藏药小檗皮对糖尿病大鼠视网膜PKC-β、VEGF、HIF-1α表达的影响

目的：探讨藏药小檗皮对糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C（PKC-β）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）和低氧诱导因子（HIF-1α）的影响。方法：SD大鼠采用链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔内注射的方法造模,随机分为模型组、小檗皮低剂量、中剂量和高剂量组、二甲双胍组、羟苯磺酸钙组、小檗碱组和对照组。成模后开始灌胃给药,小檗皮低剂量组、中剂量组、高剂量组分别按成人剂量的5、10、20倍给药,二甲双胍组和小檗碱组按成人剂量的10倍给药,模型组和对照组予灌服蒸馏水。所有实验大鼠于灌胃6周后处死。采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测视网膜PKC-β、VEGF和HIF-1α表达,采用免疫组织化学法检测视网膜HIF-1α蛋白表达。结果：与正常组比较,糖尿病大鼠视网膜中PKC-β、VEGF、HIF-1αmRNA和蛋白表达显著升高（P〈0.01）;与模型组比较,小檗皮高、中剂量组视网膜PKC-β、VEGF和HIF-1α mRNA表达显著降低（P〈0.01）,PKC-β、VEGF和HIF-1α蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）,小檗皮低剂量组大鼠PKC、VEGF和HIF-1α表达明显降低（P〈0.05）。结论：小檗皮对糖尿病大鼠视网膜具有保护作用,其作用机制可能与整体多点调控糖尿病大鼠视网膜的PKC-β、VEGF、HIF-1α表达有关。     

小檗皮水浸膏对db/db糖尿病小鼠视网膜病变的影响(Ⅱ)

目的:观察小檗皮浸膏对基因突变自然发病型db/db糖尿病小鼠视网膜蛋白激酶C-β(PKC-β),缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探索该药防治糖尿病视网膜病变的作用机制。方法:选用18周龄db/db糖尿病小鼠,db/m型同性同窝瘦型小鼠为对照。采用随机方法将db/db小鼠分为db/db组,小檗皮高、中、低剂量组(1.50,0.75,0.38 g·kg~(-1)),羟苯磺酸钙组(0.23 g·kg~(-1)),盐酸小檗碱组(0.135 g·kg~(-1))。相关药物连续ig 2个月,并于ig 2个月末处死小鼠。采用免疫组化方法观察3种因子在视网膜结构的表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测视网膜内3种因子的基因与蛋白表达。结果:与db/m组比较,db/db组视网膜组织PKC-β,VEGF免疫组化反应呈阳性,表达显著增加(P0.01);HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达量有升高趋势,但差异无统计学意义;db/db组三种因子的基因与蛋白表达显著增加(P0.01)。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P0.05),小檗皮高剂量组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P0.01),其他各给药组较db/db组PKC-β表达有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组视网膜组织HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达有降低趋势,但差异无统计学意义;小檗碱组、小檗皮低剂量组视网膜组织VEGF免疫组化反应呈阳性,表达明显降低(P0.01),其他各给药组视网膜组织VEGF有降低趋势,但差异无统计学意义。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组HIF-1α基因表达明显降低(P0.05),其他各给药组PKC-β,HIF-1α,VEGF基因表达有降低趋势,但差异无统计学意义。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、低剂量组PKC-β蛋白表达显著降低(P0.01),小檗皮中剂量组PKC-β蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义;羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、中剂量组HIF-1α蛋白表达显著降低(P0.01),小檗皮低剂量组HIF-1α蛋白表达量有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组VEGF蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:小檗皮浸膏防治db/db糖尿病小鼠视网膜病变的作用机制可能与抑制PKC-β,HIF-1α,VEGF表达有关。     

