体外转染γ-干扰素基因抑制人眼球筋膜囊成纤维细胞的研究

目的探讨阳离子脂质体介导的γ-干扰素(IFN-γ)基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法采用脂质体介导的方法,以质粒pcDNA3 IFN-γ基因转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞,同时以空载体重组质粒pcDNA3作为对照,G418筛选抗性克隆并扩增。以RT-PCR、免疫组化及流式细胞仪间接免疫荧光法检测IFN-γ基因的表达,应用流式细胞仪进行细胞周期分析,采用四甲基偶氮唑盐法检测IFN-γ基因对成纤维细胞的作用。结果转染pcDNA3 IFN-γ基因的成纤维细胞在转录水平和蛋白水平表达IFN-γ基因,转染的IFN-γ基因可明显抑制成纤维细胞的增殖。结论转染的IFN-γ基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖具有抑制作用。     

体外转染P27抑癌基因抑制人眼球筋膜囊成纤维细胞增生的研究

目的探讨阳离子脂质体介导的P27抑癌基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增生的抑制作用。方法收集斜视患者矫正手术过程中获取的球筋膜囊组织制备成组织块,采用贴壁法在DMEM＋质量分数10%胎牛血清培养液中进行培养和传代。采用脂质体介导的方法,将构建的增强型绿色荧光蛋白（pEGFP）-N1P27真核表达质粒转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞为pEGFP-N1P27转染组,同时以重组质粒pEGFP-N1的空质粒转染组为空载体组,另设部分未转染的成纤维细胞为未转染组。Westernblot法检测P27蛋白在人眼球筋膜囊成纤维细胞中的表达,用流式细胞技术进行细胞周期分析,MTT法检测P27基因对培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞活性的影响,检测值以细胞的吸光度（A490）值表示。结果荧光倒置显微镜下见转染成功的成纤维细胞呈绿色荧光。Westernblot检测显示,pEGFP-N1P27转染组中可见宽大的蛋白条带,证实人眼球筋膜囊成纤维细胞在蛋白水平表达P27基因。细胞周期分析结果表明,pEGFP-N1P27转染组73.16%的人眼球筋膜囊成纤维细胞处于G0-G1期,26.84%处于S期,而空载体组的人眼球筋膜囊成纤维细胞在G0-G1期、S期者分别为63.29%和58.16%,未转染组分别为36.71%和41.84%。MTT法检测表明,pEGFP-N1P27转染组人眼球筋膜囊成纤维细胞的A490值为0.079±0.054,明显低于空载体组的0.127±0.106和未转染组的0.180±0.007,差异均有统计学意义（P=0.000,P=0.011）。结论转染的P27基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增生具有抑制作用,并能够抑制成纤维细胞的活性。     

TGF-β2特异性siRNA载体干扰人结膜囊成纤维细胞表达的研究

目的:探讨人转化生长因子TGF-β2特异性siRNA真核表达载体转染人结膜囊成纤维细胞后对其TGF-β2mRNA表达的影响。方法:体外分离并培养人结膜囊成纤维细胞,在培养后传代3次的细胞以TGF-β2特异性siRNA真核表达载体进行转染,并以未转染细胞作为对照。转染后分别于24,48和72h收集细胞,采用RT-PCR技术检测TGF-β2特异性siRNA真核表达载体对TGF-β2mRNA表达的影响。结果:分离的人结膜囊成纤维细胞于接种约4h左右开始贴壁,同时细胞变长成为梭形,表现出明显的成纤维细胞特性,约36h后达到融合状态;RT-PCR结果示:与对照组相比,转染24,48和72h后的细胞TGF-β2表达抑制率分别为17.40%,52.80%和79.20%,抑制效率呈现随时间延长有所加强的趋势。结论:TGF-β2特异性siRNA真核表达载体能抑制人结膜囊成纤维细胞TGF-β2mRNA的表达。     

