葛根素对成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨葛根素(Pue)对高糖培养的成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原m RNA(CollⅠm RNA)表达的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松症提供实验依据。方法:取出生24 h内的SD大鼠的颅骨,体外分离培养成骨细胞,待细胞形态稳定后,取对数生长期的成骨细胞,随机分为正常组、高糖组(葡萄糖浓度22 mmol/L)、葛根素各浓度组(葛根素浓度分别为10-8 mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)、高糖加葛根素各浓度组,每组设8个复孔,分别培养48 h,隔天换液并加药。测定成骨细胞的增殖能力、细胞内ALP活性以及CollⅠm RNA表达情况。结果:与正常组比较,葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞CollⅠm RNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);高糖组、高糖+葛根素各浓度组明显低于正常组,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与高糖组比较,高糖+葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞CollⅠm RNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:高糖情况下抑制成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,但加入葛根素后能提高成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,说明葛根素对糖尿病骨质疏松症有治疗作用。     

葛根素对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡及CHOP通路的影响研究

目的:探讨葛根素对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡及CHOP通路的影响。方法:设置MC3T3-E1组,葛根素低、中、高剂量组。MC3T3-E1组常规培养,葛根素低、中、高剂量组分别用浓度为20.0μg/mL、40.0μg/mL、80.0μg/mL的葛根素溶液干预培养。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)法测定各组MC3T3-E1细胞增殖水平,流式细胞法测定各组MC3T3-E1细胞凋亡水平,逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定各组MC3T3-E1细胞转录激活因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP) RNA表达水平,Elisa法测定各组MC3T3-E1细胞ATF4、CHOP、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)蛋白表达水平。结果:与MC3T3-E1组比较,葛根素低、中、高剂量组细胞凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达水平均升高(P0.05)。与葛根素低剂量组比较,葛根素中、高剂量组凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达均升高(P0.05)。与葛根素中剂量组比较,葛根素高剂量组凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达水平均升高(P0.05)。结论:葛根素能拮抗高糖对MC3T3-E1成骨细胞的增殖抑制作用和凋亡促进作用;其机制与葛根素抑制ATF4、CHOP RNA及蛋白的表达拮抗了高糖环境引起的成骨细胞内质网应激,进而减轻成骨细胞氧化应激反应有关。     

三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍对高糖培养成骨细胞增殖功能的影响

目的:观察三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍对高糖条件下成骨细胞增殖功能的影响.方法:取3～5代成骨细胞进行试验,成骨细胞(OB)密度为1×105个/mL,观察葡萄糖(Glu)浓度分别为20,40,60 mmol·L-1时成骨细胞的生长情况.三七总皂苷和淫羊藿苷质量浓度为10,20,50,100 mg·L-1,采用MTT法观察单剂量药物及其配伍对高糖条件下成骨细胞的增殖抑制的改善情况.结果:与对照组相比,60 mmol· L-1 Glu的高糖环境对于OB的增殖有明显的抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01);三七总皂苷和淫羊藿苷在质量浓度为10,20,50 mg·L-1时对高糖引起的OB增殖抑制具有显著改善作用(P ＜0.05,P＜0.01),组分配伍比例三七总皂苷:淫羊藿苷为50 mg·L-1∶20 mg·L-1时,对高糖条件下成骨细胞增殖抑制具有明显的改善作用(P＜0.01).结论:从对高糖条件下成骨细胞增殖抑制改善作用的角度证实了三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍的合理性.     

"更年春"方对大鼠成骨细胞增殖与分化及矿化的影响

目的观察中药复方“更年春”药物血清对新生大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法用酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的更年春药物血清条件培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照药物。MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法(PNPP)检测碱性磷酸酶(ALP)活性以观察成骨细胞活性,茜素红染色观察矿化结节个数。结果与生理盐水组相比,更年春组成骨细胞MTT值(OD570)及OD405值明显增加(P均<0.01),更年春高剂量组矿化结节数显著高于生理盐水组(P<0.01)。与雌激素组相比,中药高剂量组成骨细胞的OD570值(P<0.01)、OD405值(P<0.05)及矿化结节数均增高(P<0.05)。结论更年春在体外对成骨细胞的增殖、分化和矿化有明显促进作用,更年春高剂量明显优于雌激素,提示更年春防治骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞活性有关。     

葛根素对成骨细胞生物学作用的实验研究

目的:观察葛根素对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的影响。方法:取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞。应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及茜素红染色方法观察葛根素对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性及矿化结节形成的影响。结果:葛根素具有刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性及矿化结节形成数量的作用(P<0.01或P<0.05)。结论:葛根素具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

