血清癌基因C-erbB2蛋白对恶性肿瘤诊断价值的研究

目的:探讨c-erbB2蛋白在诊断恶性肿瘤中的价值。方法:应用c-erbB2试剂盒,根据双抗夹心法原理,定量测定血清c-erbB2蛋白。结果:11种恶性肿瘤患者血清c-erbB2蛋白总阳性率为36.26%(207/571),敏感性依次为肝癌72.22%(26/36),胰腺癌47.83%(11/23),喉癌47.73%(21/44),结直肠癌39.34%(24/61),乳腺癌38..95%(37/95),卵巢癌32.65%(16/49),胶质瘤30.91%(17/55),肺癌31.11%(14/45),淋巴瘤28.13%(9/32),胃癌25.29%(22/87),食管癌22.73%(10/44)。结论:定量检测c-erbB2蛋白,对消化道肿瘤有较高诊断价值,对不同种类恶性肿瘤均有较高敏感性,可作为一种新的肿瘤标志物应用于临床诊断。     

原发性肝癌检测HBVX蛋白的临床价值

目的:研究原发性肝癌检测HBVX蛋白的临床价值。方法:采用聚合酶链反应(PCR)检测血清中乙型肝炎病毒X基因。结果:100例原发性肝细胞癌(PHC)HBVX蛋白阳性51例(51%),34例肝硬化(LC)HBVX蛋白阳性12例(35.3%),28例慢性肝炎(CH)HBVX蛋白阳性7例(25%)。47例X蛋白阳性血清中HBV标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性40例(85.1%),其中PHC患者占28例(59.6%)、LC患者占9例(19.1%)、CH患者占3例(6.3%)。HBV标志物均阴性的血清中,PHC患者50例HBVX蛋白阳性19例(38%)、LC患者29例HBVX蛋白阳性5例(17.3%)、CH患者11例HBVX心明眼亮白阳性2例(18%)。在51例HBVX蛋白阳性原发性肝癌患者中,其中Ⅰ期46例(91.2%),Ⅱ期4例(7.8%),Ⅲ期1例(%),Ⅳ期0例(0),在46例HBVX蛋白阳性的原发性肝癌Ⅰ期患者中有9例在影像学发现之前出现。34例肝硬化(LC)HBVX蛋白阳性12例(35.3%),28例慢性肝炎(CH)HBVX蛋白阳性7例(25%)。经追踪调查,12例HBVX蛋白阳性的肝硬化患者有4例发展为肝癌,7例HBVX蛋白阳性的慢性肝炎患者中,有2例发展为肝癌。结论:HBVX蛋白是癌基因的启动因子,是导致PHC发生的主要原因。     

纯蛋白早餐对血糖的影响

目的观察纯蛋白早餐对2型糖尿病(2-DM)血糖的影响。方法应用治疗前后自身对照方法。30例2型糖尿病患者均在采用皮下注射胰岛素或口服降糖药双胍类以及双胍类 磺脲类治疗,血糖稳定,早餐采用纯蛋白早餐(煮鸡蛋1枚 纯牛奶250 m l),其余两餐相对稳定。观察采用纯蛋白早餐前后3~6个月空腹血糖(FPG),餐后2 h血糖(PPG),肌酐、尿素氮以及血尿β2-微球蛋白。结果纯蛋白早餐与普通早餐相比较,PPG、FPG均下降,差异具显著性(P<0.05),肌酐、尿素氮、血尿β2-微球蛋白的差异无显著性(P>0.05)。结论2型糖尿病治疗中,在药物治疗的基础上,同时给予纯蛋白早餐能起到非常重要的控制血糖的作用。     

硫氧还蛋白与凋亡的关系

硫氧还蛋白(tlaioredoxin,Trx)系统是一个控制细胞还原/氧化状态和细胞增殖/生存的广泛表达的氧化还原系统,它包括:硫氧还蛋白(Trx),硫氧还蛋白还原酶(TrxR),还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和硫氧还蛋白过氧化物酶(TrxP).     

