胃泌素受体拮抗剂与环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺与特异性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞株MKN-45增殖、凋亡的调控作用。方法MKN-45细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,细胞长至亚单层后加丙谷胺(终浓度5.0mmol/L)和/或NS-398(10.0μmol/L),连续培养48h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析检查细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测凋亡抑制基因bcl-2mRNA及蛋白表达。结果丙谷胺和NS-398协同抑制MKN-45细胞增殖;丙谷胺组、NS-398组和联合用药组的细胞凋亡率分别为24.7%±3.2%,26.7%±3.4%和36.1%±4.6%,显著高于对照组的1.6%±0.6%(均P<0.01);联合用药组的细胞凋亡率明显高于单一用药组(P<0.05)。丙谷胺和NS-398显著下调bcl-2mRNA及蛋白表达(均P<0.05)。结论丙谷胺、NS-398抑制MKN-45细胞增殖,通过下调bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合具有协同抗癌作用。     

西咪替丁对人胃癌细胞SGC-7901生物学行为的影响

目的观察西咪替丁对人胃癌SGC-7901细胞的生长、凋亡、黏附及侵袭行为的影响。方法用四甲基偶氮唑盐（MTr）法检测不同浓度西咪替丁对胃癌SGC-7901细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;用吖啶橙（AO）染色后荧光显微镜观察药物作用后细胞的形态变化;透射电镜观察用药后细胞超微结构的改变;以matrigel为对象,检测西咪替丁对胃癌细胞与细胞外基质黏附作用的影响;利用millicell小室检测西咪替丁对胃癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响。结果在0．5～5mmol／L浓度内,西咪替丁对SGC-7901的生长具有显著的抑制作用,并呈时间和剂量依懒性;0．5～10mmol／L西咪替丁作用后,可观察到典型细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪检测可见凋亡峰,G0／G1期细胞明显增多;0．0625～0．25mmol／L西咪替丁可抑制胃癌细胞和细胞外基质的黏附及对重组基底膜的侵袭。结论西咪替丁可改变细胞周期分布,诱导SGC-7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖。在无毒剂量下,可抑制SGC-7901细胞对细胞外基质的黏附与侵袭。     

阻断胃泌素受体对胃癌细胞增殖和凋亡及其信号通路的影响

目的 探讨阻断胃泌素受体对胃癌细胞增殖、凋亡及其相关通路中关键蛋白表达的影响.方法 试验组使用终浓度为5mmol/L的丙谷胺(胃泌素受体阻断剂)处理胃癌细胞SGC-7901和AGS6d,以不加丙谷胺培养的胃癌细胞SGC-7901和AGS为对照组.四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测各组细胞的生长并绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测各组细胞的细胞周期,Annexin V-FITC/PI 双染法检测各组细胞的凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测典型Wnt/β-catenin通路、核因子κB、磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、核转录因子RelA、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、糖原合酶激酶3β mRNAs的表达;免疫蛋白印迹检测β-catenin蛋白质的表达.结果 用丙谷胺处理后,试验组细胞的生长速度低于对照组细胞,细胞周期中S期细胞百分数也低于对照组细胞,而G0/G1期细胞百分数高于对照组细胞(P<0.05);试验组的细胞凋亡数高于对照组(P<0.05); RT-qPCR结果显示:丙谷胺处理后,胃癌细胞中β-catenin的 mRNA表达量降低(P<0.05).Western blot结果显示丙谷胺处理后,β-catenin蛋白质的表达量降低(P<0.05).结论 阻断胃泌素受体能下调胃癌细胞中β-catenin的表达,抑制细胞增殖,同时促进细胞凋亡.     

利用RNA干扰技术抑制环氧合酶-2表达对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡影响的实验研究

目的研究环氧合酶(COX)-2表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法。方法构建靶向COX-2的短发夹状双链RNA(shRNA)的真核表达质粒WBH1转染人胃癌细胞系SGC-7901,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测COX-2表达被抑制后细胞的增殖和凋亡情况。15只裸鼠随机分为3组,每组5只,皮下接种胃癌细胞。抑制组接种转染抑制质粒的胃癌细胞;正常对照组接种未转染的胃癌细胞;阴性对照组接种转染阴性对照质粒的胃癌细胞。4周后观察比较各组裸鼠皮下形成瘤体的大体和病理情况并计算抑瘤率。结果WBH1高效特异地抑制了人COX-2的表达,抑制率达70.42%。COX-2表达被抑制后,细胞增殖受到明显抑制(P=0.002),细胞凋亡率明显增高,与未转染和转染阴性对照质粒的胃癌细胞的凋亡率相比有统计学意义(52.28%±17.91%、0.52%±0.27%、0.54%±0.16%,P=0.009,实验重复5次)。正常对照组和阴性对照组所有裸鼠均有瘤体形成,平均瘤重分别为(0.490g±0.017g,5只)和(0.490g±0.013g,5只)。抑制组仅2只有瘤体形成平均瘤重0.050g±0.003g,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率为89.8%。结论COX-2与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关,抑制细胞中COX-2的表达可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。通过构建靶向COX-2的shRNA真核表达载体导入细胞可以高效特异地抑制人胃癌细胞中COX-2的表达。     