载5-氟尿嘧啶聚乳酸纳米微粒对人眼球筋膜囊成纤维细胞抑制作用的研究

目的 探讨载5-氟尿嘧啶(5-FU)聚乳酸纳米微粒(5-FU-PLA-NPs)对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的抑制作用.方法 为实验研究.噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量(0.1、1.0、10.0、100.0和1000.0 mg/L)的空载聚乳酸纳米微粒(PLA-NPs)在不同时间点(48和72 h)对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的影响,MTT比色法检测不同剂最(0.1、1.0、10.0、100.0和1000.0 mg/L)5-FU纳米药物和5-FU原药在1～7 d内共7个时间点对成纤维细胞生长的抑制作用,计算并比较两者在7个时间点对成纤维细胞的抑制率.RT-PCR分别检测剂量为100.0 mg/L的5-FU纳米药物和5-FU原药作用成纤维细胞1、5、7 d后Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达情况.对同一天各浓度A值的比较用单因素方差分析,同一天相同浓度5-FU原药组A值与5-Fu-PLA-NPs组A值的比较用两独立样本t检验分析,采用单因素方差分析分别比较不同时间点各组COI3的相对A值.结果 空载聚乳酸纳米微粒对成纤维细胞的增殖没有影响.载5-FU纳米微粒和5-FU原药均抑制成纤维细胞的增殖,并使Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达水平降低,该抑制作用具有时间和剂量依赖性.作用初期各剂量组5-FU纳米微粒的抑制作用低于原药,随时间延长抑制作用超过原药,差异有统计学意义(P<0.05).结论 聚乳酸(PEA)具有良好的生物相容性与安全性,可作为眼部用药的载体.载5-FU聚乳酸纳米微粒具有一定的缓释功能,可长期释放药物,随着作用时间的延长,5-FU纳米药物对成纤维细胞的抑制作用超过原药,其可作为靶向缓释药物载体.(中华眼科杂志,2009,45:26-31)     

小干扰RNA技术下调视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50中Survivin基因表达的研究

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术沉默视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50中凋亡抑制因子Survivin的表达,观察其干扰效果及对细胞的影响.方法 实验研究.体外化学法合成针对人Survivin基因的特异性小干扰RNA(siRNA)和对Survivin基因无沉默效果的阴性对照siRNA,利用转染试剂分别将siRNA转入SO-Rb50细胞株,通过半定量RT-PCR和Western blot检测其对SO-Rb50细胞中Survivin基因和蛋白表达的抑制作用,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度siRNA对细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率和细胞周期改变,荧光显微镜下观察细胞凋亡形态.对多组间数据比较采用单因素方差分析,处理组与对照组比较采用Dunnett-t检验.结果 Survivin特异性siRNA转染细胞24 h后Survivin mRNA和蛋白表达水平明显下调,对照组中其表达则无明显改变.MTT法结果显示Survivin特异性siRNA浓度为35、70、100 nmol/L时均对SO-Rb50细胞增殖具有抑制作用(P＜0.05),且具有剂茸依赖性.流式细胞仪检测发现Survivin特异性siRNA组出现凋亡亚二倍体峰,细胞被阻滞于G0/G1期,较对照组增加了8.11%,G2/M期细胞比例减少了5.75%,S期细胞仅减少了2.26%.荧光显微镜下可见部分细胞出现染色质浓缩和凋亡小体等典型的凋亡形态学变化.结论 针对Survivin的RNA干扰技术可有效地下调SO-Rb50细胞中Survivin基因表达,进而抑制SO-Rb50细胞增殖和诱导其凋亡,为视网膜母细胞瘤的基因治疗提供了重要的途径.     

