参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的相关研究

目的探讨参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关因子caspase-8、抗凋亡因子FLIP的蛋白及其mRNA表达的影响。方法选择SD大鼠100只随机分为正常组(10只)、假手术组(10只)、模型组(40只)和参芎注射液治疗组(干预组,40只),采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学及RT-PCR法分别检测caspase-8、FLIP的蛋白和mRNA表达。结果与正常组和假手术组比较,模型组大鼠各时间点凋亡细胞明显增加(P<0.01),caspase-8、FLIP的蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.05,P<0.01)。与同时间点模型组比较,干预组大鼠凋亡细胞明显减少,caspase-8蛋白和mRNA表达明显减弱(P<0.05,P<0.01),FLIP蛋白和mRNA表达分别于再灌注6 h和12 h时间点明显增强(P<0.05)。结论参芎注射液能通过减弱caspase-8表达及增强FLIP表达,从而拮抗大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡。     

脑缺血再灌注后早期神经细胞凋亡的实验研究

目的：观察缺血再灌注后早期皮层、尾壳核和海马细胞凋亡的变化。方法：采用线栓法制成大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型(n=21)，应用末端转移酶介导的dUTP-DIG缺口末端标记法(TUNEL)，标记凋亡细胞断裂的DNA。结果：脑缺血再灌注后12h，左侧大脑中动脉缺血区皮层和尾壳核出现大量凋亡细胞，于再灌注后24h～48h达高峰。结论：神经细胞凋亡可发生于缺血再灌注后的早期．     

海风藤提取物对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 观察海风藤提取物对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后大脑皮质缺血灶周围区caspase-3蛋白、凋亡诱导因子时相表达及神经细胞凋亡的影响.方法 应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的分布,应用原位末端标记(TUNEL)和免疫组化技术分别观察模型组、海风藤提取物组和二甲基亚砜(DMSO)组大脑中动脉栓塞90 min再灌注6、24、72 h时缺血灶周围脑区caspase-3蛋白、凋亡诱导因子(AIF)和TUNEL阳性细胞的时相表达.结果 ①脑L/R后在缺血灶周围区均出现三者的表达,且表达有几乎一致的规律性.②缺血90 min再灌注24、72 h.海风藤组与其他两组比较,caspase-3、凋亡诱导因子阳性细胞和TUNEL染色阳性细胞的数量均明显减少(P＜0.01).结论 ①AIF、caspase-3参与了局灶性脑缺血后神经细胞的凋亡过程.②海风藤提取物可以减少AIF、caspase-3蛋白的表达,减轻迟发性神经元死亡.对缺血性脑组织有保护作用.     

米诺环素对缺血再灌注大鼠脑组织CD11b和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响

目的观察米诺环素对缺血再灌注大鼠脑组织CD11b、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为:假手术组、生理盐水组、预处理组、缺血30 min组、缺血4 h组。每组6只。采用HE染色观察大鼠脑组织的病理改变,免疫组织化学法检测大鼠脑组织CD11b、caspase-3的表达,用图像分析仪测定吸光度值。结果假手术组可见少量CD11b和caspase-3表达,生理盐水组CD11b和caspase-3表达增多。生理盐水组较预处理组、缺血30 min组及缺血4 h组CD11b和caspase-3的吸光度值明显升高,阳性细胞数明显增多,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论米诺环素能在一定程度上抑制脑缺血后CD11b及caspase-3的表达,发挥脑保护作用。     

氯化血红素对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡和caspase-3表达的影响

目的探讨氯化血红素(Hemin)对全脑缺血/再灌注(I/R)海马CA1区神经元的保护作用及机制。方法将138只Wistar雄性大鼠随机分为四组,对照组只凝闭双侧椎动脉,暴露但不夹闭双侧颈总动脉;I/R组凝闭双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉8 min后恢复血液再灌流;预防组在全脑缺血前按药物不同剂量、时间、途径、次数给药,手术操作同I/R组;治疗组手术操作同I/R组,按全脑缺血8 min恢复血液再灌流后按药物不同剂量、时间、途径、次数给药。采用凋亡细胞原位标记法检测各组大鼠海马CA1区神经细胞凋亡阳性个数,采用免疫组化法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3表达变化。结果 I/R组、预防组、治疗组凋亡细胞及caspase-3阳性细胞数明显高于对照组,预防组、治疗组凋亡细胞及caspase-3阳性细胞数明显低于I/R组,P均<0.05。结论 Hemin在脑缺血前后的有效时间内对I/R大鼠海马CA1区神经有保护作用,其机制可能为抑制caspase-3表达,减少细胞凋亡。     

丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响

目的观察丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注（I/R）后大脑皮质缺血灶周围区Caspase-3、Survivin的时相表达及对神经细胞凋亡的影响。方法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、丹红注射液治疗组（治疗组）时检测,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注模型。假手术组于术后,模型组、治疗组于缺血2 h后再灌注6 h2、4 h、48 h、72 h时检测,应用免疫组化技术和原位末端标记法（TUNEL）检测不同时相各组缺血灶周围脑区Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达。结果大鼠I/R后在缺血灶周围区各个时间点均可见到Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达,治疗组与模型组比较,两组Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达趋势基本一致,Caspase-3和TUNEL阳性细胞的表达高峰在I/R后24 h,Sur-vivin的表达高峰在I/R后48 h。治疗组各时间点Caspase-3和TUNEL阳性细胞的光密度值较模型组明显降低（P〈0.05）,Sur-vivin的光密度值较模型组明显升高（P〈0.05）。结论丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与丹红注射液促进Survivin的表达,抑制Caspase-3表达,减轻迟发性神经元的凋亡有关。     

大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2、Bax、FADD表达及对细胞凋亡的影响

目的 观察大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、FADD表达对细胞凋亡的影响.方法 20只SD大鼠随机分为假手术组(n=4)、模型组(n=16).线栓法制备大脑中动脉闭塞模型(MCAO),TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法染色检测Bcl-2、Bax、FADD蛋白.结果与假手术组比较,模型组凋亡神经细胞计数随再灌注时间的延长显著增加,再灌注后24 h表达达高峰,差异有统计学意义(P<0.01).模型组Bcl-2、Bax、FADD蛋白表达随再灌注时间的延长,表达逐渐增强.缺血再灌注6 h后Bcl-2蛋白表达达高峰;缺血再灌注24 h后Bax蛋白表达达高峰;缺血再灌注72 h后FADD蛋白表达达高峰,均有统计学意义(P<0.01).结论 Bcl-2、Bax 、FADD表达在脑缺血半暗带区,随再灌注时间延长,表达逐渐增强,与细胞凋亡表达规律一致.     

大鼠急性脑缺血再灌注细胞凋亡调控因素的研究

目的　探讨 Bcl- 2及 Caspase- 3在脑缺血再灌注损伤中的表达及与缺血性凋亡的关系。方法　制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。通过免疫组化及原位杂交显色方法测定 Bcl- 2、Caspase- 3在脑缺血再灌注损伤后随时间延长蛋白表达的动态变化 ,并用图像分析方法测定二者的免疫强度。结果　图像分析显示 Bcl- 2表达于缺血再灌注 3h后达高峰 ,再灌注 6 h后呈下降趋势 ,2 4 h后表达明显减少 ,与 3h相比 P<0 .0 1。Caspase- 3于缺血再灌注 6 h后达高峰 ,于再灌注 2 4 h后表达下降 ,与 6 h相比 P<0 .0 1。结论　 Bcl- 2及 Caspase- 3均介导了脑缺血再灌后神经细胞凋亡的发生 ,并可能参与迟发神经细胞死亡     

乐尔脉对脑缺血再灌注中期大鼠海马神经细胞凋亡作用与机制

目的 探讨乐尔脉对脑缺血再灌注损伤中期大鼠海马神经细胞凋亡和Fas、Bax表达的作用与机制.方法 采用大鼠右侧大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型,凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)检测海马神经细胞凋亡,免疫组化与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测大鼠海马Fas、Bax、Caspase-3、Caspase9 mRNA的表达,并进行图像处理分析结果.结果 在缺血再灌注损伤海马组织可检测到较多的凋亡细胞,主要分布在CA1区.海马Fas mRNA表达上调,海马CA1区锥体层神经元、胶质细胞、室管膜细胞Fas蛋白表达均明显增加,与凋亡呈同样趋势.海马Bax mRNA上调,但与假手术组比较无统计学意义(P>0.05),Bax蛋白水平却显著增加,下游Caspase -3、Caspase-9 mRNA显著上调.乐尔脉和氟桂利嗪可明显降低缺血再灌注损伤大鼠海马神经元细胞凋亡,降低Fas mRNA和Fas蛋白表达,但不降低Bax mRNA和Bax蛋白表达.结论 乐尔脉限制和减少脑缺血再灌注损伤中期神经细胞凋亡的发生和发展,对局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与乐尔脉降低海马Fas mRNA表达而抑制神经细胞凋亡有关.     