检测HS-C反应蛋白与冠心病的临床意义

目的:探讨冠心脏病患者超敏C反应蛋白(HSCRP)含量变化及其对预后的影响。方法:选择冠心病心绞痛患者38例,其中不稳定型心绞痛20例(A组),稳定型心绞痛18例(B组),健康自愿者20例(C组),采用rocheP800全自动生化分析仪及roche原装进口HSCRP试剂盒,检测58例入选对象的血清HSCRP浓度,并记录1个月内所有患者的病情转归。结果:A组与B组相比差异显著(P<0.01),A组与C组相比差异显著(P<0.01),同时观察到HSCRP水平相对高者病情重预后差,水平相对低者病情转归及预后良好。结论:HSCRP是发生冠心病不稳定型心绞痛的一种危险因子,并且与病情的严重程度正相关,对病情的预测有一定价值。     

多用途的蛋白:钙调节蛋白

美《科学文摘》1981年11月报道:科学家们正在研究一种多用途的蛋白,这种蛋白的作用似乎能调节各种重要的细胞活动,包括细胞的移动、分裂和能的利用。这种物质就是钙调节蛋白(Calmodulin),它在发展新的避孕药、镇静剂、心血管疾病用药方面都有很大的潜在的价值。杜克大学医学中心的瓦纳曼(Thomas     

胸腹水中C反应蛋白等免疫化学指标测定的临床意义

The levels of C-reactive protein(CRP),adenosine deaminase(ADA),total cholesterol (TC),lactate dehydrogenase(LDH),carcinoembryonic antigen(CEA),ferritin(Fer),β2-microglobulin (β2-MG),alpha-fetoprotdn(AFP),carbohydrate anfigen12-5(CA125),carbohydrate antigen19-9(CAl99),carbohydrate antigen15-3(CA153),eyfra211(CY211)and neuron specific enolase(NSE)were detected by automatic chemistry analyzer or electrogenerated chemiluminescence analyzer in pleural and peritoneal exudates from 48 cases oftuberculosis and 82 cases of malignant tumors.The levels of CRP,ADA and β2-MG in tuberculotic exudates were higher than those in malignant exudates(P<0.01).However,the levels of TC,LDH,CEA,Fer,CA153,CY211,NSE,AFP,CA125 and CA199 in malignant exudates were higher than those in tuberculotic exudates(P<0.01).Combined determination of CRP,ADA,TC,LDH,CEA,Fer,and β2-MG in pleural and peritoneal exudates are of value in differentiation of tuberculosis from malignant exudates.Combined determination of CA153.CY211 and NSE in pleural effusions and AFP,CA125 and CA199 in peritoneal effusions can improve the semitivity and specificity of diagnosis for malignant exudates.     

胸腹水中C反应蛋白等免疫化学指标测定的临床意义

The levels of C-reactive protein(CRP),adenosine deaminase(ADA),total cholesterol (TC),lactate dehydrogenase(LDH),carcinoembryonic antigen(CEA),ferritin(Fer),β2-microglobulin (β2-MG),alpha-fetoprotdn(AFP),carbohydrate anfigen12-5(CA125),carbohydrate antigen19-9(CAl99),carbohydrate antigen15-3(CA153),eyfra211(CY211)and neuron specific enolase(NSE)were detected by automatic chemistry analyzer or electrogenerated chemiluminescence analyzer in pleural and peritoneal exudates from 48 cases oftuberculosis and 82 cases of malignant tumors.The levels of CRP,ADA and β2-MG in tuberculotic exudates were higher than those in malignant exudates(P<0.01).However,the levels of TC,LDH,CEA,Fer,CA153,CY211,NSE,AFP,CA125 and CA199 in malignant exudates were higher than those in tuberculotic exudates(P<0.01).Combined determination of CRP,ADA,TC,LDH,CEA,Fer,and β2-MG in pleural and peritoneal exudates are of value in differentiation of tuberculosis from malignant exudates.Combined determination of CA153.CY211 and NSE in pleural effusions and AFP,CA125 and CA199 in peritoneal effusions can improve the semitivity and specificity of diagnosis for malignant exudates.     

结肠癌中多药耐药相关蛋白和肺耐药蛋白的表达

目的:探讨结肠癌中多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药蛋白(LRP)的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测51例结肠癌和32例癌旁相对正常结肠中MRP和LRP的表达情况。结果:51例结肠癌中MRP的阳性率为41.18％(21/51),32例癌旁相对正常结肠中MRP的阳性率为18.75％(6/32),两组比较差异有显著性(P<0.05)。LRP的表达与结肠腺癌的分化程度相关,高分化腺癌的阳性率为90.00％(9/10),中分化腺癌的阳性率为79.66％(23/29),高于低分化腺癌20.00％(1/5)的阳性率,差异有显著性(P<0.05)。结肠癌中MRP与LRP的表达存在相关性(P<0.05)。结论:结肠癌中MRP和LRP均为高表达,两者均可能是结肠癌原发性多药耐药的重要机制,且两者可能有协同作用。临床上检测这2种蛋白的表达,有助于对化疗药物的选择。     