内皮抑制素蛋白质的制备及生物学活性测定

目的：探讨内皮抑制素蛋白质的制备及其对血管内皮细胞的生物学活性作用。方法：通过限制性内切酶酶切反应、聚合酶链式反应、DNA测序及用NCBIBLAST软件与基因库序列比较的方法进行鉴定，鉴定后在大肠杆菌中扩增，用质粒纯化试剂盒抽提纯化；将纯化的pBlast—hEndostatin转染人成纤维细胞，用超滤和亲和层析法初步提纯转基因成纤维细胞产生的内皮抑制素蛋白，用Rt—PCR、Western—Blot和免疫组化检测内皮抑制素的表达，用MTT法检测其对人脐静脉内皮细胞的抑制作用。结果：实验证实质粒pBlast—hEndostatin含有人内皮抑制素基因。转染的成纤维细胞可以产生内皮抑制素蛋白，内皮抑制素蛋白质对人脐静脉内皮细胞作用48h2．5，5，10，20，40，80mg/L组抑制率分另1为8．5％，13．1％，27．7％，38．1％，56．7％，63．8％，经曲线拟合后，内皮抑制素作用于人脐静脉内皮细胞48h IC50值为34．5mg／L。而内皮抑制素对人成纤维细胞则没有明显抑制作用。结论：转内皮抑制素基因的人成纤维细胞可以表达内皮抑制素蛋白，表达的内皮抑制素蛋白对人脐静脉内皮细胞有生长抑制作用，而对人成纤维细胞没有生长抑制作用。     

不同激光能量的光动力效应对成纤维细胞抑制作用的对比

目的：探讨三种激光能量的光动力效应对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法：在体外培养的人Tenon囊成纤维细胞培养液中依次加入光敏剂BPD，使其终浓度分别为39．0625ng／ml、78．125ng／ml、156．25ng／ml、312．5ng／ml、625ng／ml、1250ng／ml、2500ng／ml，分别给予1．2J／cm^2、2．4J／cm^2和3．6J／cm^2半导体激光照射；另设空白对照组，未加任何处理。MTT法测各孔光吸收值(OD值)，分别计算各组抑制率。并采用SPSS软件(10．0)进行统计学分析。结果：三种照光能量的IC50分别为192．068ng／ml、114．142ng／ml和91．970ng／ml。经单因素方差分析及用LSD法进行各两组间的多重比较，三种照光能量组内，光动力效应组均与空白对照组间有统计学差异；照光能量为1．2J／cm^2时，各组成纤维细胞抑制率分别为11．62％、26．13％、47．68％、74．05％、88．08％、90．76％和92．54％；照光能量为2．4J／cm^2时，各组抑制率为12．5％、41．6％、66％、87．1％、90．3％、91．0％和93．3％；照光能量为3．6J／cm^2时，各组抑制率为21．97％、48．54％、78．37％、86．52％、91．85％、91．85％和94．85％。结论：光动力效应对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用大小随光敏剂浓度和激光能量的增加而增加。最佳的参效组合为BPD浓度156．25ng／ml及激光能量3．6J／cm^2。     

曲尼司特对青光眼患者体外培养的眼部Tenon囊成纤维细胞增殖和移行的影响

目的 探讨曲尼司特(tranilast)对青光眼患者体外培养的眼部Tenon囊成纤维细胞增殖及移行的影响。方法 取青光眼患者滤过术中剪下的Tenon囊组织,在体外进行成纤维细胞原代及传代培养。分别采用MTT法、细胞计数法、免疫组化加图像分析法及划线法,研究不同浓度的曲尼司特对体外培养的成纤维细胞增殖及移行的影响及其与蛋白激酶C(PKC)表达的关系。结果 当浓度在12．5～100．0mg／L之间变化时,曲尼司特能明显抑制成纤维细胞的增殖,强度呈剂量依赖性;50．0mg／L和100．0mg／L的曲尼司特能明显抑制成纤维细胞的移行,并下调细胞内PKC的表达。结论 曲尼司特能抑制成纤维细胞的增殖及移行,这种作用可能与下调细胞内PKC的表达有关。     

转染Smad7基因的人眼球筋膜囊成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白及纤维连结蛋白表达的改变