中医药抗脑缺血再灌注细胞凋亡研究进展

综述近十年中医药抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的研究，主要从中医药对神经细胞凋亡调控基因和蛋白表迭的影响方面进行阐述。     

实验性高血压大鼠局灶性脑缺血再灌注后肾上腺髓质素及其mRNA的表达

目的探讨肾上腺髓质素与脑缺血再灌注损伤及高血压的关系。方法应用改良Kellen的方法制备实验性高血压大鼠,采用栓线法制成大鼠大脑中动脉闭塞模型,阻断血流2 h后进行再灌注。免疫组织化学法检测高血压大鼠与非高血压大鼠局灶性脑缺血再灌注后肾上腺髓质素阳性细胞百分率并进行比较,逆转录聚合酶链反应检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织肾上腺髓质素mRNA表达的情况。结果正常大鼠脑内有肾上腺髓质素mRNA表达,假手术后肾上腺髓质素mRNA表达略有增加,但与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05);大鼠脑缺血再灌注后肾上腺髓质素mRNA过表达,与正常对照组及假手术组相比差异有显著性(均P<0.05);大鼠脑缺血再灌注后,缺血侧及缺血对侧肾上腺髓质素mRNA均有高表达,但以缺血侧最显著(P<0.05)。正常对照组和假手术组大鼠大脑组织中均有肾上腺髓质素阳性细胞表达,肾上腺髓质素阳性细胞百分率分别为2.87%±0.78%和2.47%±0.59%(P>0.05)。缺血再灌注非高血压组肾上腺髓质素阳性细胞高表达,以缺血侧为明显,阳性细胞百分率为59.42%±3.71%,缺血对侧亦明显,阳性细胞百分率为36.87%±5.28%,两者相比差异有显著性(P<0.05),与假手术组及正常对照组相比差异也有显著性(P<0.05)。比较高血压组与非高血压组肾上腺髓质素阳性细胞百分率发现,高血压组肾上腺髓质素阳性细胞百分率(缺血侧为78.60%±4.82%,缺血对侧为57.52%±5.22%)明显高于非高血压组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注后肾上腺髓质素及其mRNA高表达。高血压组肾上腺髓质素的高表达更显著。肾上腺髓质素与脑缺血再灌注损伤相关,与高血压血管内皮损伤有关。     

急性高血糖对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的探讨急性高血糖对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响,并分析高血糖浓度与脑缺血再灌注损伤程度及预后关系。方法制备SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于术前30 min腹腔注射25%葡萄糖或生理盐水(10 mL/kg体重),缺血90 min,再灌注24 h后评估大鼠神经缺失症状,检测血清肌酸激酶脑型同工酶水平、脑梗死体积、脑组织含水量,以及神经细胞凋亡和脑组织病理形态学改变。结果与模型组相比,高血糖组大鼠急性期存活率降低(P<0.05),脑组织病理损害明显加重,脑梗死体积、细胞凋亡数、脑组织含水量、颅底出血风险、神经缺失症状及血清肌酸激酶脑型同工酶水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。大鼠血清肌酸激酶脑型同工酶水平与缺血再灌注前血糖浓度有直线相关关系(r=0.68)。结论通过扩大脑梗死体积,促进细胞凋亡,增加脑组织含水量和血清肌酸激酶脑型同工酶水平,急性高血糖加重大鼠脑缺血再灌注损伤。高血糖浓度与脑缺血再灌注损伤程度有直线相关关系,对预后不利。     