PTEN蛋白及P53蛋白在胆囊癌中表达的研究

目的 探讨PTEN蛋白及P53蛋白与胆囊癌发生、发展的关系以及两者表达的相关性.方法 采用免疫组织化学方法检测40例胆囊癌及10例正常胆囊组织中PTEN蛋白及P53蛋白的表达.结果 胆囊癌组织中PTEN蛋白阳性表达率为 30.0% (12/40),明显低于正常胆囊组织表达率 90.0% (9/10), P ＜ 0.05 .突变型P53蛋白的阳性表达率在胆囊癌中为 47.5% (19/40),而正常组织未检测出.分析显示:PTEN表达与胆囊癌的转移情况有关,PTEN与P53蛋白在胆囊癌中表达呈高度负相关.结论 PTEN缺失及P53突变蛋白参与了胆囊癌的发生,PTEN的低表达与胆囊癌的转移情况有关.     

酵母双杂交文库筛选HBX相互作用蛋白*

目的：筛选鉴定新的乙肝病毒X蛋白（hepatitis B viral X protein,HBX）相互作用蛋白。方法：以HBX为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4 DBD（DNA binding domain）融合表达,将人肝脏cDNA文库编码的蛋白与GAL4的AD区（activation domain）融合表达。通过酵母双杂交筛选鉴定肝脏中与HBX相互作用的蛋白。筛选得到的阳性酵母转化子,经质粒提取和测序后,分析其所包含的序列编码的蛋白,通过再次验证,初步确定该蛋白是否与HBX具有相互作用。结果：筛选得到5个潜在的能与HBX相互作用的蛋白。结论：通过酵母双杂交cDNA文库筛选,得到多个潜在的HBX相互作用蛋白,进一步的验证及功能研究将对揭示HBX促进肝癌发生的机制起到重要的推动作用。     

酵母双杂交筛选雄激素受体辅助调节因子267-α(ARA267-α)的相互作用蛋白

目的:通过酵母双杂交系统筛选与雄激素受体辅助调节因子267-α(androgen receptor-associated coregulator 267-α,ARA267-α)有相互作用的蛋白质,为研究ARA267-α的生理功能寻找证据和方向.方法:以能表达ARA267-α中4个PHD(p1ant homeodomain)和1个SET[Su(var)3-9,Enhancer-of-zeste,Trithorax]结构域的pGBKT7-PHD-SET重组质粒为"诱饵",采用酵母融合(yeast mating)方法筛选预转化的人脑cDNA文库.挑选阳性酵母菌落进行质粒提取、限制性内切酶分析和DNA测序.将测序结果在GenBank中进行核苷酸序列同源性比对,确定它们所对应的基因.通过再次酵母双杂交排除假阳性相互作用.结果:筛选cDNA文库共获得约600个阳性酵母菌落,随机挑选其中的65个菌落提取混合质粒.经过在氨苄青霉素培养盘中筛选,共得到43个文库pACT2-cDNA质粒.选取35个酶切片段不同的文库pACT2-cDNA质粒进行测序,测序结果比对揭示,35个cDNA插入片段来源于16种不同的基因.酵母双杂交证实其中RanBPM是ARA267-d的假阳性作用蛋白.结论:通过筛选cDNA文库发现ARA267-α可以与多个不同的蛋白质相互作用,这提示ARA267-α可能是一个具有多种生理功能的蛋白分子,而RanBPM极可能是一个转录因子.     

Murine cytomegalovirus IE3 protein interacts with Ankrd17

Murine cytomegalovirus(MCMV) IE3 protein is a multifunctional viral protein that inter-acts with several target proteins of both viral and host cellular origin.To investigate the biological func-tion of IE3 in the pathogenesis of the brain disorders caused by CMV,a screening for host cellular pro-teins that could interact with IE3 was performed.By yeast two-hybrid screening,ankyrin repeats do-main 17(Ankrd17,also known as Gtar) was identified as a host factor that could interact with IE3.This interaction was verified by yeast two-hybrid assay and chemiluminescent co-immunoprecipitaion.Map-ping analysis suggested that the 1-148 residues of IE3 were responsible for the interaction.These results suggested that the interaction between Ankrd17 and IE3 may play a key role in the pathogenesis of MCMV-associated disease.     