目的观察转染Smad7基因的人眼球筋膜囊成纤维细胞（HTFs）Ⅰ型胶原蛋白和纤维连结蛋白表达的改变。方法用Nucleofector^TM核酸转染仪将含有Smad7的真核表达质粒转染至HTFs。采用实时定量逆转录聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原蛋白及纤维连结蛋白mRNA表达的改变。采用放射免疫法检测Ⅰ型前胶原羧端肽原（PICP）在培养液中浓度的改变,检测经转化生长因子β2（TGF-β2,10ng／ml）作用后以上指标的改变。以未转染HTFs和转染空质粒的HTFs作为对照。结果成功将含有Smad7基因的质粒转染至HTFs,并证明其Smad7基因mRNA表达明显升高。转染Smad7的HTFsⅠ型胶原蛋白mRNA表达率为（89．53±9．37）％,分别是对照组HTFs的40．47％和pCMV5-HTF8的37．94％。培养液中PICP浓度为（15．29±2．18）ug／L,分别是对照组HTFs的52．10％和pCMV5-HTFs的57．35％。转染Smad7的HTFs能够明显拮抗由TGF-β2作用引起的Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达和PICP浓度升高（P〈0．01）;无论是否有TGF-β2作用,转染Smad7的HITs纤维连结蛋白mRNA的表达与对照组相比,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论Smad7能降低HTFsⅠ型胶原蛋白mRNA表达和Ⅰ型胶原蛋白的合成,但对纤维连结蛋白mRNA表达无明显作用。     

CLC-2氯离子通道靶向阻滞对人结膜成纤维细胞纤维化的抑制作用及其机制

目的:探讨CLC-2氯离子通道靶向阻滞对人结膜成纤维细胞(HConF)纤维化过程的抑制作用。方法:将HConF分为空白对照组、脂质体2000(Lipo2000)组、无义小干扰RNA(siRNA)组和CLC-2 siRNA转染组,其中空白对照组不做任何处理,其他各组分别采用含有相应转染试剂的培养基培养。采用实时荧光定量P...     

整合素连接激酶对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的研究整合素连接激酶(integrin linked kinase,ILK)小分子干扰RNA(siRNA)对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞增殖的影响。方法培养hRPE细胞,角蛋白鉴定。以ILK为靶基因设计合成特异性的siRNA干扰片段转染hRPE细胞。荧光显微镜下观察转染效率,选择转染效率最高的干扰片段进行细胞转染。RT-PCR检测siRNA对ILK基因表达的抑制作用,MTT法检测转染前后hRPE细胞增殖活性。结果 ILK-siRNA可以成功转染至hRPE细胞,转染24h后hRPE细胞中ILK mRNA的相对表达水平在正常对照组、单纯脂质体组、阴性对照组及转染组中分别为0.44±0.48、0.43±0.38、0.42±0.47、0.32±0.71,正常对照组、单纯脂质体组和阴性对照组中ILKmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),转染组ILKmRNA的表达较正常对照组明显降低,差异有显著统计学意义(F=21.78,P<0.01)。不同浓度ILK-siRNA转染组在不同时间点细胞增殖较正常培养组明显降低(P<0.01),50nmol·L-1浓度转染组对hRPE细胞的生长抑制最明显。结论 hRPE细胞表达ILK,siRNA抑制ILKmRNA的表达,在一定范围呈时间浓度依赖性抑制hRPE细胞增殖。     

Effect of growth factors on the activation of human Tenon's capsule fibroblasts

PURPOSE: To investigate stimulatory effects of PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, bFGF, IL-1beta, TGF-beta1 and TGF-beta2 on the proliferation and myofibroblast transformation of cultured human Tenon's capsule fibroblasts and to characterize expression of PDGF- and TGF-beta-receptors in these cells. METHODS: To determine cell proliferation, cell number of 2nd passage cultured human Tenon's capsule fibroblasts was measured before and after addition of growth factors using a computer-based cell counter system. Immunoblotting was used to detect and quantitate alpha-smooth-muscle actin (alpha-SMA) expression. Expression of PDGF- and TGF-beta-receptor mRNA was detected by RT-PCR, expression of the corresponding protein was demonstrated using Western blot. RESULTS: A significant increase in proliferation (p < or = 0.05) was detected after exogenous stimulation with PDGF-AA (10 ng/ml and 100 ng/ml), PDGF-AB (10 ng/ml and 100 ng/ml), PDGF-BB (10 ng/ml and 100 ng/ml), bFGF (100 ng/ml), IL-1beta (1 ng/ml and 10 ng/ml), TGF-beta1 (0.5 ng/ml) and TGF-beta2 (0.5 ng/ml). Both TGF-beta1 and TGF-beta2 stimulated expression of alpha-SMA in a dose dependent manner with peak activity at a concentration of 50 ng/ml (TGF-beta1) and 500 ng/ml (TGF-beta2). Protein and mRNA of PDGF-receptor type alpha and type beta and TGF-beta-receptors type I, II and III are expressed in cultured human Tenon's capsule fibroblasts. CONCLUSIONS: The present investigation strongly supports the hypothesis that PDGF-isoforms are major stimulators of proliferation of Tenon's capsule fibroblasts after glaucoma filtering surgery while TGF-beta-isoforms are essential for the transformation of Tenon's capsule fibroblasts into myofibroblasts.     