补肾宁心方药物血清对鼠成骨细胞的增殖周期与凋亡的影响

目的:探讨补肾宁心方药物血清对成骨细胞(osteob last,OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法:颅骨酶解法培养OB,体外模拟雌激素撤退现象,分别予以5%~30%系列浓度的对照鼠血清或中药血清培养,流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡,透射电镜观察OB超微结构。结果:DNA含量分析显示与相应对照组相比,10%~20%药物血清组的S期和G2/M期细胞百分比明显增加,G0/G1期细胞百分比明显下降,细胞增殖指数(PI)显著增加(分别为P<0.05和P<0.01);10%~20%的药物血清还具有显著的抗凋亡作用(分别为P<0.05和P<0.01);透射电镜可见经20%药物血清诱导后的OB细胞出现典型的细胞器明显增多,内质网扩张,线粒体丰富等形态学改变。结论:补肾宁心方药物血清在体外可有效地促进鼠OB的增殖周期,从而促进OB增殖并抑制其凋亡。     

藻黄合剂防治糖尿病肾病的基础研究

目的:研究藻黄合剂防治糖尿病肾病的作用机制。方法:体外培养人肾小球系膜细胞并在高糖培养基中孵育,用不同浓度的藻黄合剂培养液孵育高糖环境下培养的GMC,于不同时间(24h、48h)采用MTS方法检测各组系膜细胞增殖的变化。分别观察24h、48h系膜细胞增殖和FN的分泌。结果:不同浓度的ZHM作用于GMC 24h、48h,除低剂量组24h无显著作用外(P0.05),其余各组均能显著抑制GMC的增殖(P0.01或P0.05)。藻黄合剂各剂量组在24h、48h时均能显著抑制高糖下FN的分泌(P0.01或P0.05)。结论:ZHM在一定时间内可明显抑制体外培养的GMC在高糖环境下的增殖,同时抑制FN的分泌,这可能是藻黄合剂延缓糖尿病肾病、保护肾功能的作用机制之一。     

荔枝核皂苷对高糖诱导的HMC细胞增殖和凋亡的作用

目的探讨高糖环境下人肾小球系膜细胞(HMC)的增殖及荔枝核皂苷的干预作用,阐明荔枝核皂苷对高糖诱导的HMC增殖的作用机制。方法体外培养HMC细胞,给予高浓度葡萄糖(30 mmol/L)诱导HMC细胞,加入不同浓度的荔枝核皂苷进行干预处理。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测高糖及不同浓度荔枝核皂苷干预HMC细胞的增殖情况;ELISA法检测转化生长因子(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的含量;流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果 MTT法及ELISA法检测结果显示:荔枝核皂苷各剂量组均可抑制高糖引起的HMC细胞增殖(P0.05或P0.01),并降低TGF-β1、FN的含量。流式细胞术检测结果显示:荔枝核皂苷各剂量组,48h细胞凋亡率表达明显增加(P0.01)。结论荔枝核皂苷对高糖诱导的HMC细胞增殖具有抑制作用,并促进其凋亡,其抑制作用可能是通过促进细胞凋亡的途径抑制细胞增殖,此作用可能对延缓和控制糖尿病肾病有积极作用。     

壮骨方对高糖培养下血管内皮细胞增殖及Notch1、Noggin表达的影响

目的 通过体外细胞实验，探讨壮骨方对高糖培养下血管内皮细胞增殖及Notch1、Noggin表达的影响。方法 采用人脐静脉内皮细胞原代培养，待细胞生长至合适浓度后将细胞随机分为阴性对照组、高糖组、高糖+20%壮骨方组、高糖+血小板衍化生长因子BB(PDGF-BB)组、20%壮骨方组、PDGF-BB组。干预后采用MTT法检测血管内皮细胞增殖水平，使用流式细胞术检测细胞凋亡水平，采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组血管内皮细胞Notch1、Noggin的表达水平。结果 与阴性对照组比较，高糖培养下血管内皮细胞增殖受到显著抑制(P<0.01)、凋亡率显著增加(P<0.01),Notch1、Noggin蛋白及mRNA水平显著降低(P<0.01);与高糖组比较，高糖+20%壮骨方组、高糖+PDGF-BB组血管内皮细胞增殖抑制明显改善(P<0.05)、凋亡率显著下降(P<0.01),Notch1、Noggin蛋白及mRNA水平明显上调(P<0.01)。结论 壮骨方能促进血管内皮细胞增殖、抑...     

