抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备抗人甲状腺球蛋白（Ｔｇ）单克隆抗体，为建立高灵敏度的Ｔｇ检测方法做准备。方法：从人的甲状腺组织中提取Ｔｇ做抗原，经腹腔免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／ｏ融合，筛选及克隆化。结果：获得２株分泌抗人Ｔｇ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。鼠腹水抗体效价达１．０２×１０６。经免疫球蛋白类别及亚类的鉴定，２株单克隆抗体均为ＩｇＧ１亚类，轻链为Ｋ型。结论：我们制备的抗Ｔｇ单克隆抗体具有良好的免疫反应特性，符合Ｔｇ酶联免疫分析法（ＥＬＩＳＡ）的要求     

SDS—PAGE法检测人甲状腺及其肿瘤组织中bFGFs条件的选择

探讨ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法检测人甲状及其肿瘤组织中ｂＦＧＦｓ（ｂａｓｉｃ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ）的条件，。方法：采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳法检测人甲状腺及其肿瘤组织中的ｂＦＧＦｓ。结果；分离胶浓度为１２．５％，胶原为０．５ｃｍ，电流强度为３０ｍＡ，样品量为５－６ｕｌ，标准ｂＦＧＦｓ上样量为２０ｕｌ较适全人甲状腺及其肿瘤组织中各种分子量的ｂＦＧＦｓ的分离及鉴定。结论：人甲状腺     

人甲状腺过氧化物酶的提取,纯化及鉴定

目的：提取较纯的ｈＴＰＯ，为甲状腺激素合成过程的研究和建立ｈＴＰＯＡｂ检测方法提供了实验材料。方法：本文采用胰蛋白酶和脱氧胆酸钠处理手术切除人甲状腺组织，经超速离心和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００柱层析提纯人甲状腺过氧化物酶（ｈＴＰＯ），并进行了愈创木酚氧化法ｈＴＰＯ酶活性测定。结果：本研究获得的ｈＴＰＯ比生物活性为８．４３愈创木酚单位（ＧＵ）／ｍｇ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示提纯的ｈＴＰＯ在分子量１０７ｋＤ处有一清晰色带，而于９３ｋＤ处也有一色带，但较浅。结论：该方法提纯ｈＴＰＯ操作简便、快速，获得的ｈＴＰＯ较纯。     

人心肌特异性肌钙蛋白的提取与鉴定

目的从人心肌组织中提取和纯化心肌特异性肌钙蛋白,为建立心肌梗塞病人免疫诊断试剂准备抗原。方法取新鲜人心室肌组织经捣碎离心提取,ＤＥＡＥ５２柱层析纯化,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳鉴定。结果１００ｇ心室肌可提取３７ｍｇ纯品肌钙蛋白。结论本次提取的心肌特异性肌钙蛋白纯度较高,能作抗原使用。     

IL-1和IL-2对甲状腺细胞分泌甲状腺球蛋白的影响

目的：研究ＩＬ－１和ＩＬ－２对甲腺细胞生成甲状腺球蛋白（Ｔｇ）的调节作用,方法采用Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）甲状腺组织,以原代细胞培养及放免分析技术,检测两类细胞因子刺激后Ｔｇ的分泌状况。结果基础状态下,１０＾－３－１０＾３Ｕ／ｍｌ的ＩＬ－１和ＩＬ－２对甲状腺细胞产生Ｔｇ的功能无明显影响;ＩＬ－１剂量依赖性地抑制促甲状腺激素（ＴＳＨ）对甲状腺细胞分泌Ｔｇ的刺激效应,而ＩＬ－２则促进ＴＳＨ诱导下Ｔｇ的产     

人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG—CSF—Ala—17的纯化及 …

目的：建立高效简便的人重组粒细胞集落刺激因子突变体ｒｈＧ－ＣＳＦ－Ａｌａ－１７纯化工艺,并对其进行鉴定。方法：大肠杆菌表达的ｒｈＧ－ＣＳＦ－Ａｌａ－１７经包涵体洗涤、变性复性后,彩和ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ阴离子交换层析和Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５凝胶过波层析分离纯化。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＦＰＬＣ检测纯度,并进行Ｎ端氨基酸序列分析、比活性分析、紫外最大吸收光谱分析、内毒素检测等指     