17肽胃泌素及其受体拮抗剂L-365260对人胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的 旨在探讨17肽胃泌素(G-17)及L-365260对人胃癌细胞生长的影响及其作用机制。方法 采用G-17及L-365260作用于人胃癌细胞株SGC-7901,通过MTT活细胞染色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 G-17在1×10-9～1×10-5mol/L浓度范围内对SGC-7901细胞有明显促进作用。L-365260在1×10-8～1×10-5mol/L浓度范围内对SGC-7901细胞有明显抑制作用。L-365260可明显抑制G-17对SGC-7901细胞的促生长作用。G-17可使SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达显著增加,对Bax蛋白无影响。L-365260不仅可使SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达显著减少,而且还可使Bax蛋白表达显著增加。结论 G-17对人胃癌细胞生长具有促进作用,而L-365260则对其具有抑制作用。上调Bcl-2蛋白表达,以抑制SGC-7901细胞凋亡可能是G-17促进胃癌细胞生长的机制之一。L-365260可能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,以抑制癌细胞生长。     

木脂素对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响及其机制

[目的]研究木脂素对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响及其机制.[方法]利用MTT、克隆实验、划痕实验、Transwell小室实验和Western blot法检测木脂素对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移及对Ezrin和P-Ezrin蛋白表达的影响.[结果]MTT检测结果显示,木脂素可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,且具有浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.01);划痕实验和Transwell小室实验结果显示,木脂素可抑制细胞横向和纵向迁移能力,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),且具有浓度依赖性;Western blot检测结果显示,木脂素可显著下调Ezrin和P-Ezrin蛋白的表达(P<0.01).[结论]木脂素可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移,机制认为与下调Ezrin和P-Ezrin蛋白的表达有关系.     

胃泌素与脾虚证关系的研究进展

关于脾虚病人和牌虚模型动物的胃泌素水平各家报道很不一致。笔者认为,单纯测定血清或组织胃泌素水平的意义十分有限,胃泌素值尚不能做为脾虚证的诊断指标,还需要从胃泌素受体数目、活性、基因表达以及受体后信息传递等方面去深入研究。同时还要研究其他胃肠激素,研究神经内分泌免疫网络与牌虚证的关系,注意牌的主运化以外其他功能的研究,从不同层面和水平去阐明脾虚证的本质。     

pshRNA-DNMT1介导的胃癌AGS细胞凋亡的体内外研究

目的构建沉默DNMT1基因的重组体pshRNA-DNMT1,研究其体内外对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法设计短发夹RNA（shRNA）的寡核苷酸片断,克隆到载体pTZU6＋1中,构建重组体pshRNA-DNMT1,转染胃癌细胞株AGS,用Western 印迹检测DNMT1蛋白质水平变化,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法评估mRNA水平,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）动态监测活细胞数,电镜和原位末端标记技术（TUNEL）观察其体外的促凋亡作用.构建裸鼠胃癌模型,经pshRNA-DNMT1处理后观察瘤体大小,绘制生长曲线;用苏木素伊红（HE）染色法、电镜和TUNEL检测细胞凋亡,用增殖细胞核抗原（PCNA）法评价细胞的增殖能力.结果成功构建重组质粒pshRNA-DNMT1后,进行序列分析得到确证.pshRNA-DNMT1转染AGS细胞后24 h出现DNMT1蛋白质表达量减少,抑制率为28.24%,48 h为68.54%,72 h为81.47%,重组质粒pshRNA-DNMT1对胃癌AGS细胞中DNMT1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24 h抑制率为21.63%,48 h为52.97%,72 h为72.06%.转染后24、48和72 h细胞数存活率为PBS组的79.49%、51.63%和39.16%.pshRNA-DNMT1能抑制肿瘤生长,呈一定的时间和剂量依赖性.结论重组质粒pshRNA-DNMT1能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内DNMT1基因的表达.在胃癌细胞株AGS的体内外实验中均能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.     

