α干扰素促进急性髓性白血病来源的树突状细胞的成熟分化

目的:研究α干扰素(interferon alpha,IFN-α)对不同亚型的急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫表型及功能的影响。方法:5例初发AML患者(其中M2 1例、M4 2例、M5 2例)的外周血单个核细胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的无血清培养液中培养11 d,其后加入IFN-α-2a(1 000 U/ml)继续培养3 d,获得DC(IFN-AML-DC),光镜下观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞免疫表型,同种异体混和淋巴细胞反应检测DC的免疫功能。结果:所有患者白血病细胞培养14 d后均转化为IFN-AML-DC,与正常人外周血单核细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(monocyte-derived DC,MoDC)及AML细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(AML-DC)相比,IFN-AML-DC具有典型成熟形态的细胞明显增多,表达CD83 细胞的比例显著增加,HLA-DR、CD86分子的表达水平增高,对同种异体T淋巴细胞的激活能力明显高于MoDC及AML-DC。结论:IFN-α能够促进AML-DC的体外成熟,形成更强的免疫激活能力,为AML的免疫治疗提供更有力的手段。     

α-干扰素治疗对慢性髓细胞性白血病患者骨髓间质的影响

目的 :探讨长期 α-干扰素 (α- INF)治疗后慢性髓细胞性白血病 (CML)患者骨髓间质的改变。方法 :应用 HGF染色、CD41 免疫组织化学染色、Gomori网硬蛋白及 Masson胶原纤维三色染色方法 ,对比分析 2 9例CML 患者经 α- INF联合羟基脲 (HU)治疗或 HU单剂治疗后骨髓塑包切片上网硬蛋白纤维、脂肪组织及巨核系的改变。结果 :长期 α- INF治疗后网硬蛋白纤维含量增加 ,脂肪细胞大小不等 ,与对照组相比均有明显差异 (P<0 .0 1和 P<0 .0 5 ) ,但 CD+ 4 1 细胞数量无明显改变 (P>0 .0 5 ) ,其形态以成熟型巨核细胞为主。结论 :长期 α- INF治疗可引起 CML 患者骨髓间质改变 ,骨髓切片有助于全国评价 α- INF的治疗作用。     

临床注射用α-干扰素和粒巨-集落刺激因子诱导慢性髓性白血病细胞向树突状细胞分化

目的：研究临床注射用α-干扰素（interferon-alpha，IFN-α）和粒巨-集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimularing factor，GM-CSF）在诱导慢性髓性白血病（chronic myeloid leukemia，CML）细胞向树突状细胞（dendritic cells，DCs）分化过程中的影响，以建立临床应用稳定的培养体系。方法：取6例CML慢性期患者的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells，BMMNCs），用含10％人AB血清的RPMI 1640同时加入不同细胞因子组合（A组：GM-CSF＋IL-4；B组：临床注射用IFN—α＋临床注射用GM—CSF）作为培养体系，培养7～9d后，在倒置显微镜下观察细胞形态，全自动血液分析仪分析CML-DCs数量，通过流式细胞仪检测其表面标志，采用异基因混合淋巴细胞反应（allogeneic mixed lymphocyte reaction，allo—MLR）分析检测DCs的免疫刺激功能。结果：经不同细胞因子组合分别培养诱导5d和7～9d后的细胞，其特征性表面标志（CD80、CD86、HLA-DR、CD83、CD1a）表达率均高于培养前的细胞（P〈0．05）；在培养的第5天，B组细胞表面标记CD83的表达率高于A组（PG0．05）；但培养7～9d后两组表面标记的表达率无明显差异，CML-DCs计数值也无统计学意义。allo-MLR在DC细胞与反应细胞之比为1：10时B组刺激指数高于A组（P〈0．05）。结论：CML患者的BMMNCs在体外经临床注射试剂组合培养后可以分化为具有典型形态、免疫表型和一定功能的DCs，这一结果为培养更适合回输人体的“临床型”DCs提供了新的培养体系。     