用酵母双杂交体系筛选与FMRP相作用蛋白的cDNA

目的 采用平双杂交体系寻找与脆性Ｘ智力低下蛋白相互作用的蛋白,探讨ＦＭＲＰ的生物医学功能。方法以编码ＦＭＲＰＰｐｒｏ３２７－Ｔｈｒ５１８肽段的ＣＤＮＡ序列与ＰＢＴＭ１１６质粒ＤＮＡ结合结构域重组作为“钓饵”,从小鼠胎ＣＤＮＡ文库中筛选与之相互作用蛋白的ＣＤＮＡ。结果 筛选出１３个与ＦＭＲＰＰｒｏ３２７Ｔｈｒ５１８肽段特异性地相互作用的克隆,其中１２个为小鼠泛素转运酶９（ＵＢＣ９）,１个是在ＧｅｎＢ     

FasL相互作用蛋白的筛选及其在大肠癌研究中的意义

目的建立FasL相互作用蛋白的酵母双杂交系统，筛选与FasL相互作用的蛋白质，探讨FasL及其相互作用蛋白在大肠癌发生与发展中的意义，为筛选大肠癌早期诊断标志物和治疗靶标提供理论依据。方法以FasL作为诱饵蛋白，在人胎肝cDNA文库中筛选与FasL相互作用的蛋白质；将FasL相互作用蛋白的基因转染人直肠癌HR-8348细胞，通过细胞学实验（四唑蓝比色法），研究FasL及相互作用蛋白对直肠癌细胞耐药性的影响；应用免疫组织化学方法检测FasL及相互作用蛋白在大肠癌标本中表达情况，比较在大肠癌不同分期中这些蛋白的表达差异，研究他们在大肠癌发生与发展中的作用机制。结果筛选出10个与FasL特异性相互作用的蛋白，包括金属硫蛋白1K、1G、2A，组织蛋白酶B，脂肪酸合成酶，干扰素d诱导蛋白27，磷脂清除酶，丝氨酸／苏氨酸样激酶，锚着黏附蛋白以及纤维微丝蛋白一5等。细胞耐药实验证实，FasL与金属硫蛋白和组织蛋白酶之间的相互作用能够增强人直肠癌HR-8348细胞的耐药能力。免疫组织化学结果表明，癌变的大肠癌组织中FasL、组织蛋白酶、金属硫蛋白表达明显增高，高于正常大肠黏膜（P〈O．05）。结论FasL与组织蛋白酶、金属硫蛋白、锚着黏附蛋白等之间的相互作用与大肠癌的侵袭力及癌细胞产生耐药性密切相关：FasL、组织蛋白酶、金属硫蛋白可能为大肠癌诊断的标志物；FasL及其相互作用蛋白可作为治疗大肠癌新的分子标靶。     

Identification of proteins that interact with murine cytomegalovirus early protein M112-113 in brain

Background  Murine cytomegalovirus (MCMV) early protein M112-113 is involved in viral DNA replication and believed to play a crucial role in the viral pathogenesis. To investigate the biological function of M112-113 protein in the pathogenesis of the brain disorders caused by cytomegalovirus (CMV), a screening for proteins interacting with M112-113 was performed by a yeast two-hybrid system.

Methods  Bait plasmid pGBKT7-M112-113 was constructed and transformed into AH109 yeast. After confirmation of the expression of MCMV M112-113 in yeast, the bait yeast was mated with a prey yeast containing mouse brain cDNA library plasmid to screen the proteins interacting with M112-113. Interactions between M112-113 and the obtained proteins were verified by yeast two-hybrid assay and chemiluminescent co-immunoprecipitaion.

Results  Two proteins interacting with M112-113 were identified, including metastasis-associated 1 (MTA1) and zinc finger, CCHC domain containing 18 (ZCCHC18). M112-113 protein could interact with MTA1 or ZCCHC18 in yeast and mammalian cells.

Conclusion  The interactions of M112-113 with MTA1 or ZCCHC18 may be related to the pathogenesis of MCMV-associated disease in central nervous system.

