淀粉酶测定用碘标准液新的配制方法

碘-淀粉比色法中,碘标准液先配成50mmol/L贮存液,再在使用时配成5 mmol/L碘应用液.在使用过程中我们发现,由于碘易升华及氧化,配制的贮备液用塑料盖密封保存放置一段时间后整个试剂瓶有大量碘吸附和渗漏,且放置在碘贮备液周围的试剂亦受部分碘的污染.若改用密封性好的橡胶盖,则时间一长,橡胶膨化,碘浓度明显降低.购买的试剂盒也经常发现碘的渗漏及试剂盒外包装受碘的污染.我们将碘标准液配制方法略加改进,很好地解决了这个问题.     

ELISA底物溶液配制的改进

邻苯二胺(OPD)为ELISA辣根过氧化物酶的常用底物,因其在溶液中不稳定,故试验时需新鲜配制。但每次用量很小,很不方便。为此,我们对底物溶液的配制进行了改进,效果较好。A液: 0.2mol/L Na_2HPO_4,每10ml加3%H_2O_2 0 1ml,放冰箱密闭保存。B液:取OPD 85mg,加无水乙醇1.5ml溶解,然后加入0.1mol/L     

用硝基—PAPS和微孔板测定血清锌

作者利用氰化钾与血清中的锌和其他干扰离子结合成氰化物,再用水合氯醛使锌离子首先游离出来,与硝基—PAPS 反应呈色。仪器微板读数仪(双波长分光光度计,干涉滤光片577nm 和650nm,半峰宽为7和12nm)MPRA4i 型。微量混合器。微孔板(扁平底、8或16孔)。试剂(1)Tris 缓冲液(0.4mol/L,pH8.1)。(2)KEN 溶液(0.5mol/L)。(3)GT 溶液(pH8.1):盐酸胍基67g,加Tris 缓冲液90ml 液解后,用3mol/L NaOH 或3mol/L HCl 调节至pH8.1,然后用Tris 缓冲液补足至100ml。贮于塑料瓶中,室温至少可稳定一个月。(4)GTAC 溶液:L-抗坏血酸钠盐20mg 溶解于10ml GT 溶液中,加KCN 溶液0.1     

超氧化物岐化酶的简易凝胶扩散过筛法

此法是在琼脂凝胶中利用核黄素和四甲基乙二胺经光照使还原的核黄素与分子氧相互作用产生O_2~-.产生的超氧负离子还原NBT呈不溶性蓝色甲?.当超氧化物歧化酶(SOD)存在时则可阻止蓝色甲?的生成.试剂和方法缓冲液A:10mmol/L磷酸钾缓冲液, pH7.8.标准液:牛红细胞超氧化物歧化酶(3000μ/mg)用缓冲液A配成1mg/ml的贮存液,并在缓冲液A中透析过夜.     

速率法测定血浆（尿液）游离血红蛋白

血红蛋白（Hb）中亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，本文用ELISA试验广泛采用的显色剂TMB（3，3，5，5—四甲基联苯胺），建立了测定血浆和尿液中游离Hb的速率法，效果满意．1材料和方法1．1仪器意大利BT－224半自动生化仪。1．2试剂①TMB溶液：TMB用二甲亚飒溶解并配成10mg／ml，以0．1mol／LpH5．4醋酸钠一枸橼酸缓冲液稀释成1mmol／L，4℃避光保存备用。②0．3％H2O2：溶液：3％H2O2lml加于9ml蒸馏水中，4℃稳定6小时。③Hb标准液：Hb质控物用盐水稀释至100mg／L。1．3方法TMB液和0．3％H2O2。液各0．5ml混匀，再加肝素…     

触珠蛋白对便潜血单克隆抗体法检测的影响

单克隆抗体便潜血检测灵敏度高 ,不受饮食影响 ,特异性高。但笔者在工作中发现 ,有少数粪便标本在含一定量蛋白时潜血呈阴性 ,当除去蛋白后 ,结果为阳性 ,就这一现象我们进行了探讨。一、主要试剂　万华公司“速而准”便潜血单克隆抗体法试剂盒 ,触珠蛋白 ( HP)标准液 ( 1 g/L,上海亚都生物技术研究所 ) ,血红蛋白 ( Hb)标准液( 1 46g/L,解放军总医院临检科 )。二、方法　 ( 1 )首先试验　用 Hb标准液配成0 .0 0 1 g/L的 Hb液 ,分别取 5ml加入 1号和 2号管 ,1号管继加用标准品配成 0 .0 2 g/L的 HP液0 .5ml,2号管加生理盐水 0 .5ml,混…     