慢性髓性白血病来源的树突状细胞诱导的CTL体外作用研究

 目的　研究慢性髓性白血病来源的树突状细胞的免疫功能。方法　分离慢性期CML患者外周血单个核细胞 (PBMNC) ,用细胞因子GM CSF及IL 4在体外诱导培养DC ,检测细胞表型 ,并观察其诱导的CTL体外抗肿瘤效应。用酶联免疫 (ELISA)方法测定CML DC混合淋巴细胞反应 (MLR)上清液中IL 12及IFN γ的量 ,并与正常DC进行比较。结果　联合GM CSF及IL 4可诱导CML细胞分化为CML DC ,CML DC的CD1a、CD80、CD83表达率均低于正常DC ;CML DC混合淋巴细胞反应上清IL 12及IFN γ含量均低于正常DC ;CML DC能诱导出对自身CML细胞有特异性杀伤作用的CTL。结论　CML DC具有抗原提呈细胞的免疫功能 ,能诱导抗白血病CTL反应。     

伊马替尼联合干扰素-α治疗慢性髓细胞性白血病的疗效

目的探讨伊马替尼联合干扰素-α治疗慢性髓细胞性白血病的疗效。方法回顾性分析50例慢性髓细胞性白血病患者的临床资料,分为接受伊马替尼联合干扰素-α治疗的观察组(28例)和接受干扰素-α治疗的对照组(22例),观察治疗后缓解情况、不良反应例数以及生活质量。结果两组患者血液学缓解情况无明显差异,观察组细胞遗传学反应情况明显好于对照组,各类不良反应例数明显少于对照组,KPS评分、躯体功能、心理功能、社会功能、认知功能和总体生活质量评分明显高于对照组。结论伊马替尼联合干扰素-α能够改善治疗的细胞遗传学反应、减少不良反应例数、提高患者生活质量,是行之有效的治疗方式。     

树突状细胞在髓性白血病免疫治疗中的作用

髓性白血病治疗失败的主要原因之一是疾病的复发,而复发的根源是由于白血病微小残留病灶的存在.采用特异性免疫治疗以清除白血病微小残留病灶已日益引起人们的重视.     

干扰素α-2b联合低剂量阿糖胞苷治疗慢性髓细胞白血病的临床研究

目的:探讨慢性髓细胞白血病(CML)患者使用干扰素α蛳2b(IFNα蛳2b)联合低剂量阿糖胞苷(LD Ara蛳C)治疗,其血液学和细胞遗传学的缓解率,寻找治疗CML的新途径。方法:采用IFNα蛳2b(300万U/d)+Ara蛳C(20mg·m2·d-1,每月用10 d)治疗CML慢性期(CP)患者30例,检测治疗后血液学缓解率和细胞遗传学缓解率,并与IFNα蛳2b+羟基脲(Hu)治疗组和单纯Hu治疗组作对照。结果:Hu+IFNα蛳2b+LD Ara蛳C治疗组治疗6个月的CHR率、总CHR率和Ph染色体阳性细胞下降病例百分数均显著高于IFNα蛳2b+Hu治疗组(P=0.004、P<0.005和P=0.009)和单纯Hu治疗组(P=0.006、P<0.005和P<0.005),CML急变发生率低于单纯Hu治疗组(P<0.005),而且发生急变的时间晚,5 a生存率明显高于IFNα蛳2b+Hu治疗组(P=0.014)和单纯Hu治疗组(P<0.005)。结论:CML(CP)患者采用IFNα蛳2b+LD Ara蛳C治疗可显著提高CML患者的CHR率,提高CML患者的细胞遗传学缓解率,延长CML患者的生存期。     

α-干扰素结合羟基脲治疗慢性髓细胞白血病15例疗效观察

已经证实干扰素（ＩＦＮ）对慢性髓细胞白血病ＣＭＬ慢性期细胞有显著的抑制增殖作用,并能减少Ｐｈ染色体,在少数病例它能完全抑制Ｐｈ染色体〔１〕。然而单独使用干扰素,病情缓解较慢。为探讨如何尽快控制血象、骨髓象,并使Ｐｈ染色体减少,我们将干扰素与羟基脲结合...     

慢性髓细胞白血病细胞诱导分化成为树突状细胞的实验研究

目的:将慢性髓性白血病患者的白血病细胞体外诱导分化成为树突状细胞。方法:从8例慢性髓性白血病患者的骨髓或外周血中获取非贴壁细胞,利用细胞因子(rhGM蛳CSF、rhIL蛳4、rhTNF蛳α)联合培养,每3 d补充新的细胞因子,其中rhTNF蛳α为第9天添加,第12天收获细胞。培养前后分别用光镜、倒置显微镜、电镜观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞表面标志,MTT法检测收获细胞激发混合淋巴细胞反应的能力。结果:8例CML标本分化成为具有典型树突状形态的细胞,流式细胞仪检测白血病细胞的HLA蛳DR由(16.16±10.70)%增至(39.94±20.79)%,CD86由(3.53±1.75)%增至(8.83±6.11)%,CD1a由(8.78±4.90)%增至(19.17±8.51)%,差异有统计学意义(P <0.01)。在混合淋巴细胞反应中具有强烈激发同种T淋巴细胞增生的能力。结论:慢性髓性白血病细胞可以诱导分化成为具有DC形态、表型、功能的细胞。     

两种慢性髓系白血病细胞株对干扰素-α的敏感性

背景和目的：临床研究表明干扰素-α(interferon-alpha,IFN-α)是造血系统恶性肿瘤和淋巴瘤的有效治疗剂之一。然而,IFN-α仅可使约70％～80％的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者获得血液学缓解。不同的CML患者对IFN-α反应性不同的机制尚未阐明。本研究旨在比较两种CML细胞株KA-1／A3、K562对IFN-α的不同敏感性。方法：(1)采用MTT、半固体集落形成和台盼蓝染色液体培养细胞检测,不同浓度IFN-α(100、500、1000、5000和10000u／ml)对KT-1／A3及K562细胞生长的影响;(2)IFN-α(1000u／ml)诱导KT-1／A3、K562细胞48h后,采用流式细胞分析(flow cytometry,FCM)、荧光染色和DNA片段检测细胞凋亡;(3)加入IFN-α(1000u／m1)培养KT-1／A3、K562细胞48h后采用相对定量RT-PCR分析细胞bcr／abl基因表达水平。结果：(1)IFN-α呈剂量依赖性(从100u／ml到10000u／ml)抑制KT-1／A3细胞生长;(2)IFN-α(1000u／m1)诱导48h后使KT-1／A3细胞凋亡率从3．3％升到11．8％,并使KT-1／A3细胞中bcr／abl嵌合基因的表达水平降至对照组的66．7％;(3)IFN-α对K562细胞的生长、凋亡及bcr／abl嵌合基因表达无明显调节效应。结论：不同类型的CML细胞对IFN-α的反应性不同。     

流感疫苗对慢性粒细胞白血病源性树突状细胞功能影响的研究

 目的 探讨流感疫苗对白血病源性树突状细胞（DC）功能的影响。方法 分离慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓单个核细胞,加入GM-CSF和IL-4诱导培养7 d,将所得细胞分为4组：完整失活流感疫苗（WIV）组;裂解流感疫苗（SIV）组;TNF-α组;对照组,用不同培养方法再培育24 h后,流式细胞仪分析DC免疫表型,ELISA法检测上清液中IL-12浓度。结果 CML源性DC细胞表面分子表达、上清液中IL-12浓度在WIV及SIV组较TNF-α和对照组显著增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中WIV组高于SIV组（P＜0.05）,而TNF-α组与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 流感疫苗具有刺激CML源DC成熟的功能。     

Decreased frequency,but normal functional integrity of mesenchymal stromal cells derived from untreated and Imatinib-treated chronic myeloid leukemia patients

In vitro, Imatinib inhibits the proliferation and stimulates the osteogenic and adipogenic differentiation of mesenchymal stromal cells (MSC). However, it is unknown whether Imatinib affects the biology of MSC in vivo. We asked whether MSC from long-term Imatinib-treated CML patients were affected by the in vivo treatment. MSC from untreated and Imatinib-treated patients displayed normal functional properties (i.e. proliferation, immunophenotype, differentiation and hematopoietic supportive capacity) – but a decreased frequency. In vitro, Imatinib lost its effect when discontinued; which suggest that it has a reversible effect on MSC. Therefore it might lose its effect on MSC after discontinuation in vivo.     

Sokal和Hasford积分系统在慢性粒细胞白血病研究中的临床意义比较

 目的 比较Sokal和Hasford积分系统在研究慢性粒细胞白血病（CML）中的临床意义。方法 204例患者按治疗方案与两种积分系统分别进行分组,比较干扰素两种积分系统对慢性期CML患者生存期的影响,并在不同危险度组内观察干扰素对患者生存期的影响。结果 干扰素、Sokal和Hasford积分系统对CML患者的预后均有显著影响（P均<0.001）,但多变量分析发现仅有Hasford积分是影响预后的独立因素。在Hasford中高危组与Sokal高危组内,干扰素并不能明显延长患者的生存时间。结论 Sokal和Hasford积分系统能较好地预测CML 患者的预后,对确定高危组患者后者更为准确。按预后评分系统将患者分组,有利于治疗方案的合理选择。     

抑制吲哚胺2，3-双加氧酶活性促进慢性粒细胞白血病源树突状细胞的功能

目的: 研究吲哚胺2,3双加氧酶（indoleamine 2,3dioxygenase,IDO）在慢性粒细胞性白血病源性树突状细胞（dendritic cells derived from chronic myeloid leukemia,CMLDCs）中的表达,及抑制IDO活性对CMLDCs免疫刺激功能的影响。方法: RTPCR检测17例患者CMLDCs的IDO mRNA的表达情况,流式细胞仪检测CMLDCs免疫表型。在有或无IDO抑制剂1甲基色氨酸（1methyltroptophan,1MT）作用下,分别以不成熟CMLDCs（imDCs）和成熟CMLDCs（mDCs）为刺激细胞,完全缓解期（complete remission,CR）CML患者外周T淋巴细胞为反应细胞建立混合淋巴细胞反应体系,ELISA法检测CMLDCs上清液IL12水平,MTT法检测CMLDCs刺激自体T淋巴细胞的增殖能力。结果: 随着CMLDCs的诱导分化和成熟,IDO mRNA表达逐渐上调;经TNFα诱导的DCs免疫表型除CD1a外,CD80、CD86、CD83、HLADR的表达均明显上调(P<005),且上述分子的表达不受1MT的影响。用1MT抑制IDO活性后的imDCs和mDCs,其IL12水平均明显增加(P<005,P<001),且激发自体T淋巴细胞增殖的能力也明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论: 抑制IDO活性可提高CMLDCs的IL12分泌水平,增强其对自体T细胞增殖的刺激能力,IDO对DCs的负性调节为白血病生物治疗提供了新的思路。     

STI571对慢性髓细胞白血病树突状细胞发育的影响

目的研究STI571对慢性髓细胞白血病（CML）树突状细胞（DC）发育的影响。方法分离CML患者及正常人的骨髓单个核细胞,将实验分为CML实验组、CML对照组及正常对照组。CML对照组及正常对照组：在培养体系中加入重组人粒单核细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）和重组人白细胞介素4（rhIL-4）培养;CML实验组：在对照组的基础上,再加入药物STI571培养。于实验第8天,各组加入重组人肿瘤坏死因子α（rhTNF-α）进一步刺激成熟。Wright染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表型,荧光原位杂交（FISH）进行细胞遗传学分析,混合淋巴细胞反应（MLR）检测抗原递呈功能;ELISA法检测培养上清中血管内皮生长因子（VEGF）的浓度。结果各组均呈现典型的树突状细胞形态;CML实验组CDS0、CD86、CD83和HLA—DR的表达均显著高于CML对照组（P〈0．05）,经FISH证实,CMLDC来源于白血病细胞;各组DC均具有刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力,CML实验组刺激淋巴细胞增殖的能力显著高于CML对照组（P〈0．05）,而与正常对照组相似（P〉0．05）;CML实验组VEGF的浓度较CML对照组显著降低（P〈0．05）。结论STI571可促进CML骨髓来源DC的活化,可能与其抑制了CML细胞VEGF的过度分泌,从而解除了VEGF对CMLDC的分化抑制有关。     

Total body irradiation in chronic myeloid leukemia

Total body irradiation (TBI), given as 10 rad daily for five days a week for a total dose of 150 rad has been used in an attempt to control the chronic phase of chronic myeloid leukemia (CML). Thirteen patients with CML received fractionated TBI leading to rapid and good control of WBC count without any adverse reaction. The chronic phase of CML could also be controlled with TBI, even in three patients who were resistant to busulfan. Following TBI, WBC count remained under control for a period of 32 weeks as compared to 40 weeks following busulfan alone. Repeat TBI was also well tolerated with good response. It appears that TBI is an effective and safe therapy for controlling the chronic phase of CML.     

慢性髓系白血病急变期中免疫分型研究

 目的 探讨慢性髓系白血病急变期（CML-BC）的免疫表型特征及应用价值。方法 采用一组单克隆抗体和三色流式细胞术对36例成年人CML-BC骨髓标本进行免疫表型分析。结果 36例CML-BC患者中急性非淋巴细胞白血病变30例（83.33 %）,其中40 %（12／30）伴淋系表达;急性淋巴细胞白血病变急淋变3例（8.33 %）,其中66.67 %（2／3）伴髓系表达;急性混合型白血病变2例;急性未分化型白血病变1例。CML-BC以CD33阳性率最高91.67 %,其次是CD+13 86.11 %,CD+34 61.11 %,CD+7 33.33 %,CD+10 19.44 %,CD+19 16.67 %,CD+2 2.78 %,CD+20 5.56 %及CD+14 5.56 %。CD7与CD34共阳性27.78 %。结论 CML-BC免疫表型复杂,多系表达常见。免疫分型可协助判断CML的急变类型。     

PHA-induced colony formation in acute non-lymphocytic and chronic myeloid leukemia

A method which has previously been introduced for growing colonies in vitro from T-lymphocytic cells in normal subjects, has been applied to studying the growth of colonies from the bone marrow and blood of patients with acute non-lymphocytic leukemia and chronic myeloid leukemia. The technique consists of an underlayer of agar containing irradiated leukocytes and a liquid overlayer containing PHA. In leukemic patients, the assay permitted the formation of T-lymphocytic as well as leukemic colonies. Removal of the E-rosette forming cells before culture resulted in the appearance of mainly leukemic colonies. Cytogenetic analysis demonstrated the presence of the acquired karyotypic changes characteristic of the leukemic cells of these patients in the colony cells. Study of eight cases of acute non-lymphocytic leukemia, four cases of blast crisis of CML, and seven cases of CML chronic phase revealed the assay to be efficient in growing large numbers of leukemic blast colonies, as compared to the Robinson culture assay where large colony formation is only found in chronic leukemia [10]. Removal of the progenitors of lymphocytic colonies was sometimes incomplete in acute leukemia but not in CML.     

流感疫苗促进髓系白血病骨髓细胞来源树突状细胞的功能

目的: 研究流感疫苗对髓系白血病骨髓源性树突状细胞（dendritic cells,DCs）功能的影响及其机制。方法：分离髓系白血病患者\[急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia, AML)19例, 慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML) 8例\]骨髓单个核细胞（mononuclear cell,MNC）,用GMCSF和IL4诱导7 d,获得未成熟白血病DCs,然后加入全病毒灭活流感疫苗（whole inactivated influenza vaccine, WIV）、裂解病毒流感疫苗（split influenza vaccine,SIV）或TNFα继续培养24 h。R显带法分析DCs染色体核型,流式细胞仪检测DCs表型,ELISA法测定DCs培养上清IL12的水平,CCK8法检测DCs诱导的CTL对自体白血病细胞的细胞毒作用。结果：19例AML患者中的15例及8例CML患者的MNC全部成功诱导出DCs。与TNFα刺激的白血病DCs相比,流感疫苗刺激的白血病DCs表面分子（CD80、CD83、CD86、HLADR）表达明显上调（P<005）,培养上清中IL12的分泌水平明显增加（P<0.05）,其诱导的CTL可显著杀伤自体白血病细胞（P<0.05）;WIV刺激的DCs在表型、IL12分泌水平及细胞毒作用方面均较SIV刺激的DCs显著增高（P<0.05）。结论： 流感疫苗促进髓系白血病源DCs表型成熟及IL12的分泌,增强其诱导的CTL对自体白血病细胞的杀伤作用。