预缺血对大鼠心肌缺血再灌注凋亡的影响

为观察大鼠心肌缺血再灌注的致凋亡作用和再灌注早期不同阶段中性粒细胞浸润与凋亡的关系及预缺血对凋亡的影响 ,制备在体大鼠心肌缺血再灌注模型 ,实验分为四组 :缺血 1h再灌注组、缺血 2h再灌注组 ,缺血 3h再灌注组及预缺血组 ,观察分析心功能、梗死面积、中性粒细胞计数、心肌髓过氧化物酶活性及凋亡指数等指标。结果发现 ,缺血再灌注明显引起心脏功能损伤、中性粒细胞浸润和心肌细胞凋亡 ,且随再灌注时间延长而加重 ,预缺血明显减轻其损伤并抑制凋亡。心肌细胞凋亡与中性粒细胞浸润存在显著正相关关系。结果提示 ,预缺血可通过减轻凋亡对心肌发挥保护作用。     

补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的 观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响并探讨其影响机制。方法 48只SD大鼠随机分为3组：①假手术组（n=16）；②对照组（n=16）；③补阳还五汤组（n=16）。线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，再灌注48h后干湿重法测定缺血脑组织含水量，经股静脉注射伊文思蓝观察血脑屏障的通透性，取缺血脑组织提取总RNA和蛋白质分别应用逆转录聚合酶链反应和Western杂交技术检测基质金属蛋白酶9的转录及表达情况，同时电镜观察血脑屏障的变化。结果 脑缺血再灌注48h，对照组缺血侧脑含水量明显升高，伊文思蓝含量也明显增加，电镜观察发现血脑屏障破坏严重，基质金属蛋白酶9的转录与表达也较假手术组显著增加；而应用补阳还五汤处理的大鼠其缺血脑组织含水量明显减少，缺血侧伊文思蓝含量较对照组也明显降低（P〈0．05），同时电镜观察到血脑屏障的破坏减轻，而基质金属蛋白酶9mRNA和蛋白表达水平也明显低于对照组。结论 对大鼠脑缺血再灌注损伤后的血脑屏障具有保护作用，其作用机制可能是通过抑制基质金属蛋白酶9的转录和表达来实现的。     

Apelin-13对急性缺血诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究Apelin在大鼠急性心肌缺血时的变化及外源性给予Apelin-13对大鼠急性心肌缺血损伤的保护机制。方法采用酶联免疫吸附法测定大鼠前降支结扎30、60和120min时心肌组织及血浆Apelin含量;并通过结扎大鼠前降支120min建立急性心肌缺血模型,于缺血前5min经尾静脉分别注射10、100μg/kgApelin-13,观察Apelin-13对心脏功能、心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。结果心肌缺血30～60min时,大鼠心肌组织Apelin含量逐渐增高,而缺血120min时Apelin含量降至正常水平以下,血浆中Apelin含量在缺血120min内呈逐渐增高趋势。缺血前给予100μg/kgApelin-13能改善心脏功能,减少心肌细胞凋亡,抑制促凋亡基因Bax和Caspase-3的表达,并提高抗凋亡基因Bcl-2的表达。结论在心肌缺血早期心肌组织Apelin含量代偿性增高,长时间缺血时含量下降;外源性Apelin-13在急性心肌缺血中的保护作用与抑制心肌细胞凋亡有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡分子C/EBP同源蛋白的表达变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后凋亡分子C/EBP同源蛋白的表达变化,探讨该分子对神经细胞凋亡的影响。方法制备SD大鼠大脑中动脉闭塞模型,逆转录聚合酶链反应法、免疫组织化学染色分别测定大鼠脑缺血半暗带区再灌注后不同时相C/EBP同源蛋白mRNA及蛋白的表达变化;缺口末端标记法测定神经细胞凋亡。结果模型组C/EBP同源蛋白mRNA表达于再灌注后12h达高峰,其蛋白表达于再灌注后24h达高峰,与神经细胞凋亡变化趋势相平行。结论大鼠脑缺血再灌注可诱导C/EBP同源蛋白表达,C/EBP同源蛋白在缺血再灌注所致神经细胞凋亡中可能发挥重要作用。     

电针对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质胎盘生长因子及其受体Flt-1 mRNA和蛋白表达的影响及其促进脑内血管再生的作用