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和Ⅰ型前胶原αmRNA表达影响.根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR-106/01,采用3H-Tdr法检测细胞增殖,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ型胶原αmRNA的表达,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响;FCM法检测细胞周期.结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异无显著性.续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异也无显著性.细胞凋亡率和G0-G1期细胞比率显著低于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05).表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖,防止成骨细胞凋亡,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一.     

翻白草含药血清对高糖培养肾小管上皮细胞增殖作用及其对RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:探讨翻白草含药血清对高糖培养小鼠肾小管上皮细胞增殖及其对转分化机制的影响。方法:制备各组大鼠含药血清;10%胎牛血清(FBS)-RPMI 1640培养基培养小鼠肾小管上皮细胞,传代培养后按3 000个/孔接种于96孔培养板,分为正常组、高糖组、厄贝沙坦组及翻白草组;加入相对应6%含药血清的高糖RPMI 1640培养基;培养12,24,48,60 h时分别观察各组细胞形态,并应用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组吸光度A;高糖培养24 h后应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肾小管上皮细胞小G蛋白(RhoA),Rho蛋白激酶1(ROCK1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏附蛋白-E(Ecadherin)蛋白表达情况。结果:高糖培养后肾小管上皮细胞由扁平不规则的多角形变为长梭形;加入相应含药血清干预后细胞呈扁平不规则的多角形;与正常组比较,12 h时高糖组肾小管上皮细胞呈明显增殖状态(P0.05),24,48,60 h时增殖显著(P0.01);与高糖组比较,12 h时翻白草组能抑制肾小管上皮细胞增殖(P0.05),24,48,60 h时翻白草组抑制肾小管上皮细胞增殖作用显著增强(P0.01);与厄贝沙坦组比较,48,60 h翻白草组能抑制肾小管上皮细胞增殖(P0.05);与模型组比较,翻白草组E-cadherin蛋白表达显著增加,RhoA,ROCK1和α-SMA蛋白表达显著减少(P0.01)。结论:翻白草含药血清可以抑制高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、抑制肾小管上皮细胞转分化,可能与RhoA/ROCK信号通路有关。     

Inhibition of Qiyaoxiaoke capsule on the glomerular mesangial cell proliferation induced by high glucose

目的 观察芪药消渴胶囊对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMCs)增殖的抑制作用.方法 通过GMCs体外培养技术,采用含药血清药理学的方法,制备不同浓度芪药消渴胶囊的含药血清,筛选最佳葡萄糖浓度,在葡萄糖的诱导下,通过四甲基偶氮唑蓝(M TT)比色法检测并观察不同时间、不同浓度下GMCs增殖情况.结果 在不同时间点,空白组细胞生长最为缓慢.与空白组比较,在相同培养条件下,0.4 g/L葡萄糖组及0.5 g/L葡萄糖组在48h、72h对GMCs增殖有刺激作用(P＜0.05,P＜0.01),0.6 g/L葡萄糖组0.7 g/L葡萄糖组、0.8 g/L葡萄糖组在24h、48h、72h对GMCs增殖有明显刺激作用(P＜0.05,P＜0.01),其中0.6 g/L萄萄糖组在48 h、72h对GMCs增殖刺激作用较强(P＜0.01).提示0.6 g/L葡萄糖为GMCs增殖的最佳刺激浓度.与空白对照组比较,高糖组细胞生长迅速(P＜0.05,P＜0.01);与高糖组比较,芪药消渴胶囊含药血清各组细胞在48 h、72 h生长缓慢(P＜0.05),提示芪药消渴胶囊对高糖诱导的GMC8增殖的抑制作用.结论 芪药消渴胶囊具有抑制GMCs增殖作用.     

