脐血与脐带间充质干细胞的分离、扩增、分化比较

目的比较人脐血、脐带组织间充质干细胞体外分离、扩增与成骨、成脂肪细胞分化的方法与条件,比较相应实验的难易度。方法脐血采用沉降红细胞后密度梯度法及CD34+免疫磁珠负选法分离单个核细胞+10%胎牛血清或MesencultTM培养基培养传代,集落生长细胞向成骨、脂肪细胞定向诱导分化;脐带沿血管灌入胶原酶悬液,获取细胞培养、扩增,细胞呈集落生长后传代,定向成骨、成脂肪细胞分化。结果脐血经沉降红细胞后分离的MNCs,使用MesencultTM培养基+10%胎牛血清培养成功率高,集落细胞能向成骨、成脂肪细胞定向诱导分化。脐带去除血管后灌注可获得贴壁生长的细胞,能扩增形成集落,并向成骨、成脂肪细胞定向分化。结论脐血中可分离出MSCs,并可在体外进行培养扩增及分化,但难度较大。脐带组织存在间充质干细胞,并可在体外进行培养扩增形成集落细胞传代,集落细胞能够向成骨、成脂肪细胞分化,方法较脐血容易。     

人脐血CD34^＋细胞体外诱导分化为树突状细胞及其扩增

目的采用脐血CD34^＋细胞在rhGM—CSF、rhTNF—α诱导下体外分化扩增为成熟树突状细胞。方法应用CD34^＋干细胞分选试剂盒以及免疫磁珠法从脐血中分离CD34^＋细胞,用rhGM—CSF、rhTNF—α联合诱导分化发育14d,成为成熟DC,观察细胞形态及检测CD83分子表达。结果50ml脐带血可分离出CD34^＋细胞约1．1×10^6,在rhGM—CSF、rhTNF-α诱导下CD34^＋干细胞培养2周,约扩增10～20倍。CD34^＋干细胞培养第3d开始出现集落,第8～9天集落最大,CD34^＋千细胞分化发育为有树突状突起的成熟DC,表面分子CD83阳性率为81．7％。结论体外联合运用rhGM—CSF、rhTNF—α,能够成功诱导脐血CD34^＋细胞分化为大量成熟的DCs。     

C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养、分化及两种不同品牌血清对其增殖的影响

目的 研究C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)体外分离培养、分化及比较含两种不同品牌血清培养基对其生长的影响,探索体外培养C57BL/6小鼠BMSCs更优方法。方法 差速贴壁法体外分离提取BMSCs,分别用含10%Yeasen胎牛血清和10%Gbico胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养,分别在2 d、4 d、6 d(后)通过倒置显微镜观察两组BMSCs的细胞形态;CCK-8法检测其生长趋势;免疫荧光染色鉴定表型;不同诱导培养基诱导其成骨、成脂分化。结果 成功分离BMSCs,原代培养细胞呈长角形涡状排列生长,第二代BMSCs免疫表型鉴定结果显示CD44、CD90、CD106为阳性表达,CD34为阴性表达;成骨、成脂诱导分化后,细胞茜素红、油红染色均呈阳性;CCK-8检测显示含Gbico血清培养基所培养的BMSCs更容易形成细胞集落且数量更多,生长上升趋势更为明显。结论 两种血清都能促进BMSCs的体外增殖,Yeasen血清有着更高的性价比,Gbico血清则在促进增殖方面表现更加良好。     

骨髓间充质干细胞支持脐血造血干／祖细胞体外扩增的研究

目的体外分离培养人新鲜脐血（UCB）造血干细胞（HSC），利用骨髓间充质干细胞作为滋养层联合细胞因子组合以扩增脐血造血干／祖细胞。方法采用Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离UCBHSC，加入骨髓间充质干细胞和细胞因子，检测脐血造血干／祖细胞总有核细胞（NC）总数和CD34^＋细胞数。结果有核细胞总数扩增（75．2±15．0）倍，CD34^＋细胞数扩增（18．7±12．3）倍。结论体外HSC培养，加入骨髓间充质干细胞和细胞因子对造血干／祖细胞增殖有明显的作用。     

人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及向肝细胞的定向诱导分化

目的 分离纯化人脐带间充质干细胞(UCMSCs),探讨UCMSCs是否能在体外条件下被诱导成为肝细胞样细胞.方法 无菌条件下采集健康新生儿脐带,采用胰酶、胶原酶顺序消化法分离单个细胞,通过贴壁培养方法分离纯化间充质干细胞(MSCs).从形态、表面抗原、成脂肪细胞和成骨细胞分化潜能三方面进行鉴定.随后通过细胞因子诱导的方法将间充质干细胞诱导为肝细胞样细胞.结果 从人脐带中成功分离纯化得到UCMSCs,细胞呈纤维状;表达CD44、CD105、CD73、CD90,不表达与造血细胞和内皮细胞相关的CD34、CD45、CD31等标志物,不表达与移植物抗宿主病相关的HLA-DR等分子;在不同细胞因子作用下,可以被诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和卵圆形肝细胞样细胞.结论 人脐带中含有较丰富的MSCs,在体外条件下可以被诱导为肝细胞样细胞.     

人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及向肝细胞的定向诱导分化

目的 分离纯化人脐带间充质干细胞(UCMSCs),探讨UCMSCs是否能在体外条件下被诱导成为肝细胞样细胞.方法 无菌条件下采集健康新生儿脐带,采用胰酶、胶原酶顺序消化法分离单个细胞,通过贴壁培养方法分离纯化间充质干细胞(MSCs).从形态、表面抗原、成脂肪细胞和成骨细胞分化潜能三方面进行鉴定.随后通过细胞因子诱导的方法将间充质干细胞诱导为肝细胞样细胞.结果 从人脐带中成功分离纯化得到UCMSCs,细胞呈纤维状;表达CD44、CD105、CD73、CD90,不表达与造血细胞和内皮细胞相关的CD34、CD45、CD31等标志物,不表达与移植物抗宿主病相关的HLA-DR等分子;在不同细胞因子作用下,可以被诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和卵圆形肝细胞样细胞.结论 人脐带中含有较丰富的MSCs,在体外条件下可以被诱导为肝细胞样细胞.     

改良的人脐带间充质干细胞培养方法

目的:建立人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的分离和培养方法,探讨hUCMSCs的成脂成骨分化潜能。方法:用酶消化法、传统组织块法和改良组织块法从人脐带中分离间充质干细胞,流式细胞仪检测其免疫表型;用不同的培养体系诱导hUCMSCs向成骨细胞及成脂细胞分化,并对其进行鉴定。结果:改良的hUCMSCs培养方法培养细胞纯度更高,在相同的培养时间内,改良组织块法所获得的细胞数量是酶消化法的2～3倍,是传统组织块法的20～30倍,细胞呈长梭形生长;高表达CD73、CD90、CD44、CD105,不表达CD31、CD45、CD34;茜素红染色及油红O染色证实了hUCMSCs可分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论:建立了hUCMSCs的培养新方法,证实了hUCMSCs的增殖能力和多向分化潜能,为其治疗应用提供支持。     

诱导分化骨髓干细胞（MSCs）构建膀胱的实验研究

目的分离提起大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,体外培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,通过组织工程技术．构建组织构建膀胱,为进一步临床应用奠定基础。方法将sD大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养扩增后,以生长状态良好的骨髓问充质干细胞接种于制备好的聚乳酸一聚乙醇酸支架上,进行体外联合培养,构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及组织工程构建膀胱。结果体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞生长良好,传代扩增容易,骨髓间充质干细胞在聚乳酸一聚乙醇酸基质中生长良好,可体外构建组织工程膀胱。结论通过利用体外扩增培养的骨髓问充质干细胞制备的上皮细胞可以体外聚乳酸一聚乙醇酸支架构建组织工程膀胱。     

脂肪干细胞在骨、软骨组织工程中的研究进展

近年研究发现脂肪组织中存在着一类间充质干细胞,具有多向分化潜能,增殖能力强,在体外培养中能保持稳定的生长增殖活性,且具有与骨髓间充质干细胞(BMSCs)一样的多向分化潜能,故被称为脂肪干细胞(ADSCs)[1].该干细胞在体外可以持续分裂和增殖,不同的培养基能诱导其向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、神经细胞等分化[2-5].因其具有存在广泛、取材方便、可迅速扩增及多项分化潜能等特点,ADSCs作为骨组织工程的种子细胞已越来越受到关注.     

间充质干细胞的生物学特性和临床应用

间充质干细胞（MSCs）是主要存在于骨髓中的非造血性干细胞,可以从广泛的组织来源中提取,并可分化为多种细胞,如：成骨细胞,成软骨细胞,成脂肪细胞,神经样细胞,血管内皮细胞等。在体外培养MSCs过程中,胎牛血清和生长因子的选择,以及多能分化诱导控制等,对MSCs的体外繁殖和分化至关重要。大量的临床研究证明,经体外分化繁殖的MSCs,在疾病的再生医疗和组织工程领域有很大的应用潜能。牙周韧带来源的间充质干细胞（PDL-MSCs）经体外培养,贴壁,伸展性良好,将它移植于生物相容性支架材料中,具有高度伸展性和分化为成骨细胞的能力。因此,应用PDL-MSCs和骨髓来源的骨髓-MSCs制成的有效的移植生物材料,可用于牙周再生中的骨组织工程治疗。     

人脐血间充质干细胞分离培养方法的优化

目的探索脐血来源的间充质干细胞体外分离培养的更优方法。方法无菌条件下抽取正常足月剖宫产胎儿的脐带血,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞。50份脐血分为对照组和改良组,每组25份,分别以1.5×10^7/ml的细胞密度接种于25 cm^2培养瓶中。对照组贴壁3 d后弃上清,去除未贴壁细胞,更换新鲜培养液;改良组贴壁0.5 h后弃上清,去除未贴壁细胞,更换新鲜培养液。结果对照组杂细胞较多,最终成功培养出8份脐血间充质干细胞;改良组杂细胞较少,最终成功培养出18份脐血间充质干细胞。经流式细胞仪检测脐血间充质干细胞的免疫表型,结果显示,所培养出的脐血间充质干细胞不表达或极弱表达CD34、CD106等造血细胞标志,稳定地高表达CD29、CD44、CD105等间充质细胞相关的表面抗原标记物。结论采取脐血单个核细胞贴壁0.5 h弃上清更换新鲜培养液可以明显提高脐血间充质干细胞的培养成功率,其结果优于脐血单个核细胞贴壁3 d弃上清更换新鲜培养液。     

脐带消毒方式对脐带血污染率和脐带血质量的影响研究

目的 探讨深度脐带消毒方案与常规消毒方案对脐带血采集后的污染率和脐带血质量的影响.方法 将2019年5—12月在南方医科大学附属何贤纪念医院分娩的孕妇400例随机分成两组,试验组200例采用深度脐带消毒方案消毒后采集脐带血,对照组200例采用常规消毒方案消毒后采集脐带血,采集后的脐带血运送至广东省脐带血库进行细菌/霉菌...     

四联袋分离脐血干细胞方法及临床效果初步研究

目的探讨一种高效实用、安全且具有临床应用价值的分离脐血干细胞方法，并研究多次、多份脐带血干细胞静脉叠加输注治疗股骨头坏死的临床安全性和疗效。方法①应用四联袋结合无菌接口技术制备脐血干细胞，对分离后单个核细胞（MNC）数、MNC收率、CD^34＋细胞数、台盼蓝拒染率、红细胞混入量进行检测。②将四联袋分离的脐血干细胞静脉输注给8例股骨头坏死患者，观察患者髋关节疼痛程度、性质及时间变化、髋关节外展与内旋功能变化、行走距离及步态变化；细胞移植后6个月，观察X线图像、股骨头形态学变化。结果①四联袋结合无菌接口技术分离的脐血MNC收率高，效果好且分离过程不易发生微生物污染。②8例患者临床症状均有不同程度的缓解或消失，有效率100％；细胞移植后6个月，X线图像、股骨头形态学有不同程度改善。③在细胞移植过程中及移植后均未发生并发症和发热、过敏等不良反应。结论①四联袋分离脐血干细胞是一种效率高、安全且具有临床应用价值的分离方法。②经静脉多次、多份输注脐血间质干细胞，是全身整体治疗股骨头坏死的一种新手段。③多份脐血干细胞不需ABO、HLA配型输注。     