目的 观察电针对SD大鼠局灶脑缺血再灌注后大脑皮质胎盘生长因子及其受体Flt-1 mRNA和蛋白表达的影响,探讨电针促进局灶脑缺血再灌注后脑内血管再生的可能机制.方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血再灌注模型.将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组,将模型组和电针组分为局灶脑缺血2 h再灌注1、3和7天三个亚组.取双侧"合谷"穴为电针刺激穴位.采用免疫组织化学法检测胎盘生长因子及其受体Flt-1蛋白在缺血区大脑皮质的分布及其表达;逆转录聚合酶链反应检测缺血区大脑皮质胎盘生长因子mRNA和Flt-1 mRNA的表达;免疫印迹法定量检测缺血区侧大脑皮质胎盘生长因子蛋白的表达.结果 与正常对照组比较,模型组和电针组各时间点缺血区大脑皮质胎盘生长因子mRNA和蛋白及Flt-1 mRNA和蛋白的表达增加(P<0.05);电针组各时间点缺血区大脑皮质胎盘生长因子mRNA和蛋白及Flt-1 mRNA和蛋白的表达比模型组增加更为明显(P<0.05).结论 电针上调了局灶脑缺血再灌注大鼠缺血区大脑皮质的胎盘生长因子和Flt-1的表达,胎盘生长因子/Flt-1可能促进脑缺血后脑内血管再生.     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血后神经元凋亡及热休克蛋白27和血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨促红细胞生成素对大鼠脑缺血的保护作用。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉制作大鼠局灶性缺血再灌注模型。促红细胞预处理组于缺血开始前2h予腹腔注射促红细胞生成素3000u/kg;缺血再灌注组和假手术组在手术前2h予腹腔注射等量生理盐水。再灌注24h后进行细胞凋亡检测及热休克蛋白27和血管内皮生长因子免疫组织化学染色。结果再灌注24h后,缺血再灌注组可见较多的POD阳性细胞(67.48±11.17个/高倍视野),促红细胞生成素预处理组缺血区阳性细胞数目减少(45.25±4.72个/高倍视野,P<0.01),假手术组偶见个别阳性细胞,正常组未见凋亡细胞;与缺血再灌注组(25.60±4.42个/高倍视野)相比,促红细胞生成素预处理组热休克蛋白27表达增加(67.56±13.84个/高倍视野,P<0.01);促红细胞生成素预处理组血管内皮生长因子表达较缺血再灌注组亦增加(74.90±11.64个/高倍视野比40.14±7.50个/高倍视野,P<0.01))。结论促红细胞生成素预处理后可抑制缺血损伤后缺血侧皮层细胞凋亡,其机制可能是通过上调热休克蛋白27和血管内皮生长因子基因表达而实现的。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响

目的 探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响.方法 采用大脑中动脉线栓法建立右侧局灶性脑缺血大鼠模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、中药组、重组人血管内皮抑制素(ED)组和中药+ED组,腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷,给予不同处理,分别于1、7、14天和28天处死动物,采用免疫组织化学法观察血管新生情况.结果 正常脑内存在一定的5-溴脱氧尿嘧啶核苷、血管性血友病因子阳性细胞,脑缺血后表达迅速增加,7天达高峰,然后逐渐下降;ED组5-溴脱氧尿嘧啶核苷、血管性血友病因子阳性细胞数量明显少于同期各组(P<0.05);补阳还五汤可显著增强5-溴脱氧尿嘧啶核苷、血管性血友病因子的表达,在第7天和14天时明显多于其它各组(P<0.05),7天时补阳还五汤+ED组5-溴脱氧尿嘧啶核苷、血管性血友病因子阳性细胞数多于模型组和ED组(P<0.05),但少于补阳还五汤组(P<0.05).用药7天和14天,补阳还五汤组降低神经功能积分作用与其它用药组比较差异有统计学意义(P<0.05).补阳还五汤+ED组降低积分作用强于模型组和ED组(P<0.05),但较补阳还五汤组作用弱(P<0.05).结论 补阳还五汤可促进局灶性脑缺血大鼠缺血区血管新生,并可部分拮抗重组人血管内皮抑制素阻断的血管新生,提示其可能通过其他途径影响血管新生.     

应用S-腺苷蛋氨酸预处理在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用

目的 研究S-腺苷蛋氨酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 将54只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组和S-腺苷蛋氨酸预处理(S-arleneyslmethioaine,SAM)组.SAM组大鼠缺血前2 h行腹腔注射SAM预处理.假手术组仅做分离,不阻断肝门;其余两组大鼠均在阻断肝门左、中...