干血滤纸片在胎甲球检测上的应用

近年来,国内外采用甲种胎儿球蛋白(αFG)的检测来诊断原发性肝癌,证明这是一种有效的诊断方法。在检测技术上,以双向琼脂扩散试验最为常用,并认为此法特异性高,但敏感度较低;为了提高胎甲球的检出率,国内应用对流免疫电泳技术     

软骨发育不良一家系的FGFR3基因突变分析

目的探讨一个中国汉族软骨发育不良家系的临床表型及FGFR3基因突变类型,确定其致病原因。方法在获得知情同意后对该家系成员进行病史采集和临床检测,并对其中3例患者和3例正常亲属及家系外100例正常对照者采血进行DNA提取,采用聚合酶链反应结合DNA直接测序法对FGFR3基因的第10、13外显子及其部分内含子进行突变检测。结果该家系中3例患者的临床表现为身材矮小、四肢过短、腰椎前突、头颅增大、前额突出。3例患者在FGFR3基因对应cDNA序列发现C1620A(N540K)杂合突变及第13内含子3’剪接位点上游23 bp处发现一G>A杂合突变,3例正常亲属及家系外100例正常对照者均未发现该两种突变。结论FGFR3基因的N540K突变是导致该家系软骨发育不良的关键性分子病因,而内含子IVS13-23突变可能加重了患者的病情。     

滤纸干血片法筛查孕中期唐氏综合征的可行性

目的探讨滤纸干血片法应用于孕中期妇女唐氏(Down′s)综合征产前筛查的可行性。方法应用自动时间分辨荧光免疫分析(Auto DELFIA)法检测滤纸干血片洗脱液中血清甲胎蛋白(AFP)和游离β 人绒毛膜促腺性激素（游离β hCG）的含量,并对干血片检测方法的精密度、回收率、检测限等进行评估。结果该方法检测AFP水平的变异度为2.5%～6.8%;回收率为95.1%;检测低限为0.5?u/mL;检测游离β hCG水平的变异度为4.1%～7.0%;回收率为97.6%;检测低限为1?μg/L;发病风险为1/128,本研究共测定孕妇1?320例,筛查出阳性病例85例,筛查阳性率为6.4%,经羊水染色体检查确诊1例Down′s综合征胎儿。与国际公认的金标准血清学筛查结果的符合率为98.4%。结论采用滤纸干血片法替代血清学方法测定孕中期女性血中AFP和游离β hCG的含量,用血量少,方便快捷可行,不增加筛查成本,筛查结果准确可靠。     

滤纸干血片样品用于自愿咨询检测HIV抗体的研究

目的研究在自愿咨询检测HIV抗体工作中,用采集末梢血制成滤纸干血片替代采集静脉血的可行性。方法采集200例自愿咨询受检者的手指末梢血及静脉血(抗凝全血和非抗凝血)。将手指末梢血和静脉抗凝全血分别制成滤纸干血片样品,非抗凝血则分离出血清,并在不同条件下保存。用ELISA法和免疫印迹法检测HIV抗体,将检测结果进行比较。结果各类滤纸干血片与静脉血清经ELISA法检测,定性结果一致。与血清的测量结果相比,直径6 mm的滤纸干血片OD值有显著性差异(P0.05)。直径10 mm的滤纸干血片OD值无显著性差异(P0.05),滤纸干血片样品用生理盐水和pH7.4的PBS洗脱均可,300μL的生理盐水洗脱效果更好。滤纸干血片保存1周的结果稳定。用免疫印迹法检测,滤纸干血片与静脉血清判读结论一致。结论采集末梢血制成的滤纸干血片,以ELISA法检测HIV抗体,结果可靠、稳定,且操作简便,运输和保存无生物危害,可替代采集静脉血用于自愿咨询HIV抗体检测工作。     

软骨发育不全性侏儒与FGFR3基因跨膜区的突变

软骨发育不全(ACH)是由于软骨内成骨缺陷而膜性化骨正常的遗传性软骨发育不良性侏儒症之一。此病为常染色体显性遗传病,其中80 %～90 %是由于新生突变所致[1]。新生儿发病率为1/15000～1/77000。此病80 %为散发,无家族史。患者智力通常正常。近来文献报道,在ACH患者中发现了3种基因突变均发生于成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)基因跨膜区,FGFR3基因是ACH的侯选基因。1主要临床表现、X线特征及伴有的症状或并发症根据国内外文献报道,患者主要临床表现为:短肢型侏儒,头大、额凸、塌鼻,脊柱后凸和三叉状手,智力和性发育正常[2]。X线特征:表现为小立方样锥体,下部腰椎弓根间距自上而下进行性缩窄。其锥体成弹头状,椎板前后径变短。第1、2腰椎前部偶有鸟嘴样改变。四肢长骨粗短,干骺端成烧杯口状膨大[3]。与ACH同时伴有的症状或并发症有:(1)运动发育迟缓:主要影响肢体近端使身长发育受限。(2)肺炎及呼吸衰竭:胸口畸形狭小而发育不全导致呼吸道感染。(3)交通性脑积水:软骨大孔畸形,导致脑脊液回流障碍所致。(4)听觉障碍:咽鼓管畸形而导致中耳炎影响听力。2FGFR3基因结构及功能Fibroblast...     