酒石酸锑钾对人胃癌细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：通过观察酒石酸锑钾(PAT)在体外对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响,探讨重金属锑剂对实体瘤的治疗作用,为PAT用于临床治疗胃癌提供实验依据及理论基础．方法：采用MTT法检测不同浓度PAT对人胃癌SGC-7901细胞的生长增殖的影响;应用流式细胞术和Hoechst33258染色后荧光显微镜检测细胞凋亡。结果：5,10,20,40μmol/L PAT能明显抑制胃癌细胞增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性．20,40μmol/L PAT作用72h细胞的生长抑制率分别是54．1％和66．6％;Hoechst 33258染色显示PAT作用后,细胞核出现明显的凋亡形态学改变;流式细胞仪检测到凋亡峰,凋亡率以40μmol/L作用48h最大,达35．2％．同时G2／M期细胞明显增多,以对照组的5．4％,增至24．6％。结论：PAT能抑制SGC-7901细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

胆囊收缩素,胃泌素与胆管癌细胞增殖关系的研究

胆囊收缩素、胃泌素与胆管癌细胞增殖关系的研究博士生论文摘要ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｔｈｅＣＣＫａｎｄｇａｓｔｒｉｎ马宽生何振平（第三军医...     

木黄酮靶向抑制MKN-45胃癌细胞Notch1蛋白表达及对增殖和凋亡的影响

目的:探讨木黄酮靶向抑制Notch1蛋白表达对人胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭作用的影响及可能机制。方法:通过不同浓度木黄酮干预胃癌细胞MKN-45,以未干预细胞为正常对照组,Western blot法检测木黄酮抑制Notch1蛋白表达的效果,MTT法检测各组MKN-45细胞的增殖能力,荧光双标流式细胞术检测各组MKN-45细胞的凋亡状况,RT-PCR检测Bcl-2和BaxmRNA的表达水平。结果:木黄酮干预MKN-45胃癌细胞后能明显抑制Notch1蛋白表达,同时抑制MKN-45细胞增殖,促进MKN-45细胞凋亡。木黄酮干预明显上调细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA水平。结论:木黄酮干预可靶向抑制胃癌细胞MKN-45Notch1蛋白表达,抑制胃癌细胞MKN-45增殖并促进凋亡,可能与其上调细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA有关。     

IL-1受体拮抗剂基因多态性与胃癌易感性的相关性研究

目的：探讨白细胞介素 1受体拮抗剂（interleukin 1 receptor antagonist gene IL 1ra）基因多态性与胃癌易感性的关系。方法: 应用聚合酶链式反应（PCR）技术和酶联免疫吸附试验（ELISA）对济南地区65例胃癌患者和71例健康对照IL 1ra基因多态性和幽门螺杆菌(helicobacter pylori Hp)进行分析。结果:与对照组相比,胃癌患者IL 1ra基因多态性差异无统计学意义（P>0.05）。在淋巴结转移、Hp阳性胃癌组与无淋巴结转移和Hp阴性胃癌组,IL 1ra基因多态性差异无统计学意义（P>0.05）。IL 1ra基因多态性与不同分化程度之间的胃癌患者无关。结论: 济南地区胃癌的易感性与IL 1ra基因多态性无关。     

人层粘连蛋白受体调节胃癌细胞多药耐药性的实验研究

目的：探讨相对分子质量为67000的人层粘连蛋白受体（LR）对胃癌细胞多药耐药性（MDR）的调节作用及其机制。方法：应用DNA重组技术构建LR前体蛋白（LRP）的反义RNA表达载体,并借助脂质体将其导入胃癌MDR细胞SGC7901／VCR中。用Western印迹法检测ＬＲ在胃癌细胞中的表达,ＭＴＴ法测定细胞对化疗药物的敏感性,流式细胞仪测定细胞周期以及阿霉素在细胞内的蓄积和潴留。结果：转染LRP反义RNA表达载体显著降低了LR在SGC7901／VCR细胞中的表达。转染细胞（SGC7901／VCR－anLRP)对长春新碱、阿霉素、5－氟尿嘧啶和顺铂的敏感性明显升高,细胞内蓄积和潴留的阿霉素也明显增多。细胞周期分析表明,SGC7901／VCR－anLRP细胞发生了G1期阻滞,并出现了自发性凋亡。结论：LR可能通过影响药物蓄积和细胞凋亡参与对胃癌细胞MDR的调节。     

外源性FHIT基因表达对胃癌细胞株MGC-803凋亡作用的影响

目的 :探讨外源性 FHIT基因的表达对胃癌细胞株凋亡作用的影响。方法 :将载有人外源性 FHIT基因的真核表达质粒 p Rc CMV- FHIT用脂质体介导转入胃癌细胞株 MGC- 80 3,用流式细胞仪、普通光镜、透射电镜观察 FHIT基因的表达对 MGC- 80 3细胞凋亡的影响。结果 :转染 FHIT基因的 MGC- 80 3细胞的凋亡水平 (32 % )与空质粒转染组 (12 .15 % )相比明显增高 ,且存在显著性差异 (P<0 .0 1) ,同时细胞的生长周期出现了明显的 G0 /G1期阻滞 (6 4.375 % vs 4 9.5 % )。结论 :外源性 FHIT基因能诱导胃癌细胞株 MGC- 80 3凋亡 ,细胞生长周期阻滞。     