葡萄球菌核酸酶去C—末端的肽段52—79的分离纯化

目的 建立金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）去Ｃ－末端的５２（ＳＮ５２）和７９（ＳＮ７９）的提纯方法，并鉴定其纯度。方法 应用低温乙醇沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－１００柱层析分离纯化；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和高效液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度。结果 化的ＳＮ５２和ＳＡＮ７９级ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单一区带；ＨＰＬＣ鉴定均为一个峰。结论 纯     

日本血吸虫多坐分子疫苗的制备及其抗原性的研究

为了制备足量、高纯度的供血吸虫保护性免疫力研究的多价分子疫苗。通过制备型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电渗方法从日本血吸虫成虫分离纯化出２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ蛋白。经ＢＣＡ法检测蛋白含量，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测蛋白纯度和分子量，Ｗｅｓｔｒｎ－ｂｌｏｔ及ＥＬＩＳＡ检测其抗原活性。结果日本血吸虫成虫２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ三种纯化蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测均为单一条带并与所分离的蛋白分子量相符     

加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化

目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ＣＴｎＴ）。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取ＣＴｎＴ,以ＤＥＡＥ５２柱层析纯化。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳初步鉴定,每１００ｇ左心室肌经此法可得１１．７９ｍｇＣＴｎＴ纯品,纯化后的ｃＴｎＴ为单一条带,分子量为３７ＫＤ。结论本法提取ＣＴｎＴ步骤简单,纯度尚可,可做抗原使用。     

葡萄球菌核酸酶去C-末端的肽段52和79的分离纯化

①目的建立金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）去Ｃ－末端的肽段５２（ＳＮ５２）和７９（ＳＮ７９）的提纯方法，并鉴定其纯度。②方法应用低温乙醇沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００柱层析分离纯化；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和高效液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度。③结果纯化的ＳＮ５２和ＳＮ７９经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定均为单一区带；ＨＰＬＣ鉴定均为一个峰。④结论纯化的ＳＮ５２和ＳＮ７９已达电泳纯和层析纯，可用于其构象的比较研究。     

弓形虫CDPK5基因多克隆抗血清的制备及功能鉴定

目的：筛选弓形虫（Tg）CDPK5基因序列的免疫多肽,将合成多肽免疫新西兰白兔制备多抗血清,并对其功能进行鉴定。方法利用生物信息学的方法分析确定Tg CDPK5序列免疫多肽,再用合成的多肽免疫新西兰白兔制备多抗。收集多抗血清,酶联免疫吸附测定（ELISA）测定多抗滴度,蛋白免疫印迹法（Western blot）鉴定免疫活性,免疫荧光实验分析Tg CDPK5的亚细胞定位。结果通过生物信息学分析,选择Tg CDPK5序列N端一段长17 bp的多肽序列作为免疫多肽;用合成的多肽免疫兔子,成功获得多抗血清。ELISA测定多抗血清效价为1∶640000;Western blot证明该多抗血清能特异性识别 Tg CDPK5（75．4×103）条带;免疫荧光实验结果表明,该多抗能特异性识别弓形虫内源Tg CDPK5蛋白。结论研究根据 Tg CDPK5序列信息的分析,获得Tg CDPK5序列免疫多肽,并制备兔源多克隆抗体。     

人基质金属蛋白酶-1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的 :获得兔抗人基质金属蛋白酶 1 (MMP 1 )多克隆抗体 ,并将其初步应用于临床检测。方法 :将人MMP 1融合蛋白经亲和层析法纯化 ,并将其作为抗原免疫家兔 ,获得兔抗血清 ,经饱和硫酸铵纯化 ,获得初步纯化的兔抗人MMP 1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验 (ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP 1的OD值。结果 :获得初步纯化的兔抗人MMP 1特异性多克隆抗体 ,该抗体能与人MMP 1起反应。结论:制备的MMP 1多克隆抗体可初步用于临床检测     

Specific humoral immune responses in rhesus monkeys vaccinated with the Alzheimer’s disease-associated β-amyloid 1-15 peptide vaccine