干血滤纸片试剂盒和水煮法提取间日疟原虫DNA用于PCR检测的比较

目的：比较水煮法和干血滤纸片基因组DNA分离试剂盒提取间日疟原虫DNA用于PCR检测及克隆研究的差异。方法：采集间日疟患者末梢血制备干血滤纸片,分别用水煮法和QIAamp DNAmini kit试剂盒提取间日疟原虫基因组DNA10份。PCR扩增LDH基因,并克隆质粒pGEM-PvLDH。分析比较2种提取方法的差异。结果：水煮法和试剂盒法提取的间日疟原虫gDNA,均扩增出LDH基因特异条带,但试剂盒提取的gDNA目的条带亮于水煮法。结论：水煮法操作简便、快速、经济,在等量血源条件下,所得DNA量较少、纯度较低;试剂盒提取可获得较高的得率,在定量检测和复合扩增时受到的影响因素较少,成功率较高。     

软骨发育不全患者FGFR3突变基因分析简

目曲对9例初步诊断为软骨发育不全患者及其父母进行成纤维生长因子受体3（fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3）基因突变筛查,以判定患者是否为软骨发育不全,同时验证中国人群中FGFR3是否为引起软骨发育不全的致病基因。方法提取9例患者及父母的外周血液DNA,并针对FGFR3外显子10序列设计引物,进行PCR扩增、纯化,并对PCR扩增产物进行毛细管电泳测序。结果9例患者的FGFR3基因第10外显子1138位点均发生了G〉A碱基转换,使得其所编码蛋白FGFR3的第380位氨基酸由甘氨酸（G1y）变为精氨酸（Arg）。结论通过毛细管测序,9例患者均可以确诊为软骨发育不全,同时也验证了在中国人群中FGFR3基因是导致软骨发育不全的致病基因,G1138A为热点突变。     

一种简便,快速筛查软骨发育不全FGFR3基因G380R突变的检测方法

自１９８９年Ｏｒｉｔａ等首次报道单链构象多态（ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）分析技术以来［１］，ＳＳＣＰ技术已成为基因突变筛查的重要检测手段，但是常规操作过程中采用的同位素或银染显影方法给临床实验室带来许多不便，我们将此技术加以改进，使其更为简便、快速适于临床开展软骨发育不全的ＦＧＦＲ３基因Ｇ３８０Ｒ突变检测。１　材料与方法１１　按常规方法提取ＤＮＡ１２　ＰＣＲ引物及条件　实验所用ＦＧＦＲ３基因第１０外显子上游引物为５ＡＧＧＡＧＣＴＧ…     

用滤纸血片与血清检测HBsAg结果比较

1982年9～12月对在县医院门诊检查肝功能分别用滤纸血片和血清检测HBsAg共289人份标本,现将方法和结果报告如下: 用杭州生产的直径为15cm的新华牌定量和(或)定性滤纸,先将滤纸摺好剪成四条,每张滤纸可供12人份使用。在县医院门诊检验室检查肝功能者,每人取静脉血2ml,先滴到准备好的滤纸上两滴(滴在一起,直径约1.5cm),然后缓慢注入准备好的无菌试管内,留作分离血清检查对照。用卫生部北京生物制品厂出品的HBsAg诊断血球和     

应用PCR-SSCP法检测乳腺癌患者血中p53基因突变

[目的]探讨乳腺癌患者外周血p53基因突变的临床意义.[方法]应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）的方法检测35例乳腺癌患者和20例良性肿瘤患者外周血中p53基因外显子5～8的突变情况.[结果]乳腺癌患者p53基因突变的检出率为40.0%（14/35）,显著高于对照组良性肿瘤患者的5.0%（1/20）（P＜0.05）.[结论]p53基因突变在乳腺癌外周血中有较高的检出率,是乳腺癌发生的早期信号.     