胃癌癌前病变演化与细胞凋亡和增殖的关系

OBJECTIVE: To clarify the correlation between apoptosis/proliferation and the expressions of oncogene bcl-2 and P53 in the changes from superficial gastritis, intestinal metaplasia, dysplasia, gastric cancer in early stage to advanced gastric cancer. METHODS: TUNEL method was used to detected apoptosis. Immunohistochemical analysis was used to detect the expressions of proliferating cellular nuclear antigen(PCNA), bcl-2 protein and P53 protein. Results In the patients of superficial gastritis, atrophic gastritis, intestinal metaplasia, dysplasia, early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastric cancer, apoptotic indexes were: (6.4 +/- 1.9)%, (14.1 +/- 4.1)%, (23.3 +/- 6.1)%, (17.4 +/- 2.6)%, (11.3 +/- 3.7)%, (6.3 +/- 2.0)% respectively. PCNA indexes were: (11.3 +/- 2.2)%, (18.9 +/- 6.5)%, (20.3 +/- 7.3)%, (40.0 +/- 10.6)%, (53.1 +/- 10.9)% and (72.4 +/- 18.4)% respectively; the expression rates of bcl-2 were 10.0%, 23.3%, 40.0%, 56.7%, 85.7% and 46.7%. The expression rates of P53 were: 0%, 0%, 0%, 4.3%, 14.3% and 53.3%. The difference in the majority of observed indexes were significant (P < 0.05-0.01). CONCLUSION: During the changes of gastric cancer, the apoptotic and proliferating indexes incerased simultaneously in superficial gastritis, atrophic gastritis and intestinal metaplasia. However, PCNA indexes further increased but apoptotic indexes decreased in dysplasia, early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastric cancer. The former may be the phenomenon in early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastic cancer. The former may be the phenomenon in ear early gastric cancer the latter may be the phenomenon in advanced gastric cancer.     

miR-200c在CIK细胞诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对胃癌细胞凋亡的影响,探讨微RNA-200c(miR-200c)在此过程中的作用.方法 实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞(MKN-45、BGC-803)miR-200c表达,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡.构建包含miR-200c作用位点的psiCHECK2-FAP-1 3’-UTR,转染胃癌细胞,双荧光素酶报告基因试剂盒检测胃癌细胞Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)荧光素酶活性.结果 CIK细胞促进MKN-45细胞miR-200c表达[(2.10±0.25)倍,P＜0.05]及凋亡(P＜0.01),而miR-200c inhibitor能够拮抗此过程(P＜0.05).另外,miR-200c mimics诱导胃癌细胞凋亡(P＜0.05),BGC-803细胞也发现相似趋势.miR-200c直接作用于FAP-1基因3’-UTR区,且CIK细胞降低胃癌细胞荧光素酶活性[MKN-45细胞:(49.67±2.36)％,P＜0.01;BGC-803细胞:(43.86±4.41)％,P＜0.01].结论 CIK细胞通过上调miR-200c促进胃癌细胞凋亡,为CIK细胞治疗胃癌提供新的数据.     

嵌合锚定T细胞致癌胚抗原阳性胃癌细胞的凋亡效应

目的探讨CEA靶向性嵌合锚定T细胞的制备方法,并检测其活化功能及诱导CEA阳性胃癌细胞的杀伤活性。方法分离外周血单个核细胞（PBMC）,然后用免疫磁珠分离得到CD8^＋T细胞。将重组真核表达载体抗-CEA-scFv-CD3 zeta-pcDNA3．0采用脂质体转染上述T细胞以制备CEA靶向性的嵌合锚定T细胞;用流式细胞仪检测其CD69的表达,以检测嵌合锚定T细胞活化功能;将嵌合锚定T细胞与胃癌细胞HGC-27、SGC-7901共培养,检测后者膜联蛋白V的表达,分析嵌合锚定T细胞致胃癌细胞的凋亡效应。结果将已制备的CEA靶向性嵌合锚定T细胞培养12h、24h后,检测T细胞的活化信号CD69表达率分别为40．5％±3．4％、48．3％±2．8％,证明嵌合锚定T细胞具备活化功能。检测与嵌合锚定T细胞共培养的胃癌细胞HGC-27、SGC-7901,凋亡率分别为47．8％±4．2％、18．7％±2．8％,两者之间有统计学意义（P〈0．05）。结论CEA靶向性嵌合锚定T细胞可特异性识别CEA阳性胃癌细胞并促使后者凋亡,这种治疗策略将为胃癌的临床诊治提供一种有希单的涂释。