人参皂苷Rg1对高糖诱导损伤人脐血间充质干细胞生物学特性及分泌干细胞因子功能的影响

目的观察研究人参皂苷Rg1(GS-Rg1)对高糖诱导损伤人脐血间充质干细胞(h UCBMSCs)生物学特性及分泌干细胞因子(SCF)的影响。方法通过体外分离和培养h UCBMSCs,并取第4代细胞进行成骨、成软骨、成脂诱导分化鉴定。将鉴定成功的h UCBMSCs用含30 mmol/L葡萄糖的培养基培养120 h,分别用不同浓度GS-Rg1(0、5、10、20、40、80 mg/L)处理,确定GS-Rg1促进高糖诱导损伤h UCBMSCs增殖的最佳浓度。将高糖诱导损伤h UCBMSCs分成试验组和对照组,另将用含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基培养的h UCBMSCs作为正常组。试验组用最佳浓度GS-Rg1干预,对照组和正常组用等容积磷酸盐缓冲液(PBS)干预,分别观察各组对高糖诱导损伤h UCBMSCs的增殖能力、黏附能力、迁移能力、抗凋亡能力及分泌SCF功能的影响。结果 GS-Rg1促进高糖诱导损伤h UCBMSCs增殖的最佳浓度为40 mg/L。与正常组比较,对照组h UCBMSCs的增殖密度(OD)值、黏附数、迁移宽度及SCF含量均明显下降(P 0.05),细胞凋亡率明显升高(P 0.05);与对照组比较,试验组h UCBMSCs增殖OD值、黏附数、迁移宽度及SCF含量均明显增加(P 0.05),细胞凋亡率明显下降(P 0.05)。结论 GS-Rg1对高糖诱导损伤h UCBMSCs的生物学特性具有保护作用,能够明显促进h UCBMSCs增殖,提高黏附和迁移能力,减少细胞凋亡,并能促进SCF分泌。     

黄芪注射液对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

[目的]研究黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。[方法]传代培养人近曲肾小管上皮细胞,细胞用无血清培养基同步化24 h后,将细胞分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+不同浓度黄芪注射液组(2、20、200μg/m L),每组设3个复孔。将细胞置于37℃恒温培养箱中培养至24、48、72 h,收集细胞及细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。[结果]24、48、72 h,低糖对照组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养24 h,黄芪干预组200和20μg/m L细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养48和72 h,黄芪注射液干预组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。黄芪注射液干预组各组之间凋亡率比较差异也都有显著性(P0.05),其干预作用呈剂量依赖性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,有助于糖尿病肾病的治疗。     

益骨口服液含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的:探讨益骨口服液含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法:取SD大鼠40只,雌雄各半。将大鼠分为A组(高剂量组)、B组(中剂量组)、C组(低剂量组)、D组(空白组),E组(对照组)。按照不同的剂量灌胃。灌胃10d后,制备含药血清;将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用MTT法、硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果:经过10d益骨口服液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量(P0.05或P0.01)、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成明显。结论:证实了益骨口服液含药血清可以促进成骨细胞增殖、分化及矿化。     

葛根素注射液对高糖培养成骨细胞保护作用的研究

目的：探讨葛根素注射液对高糖培养成骨细胞的保护作用,为临床治疗糖尿病骨质疏松提供实验依据。方法：体外分离培养成骨细胞,并随机分为正常培养基组、高糖培养基组和高糖培养基添加葛根素注射液组。3组成骨细胞各自培养48小时后进行形态学观察,同时检测其碱性磷酸酶（ALP）表达的阳性率。结果：高糖培养组成骨细胞增殖分化能力减弱,细胞数量及连接减少,其碱性磷酸酶（ALP）阳性率也明显低于正常组;葛根素组上述指标均明显改善。结论：高糖可影响骨组织代谢及成骨细胞的增殖分化,葛根素对上述改变有一定的保护作用。     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞的促凋亡作用

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的促凋亡作用。方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的淫羊藿苷共同培养48h后,用MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;比色法测半胱天冬蛋白酶3(Caspas-3)活性。结果:与空白组相比较,模型组OD值显著升高(P0.01),证明HCY可促进VSMC增殖;与模型组相比,高、中、低浓度的ICA都可抑制HCY所诱导的VSMC增殖(P0.05),抑制作用与ICA浓度呈正相关;淫羊藿苷各组凋亡细胞数明显增多,与HCY组相比差异显著(P0.01);与空白组相比较,模型组A405nm显著降低(P0.01),表明HCY可通过抑制Caspas-3酶的活性而抑制VSMC凋亡;与模型组相比,高、中、低浓度ICA组Caspas-3酶活性显著升高(P0.01)。结论:淫羊藿苷拮抗HCY诱导的兔VSMC增殖,促进其凋亡,激活caspase-3这一凋亡效应酶可能是其机制之一。     