薄血膜及滤纸片干血滴分离疟原虫DNA方法的比较

DNA检测以特异性强、敏感性高、简便快速 ,被广泛应用于疟疾的诊断及普查。疟原虫 DNA的分离方法虽多 ,但多以静脉血分离为主 [1 ] 。有学者应用指尖取血制作滤纸片干血滴及静脉全血制作的薄血膜进行疟原虫 DNA的分离 [2 ] 。本文就两种方法对疟原虫 DNA的分离进行比较 ,探讨其应用价值。1　材料与方法1.1　血样制备1.1.1　恶性疟原虫血样品制备 :用采自非疟疾流行区、经姬姆萨染色显微镜检查确诊恶性疟原虫阴性的正常人静脉血对人工培养的恶性疟原虫 FCR3株进行倍比稀释 ,制成恶性疟原虫浓度分别为 1.5× 10 4/μl、1.5× 10 3/μl、…     

检测艾滋病患者滤纸干血斑标本中的HIV-1 DNA

目的为适应艾滋病大面积流行病学筛查的需要,建立一种简便、可靠的采集标本、检测ＨＩＶ－１感染的方法,以尽早发现处于“窗口期”、婴儿期及基层边远地区的感染者。方法滤纸干血斑标本的收集：模拟现场情况,采集经确证的艾滋病患者或ＨＩＶ－１感染者和健康对照者的外...     

干血滤纸片DNA分析新生儿CYP21基因和SRY基因方法初探

【目的】初步探讨干血滤纸片DNA分析新生儿CYP21基因和SRY基因的方法。【方法】采用chelex-100提取20例新生儿的干血滤纸片DNA,采用一步法PCR扩增CYP21基因Exon1-3片段,与脐带血DNA的结果进行比较。同时检测了11例男性新生儿样本的SRY基因。【结果】应用干血滤纸片DNA模板,一步法PCR扩增CYP21基因的扩增效率为10%(2/20),脐带血的扩增结果为100%。SRY基因的扩增效率为100%(11/11)。【结论】利用干血滤纸片DNA模板,一步法PCR扩增的效果不适于新生儿CYP21基因的分析,可以对假两性畸形新生儿进行性别快速筛选。     

干血片荧光法检测苯丙氨酸用于苯丙酮尿症患者的监测

苯丙酮尿症 (phenylketonuria ,PKU )是由于肝脏苯丙氨酸羟化酶缺乏所致的一种常染色体隐性遗传性疾病。由于苯丙氨酸 (phenylalanine ,Phe)在体内不能转化为酪氨酸 ,而蓄积在体液中 ,大量的Phe及其异常的代谢产物抑制脑组织的谷氨酸代谢 ,同时也使神经递质5 -羟色胺的生成量减少 ,损害脑细胞的正常生理功能 ,并对神经系统功能造成损害。自20世纪80年代以来 ,我国已将PKU列入新生儿筛查项目之一 ,筛查方法经历了由细菌抑制法向干血片荧光法的转变。目前我国PKU患者的治疗监测基本采用静脉血高效液相法或血清荧光法 ,由于上述方法检测所…     

滤纸干血片TSH免疫放射分析用于新生儿甲状腺功能低下筛查的初探

为了达到新生儿先天性甲状腺功能低下(简称新生儿甲低)的早期诊断及早期治疗的目的,我们用引进的滤纸干血片 TSH 免疫放射法,在青海省缺碘性疾病流行区进行了新生儿甲低筛查。我们认为 TSH 放射免疫分析具有实验方法简单易操作,灵敏度较高,样品采集,运输及贮存方便之特点,故适合于新生儿甲低的筛查,尤为适合于采集静脉血较困难的农村、山区及偏远地区的筛选     

用DNA扩增法检测人类干血痕的性别

作者报道用DNA扩增技术对人类微量干血痕进行性别鉴定。方法是从干血痕纸片提取DNA,用引物Y1.1、Y1.2和Alu9.1、Alu9.2,通过聚合酶链反应(PCR)对Y特异3.4kb重复序列和人类共有的Alu重复序列进行扩增。选用引物Y1.1、Y1.2,8例男性样本均有扩增产物,8例女性样本则无。选用引物Alu9.1、Alu9.2,男女各4例样本均有扩增产物。     

环介导等温扩增法直接检测阳性血培养瓶中大肠埃希菌

目的：应用环介导等温扩增技术（LAMP）建立一种快速敏感的直接检测阳性血培养瓶中大肠埃希菌的方法。方法根据美国国立卫生研究院基因序列数据库（GenBank）上大肠埃希菌的lacZ（登录号：M74750）基因序列,设计4条特异引物（2条内引物、2条外引物）,对lacZ基因进行扩增,对扩增反应进行优化。分别验证该方法的特异性及敏感性,并与传统培养法进行比较。结果在300份阳性血培养瓶中,采用LAMP法检测到68株大肠埃希菌,所设计引物对大肠埃希菌扩增的特异性及敏感性均较好,与传统培养法比较,灵敏度和特异性均达100％,但传统培养法的检出时间为3d,而LAMP法的检出时间只需1h。结论LAMP检测大肠埃希菌是快速、低成本、特异性强、灵敏度高的方法,适合临床开展。