精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸肽对人Tenon囊成纤维细胞的贴壁抑制试验观察

目的：研究精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸（Arg-Gly-Asp-Ser，RGDS）肽对人Tenon囊成纤维细胞与纤维连接蛋白（FN）粘附、增殖的影响。方法：在传代培养的人Tenon囊成纤维细胞中加入不同浓度的RGDS（1、0.1、0.001g/L），用未贴壁细胞记数法及MTT法测定RGDS肽对人Tenon囊成纤维细胞粘附、增殖的影响。结果：RGDS肽能抑制成纤维细胞在FN上的粘附，呈浓度效应特点，能抑制成纤维细胞的增殖，呈浓度及时间效应特点。结论：在细胞水平上证实RGDS肽可阻止人Tenon囊成纤维细胞对FN的粘附和增殖，具有避免青光眼滤过术后瘢痕化形成的应用前景。     

拉坦前列素滴眼液对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的影响

目的研究拉坦前列素滴眼液对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖有无促进作用。方法体外培养人眼球筋膜囊成纤维细胞。按1∶10比例逐级稀释拉坦前列素滴眼液(0.005%),使药物浓度依次为5.00、0.50、0.05μg/ml直至5×10-8μg/ml。采用噻唑蓝比色法检测在不同浓度药物作用下的细胞增殖情况,并在光学显微镜下观察细胞的形态变化。结果较高浓度组(5.00μg/ml)拉坦前列素滴眼液对人眼球筋膜囊成纤维细胞存在明显的杀伤作用,细胞几乎全部死亡,吸光度(A)值与对照组相比明显下降(P<0.01);低浓度组(<0.05μg/ml)A值较对照组无明显变化(P>0.05)。比较拉坦前列素滴眼液在不同作用时间下的剂量效应曲线,24、48及72h差异均无统计学意义(P>0.05)。结论拉坦前列素滴眼液不能促进体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖,在较高浓度时具有细胞毒性,在较低浓度时则对细胞增殖无明显影响。     

特异性转化生长因子-β_2 shRNA对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用

目的观察转化生长因子-β2（TGF-β2）特异性短发夹RNA（shRNA）对人眼Tenon囊成纤维细胞（TCFs）TGF-β2表达的影响及对人TCFs增生的抑制作用。方法根据小干扰RNA（siRNA）的设计原则,针对TGF-β2基因序列特征构建特异性shRNA载体,转染培养的人TCFs。MTT比色法检测细胞的增生情况;ELISA法检测shRNA对TGF-β2蛋白表达的抑制作用。结果 TGF-β2shRNA转染组的细胞增生及TGF-β2蛋白的表达均受到抑制。转染24、48、72h后MTT比色法检测显示,TGF-β2shRNA转染组培养的Tenon囊的成纤维细胞的增生值分别为0.5426±0.05、0.5210±0.03、0.4055±0.04,明显低于阴性对照组的0.5655±0.03、0.5378±0.03、0.5268±0.04,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义（F组=54.691,P=0.000;Ftime=66.888,P=0.000）。ELISA法检测显示,TGF-β2shRNA转染组TGF-β2蛋白的表达水平下降,24、48、72hTGF-β2蛋白的表达量分别为（543.58±25.32）、（400.26±30.74）、（202.72±23.24）ng/L,明显低于阴性对照组的（659.78±20.95）、（547.45±24.65）、（442.87±17.43）ng/L及空白组的（721.75±30.19）、（756.61±30.19）、（787.60±18.37）ng/L,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义（F组=163.082,P=0.000;F时间=31.498,P=0.000）。结论 TGF-β2特异性shRNA能显著抑制人TCFsTGF-β2的表达,载体介导的TGF-β2特异性shRNA对眼前节术后的抗瘢痕化治疗具有潜在的可能性。     