龟鹿二仙汤含药血清对大鼠成骨细胞细胞周期调控的研究

目的 探讨龟鹿二仙汤含药血清对体外培养SD大鼠成骨细胞（OB）增殖功能以及细胞周期与凋亡的调控作用,分析其防治骨质疏松症的作用机理.方法 采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原同浓度（10％、15％、20％）的龟鹿二仙汤含药血清加入OB培养体系（对照组等量生理盐水灌胃）,培养24、48、72 h,应用MTT比色法来检测其对OB增殖功能的影响.培养72 h后流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡.结果 龟鹿二仙汤含药血清对OB的增殖作用呈浓度依赖性,在培养72 h后显著促进其增殖作用.DNA含量分析显示,含药血清组的S期和G2/M期细胞百分率比对照组明显增加,龟鹿二仙汤含药血清对OB具有抗凋亡作用,高浓度组作用最显著.结论 龟鹿二仙汤含药血清对体外培养SD大鼠OB增殖具显著作用且呈浓度依赖性,在体外可抑制OB凋亡从而治疗骨质疏松.     

牛蒡子苷对高糖诱导的视网膜神经节细胞凋亡和氧化损伤的影响

目的研究牛蒡子苷对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡和氧化损伤的影响和机制。方法 RGCs分成对照组、高糖组、牛蒡子苷低剂量组(ARC-Ⅰ组)、中剂量组(ARC-Ⅱ组)、高剂量组(ARC-Ⅲ组),其中高糖组、ARC-Ⅰ组、ARC-Ⅱ组、ARC-Ⅲ组细胞在培养时分别添加50 mmol/L的葡萄糖,ARC-Ⅰ组、ARC-Ⅱ组、ARC-Ⅲ组依次添加牛蒡子苷浓度为0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL。MTT检测增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡,试剂盒检测caspase-3活性以及ROS、MDA、SOD水平,Western blot检测TLR4蛋白表达。在RGCs中转染TLR4过表达载体,用高糖和牛蒡子苷细胞培养液培养,检测细胞增殖、凋亡、caspase-3活性以及ROS、MDA、SOD水平。结果 (1)增殖率:与对照组比较,各组均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而增殖率升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。(2)凋亡率:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而凋亡率降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。(3)caspase-3蛋白表达:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而caspase-3蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。(4)ROS、MDA、SOD水平:与对照组比较,各组ROS、MDA水平均明显升高,SOD水平均明显下降,差异均具有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组ROS、MDA水平均明显降低,SOD水平均明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而ROS、MDA水平降低,SOD水平升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。(5)TLR4蛋白表达:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而TLR4蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。(6)TLR4过表达:在RGCs中转染TLR4过表达载体,经过高糖和牛蒡子苷处理后,差异均具有统计学意义(t=9.391,P=0.001)。(7)TLR4过表达下的RGCs增殖率、凋亡率以及ROS水平:在RGCs中转染TLR4过表达载体和空载体(NC)阴性对照,经过高糖和牛蒡子苷处理后,ARC-Ⅱ+NC与ARC-Ⅱ+TLR4比较,细胞增殖率(t=7.639,P=0.000),凋亡率(t=7.129,P=0.000)和caspase-3活性(t=8.231,P=0.000),ROS(t=13.891,P=0.000)和MDA(t=8.406,P=0.000),SOD(t=9.966,P=0.000),差异均具有统计学意义。结论牛蒡子苷可通过下调TLR4蛋白表达抑制高糖诱导的RGCs凋亡和氧化损伤。     

藏药波棱瓜子总木脂素对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的通过研究藏药波棱瓜子总木脂素(TLHPS)对大鼠肝星状HSC-T6细胞的增殖抑制作用及诱导其凋亡的作用,进一步探讨TLHPS抗肝纤维化的作用机制。方法实验分为对照组,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组,阳性药秋水仙碱0.1μg/mL组。用加入各组药物的培养基分别培养HSC-T6细胞24、48、72 h,采用CCK8法检测各组细胞24、48、72 h的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,Western blotting法检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax、核转录因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果与对照组相比,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组对HSC-T6细胞24、48、72 h时的增殖抑制率明显增高(P0.01),且各组HSC-T6细胞早期凋亡率与晚期凋亡率明显升高(P0.05,0.01),G0/G1期细胞数明显增多(P0.01),G2/M期细胞数无明显差异(P0.05),S期细胞数明显减少(P0.01)。Western blotting结果显示,与对照组相比,TLHPS10、20、30、40μg/mL组Bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05,0.01),TLHPS 40μg/mL组Bax蛋白表达明显升高(P0.01),TLHPS 20、30、40μg/mL组NF-κB表达明显降低(P0.01)。结论 TLHPS抗肝纤维化的作用机制可能是通过降低Bcl-2、NF-κB的表达抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡。