survivin促进血管生成的作用。方法选取北京口腔医院病理科存档石蜡标本45例,其中口腔白斑伴上皮轻-中度异常增生16例,口腔白斑伴上皮重度异常增生12例,口腔高-中分化鳞状细胞癌17例,另取正常口腔粘膜组织10例作对照。采用免疫组化SP法对各组织病损中Survivin和Von Willebrand Factor的表达情况进行检测。结果免疫组化结果显示,从正常粘膜→白斑伴上皮轻-中度异常增生→白斑伴上皮重度异常增生→口腔鳞癌,Survivin的表达量呈增加趋势;微血管密度则由正常对照组的28．49±11．87条／mm^2升高到口腔鳞癌组的91．98±40．20条／mm^2,各组之间有显著性差异。结论Survivin的过度表达是口腔鳞癌发生过程中的早期事件。随着Survivin表达量的增加,微血管密度明显升高。Survivin的过表达可能抑制了血管内皮细胞的凋亡,从而促进血管的生成。     

Survivin mRNA、Caspase-3mRNA在舌鳞癌中的表达及相关性

目的:检测舌鳞癌组织中凋亡抑制基因Survivin mRNA及Caspase-3 mRNA的表达,探讨其在舌鳞状细胞癌中的意义及相关性。方法:应用原位杂交方法检测10例正常舌黏膜、45例舌鳞状细胞癌标本中Survivin mRNA及Caspase-3 mRNA的表达情况。采用SPSS13.0软件包进行χ2检验及Fisher精确概率法检验,指标间关系采用Spearman等级相关分析。结果:舌鳞癌标本中Survivin mRNA阳性表达率为55.6%,正常对照组全部为阴性,两组差异显著(P<0.01);舌鳞癌标本中Caspase-3 mRNA阳性表达率为42.2%,明显低于正常对照组的80.0%(P<0.05);Survivin mRNA高表达及Caspase-3 mRNA低表达与舌鳞癌组织学分级、颈淋巴结转移相关(P<0.05);与TNM分期密切相关(P<0.01);经Spearman等级相关分析,两者之间呈显著负相关,r=-0.412,P=0.005。结论:在舌鳞癌中,Survivin mRNA参与了抑制Caspase-3m RNA的表达,且这种抑制作用与肿瘤的发生、发展相关。