     

利用酵母双杂交筛选与DAT1的LIM2相互作用的蛋白质

目的利用酵母双杂交系统筛选人胎脑组织中能与多巴胺相关转录因子DAT1的LIM2相互作用的蛋白质,以初步了解DAT1的功能.方法构建酵母双杂交诱饵质粒pLexA-LIM2,筛选人胎脑cDNA文库,并用酵母交配试验初步验证.结果获得3个能与DAT1的第2个LIM结构域LIM2结合的相互作用蛋白,通过酵母结合试验证实了它们在酵母中的结合.结论DAT1的第2个LIM结构域LIM2可与唐氏综合征关键区基因2(Similar to Down syndrome critical region gene2,DSCR2)、钙-整合素结合蛋白(calcium and integrin binding protein,CIB)、和HSPC170(CD34 hematopoietic stem/progenitor cells,HSPCs)结合.     

脆性X智力低下蛋白与NDK／Nm23—H2的相互作用

目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索.方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白.应用酵母双杂交体系对FMRP的相互作用区域进行定位.结果 (1)所构建的5月龄人胚海马cDNA酵母双杂交文库含1×106克隆,插入片段平均长度约1.5 kb,有效克隆90%;(2)在该文库中筛选到一个与FMRP相互作用的阳性克隆.序列分析表明该克隆为人的核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2与缺少外显子12、14-17的FMRP异构体,以及含FMRP外显子1-12的克隆相互作用,而与FMRP外显子1-6、外显子2-7不能直接结合.结论人Nm23-H2在酵母细胞内能与FMRP结合,其相互作用区域定位于FMRP的前1-11个外显子.Nm23-H2具反式调控因子特性,FMRP与Nm23-H2的相互作用提示FMRP参与基因表达调控.这一发现有助于进一步研究FMRP在细胞核内的生物学功能.     

CytoTrap酵母双杂交筛选与乙型肝炎病毒HBx 蛋白相互作用的肝细胞蛋白

目的筛选与乙型肝炎病毒HBx蛋白发生相互作用的肝细胞蛋白。方法构建诱饵重组载体pSos-HBx,经测序正确后将
其转化酵母菌cdc25Hα中,检测其在酵母中的表达及有无自激活作用,并利用CytoTrap酵母双杂交的方法筛选与诱饵蛋白HBx
相互作用的肝细胞蛋白。结果获得重组诱饵质粒pSos-HBx,验证可以在酵母中表达诱饵蛋白Sos-HBx,且诱饵质粒在此系统
中没有自激活作用。利用此系统筛选出6个能与HBx相互作用的肝细胞蛋白,分别为纤连蛋白1、翻译调控肿瘤蛋白1、核受体
结合蛋白IQ-WD1、软泡抑素、血清类粘蛋白1、二硫化物异构酶家族A3。结论成功克隆出乙型肝炎病毒HBx蛋白的结合蛋白,
为进一步研究HBx蛋白在肝炎或肝癌过程中发挥的作用提供了新线索。
     

乙型肝炎病毒核心抗原肝细胞结合新蛋白的功能研究

目的为探讨乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)在乙型肝炎发病机制中的作用,筛选、克隆出人肝细胞中与HBcAg相互作用的未知蛋白基因C12并进一步对其功能作初步研究.方法应用酵母双杂交系统-3筛选到与肝细胞蛋白结合的蛋白编码基因C12,克隆该基因并用再次用重回交实验证实作用可靠后,将基因与荧光蛋白基因融合表达,分析该基因表达产物在哺乳动物细胞中的定位;用MTT代谢实验了解C12表达对哺乳动物细胞生长代谢的影响作用;酵母双杂交实验寻找肝细胞中与之相互作用的蛋白;基因芯片技术了解C12基因表达对其他基因表达的影响.结果成功地筛选并克隆出HBcAg的肝细胞结合蛋白C12基因,经回交实验再次证实C12基因的表达产物C12蛋白与HBcAg确切的结合作用.该基因与荧光蛋白基因融合表达转染293细胞、L02细胞后48 h细胞呈现均匀分布的强绿色荧光信号,提示C12蛋白可能主要定位在细胞质内;通过在Bel7402、L02细胞系中进行MTT检测,发现C12在上述细胞中表达没有对细胞的生长繁殖产生明显影响;用酵母双杂交系统-3筛选出肝细胞中与C12蛋白相互作用的蛋白基因16种;基因芯片技术在1 152个基因中筛选出17个差异表达的基因.结论 C12蛋白主要定位在细胞质内,对哺乳动物细胞生长繁殖无明显影响,能与肝细胞中多种蛋白结合,在细胞内的过表达引起的生物过程涉及许多不同基因表达的变化.