组织液中粒细胞弹性蛋白酶的测定法

由中性粒细胞释放的粒细胞弹性蛋白酶(GE)在炎性反应中具有重要作用,由于受蛋白酶抑制剂的影响,难以从血中检测出GE 的活性。作者介绍一种测定GE 活性的新底物,并检测了支气管肺泡灌洗液(BALF)、水疱液(BF)和滑膜液(SF)中GE 的活性。BALF 与SF 标本离心去掉细胞、碎片和粘液,上液贮存在—70℃备用。BF 标本采取后立即冰冻,贮存在-70℃备用。试剂:L—焦性谷氨酰—脯氨酰—L—缬氮酸—对硝基苯胺(简称S—2482)底物溶液,用二甲亚砜溶解,并用蒸馏水稀释四倍,使浓度为2mmol/L。操作:取标本200μl,加缓冲液(0.1mol/LTris,0.96mol/L Nacl,pH8.3)200μl,混合后放37℃,加底物200μl 记录反应开始时间,此混合物中组成的最后浓度底物为0.67mmol/L,Tris 为0.33mol/L,Nacl为0.32mol/L。于37℃3小时后,分别加入5.8mmol/L 亚硝酸钠(用0.48nmol/L,Hcl 配制)500μl。     

尿沉渣中无晶型盐类三种去除方法的比较

尿沉渣中的无晶型盐类呈细颗粒状,量多时掩盖视野,影响镜检.去除的方法有3种:(1)0.52mol/L醋酸法:尿沉渣1滴加0.52mol/L 醋酸1小滴于玻片上、混匀后镜检.(2)3.24mol/L 盐酸法:操作同上.(3)0.015mol/L EDTA Na_2(原为0.4%的     

AVL-9140电解质分析仪工作液的配制

用自配试剂与瑞士进口原装试剂进行了比较.K~+,Na~+,iCa~+的相关系数分别为0.9854,0.9822,0.9344.用自配试剂测定样品的批内变异系数(CV)分别为1.0%,1.8%,1.98%.批间CV分别为1.03%,2.39%,2.42%.自配试剂的主要成分(mmol/L):NaCl NaAc惰性盐 还原剂 KCl CaCl_2 Tris pHA标准液1100 400 30 0.4% 50 12.5 60 7.2B标准液700 30 10 0.4% 18 25 60 6.8参比液为1.2mol/L KCL.A,B标准液均用1molHCl调到所需pH,用时蒸馏水稀释10倍,A液加适量防腐剂.     

糖基化指甲蛋白,血浆蛋白及血红蛋白测定法

糖基化血红蛋白(GHb)和糖基化血浆蛋白(GPP)是糖尿病患者血糖控制较准确的指标.我们在测定GHb 和GPP 的基础上,进一步测定了糖基化指甲蛋白(glycosylated nail protein,GNP)的水平.一、试剂0.5mol/L 草酸溶液、0.05mol/L α-硫代巴比妥酸(TBA)溶液、400g/L三氯醋酸溶液(TCA)均用双蒸馏水配制,4℃冰箱保存;100μmol/L 5-羟甲基糖醛(5-HMF)贮存液:     

由冷凝集素引起的与EDTA无关的假性血小板减少

过去文献报告,假性血小板减少,多数与乙二胺四乙酸(EDTA)依赖性抗体有关。但本文报告2例非EDTA 的依赖性假性血小板减少,是与温度有关的由冷凝集引起假性血小板减少,现报告如下。方法:采集病人血液加在标准收集管里,内含抗凝剂K_3—EDTA(取15%EDTA 溶液0.05ml,加全血5ml,即含EDTA7.5mg/5ml 血),枸橼酸钠(取枸橼酸钠0.11mol/L 0.5ml/4.5ml 全血)和肝素钠(143USP 单位/10ml 全血)。采集病人毛细血管血液收集在微量吸管内(0.78mg 干燥Na—EDTA/500μl 毛细血管血液)或用草酸铵抗凝(市售)。     

柱前氧化铝固相丹磺酰化高效液相色谱法测定尿中的儿茶酚胺

作用介绍了柱前固相丹磺酰化测定儿茶酚胺的灵敏和选择性的高效液相色谱方法.肾上腺素(EP),去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)这些儿茶酚胺(CAs)的标准贮备液,由溶于0.04M的高氯酸中并稀释到浓度为1μmol/ml,贮藏于4℃,临用前仍用0.04M的高氯酸稀释,内标物3.4-二羟基甲苯胺(DHBA)溶液也用类似的方法配制.儿茶酚胺的测定步骤:将50μl的内标液(1.0nmol/ml)和200μl儿茶酚胺溶液或尿液一起加入含有25mg氧化铝和2mgEDTA-Na_2的试验管中,在加入100μl 3M Tris/HCl缓冲溶液(pH8.6)后,于室温下将试管缓慢地振摇10分钟,氧化铝用30ml水冲洗;然后吸出冲洗液,再加入200μl的丹磺酰     

用4-氨基安替比林作ELISA底物显色剂

我们用4-氨基安替比林(4-AAP)作底物显色剂做ELISA,获得了满意结果.介绍如下.1 4-AAP 溶液称取苯酚(国营练湖化工厂生产,A.R.)550mg,4-AAP(上海试剂一厂,A.R.)24mg,溶于100 ml 0.1 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液     

三种试剂对红细胞表面CD38抗原去除效果的研究

目的 比较0.2 mol/L二硫苏糖醇(DTT)、0.2 mol/L二巯基乙醇(2-ME)及1％菠萝蛋白酶对红细胞表面CD38抗原去除的效果.方法 将2％～5％红细胞悬液与0.2 mol/L DTT、0.2 mol/L 2-ME及1％菠萝蛋白酶按照体积比1:4分别混匀,37℃孵育30 min洗涤后制备试验用红细胞悬液,...     

尿蛋白的溴酚蓝测定法

常用考马斯高蓝法(CBG-250法),测定尿蛋白,此法显色稳定,精密度高,但线性范国窄(0～1g/L)且不同蛋白质呈色不同。我们根据国外有关资料,设计了溴酚蓝法。一、试剂(1)1mmol/L溴酚蓝液:溴酚蓝0.67g溶解于10ml的0.1mol/L NaOH液中,加蒸馏水至1000ml。(2)缓冲液:在0.1mol/L柠檬酸液1000ml中,加入0.2mol/L Na_2HPO_4液20ml,调整     

血清锌自动化分析法的临床应用

1　材料和方法1.1　仪器　日立 7170 A全自动生化分析仪 (日本产 )。1.2　试剂　 1锌标准液 :30 .6μmol/ L ;2试剂 :购买中美合资宁波亚太生物技术公司生产的试剂盒。1.3　方法　日立 7170 A测定参数 :标准液浓度 30 .6 ,标本量5 .0μL ,试剂量 10 0μl测定方法 1点法 ,副 /主波长 70 0 nm /5 70 nm,测定点 (10 ) (5 )。2　结果2 .1　波长选择　锌与络合剂 5 - Br PAPS反应产生紫红色络合物的最大吸收波长为 5 6 0 nm,本仪器无此波长 ,故选用 5 70 nm为主波长。2 .2　标准曲线　按本方法测定 ,锌含量在 2～ 6 0μmol/ L范围内观察仪器…     

耐力运动对高脂饮食小鼠一氧化氮及氧化型低密度脂蛋白水平的影响

目的:研究耐力性运动对高脂饮食小鼠血浆一氧化氮以及氧化型低密度脂蛋白水平的影响,探索耐力性运动是否有可能作为药物以外的预防动脉硬化的手段。方法:实验在天津体育学院实验中心完成。采用南京建成生物工程公司试剂盒测定一氧化氮浓度,依试剂盒说明书操作。氧化型低密度脂蛋白的测定方法如下:将血浆0.3mL注入预先加入EDTA(100mmol/L)的试管中,加入柠檬酸钠和肝素的混合溶液3mL(柠檬酸钠0.064mol/L,肝素5万U/L),震荡混匀后室温放置15min,4000r/min离心15min,弃上清,在沉淀物中加入Tris-HCL0.3mL(0.02mol/L,pH值8.6)再次溶解,取再次溶解液0.3mL依次加入乙酸1.5mL(200g/L),硫代巴比妥酸1.5mL(8g/L),震荡混匀后,沸水浴60min,流水冷却后,加入正丁醇4mL,强力震荡混匀,3000r/min离心5min,532nm波长下测定吸光度。结果:高脂饮食组动物血浆一氧化氮水平犤(24.90±9.06)μmol/L犦明显低于正常饮食组犤(45.03±10.23)μmol/L犦(P<0.05),而高脂饮食结合运动干预组动物血浆一氧化氮水平犤(38.11±12.71)μmol/L犦明显高于高脂饮食组(P<0.05),并与正常饮食对照组相比无显著性差异(P>0.05)。另外,高脂饮食组动物血浆氧化型低密度脂蛋白水平犤(4.13±0.66)μmol/L犦明显高于正常饮食对照组犤(2.04±0.52)μmol/L犦(P     

广西首例心脏移植患者术后环孢素A的药物监测

背景:口服环孢素A的生物利用度和药代动力学个体差异大,故进行药物血药浓度监测,对安全、有效地用药和减少急性排斥反应具有重要临床意义.目的:建立心脏移植后环孢素A血药浓度监测方法,分析药物浓度与剂量、疗效的关系,建立最佳给药方案.设计、时间及地点:样本对照观察,2003-08/09在广西医科大学第四附属医院药剂科临床药学实验室完成.对象:广西壮族自治区首例心脏移植患者,环孢素A胶囊、强的松、霉酚酸酯三联用药治疗.方法:受者早上服药前取静脉血3 mL,肝素抗凝,混匀.在10 mL具塞玻璃试管内加入内标环孢素B贮备液10 uL,加入1 mL全血,再加入0.2mol/L NaOH溶液1 mL,混匀.取上清液加入另一试管,于60℃水浴挥干,冷却至室温,残渣加入0.05 mol/L盐酸与乙腈混合液100 μL溶解,再加入400 μL正己烷洗涤,离心5 min,取下层液20 μL进样.运用高效液相色谱法以环孢素B为内标、214 nm处紫外检测,对心脏移植受者进行环孢素A血药浓度监测,并及时给予用药剂量调整.主要观察指标:患者是否出现急性排斥反应,环孢素A血药谷浓度.结果:受者高效液相色谱法分析有很好的分离度,环孢素A绝对回收率均不低于75%.监测结果显示环孢素A药物最高浓度产生在移植后第10天,根据结果及时调整用药剂量,移植后14 d谷浓度维持在200～300 μg/L,受者未出现急性排斥反应.结论:高效液相色谱法能满足心脏移植后环孢素A的血药浓度监测需求,心脏移植后短期环孢素A血药谷浓度维持在200～300 μg/L较适合.     

酶法测定红细胞肌酸作为细胞成熟程度的指标

红细胞的肌酸含量与红细胞的成熟程度有关,据报道可用作评价红细胞平均成熟程度的一个敏感指标。作者采用酶法测定红细胞肌酸含量,比较了方法学问题,报告了正常值,并对与红细胞代谢有关的疾病进行了探讨。测定方法:EDTA抗凝血在室温离心10分钟(4000×g),取1ml压积红细胞加等体积的0.15mol/L NaCl溶液,混合后室温离心10分钟(4000×g),上液弃掉,加两滴Tritonx-100液使之溶血。取400μl溶血液于室温内加1ml饱和硫酸铵溶液(4mol/L)沉淀血红蛋白,在低压(35mmHg)条件下用玻璃纤维滤器过滤,所获得的清亮无血红蛋白     

乳酸脱氧酶同工酶的焦磷酸缓冲液-琼脂糖电泳分析法

以琼脂糖凝胶作载体,并用焦磷酸缓冲液进行电泳,则所有的血清蛋白皆从原点向阳极泳动.应用这一系统进行乳酸脱氢酶同工酶的分析获得了良好的结果.在0.025mol/L焦磷酸钠-盐酸缓冲液中加入琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及蔗糖,煮沸溶解后在载波片上加2.5mL使之凝固.用琼脂电泳装置并以石油醚冷却,室温下100V稳定电压电泳60分钟.电泳后将载体浸于显色液中,在40℃暗处静置90分钟〔显色液的组成为:磷酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH7.9)15ml,乳酸钠(2.0mol/L水溶液)1ml,NAD~++(15mmol/L水溶液)1ml,PMS(1.6mmol/L水溶液)0.5ml及NTB(1.2m mol/L水溶液)2.5ml〕,再浸入甲醇∶水∶冰醋酸(5∶5∶1)混合液—小时.最后