新生儿脐带暴露法对脐部感染和脐带残端脱落的影响

目的 比较应用WHO倡导的脐带暴露法与传统的脐带包扎法对预防新生儿脐部感染和脐带残端脱落时间长短的影响.方法 选择2012年10月至11月住院分娩的356例新生儿,随机分为脐带暴露法组与脐带包扎法组,两组脐带结扎方法相同,脐带暴露法组断脐后在产房开始即暴露脐带,日常护理用清水清洁脐部,不用任何消毒液;脐带包扎法组断脐后使用脐带卷包扎,日常护理仍然使用75％酒精消毒脐部并每日包扎.比较分析两组新生儿脐带残端脱落时间、脱落率、脐部分泌物及脐炎发生率情况.结果 脐带暴露法组脐带残端脱落时间多集中在6～7天,而脐带包扎法组多在7天以上,两组脱落率分别有显著差异（P＜0.01）;脐带暴露法组脐部分泌物和轻度脐炎发生率明显低于脐带包扎法组（P＜0.01和P＜0.05）.结论 采用脐带暴露法可明显缩短脐带残端脱落时间,并能降低脐部感染率,是一种安全有效的新生儿脐部护理方法.     

200例新生儿脐带残端脱落情况比较

目的：探讨临床应用清洁干燥暴露脐带残端以及联合应用3％过氧化氢与0．5%碘伏消毒脐带及脐周,对比其护理效果并进行分析。方法：将200例正常足月新生儿随机分为观察组和对照组各100例。两组分娩过程中脐带结扎方法相同,均在出生后次日晨（出生时间〉12小时）解除脐带护理敷料。观察组采用清洁干燥暴露法护理脐带,对照组联合应用0．5％碘伏与3％过氧化氢消毒脐部。比较两组新生儿脐周皮肤红肿感染情况、脐带残端脱落时间及脐部愈合时间。结果：两组均无脐带感染情况,而观察组脐带残端轻度感染,脐部愈合时间均少于对照组（P〈0．05）。结论：观察组采取脐带清洁干燥暴露法操作简便,缩短脐带残端愈合时间,值得临床推广应用。     

正常新生儿脐血18项检验指标值观察

目的　探索新生儿脐血血脂、蛋白质、酶类及红细胞、白细胞、血小板、红细胞压积、血红蛋白的参考值。方法　生化项目采用全自动生化分析仪法 ,血常规项目采用血液分析仪法。结果　建立了脐血ALT、AST、WBC等 18项检验指标的参考值。新生儿脐血中ALT、CK、TP、ALB、TBIL、WBC与孕周有关 ,呈升高趋势 (P <0 0 5 ) ;ALP、GGT随孕周增加呈下降趋势 (P <0 0 5 )。各项指标男女性别间均无显著性差异(P >0 0 5 )。结论　新生儿脐血血清蛋白、血脂、酶及白细胞等与其胎龄具有一定的相关性 ,与成人存在显著性差异。     

自体骨髓基质干细胞移植联合EPO治疗脊髓损伤的研究

目的：探讨自体骨髓基质干细胞（MSCs）移植联合促红细胞生成素（EPO）对大鼠脊髓损伤（SCI）治疗的效果。方法：培养与纯化骨髓基质干细胞。80只SD大鼠制备脊髓损伤模型,随机分为4组：干细胞移植组、EPO组、联合组和对照组。采用BBB法进行运动能力评分和组织切片观察来评定修复情况。结果：三个实验组与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）,三个实验组均可明显促进大鼠运动功能和损伤后组织结构的恢复,其中联合组效果更显著。结论：骨髓基质干细胞移植联合EPO具有促进大鼠脊髓损伤后神经功能的修复。     

胎儿脐血流检测电路的研究

目的：针对目前胎儿脐血流监护仪的灵敏度与方向性的不足,设计一种新型的胎儿脐血流检测电路。方法：基于超声多普勒血流测量的理论模型,通过比较不同检测电路的特点,提出并实现由有源晶振超声发射电路和谐振放大同步解调接收电路组成的脐血流检测电路的方案。结果：使用血流动力学模拟实验装置进行检测,能正确地显示脐血流方向的声谱图,不存在反向的血流假象。结论：该脐血流检测电路灵敏度高,提取脐血流方向的性能显著提高。为医生评估胎儿状态提供了良好的参考指标。