芪桂益脉灵对缺血再灌注大鼠IMA表达的实验研究

目的:观察芪桂益脉灵(QGYML)对急性心肌梗死大鼠缺血修饰性白蛋白(IMA)表达的影响。方法:将Wistar大鼠56只,随机分为7组,其中空白对照组(8只)不做任何处理,而假手术组(8只)大鼠开胸后暴露左冠状动脉,不作结扎,余下40只分别分成缺血再灌注组、缺血预适应组、消心痛组、芪桂益脉灵低剂量组及高剂量组,并将大鼠行冠状动脉左前降支结扎造成急性心肌梗死(AMI)模型,模型成功后,分别予QGYML(大、小剂量,即1g/kg、2g/kg)、异山梨酯(消心痛)(2.7mg/kg)和生理盐水,连续灌服7天。采用固相夹心法酶联免疫吸附测定IMA的表达。结果:芪桂益脉灵高剂量组、低剂量组及消心痛组可明显减少缺血再灌注条件下IMA的含量,与缺血再灌注组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:芪桂益脉灵可抑制缺血再灌注模型中IMA的表达,具有抗心肌缺血损伤的作用。     

芪桂益脉灵对缺血再灌注型大鼠心肌细胞蛋白激酶C的影响

1 材料与方法 1．1材料 选用健康Wistar大鼠56只[合格证号SCXK（辽）2003—0012]，雄雌各半，体重200～250g，由沈阳市双义实验动物研究所提供。芪桂益脉灵水煎汤剂由我校制剂室提供。消心痛：购自山东博山制药有限公司（H37022980）。生理盐水：哈尔滨三精艾富西药业有限公司。抗鼠PKC抗体试剂盒：武汉博士德公司。二抗，多聚赖氨酸：北京中杉金桥生物技术有限公司。     

芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织P38MAPK信号通路的影响

目的:观察芪桂益脉灵(QGYML)对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织p38MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)、P-p38MAPK(磷酸化丝裂原活化蛋白激酶)表达的影响,探讨该药抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法:雄性SD大鼠50只,随机分为5组,正常对照组、假手术组、模型组、芪桂益脉灵高剂量组、低剂量组,分别给生理盐水、QGYML1.2、0.6 g/kg灌胃,每日灌胃给药1次,连续灌胃7 d,结扎/再通冠状动脉左前降支制备急性心肌缺血再灌注模型。取大鼠心肌组织HE染色观察病理形态变化,免疫组化法测定心肌细胞p38MAPK、P-p38MAPK表达。结果:芪桂益脉灵高、低剂量组大鼠心肌组织病理学变化较模型组明显减轻,高剂量组效果更明显。模型组大鼠心肌组织P-p38MAPK表达较其他各组明显增强(P0.05);芪桂益脉灵组P-p38MAPK表达明显减少,与模型组比较具有统计学意义(P0.05),高剂量组效果更显著;各组p38MAPK表达未见明显变化。结论:芪桂益脉灵对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有显著保护作用,抑制p38 MAPK信号通路是其作用机制之一。     

芪桂益脉灵预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡基因Fas及Bcl-2表达的影响

目的 观察芪桂益脉灵（QGYML）对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响,探讨其预适应样心肌保护作用。方法 取Wistar大鼠56只,随机分为7组,假手术组（8只）大鼠开胸暴露左冠状动脉,但不作结扎,空白对照组（8只）不做处理,其余40只大鼠结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死（AMI）模型,造模成功后,分别给QGYML（大、小剂量,即1g／kg、2g／kg和0.6g／kg）、异山梨酯（消心痛）和生理盐水,连续灌服7d。采用免疫组织化学法测定Bcl-2和Fas的表这。结果 消心痛组和QGYML大剂量组、小剂量组Bcl-2基因表达均上调,Fas蛋白表达均下调,与缺血再灌注组比较均有统计学意义。结论 QGYML能明显抑制AMI后大鼠心肌细胞凋亡,下调Fas蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,具有抗心肌缺血损伤的作用。     

芪桂益脉灵对缺血再灌注大鼠心肌细胞炎症因子ICAM-1、VCAM-1的影响

目的:观察芪桂益脉灵对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的影响。方法:选用健康大白鼠50只,随机分为正常对照组、假手术组(只开胸,不结扎冠状动脉)、单纯缺血-再灌注组(模型组)、芪桂益脉灵低剂量组、芪桂益脉灵高剂量组,每组10只。给药组予芪桂益脉灵(0.6、1.2 g/kg),其余组给生理盐水,2 mL/次,每日清晨空服灌胃给药1次,连续7 d,用酶联免疫分析法检测心肌组织ICAM-1、VCAM-1含量。结果:芪桂益脉灵高、低剂量组可减少缺血再灌注条件下血管炎症因子ICAM-1、VCAM-1的含量,与模型组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:芪桂益脉灵可有效降低缺血再灌注模型大鼠炎症因子ICAM-1、VCAM-1的表达,具有保护血管内皮,干预炎症反应,抗心肌缺血损伤作用。     

芪桂益脉灵对大鼠心律失常的影响

1　材料与方法取大白鼠 5 0只 ,体重在 2 80± 2 0ｇ ,雌雄各半 ,随机分 5组并编号。每组 10只 ,每日清晨空腹灌服给药 1次 ,连续 7ｄ。 (1)生理盐水组 ,生理盐水 2ｍｌ/次。 (2 )芪桂益脉灵Ⅰ组 (低量 )将益脉灵按 0 632ｇ/ｋｇ溶于2ｍｌ生理盐水中。 (3)芪桂益脉灵Ⅱ组 (高量 )将益脉灵按 1 2 64ｇ/ｋｇ溶于 2ｍｌ生理盐水中。 (4)胺碘酮组 ,将胺碘酮 60 2 1ｍｇ/ｋｇ溶于 2ｍｌ生理盐水中 ,于第 7ｄ灌药 1ｈ后 ,分别以戊巴比妥钠 30ｍｇ/ｋｇ麻醉固定 ,分离颈Ｖ记录血压 ,切开气管按入人工呼吸机供开胸后进行人工呼吸 (15 4次 /ｍｉｎ)…     

芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤保护机制的研究

目的通过测定ICAM-1、VCAM-1、PI-3Kp85am RNA和AKT2m RNA的表达,探讨芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤的保护机制。方法随机将50只SD大鼠分为5组,每组10只,每日清晨空腹灌胃1次,连续灌服7 d。空白对照组(灌服生理盐水)开胸暴露左冠状动脉后不做任何处理,假手术组(灌服生理盐水)开胸暴露左冠状动脉后穿线并结扎,单纯缺血再灌注组(灌服生理盐水)、芪桂益脉灵低剂量组(0.6 g/kg)和芪桂益脉灵高剂量组(1.2g/kg)结扎左冠状动脉前降支造成急性心肌梗死(AMI)模型。再灌注后腹主动脉采血5 m L,离心后将上层血清用双抗体夹心法酶联免疫测定ICAM-1和VCAM-1的表达;取大鼠心尖部缺血组织,采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法来测定PI-3Kp85am RNA、AKT2m RNA的表达。结果芪桂益脉灵组与单纯缺血再灌注组比较,ICAM-1和VCAM-1表达均下降(P<0.05),PI3Kp85am RNA、AKT2m RNA水平明显升高(P<0.05),其中高剂量组的效果更加显著。结论芪桂益脉灵可减轻心肌缺血再灌注后的炎症反应,并且可激活再灌注损伤挽救激酶信号通路,从而保护血管内皮和受损心肌组织。     

芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞外信号调节激酶1/2的影响

目的:观察芪桂益脉灵对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的影响。方法:取SD大鼠50只,随机分为5组,正常对照组、假手术组、模型组、芪桂益脉灵高、低剂量组,分别给生理盐水、QGYML1.2 g/kg和0.6 g/kg),连续灌服7 d。结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死(AMI)模型。实验结束后免疫组化法检测心肌组织ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达水平。结果:各组大鼠心肌ERK1/2蛋白表达水平比较无显著性差异(P0.05);与正常组、假手术组比较,模型组心肌PERK1/2表达显著升高(P0.05);芪桂益脉灵组P-ERK1/2表达显著高于空白组、假手术组和单纯缺血再灌注组,其中高剂量组升高更加明显(P0.05)。结论:芪桂益脉灵能够升高ERK1/2磷酸化水平,减少心肌细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤心肌具有保护作用。     

芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠血清基质金属蛋白酶-9的影响

目的:通过观察芪桂益脉灵(QGYML)对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨该药对心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法:取雄性SD大鼠50只,随机分为5组,正常对照组、假手术组、模型组、芪桂益脉灵高剂量组(1.2 g/kg)和低剂量组(0.6 g/kg)。结扎大鼠冠状动脉左前降支制备急性心肌缺血再灌注损伤模型,造模成功后,分别给予相应处理7 d。采用双抗体夹心酶联免疫法测定血清MMP-9的表达。结果:正常组、假手术组血清MMP-9无明显变化,模型组血清MMP-9水平明显升高,QGYML低剂量组、高剂量组血清MMP-9水平明显降低,与模型组比较均有统计学意义(P0.05)。结论:QGYML能够通过减少MMP-9的分泌,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。     

芪桂益脉灵对大鼠心肌缺血再灌注损伤基质金属蛋白酶9及c-Jun氨基末端蛋白激酶表达的影响

目的观察芪桂益脉灵对大鼠心肌缺血再灌注损伤基质金属蛋白酶9(MMP-9)和c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)信号通路的影响。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为空白组(N)、假手术组(Sham)、单纯缺血再灌注组(I/R)、芪桂益脉灵高剂量组(QGYMLH)、芪桂益脉灵低剂量组(QGYML),每组10只,分别给予0.9%氯化钠注射液、芪桂益脉灵(高、低剂量),连续灌服7 d,结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型,腹主动脉采血,离心取上层血清,采用酶联免疫法检测MMP-9的表达;取心肌组织,用中性福尔马林固定,应用免疫组化法检测磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶(P-JNK)表达。结果 Sham组MMP-9、P-JNK表达水平与N组比较差异无统计学意义(P0.05);I/R组、QGYMLL组、QGYMLH组MMP-9、P-JNK表达水平均高于N组(P0.05);QGYML组、QGYMLH组MMP-9、P-JNK表达水平均低于I/R组(P0.05);QGYMLH组MMP-9、P-JNK表达水平低于QGYMLL组(P0.05)。结论芪桂益脉灵对缺血再灌注损伤心肌具有保护作用,其机制与抑制心肌组织中JNK磷酸化程度及MMP-9表达有关,且与中药剂量相关。     

电针内关对缺血再灌注损伤大鼠心肌肌浆网钙泵活性及mRNA表达的影响

目的：观察电针内关对缺血再灌注损伤大鼠心肌SERCA活性及其基因表达的影响,并以神门穴、合谷穴作对比研究。方法：实验分为假手术组、心肌缺血再灌注模型组（模型组）、电针内关组、电针神门组、电针合谷组,用无机磷比色法测定SERCA活性、RT-PCR法分析SERCA基因表达。结果：与假手术组比,模型组SERCA活性及其基因表达均有非常显著性差异（P〈0.01）,电针内关组、电针神门组与模型组比较差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）,电针内关组优于电针神门组（P〈0.05,P〈0.01）。结论：电针内关上调心肌SERCA基因表达,增强SERCA活性是实现对再灌注损伤心肌组织保护作用的途径之一。电针内关与电针神门两组疗效差异说明经穴对靶器官机制调节作用与经脉（穴）脏腑间的特异联系密不可分。     

冠心康对大鼠缺血再灌注损伤心肌氯通道ClC-2、ClC-3、CFTR表达的影响

目的观察中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤（MIRI）心肌细胞氯通道ClC-2、ClC-3、CFTR表达的影响.方法 40只SD雄性大鼠随机分为4组：假手术组、MIRI模型组、冠心康组、盐酸地尔硫卓组.冠心康按生药13 g/（kg·d）灌胃给药,盐酸地尔硫卓按30 mg/（kg·d）灌胃给药,假手术组和MIRI模型组分别于相同时间给予等容积的生理盐水灌胃,术前灌胃7 d,每日1次.采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h复制大鼠MIRI模型,造模成功后,在MIRI结扎线以下区域至心尖取材,运用RT-PCR法检测ClC-2、ClC-3、CFTR mRNA表达水平和蛋白质印迹法检测ClC-2、ClC-3、CFTR蛋白的表达.结果氯通道相关基因ClC-2、ClC-3、CFTR mRNA相对表达量在MIRI模型组明显升高,冠心康组和盐酸地尔硫卓治疗组mRNA相对表达量则明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）;氯通道相关基因ClC-2、ClC-3和CFTR蛋白相对表达量在MIRI模型组明显升高,冠心康组和盐酸地尔硫卓治疗组蛋白表达量则明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论冠心康对大鼠MIRI心肌组织具有明显的保护作用,其作用机制可能与调控心肌细胞氯通道相关蛋白的表达有关.     

针刺预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌HMGB1表达的影响

目的:观察针刺预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌HMGB1(高迁移率族蛋白1)表达的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分为4组,假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)、电针预处理组(EP)、电针对照组(EC);建立心肌缺血再灌注模型,EP组于造模前1周即开始每天电针大鼠"内关穴",EC组则予电针"外关穴"处理。通过心脏彩超比较造模后各组大鼠心功能,蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌HMGB1与STAT3(信号转导和转录活化因子3)的表达。结果:EP组与I/R组相比,左心室前壁厚度、LVDd、LVDs、FS、LVEF均有明显改善(均P0.01),HMGB1的表达明显减少(P0.01),p-STAT3的表达显著提高(P0.01);而EC组与模型组比较,未见明显变化。结论:针刺"内关穴"预处理可抑制心肌组织HMGB1表达发挥心肌缺血再灌注损伤保护作用,其机制可能与STAT3激活相关。     

芪黄煎剂对缺血-再灌注大鼠肠黏膜上皮细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3、9 mRNA表达的影响

目的 观察中药芪黄煎剂对缺血-再灌注(ischemia-reperfusion, I/R)损伤大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡基因Bcl-2、Bax mRNA表达和信号转导分子Caspase-3、9 mRNA表达的影响。     

针刺对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织CaMKⅡmRNA表达与细胞凋亡的影响

目的:观察电针手厥阴经“内关”“郄门”对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织CaMKⅡmRNA水平和细胞凋亡的影响。方法:将30只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、针刺内关组、针刺郄门组、针刺对照组,每组10只。除假手术组外,其余各组采用结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血再灌注模型,并在结扎冠脉前分别电针大鼠双侧“内关”...     

舒冠滴丸对高脂血症大鼠缺血再灌注损伤心肌ICAM-1表达的影响

目的观察舒冠滴丸对高脂血症大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响及其作用机制探讨。方法建立大鼠高脂血症模型,随机分为对照组、假手术组、模型组、辛伐他汀组及舒冠滴丸高剂量、中剂量和低剂量组。再灌注后,测定心肌组织ICAM-1表达、血脂,观察心肌病理形态学变化。结果与模型组比较,舒冠滴丸各剂量组心肌组织ICAM-1蛋白表达均降低（P〈0.05）,而辛伐他汀组与舒冠滴丸高剂量组相近;与模型组比较,舒冠滴丸高剂量和中剂量组可明显降低血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平（P〈0.05）,升高血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平（P〈0.05）,而辛伐他汀组血脂与舒冠滴丸高剂量组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;舒冠滴丸高剂量组和辛伐他汀组缺血区心肌细胞排列基本整齐,心肌纤维断裂及坏死减少,空泡变性减轻,心肌间质水肿不明显,灶性出血及炎性细胞浸润减轻。结论舒冠滴丸可降低高脂血症大鼠缺血再灌注损伤心肌组织ICAM-1表达,减轻PMN浸润,调节血脂代谢紊乱。     

黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注损伤大鼠心肌P-STAT蛋白表达的影响

目的观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对缺血再灌注大鼠心肌信号转导及转录激活因子P-STAT1,P-STAT3蛋白表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、SSTF 3个剂量组。SSTF组于术前1周灌服不同剂量的SSTF(17.5,35,70 mg·kg-1.d-1),另两组给等量生理盐水。结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。缺血30 min、再灌注2 h后,采用电镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构的变化,Western blot-ting技术检测心肌细胞P-STAT1,P-STAT3蛋白表达的变化。结果与sham组相比,IR组的心肌细胞超微结构损伤明显,P-STAT1蛋白表达增加(P<0.01),P-STAT3蛋白表达减少(P<0.01);与IR组相比,SSTF组细胞超微结构损伤减轻,心肌细胞的P-STAT1蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01);P-STAT3蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论 SSTF可以减轻心肌细胞结构损伤,其机制可能与降低P-STAT1蛋白表达,增加P-STAT3蛋白表达有关。     

针灸预处理对缺血再灌注大鼠心肌Bcl-2mRNA和BaxmRNA基因表达的影响

目的:为探求针灸预处理与缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2mRNA及BaxmRNA的影响,丰富治未病理论。方法:采用针灸预处理组间,针灸预处理与缺血预处理比较,利用大鼠心肌缺血再灌注模型观察,分正常对照组,假手术组,缺血再灌注组,缺血预处理组,手针预处理日1次组,电针预处理日1次组,艾灸预处理日1次组,手针预处理日2次组,电针预处理日2次组,艾灸预处理日2次组。结果:表明针灸预处理与缺血预处理使bcl-2mRNA增多,使baxmRNA减少,且针灸预处理日2次组比日1次组和缺血预处理更有效,进一步证明了中医针灸"治未病"理论科学价值。     

芪桂益脉灵对大鼠核因子-KB表达和TNF-α含量的影响

目的:通过测定芪桂益脉灵及其不同配伍对大鼠心肌缺血-再灌注核因子-KB和肿瘤坏死因子-α表达,探讨芪桂益脉灵及其不同配伍对大鼠心肌缺血-再灌注的疗效以及作用机制。方法:入选Wistar大鼠110只,随机分成假手术组、模型组、单味药组、配伍组,共11组,每组10只。冠脉左前降支结扎缺血30min再灌注2h复制MI/R模型,放免法检测血清TNF-α含量,免疫组化法测定心肌组织中核因子KB的表达。结果:芪桂益脉灵组较其余各组TNF-α含量显著降低(P0.05),较其余各组心肌组织中核因子-KB活化程度减低。结论:芪桂益脉灵组可以降低血清中肿瘤坏死因子含量,减少心肌组织中核因子-KB活化程度,均明显优于单味药组及其他配伍组。     

针刺预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌内质网应激的影响

目的:研究针刺预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌内质网应激的影响。方法:48只Wistar雄性大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)、电针干预组(EP)、电针对照组(EC)。建立心肌缺血再灌注模型,EP组于手术前1周即每日给予电针"内关穴"(P6)处理,而EC组则予电针"外关穴"(SJ5)处理,免疫印迹法与免疫组化法检测内质网应激相关蛋白及p-Akt的表达。结果:I/R组心肌细胞内质网相关蛋白Caspase-12、Chop较Sham组升高,EP组内质网相关蛋白Caspase-12、Chop较I/R组下降;EP组显著上调心肌组织p-Akt的表达,与I/R组相比具有显著统计学意义(P0.05);同时与I/R组相比,电针"外关穴"并未发现p-Akt的激活以及Caspase-12、Chop表达的下调。结论:针刺预处理通过抑制心肌缺血再灌注后的内质网应激,其机制可能与激活Akt磷酸化有关。