莪蚕健胃方调控HIF-1ɑ、VEGF表达对胃癌前病变的影响

目的:探讨莪蚕健胃方调控胃癌前病变大鼠HIF-1ɑ、VEGF蛋白及其mRNA对血管生成的影响。方法:60只Wistar雄鼠分为正常组5只,造模组55只。用MNNG、脱氧胆酸钠等刺激24周制作胃癌前病变模型。确认造模成功后,将造模组随机分为5组,包括模型组,维甲酸组、莪蚕健胃方(8.05g/kg组、16.10g/kg组、32.20g/kg组),每组10只,给药16周后处死取材。观察大鼠病理组织,进行MVD计数,以及HIF-1ɑ、VEGF蛋白和mRNA的检测。结果:与正常组比较,造模组的MVD值和HIF-1ɑ、VEGF蛋白和mRNA的表达均明显升高,且随异型增生程度加重而增强(两两比较P0.05)。HIF-1ɑ蛋白及mRNA、VEGF蛋白及mRNA与MVD的相关系数r依次为0.742,0.621,0.770,0.690,所有P0.01。在MVD值、HIF-1ɑ、VEGF二者蛋白和mRNA的表达方面:与模型组比较,除莪蚕健胃方8.05g/kg组差异无统计学意义外,其余治疗组均能明显降低其表达。与维甲酸组比较,莪蚕健胃方16.10g/kg组差异无统计学意义,32.20g/kg组的表达明显降低。结论:(1)胃癌前病变组织中血管生成活跃,MVD及HIF-1ɑ、VEGF的蛋白与mRNA呈现高表达,且随异型增生程度加重而增强。(2)胃癌前病变组织中HIF-1ɑ、VEGF的蛋白和mRNA与MVD呈正相关,提示二者参与了血管生成。且HIF-1ɑ与VEGF在蛋白水平上呈正相关,提示二者在蛋白层面与血管生成有协同作用。(3)莪蚕健胃方可抑制胃癌前病变的血管生成,可能是通过削弱HIF-1ɑ、VEGF基因的转录及表达而发挥治疗作用的。其作用与剂量有关。     

参青粉对溃疡性结肠炎大鼠HIF-1、VEGF表达的影响

目的观察参青粉（参三七、青黛）对三硝基苯磺酸（TNBs）诱导的溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜低氧诱导因子．1（HIF-1）、血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨其作用机制。方法将60只SD大鼠,分为正常组、模型组、SASP组和参青高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组采用三硝基苯磺酸（TNBs）诱导溃疡性结肠炎模型。造模后第3天开始各组给予相应的干预措施,连续干预7天后处死大鼠。采用免疫组化及Realtime-PCR的方法测定各组大鼠结肠黏膜HIF-1及VEGF含量。结果与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜HIF-1和VEGF免疫组化指数、相对mRNA表达升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。与模型组比较,参青高、中、低剂量组大鼠结肠黏膜HIF．1和VEGF免疫组化指数、相对mRNA表达均下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。参青各剂量组间比较,高剂量组HIF-1免疫组化指数较中低剂量组升高,差异有统计学意义（P〈0．05）,而高、中剂量组VEGF免疫组化指数与低剂量组差异有统计学意义（P〈0．05）;参青高、中剂量组HIF-1和VEGF相对mRNA表达,与低剂量组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论参青粉能有效下调溃疡性结肠炎HIF．1及VEGF的表达,改善肠道缺氧环境,修复肠道屏障,达到缓解大鼠溃疡性结肠炎的效应。     