Role of Heat Shock Protein 47 in Transdifferentiation of Human Tenon's Fibroblasts to Myofibroblasts

ABSTRACT: BACKGROUND: Heat shock protein 47 (Hsp47) is a well-known molecular chaperone in collagen synthesis and maturation. The aim of this study is to investigate its putative role in the transdifferentiation of Tenon's fibroblasts to myofibroblasts. METHODS: Primary cultured human Tenon's fibroblasts were exposed to transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) for up to 48 hours. The mRNA levels of Hsp47 and alpha smooth muscle actin (alphaSMA) were determined by quantitative real time RT-PCR. After delivery of small interfering RNA (siRNA) molecules targeting Hsp47 into the cells, the expression of Hsp47 and alphaSMA proteins was determined by western immunoblotting. RESULTS: TGF-beta1 increased the mRNA expressions of both Hsp47 and alphaSMA in human Tenon's fibroblasts, as determined by quantitative real time RT-PCR. However, it induced the protein expression of only alphaSMA but not Hsp47, as determined by western immunoblots. When siRNAs specific for Hsp47 were introduced into those cells, the TGF-beta1-induced expression of alphaSMA was significantly attenuated on western immunoblots; after 48 hours of exposure to TGF-beta1, the relative densities of immunobands were 11.58 for the TGF-beta1 only group and 2.75 for the siRNA treatment group, compared with the no treatment control group (p < 0.001). CONCLUSIONS: Our data suggest that Hsp47 may be related to the TGF-beta1-induced transdifferentiation of human Tenon's fibroblasts to myofibroblasts.     

整合素连接激酶对人视网膜色素上皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨RNA干扰抑制整合素连接激酶（integrin-linked kinase, ILK）对人视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelium,hRPE）细胞增殖和迁移的影响。方法:体外培养hRPE细胞,设计并合成特异性人ILK的RNA干扰片段,阳离子脂质体转染入人视网膜色素上皮细胞,利用RT-PCR及Western blot半定量检测siRNA对ILK基因及蛋白表达的抑制作用,MTT方法检测转染前后siRNA对细胞增殖的抑制作用。损伤愈合实验和Transwell实验观察人视网膜色素上皮细胞迁移能力的改变。结果:培养的hRPE细胞存在ILK的基因转录表达,siRNA显著抑制hRPE细胞ILK的mRNA和蛋白表达（P<0.01）。MTT、损伤愈合实验和Transwell实验提示转染ILK-siRNA后人视网膜色素上皮细胞的增殖、迁移能力有明显下降,与正常对照组相比有统计学差异（P<0.05）。结论:特异性ILK-siRNA能有效抑制ILK在hRPE的mRNA和蛋白的表达并显著降低hRPE的增殖和迁移能力。     

CTGF siRNA转染对体外培养人晶状体上皮细胞株B3转分化的抑制作用

目的:研究脂质体介导CTGF siRNA 转染对人晶状体上皮细胞(HLEC)株B3 CTGF和α-SMA表达的影响.方法:5`-异硫氰酸荧光素标记的CTGF siRNA与脂质体混合,并转染HLECs,通过荧光转染评估转染率.我们用CCK-8来评价转染组和对照组的细胞活力并使用实时定量RT-PCR,细胞免疫化学和Western blot来分析CTGF和α-SMA在转染后的表达改变.结果:脂质体介导的CTGF siRNA转染呈现出高效的转染率.转染率在24h高达95%.CTGF siRNA 72h转染能有效抑制HLECs的增殖.CTGF siRNA转染24h后CTGF和α-SMA的表达量都显著下降,而对照组则无类似效应.结论:CTGF siRNA 能够有效降低CTGF和α-SMA的表达.