黄芪丹参颗粒药对干预肾纤维化Wnt/β-catenin信号通路的实验研究

目的：观察黄芪丹参颗粒药对对肾纤维化信号通路Wnt/β-catenin 的影响,并初步明确其量效关系。方法：40 只雄性SD 大鼠,随机分为5 组,即正常组,模型组,黄芪丹参颗粒药对（1:1）低剂量治疗组,黄芪丹参颗粒药对（1:1）中剂量治疗组,黄芪丹参颗粒药对高剂量（1:1）治疗组。除正常组外,其余大鼠均建立单侧输尿管梗阻（UUO）模型。各组给予相应药物治疗,收集尿液检测24 h 尿蛋白、琢1-微球蛋白（ɑ1-Microglobulin,ɑ1-MG）的含量,光镜观察肾组织病理;Western Blot 技术检测肾组织Wnt4 和β-catenin蛋白表达。结果：①24 h 尿蛋白和ɑ1- MG 检测结果,与正常组比较,模型组24 h 尿蛋白和ɑ1- MG 均明显升高（P＜0.05）;与模型组比较,各治疗组24 h 尿蛋白和ɑ1-MG 明显降低（P＜0.05）;与颗粒低剂量组比较,颗粒中、高剂量组24h 尿蛋白均明显降低（P＜0.05）,各剂量组之间ɑ1-MG 差异无显著性。②HE 染色结果,各治疗组病理变化较模型组均有明显改善,与颗粒低剂量组比较,颗粒中、高剂量组评分明显减少（P＜0.05）。③肾组织Wnt4 和β-catenin 免疫印迹检测结果,与正常组比较,模型组和各剂量组大鼠肾组织Wnt4 和β-catenin 具有明显有升高趋势,各治疗组均有不同程度下降,尤以颗粒中、高剂量组下降明显。结论：黄芪丹参（1:1）颗粒药对可以保护UUO 大鼠肾小管功能,一定程度改善UUO 大鼠肾脏病理改变,其机制可能与干预Wnt/β-catenin 信号通路有关。黄芪丹参颗粒药对可以干预UUO 大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin 的表达,并存在一定的量效关系。     

通络驻景丸对糖尿病大鼠视网膜HIF-1α及PDGF-Β表达的影响

目的:探讨通络驻景丸对糖尿病大鼠视网膜中HIF-1α及PDGF-Β表达的影响。方法:除空白组外,SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,造模成功的大鼠随机分为:模型组,通络驻景丸低、中、高剂量组。模型组和空白组给予蒸馏水作对照,通络驻景丸低、中、高剂量组给予不同剂量通络驻景丸药液治疗(分别是1.65、3.33、6.66g生药/kg)。末次给药结束后,取大鼠全血测糖化血红蛋白水平;取大鼠视网膜,用RT-PCR检测各组大鼠视网膜中HIF-1αmRNA及PDGF-ΒmRNA的表达;ELIAS检测HIF-1α及PDGF-Β蛋白表达。结果:模型组大鼠视网膜HIF-1αmRNA、PDGF-ΒmRNA水平比空白组显著升高,通络驻景丸给药组HIF-1αmRNA、PDGF-ΒmRNA表达水平比模型组均有降低,且通络驻景丸高剂量组降幅最大。模型组大鼠HIF-1α、PDGF-Β蛋白水平比空白组显著升高,通络驻景丸给药组HIF-1α、PDGF-Β表达水平比模型组均有降低,且通络驻景丸高剂量组降幅最大。结论:研究显示通络驻景丸可能通过降低HIF-1α及PDGF-Β表达,在糖尿病大鼠视网膜疾病的发生发展过程中起一定作用。     

糖耐康改善ZDF大鼠胰岛β细胞凋亡的作用机制研究

目的：探讨糖耐康干预2型糖尿病大鼠（ZDF）胰岛β细胞凋亡的作用及机制。方法：6只雄性ZDF（fa/+）大鼠设为正常对照组,雄性ZDF（fa/fa）大鼠30只设为2型糖尿病成模组。根据体质量及随机血糖将成模组大鼠随机分为5组,即模型组、二甲双胍组、糖耐康高、中、低剂量组。给药前测大鼠空腹血糖值及血清胰岛素值;给药6周再次检测大鼠空腹血糖值及血清胰岛素值并进行比较。采用HE染色观察胰岛形态结构的改变;采用TUNEL法检测各组大鼠胰腺组织中胰岛β细胞凋亡情况;免疫组织法观察细胞死亡信号转导效应酶Caspase-3在胰岛中表达情况。结果：给药6周后,糖耐康高、中、低剂量组均可显著改善ZDF大鼠空腹血糖（P<0.01）;糖耐康高、中、低剂量组血清胰岛素值较模型组均有所升高,其中,高、低剂量组有显著性差异（P<0.05）;给药组胰岛素抵抗指数较模型组均有所下降,其中,糖耐康高剂量组及二甲双胍组有极显著性差异（P<0.01）。HE染色显示给药组的胰岛细胞形态、结构较模型组有所改善。TUNEL结果显示ZDF（fa/fa）大鼠胰腺组织内均可见胰岛细胞凋亡改变,与模型比,给药组TUNEL阳性表达率均显著性减少（P<0.05）。免疫组化结果显示给药组Caspase-3蛋白表达下降（P<0.05）。结论：糖耐康能有效降低ZDF大鼠胰岛β细胞的凋亡,即对胰岛β细胞有一定的保护作用。     

双参通冠方对心肌梗死大鼠HIF-1α和VEGF表达的影响

目的:研究双参通冠方对急性心肌梗死大鼠缺血心肌内皮细胞VEGF及上游调控因子HIF-1α表达的影响,探讨双参通冠方防治心肌梗死的作用机制。方法:SD大鼠分为模型组、空白组、双参通冠方低剂量组(2.5 g/kg)、中剂量组(5 g/kg)、高剂量组(7.5 g/kg),采用结扎左冠状动脉前降支建立大鼠心肌梗死模型,灌胃给药2周后,取大鼠的心肌组织,制备心肌组织匀浆,Elisa法检测VEGF含量,Western blot法检测VEGF及上游调控因子HIF-1α的表达。结果:模型组大鼠心肌组织VEGF含量和VEGF、HIF-1α表达高于空白组,差异有统计学意义(P0.05);双参通冠方低剂量组、中剂量组和高剂量组VEGF含量和VEGF、HIF-1α表达均高于模型组,差异均有统计学意义(P0.05);双参通冠方低剂量组VEGF含量和VEGF、HIF-1α表达低于双参通冠方中剂量组,双参通冠方高剂量组VEGF含量和VEGF、HIF-1α表达高于双参通冠方中剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:双参通冠方可增加急性心肌梗死模型大鼠缺血区心肌组织中VEGF含量和上游调控因子HIF-1α表达,促进血管内皮细胞增殖,诱导缺血部位血管新生,对心肌具有保护作用。     

活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察中药复方活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白表达的影响。探讨中医药治疗糖尿病视网膜病变(DR)的机制。方法:采用链脲佐菌素(65mg/kg)一次性腹腔注射的方法,建立糖尿病大鼠模型,将78只SD大鼠随机分为模型组和活血解毒方高剂量组(15.4g/kg)、中剂量组(7.70g/kg)、低剂量组(3.85g/kg)及导升明组(0.167g/kg),每组13只,另设13只正常对照组。造模成功后,灌胃给药,24周后处死动物。检测血清和视网膜全层中VEGF的表达;采用Real-time PCR法检测视网膜VEGF mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠血清中VEGF的含量增加(P<0.01),与模型组相比,各用药组VEGF的含量均下降,但差异无统计学意义。与正常对照组相比,模型组的视网膜全层VEGF表达增加(P<0.01),各用药组与模型组相比显著降低(P<0.01)。与正常对照组相比,模型组的VEGF mRNA表达升高,而各用药组的表达比模型组降低(P<0.01)。结论:活血解毒方可能通过降低糖尿病大鼠视网膜VEGF的表达,延缓DR的发生和发展。     

糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经VEGF和HIF-1α调控机制研究

目的:观察中药复方糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经VEGF及HIF-1α表达的影响。方法:SD雄性大鼠60只,随机选取10只为正常组,其余大鼠采用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发2型糖尿病大鼠动物模型。造模成功后随机分为模型组,甲钴胺组,糖痹康低、中、高剂量组,每组10只。各组采取相应干预。16周后取大鼠一侧坐骨神经,采用Western blot法检测大鼠大鼠坐骨神经VEGF和HIF-1α的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经组织HIF-1α及VEGF蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,糖痹康中剂量组HIF-1α蛋白表达显著降低(P0.01),而与模型组比较,糖痹康低和高剂量组以及弥可保组虽有减低但无统计学意义;与模型组比较,弥可保组与糖痹康低、中、高剂量组均可显著降低大鼠坐骨神经中VEGF的蛋白表达。(P0.01)。结论:糖痹康上调糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神VEGF及HIF-1α蛋白表达,可能是其DPN神经保护作用靶点之一。     

丹瓜方对糖尿病大鼠视网膜组织MCP-1和NF-κB p65表达的影响

目的 研讨丹瓜方对糖尿病大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的影响。方法 将40只造模成功的GK大鼠随机分成模型组、二甲双胍组、辛伐他汀组、丹瓜方组4组,10只Wistar大鼠为正常组。采用Western blot法检测大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的表达。结果 与正常组比较,模型组视网膜组织MCP-1、NF-κB p65蛋白表达显著提高（P<0.01）;与模型组比较,二甲双胍组、辛伐他汀组和丹瓜方组MCP-1、NF-κB p65蛋白表达均显著下降（P<0.01）。结论 MCP-1和NF-κB p65可能均是糖尿病视网膜病变的影响因子,二甲双胍、辛伐他汀、丹瓜方均能降低GK大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的表达,从而预防或减少糖尿病视网膜病变的发生,其中以丹瓜方效果最好。     

复方丹参明目治疗糖尿病大鼠视网膜病变的药效研究

目的 研究复方丹参明目汤剂对糖尿病视网膜病变大鼠的药效作用及机制。方法 采用大鼠腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病病变模型,糖尿病大鼠继续进行普通饲料喂养14周,制备成糖尿病性视网膜病变大鼠模型。50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方丹参明目低、中和高剂量组（200, 400, 800 mg/kg）,每组10只。除正常组大鼠腹腔注射生理盐水外,其它大鼠均制备成糖尿病性视网膜病变模型。正常组和模型组大鼠给予蒸馏水灌胃,其它组大鼠给予不同剂量的复方丹参明目分别灌胃治疗2个月后,用ELISA法检测血清中的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)、血小板衍生生长因子A/B(PDGFA/B)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)含量,免疫组化法检测视网膜组织中VEGF和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的表达量,以及用显微镜观察视网膜的病理形态。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清VEGF、MMP2、MMP9、PDGFA/B、bFGF和IGF-1含量均显著升高（P<0.05）,其视网膜神经节细胞层和内网层（内核层）,以及外网织层的VEGF和VEGFR2表达均显著增多（P<0.01）,并且其视网膜神经节细胞层、内核层和外核层中血管均显著增多。与模型组大鼠比较,复方丹参明目溶液中和高剂量组大鼠血清VEGF、MMP2、MMP9、PDGFA/B、bFGF和IGF-1含量均显著降低（P<0.05）,VEGF和VEGFR2表达量均显著减少（P<0.01）,而且其视网膜血管数量均明显减少。结论 复方丹参明目溶液能显著改善和治疗糖尿病大鼠的视网膜病变。     

通心络抑制KK/Upj-Ay小鼠视网膜组织HIF-1a/VEGF/VEGFR-2表达

目的:观察通心络对自发糖尿病KK/Upj-Ay小鼠视网膜组织缺氧诱导因子-1a(HIF-1a),血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)基因及蛋白表达的影响,探讨通心络对糖尿病视网膜病变的保护机制。方法:40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组和通心络低、中、高剂量组(通心络生药1,2,4 g·kg-1,ig给药12周),实验以C57BL/6小鼠为正常组。用血液黏度仪测定全血黏度和血浆黏度、红细胞变形聚集仪测定红细胞聚集指数;应用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠视网膜组织中VEGF和VEGFR2的基因表达;Western blot法检测视网膜组织中HIF-1a,VEGF,VEGFR2蛋白的表达。结果:与正常组C57BL/6小鼠比较,模型组小鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数明显升高(P0.01);与模型组比较,应用通心络中、高剂量治疗的KK/Upj-Ay小鼠红细胞聚集指数明显降低(P0.05,P0.01);高剂量通心络组的低切全血黏度降低(P0.05),血浆黏度较模型组也显著降低(P0.01)。模型组小鼠视网膜组织HIF-1a,VEGF,VEGFR2蛋白和VEGF,VEGFR2 mRNA表达较正常组明显增高(P0.01);通心络ig治疗后,各剂量组HIF-1a,VEGF,VEGFR2 mRNA和蛋白表达水平均较模型组明显下降(P0.01)。结论:通心络可抑制自发性糖尿病小鼠视网膜组织HIF-1a/VEGF/VEGFR-2信号途径,此作用可能与其改善糖尿病血液流变学相关。     

基于TGF-β1/p38MAPK通路探讨益气升清方对糖尿病大鼠肾组织的影响

目的:探讨益气升清方对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1/p38MAPK通路的影响。方法:SPF级大鼠60只,正常组10只,其余腹腔注射STZ制备DM模型。成模后随机分为模型组（等量蒸馏水）、厄贝沙坦组［27 mg/(kg·d)］、中药低剂量组［3.465 g/(kg·d)］、中药中剂量组［6.93 g/(kg·d)］、中药高剂量组［13.86 g/(kg·d)］,每组10只,给药8周,检测血糖、Scr、BUN,观察肾组织的病理,用荧光定量PCR和免疫组化法检测TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA和蛋白的表达。结果:造模后各组血糖较正常组有显著性升高（P<0.01）,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。模型组大鼠血清BUN、Scr显著增高（P<0.01）,肾组织有大量TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA及蛋白表达（P<0.01）;与模型组比较,各观察组病理损害明显减轻,血清BUN、Scr明显降低（P<0.01）,TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA及蛋白表达明显减少（P<0.01）,厄贝沙坦组、中药中、高剂量组优于中药低剂量组（P<0.01）。结论:糖尿病大鼠TGF-β1/p38MAPK通路的激活导致肾间质病变,益气升清方可减少TGF-β1、p38MAPK的表达,从而减少FN的沉积,起到保护肾脏的作用。     

消朦灵方在糖尿病视网膜病变大鼠中的应用价值

目的:探讨消朦灵方在糖尿病视网膜病变(SD)大鼠中的应用价值。方法:随机将75只SD大鼠分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组及空白组,每组15只,除空白组外,剩余60只大鼠均造模成糖尿病视网膜病变大鼠,造模成功后,中药组依次给予6.8、3.4、1.7 mg/(kg·d)消朦灵方灌胃,模型组给予温开水灌胃,空白组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,连续给药60 d。对比各组体重、血糖、白细胞介素6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(1L-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及细胞凋亡指数,并对各组视网膜组织光学显微镜下结构变化情况进行观察。结果:造模前,各组体重血糖水平比较,差异无统计学意义(均P>0.05); 造模成功后第1天,高剂量组、中剂量组、低剂量组及模型组的体重均低于空白组,血糖高于空白组,差异有统计学意义(均P<0.05); 治疗后,各组体重比较,差异无统计学意义(P>0.05); 空白组、高剂量组血糖水平、IL-6、1L-1β、TNF-α、Ang-1、VEGF、VEGFR2蛋白及mRNA、细胞凋亡指数低于中剂量组、低剂量组及模型组,中剂量组血糖水平、IL-6、1L-1β、TNF-α、Ang-1、VEGF、VEGFR2蛋白及mRNA、细胞凋亡指数低于低剂量组及模型组,低剂量组血糖水平IL-6、1L-1β、TNF-α、Ang-1、VEGF、VEGFR2蛋白及mRNA、细胞凋亡指数低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05); 高剂量组血糖、IL-6、1L-1β、TNF-α、Ang-1、VEGF、VEGFR2蛋白及mRNA水平与空白组比较,差异无统计学意义(均P>0.05); 高剂量组细胞凋亡指数高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:消朦灵方能够降低糖尿病视网膜病变大鼠血糖水平,降低炎症水平,减少高血糖对视网膜的损害,降低细胞凋亡指数,促使视网膜各层组织、毛细血管恢复正常,改善神经纤维层水肿、内丛状层水肿及内核层空泡变性。     

基于HIF-1α/VEGF信号通路观察健脾补肾活血方对大鼠脑微血管内皮细胞的影响

目的 基于低氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子（VEGF）信号通路观察健脾补肾活血方对大鼠脑微血管内皮细胞（RBMEC）的影响,以期为缺血性中风的治疗提供理论依据。方法 选用SPF级8周龄雄性SD大鼠12只,随机选取其中8只给予3.25 g·mL^-1的健脾补肾活血方药液灌胃10 mL·kg^-1,连续灌胃5 d,提取含药血清,保存备用,余下4只给予同体积生理盐水灌胃,后续操作与上述8只大鼠相同,最终获得正常大鼠血清,保存备用。对RBMEC细胞进行复苏、培养、传代后随机分为正常组（20%正常大鼠血清+80%高糖DMEM培养基）、模型组（缺氧复氧损伤,20%正常大鼠血清+80%无糖DMEM培养基）、含药血清组（20%健脾补肾活血方含药血清+80%无糖DMEM培养基）,含药血清+HIF-1α抑制剂组（20%健脾补肾活血方含药血清+HIF-1α抑制剂1 mg+80%无糖DMEM培养基）、含药血清+VEGF抑制剂组（20%健脾补肾活血方含药血清+ VEGF1 mg抑制剂+80%无糖DMEM培养基）。观察各组RBMEC中Claudin-l和Claudin-5蛋白相对表达水平、RBMEC培养上清液中HIF-1α、VEGF表达水平、RBMEC的损伤修复能力和RBMEC培养72 h时的节点数目、微血管形成数量和长度。结果 RBMEC细胞在复氧24 h后划痕愈合率比较,与正常组比较,模型组划痕愈合率显著下降（P<0.01）;与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组细胞划痕愈合率明显提高（P<0.05）;与含药血清组比较,含药血清+ HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组细胞划痕愈合率明显下降（P<0.05）。RBMEC体外微管形成的节点数目、管腔数目及管腔总长度比较,与正常组比较,模型组体外微管形成能力显著下降（P<0.01）;与模型组比较,含药血清组、含药血清+ HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组体外微管形成能力明显提高（P<0.05）;与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组体外微管形成能力明显下降（P<0.05）。RBMEC中Claudin-l和Claudin-5蛋白相对表达量比较,与正常组比较,模型组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达显著下降（P<0.01）;与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达明显提高（P<0.05）;与含药血清组比较,含药血清+ HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达明显下降（P<0.05）。RBMEC培养上清液中HIF-1α、VEGF表达水平比较,与正常组比较,模型组HIF-1α、VEGF表达显著下降（P<0.01）;与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组HIF-1α、VEGF表达明显提高（P<0.05）;与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组HIF-1α、VEGF表达明显下降（P<0.05）。结论 健脾补肾活血方可促进缺氧复氧损伤大鼠脑微血管内皮细胞增殖、迁移和细胞成小管等血管新生活动;其机制可能是通过调控HIF-1α/VEGF信号通路来实现。     

三七含药血清对成纤维细胞功能及VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ表达的影响

目的:探讨三七含药血清对L929成纤维细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。方法:将28只SPF级SD大鼠随机分为对照组及三七低、中、高剂量组,制备血清。体外培养小鼠成纤维细胞系L929,对照组给予生理盐水血清,低、中、高剂量组给予相应的三七含药血清干预。CCK-8法检测成纤维细胞增殖,划痕实验检测成纤维细胞迁移,RT-qPCR及Western Blot分别检测VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ的mRNA及蛋白表达。结果:与对照组比较,低剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比升高(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);中剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比提高(P<0.05),VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);高剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比降低(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达下...     

通络驻景丸对糖尿病大鼠视网膜VEGF及其mRNA表达的影响

目的观察通络驻景丸对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响,并探讨其可能的作用机制。方法链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠糖尿病模型,并随机将造模成功的大鼠分为4组:模型组,通络驻景丸低、中、高剂量组。模型成功1周后,除空白组、模型组灌胃给予等容积的蒸馏水,其他治疗组给予不同剂量通络驻景丸药物治疗(分别是1.65、3.33、6.66 g生药/kg)。给药12周后,ELISA试剂盒测定血清中VEGF的含量;实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠视网膜组织中VEGF m RNA的表达情况;免疫组织化学法检测视网膜中VEGF蛋白表达情况。结果与模型组比较,通络驻景丸给药组大鼠血清VEGF和视网膜VEGF m RNA表达水平均有不同程度的降低,其中通络驻景丸高剂量组降幅最大。免疫组化结果显示给予通络驻景丸后,视网膜中VEGF表达水平也降低。结论通络驻景丸能降低糖尿病大鼠血清和视网膜中VEGF的表达水平,延缓DR病程的发展。     

复方红豆杉胶囊对Walker-256移植性肝癌大鼠HIF-1α、VEGF及PCNA表达的影响

目的:探讨复方红豆杉胶囊对Walker-256移植性肝癌大鼠缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、低剂量组、中剂量组及高剂量组。对除空白组外其余组大鼠进行Walker-256移植性肝癌造模,造模后第8天对各组灌胃给予复方红豆杉胶囊,低剂量组、中剂量组及高剂量组给药剂量依次为0.93g/kg,0.1875g/kg及0.37g/kg,连续21d。末次给药24h后,取各组大鼠血,检测其中肝功能指标[天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)]。取各组大鼠肝癌病灶,对其进行病理组织学观测,并观察HIF-1α、VEGF及PCNA免疫组化表达情况及相对表达量。结果:与模型组比,空白组、小剂量、中剂量和大剂量组大鼠血清ALB含量明显增高,而AST、TBIL及ALT含量则均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,小剂量、中剂量和大剂量组大鼠肿瘤组织中肝癌细胞排列紊乱,胞核肿胀增大等现象明显减轻。与模型组比较,小剂量、中剂量和大剂量组大鼠肿瘤组织中HIF-1α、VEGF及PCNA阳性表达情况均明显降低,且相对表达量均明显低于对照组(P<0.05)。结论:复方红豆杉胶囊对Walker-256移植性肝癌大鼠HIF-1α、VEGF及PCNA的表达具有较好的抑制作用。     

糖眼宁调控Nod样受体蛋白3炎症小体通路对糖尿病大鼠视网膜细胞焦亡的影响

【目的】 观察糖眼宁对糖尿病大鼠视网膜的保护作用。【方法】 采用腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组,导升明组及糖眼宁高、中、低剂量组,每组10只。另设正常组。糖眼宁高、中、低剂量组大鼠分别给予糖眼宁10.8、5.4、2.7 g·kg-1·d-1灌胃,导升明组大鼠给予导升明0.135 g·kg-1·d-1灌胃,正常组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃。灌胃期间每4周检测大鼠体质量和空腹血糖。灌胃12周后,分别采用苏木素-伊红染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记（TUNEL）染色法观察大鼠视网膜组织病理形态,采用免疫组织化学法检测视网膜组织凋亡相关斑点样蛋白（ASC）表达,免疫印迹分析（Western Blot）法检测视网膜组织焦亡相关蛋白 BRCC36、Nod 样受体蛋白 3 （NLRP3）、ASC、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 1 前体（Pro-Caspase-1）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 1（Caspase-1）、消皮素 D （GSDMD）的表达情况。【结果】（1）给药4周后,与正常组比较,模型组体质量趋于降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;给药4周后,与模型组比较,导升明组和糖眼宁低、中剂量组体质量变化差异无统计学意义（P＞0.05）,糖眼宁高剂量组体质量持续增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖水平明显升高（P＜0.05）;与模型组比较,导升明组和糖眼宁各剂量组大鼠空腹血糖水平无明显降低,差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）与正常组比较,模型组大鼠视网膜萎缩,层间细胞排列紊乱;与模型组比较,导升明组和糖眼宁各剂量组大鼠视网膜组织结构改善。（4）与正常组比较,模型组大鼠视网膜凋亡细胞染色程度、ASC表达明显增强（P＜0.05）;与模型组比较,导升明组和糖眼宁各剂量组大鼠视网膜凋亡细胞染色程度、ASC 表达不同程度减弱（P＜0.05）。（5）与正常组比较,模型组大鼠焦亡关键蛋白 NLRP3、ASC、Pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD、BRCC36表达水平明显升高（P＜0.05）;与模型组比较,导升明组和糖眼宁各剂量组视网膜组织NLRP3、ASC、Pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD、BRCC36表达水平明显降低（P＜0.05）。【结论】 糖眼宁能够减轻糖尿病大鼠视网膜炎症反应,抑制视网膜细胞焦亡,进而维护血-视网膜屏障的完整性。