Background Alzheimer‘ s disease(AD) is a neurodegenerative disorder characterized by overproduction of β-amyloid (Aβ) , with the subsequent pathologic deposition of Aβ which is important for memory and cognition. Recent studies showed murine models of AD and AD patients inoculated with Aβ1-42 peptide vaccine had a halted or delayed pathological progression of AD. Unfortunately, the clinical phase Ⅱ a trial of Aβ1-42 peptide vaccine (AN1792) was halted prematurely because of episodes of menigoencephalitis in 18 of the vaccinated patients. The vaccination of BALB/c or Tg2576 transgenic mouse with Aβ1-15 peptide vaccine is safe and the immune effects are satisfactory. This study further characterizes the specific humoral immune responses in adult rhesus monkeys induced by Aβ1-15 peptide vaccine. Methods Five male adult rhesus monkeys were injected intramuscularly with Aβ1-15 peptide vaccine at baseline and at weeks 2, 6, 10, 14, 18 and 22. The titers and IgG isotypes of the antibody against Aβ1-42 in serum was measured by Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA). The specificity of the antibody against Aβ1-42 was determined by Western blot. The Aβ plaques in Tg2576 transgenic mouse brain were stained with the antiserum using immunohistochemistry method. Results At the eighth week after the vaccination, antibody against Aβ1-42 began to develop significantly in serum. The titers of the antibody increased following vaccine boosted and reached 1 : 3840 at the twenty-fourth week, then decreased after the termination of inoculation. The IgG1 was accounted for the highest level in the antiserum pool. The antibody against Aβ1-42 showed high specificity. The Aβ plaques in Tg2576 transgenic mouse brain were labeled with the antiserum. Conclusion Aβ1-15 vaccine can induce vigorously specific humoral immune resoonses in adult rhesus monkey.     

人基质金属蛋白酶—1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的：获得兔抗人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)多克隆抗体，并将其初步应用于临床检测。方法：将人MMP-1融合蛋白经亲和层析法纯化，并将其作为抗原免疫家兔，获得兔抗血清，经饱和硫酸铵纯化，获得初步纯化的兔抗人MMP-1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验(ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP-1的OD值。结果：获得初步纯化的兔抗人MMP-1特异性多克隆抗体，该抗体能与人MMP-1起反应。结论：制备的MMP-1多克隆抗体可初步用于临床检测。     

基于表位多肽的抗TRIM22抗体的制备及其初步应用

 目的 制备抗TRIM22多肽抗体及鉴定其性能。 方法 将TRIM22 N端15个氨基酸的多肽（MDFSVKVDIEKEVTC）与钥孔嘁血蓝蛋白（KLH）偶联，免疫新西兰白兔制备抗血清；将TRIM22多肽与Affi-Gel 10偶联制备免疫亲和层析柱, 兔抗血清经亲和层析纯化后得到TRIM22多肽特异性抗体；采用ELISA测定抗体效价、Western blot来鉴定抗体特异性，并利用该抗体通过间接免疫荧光实验来检测TRIM22蛋白的细胞内定位。 结果 获得了抗TRIM22特异性抗体。Western blot结果显示该抗体能特异识别真核及原核表达的TRIM22蛋白。利用该抗体进行的间接免疫荧光实验发现TRIM22蛋白主要定位在HepG2细胞核中。 结论 该抗体的制备为TRIM22分子的功能研究提供了有力的工具。     

亲和层析法纯化抗大肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体

目的制备和纯化鼠源性抗人大肠肿瘤单克隆抗体(单抗),分析其相应抗原在大肠肿瘤细胞中的表达。方法常规方法免疫BALB/c小鼠制备腹水,应用G蛋白亲和层析柱对小鼠腹水样品进行分离纯化。采用SDS-PAGE、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA检测纯化后抗体的纯度、活性、效价和特异性。用免疫细胞化学、流式细胞术和免疫组织化学技术S-P法检测其相应抗原在大肠肿瘤细胞株和组织中的表达。结果还原性SDS-PAGE显示所获抗体为单一组分。应用间接ELISA检测抗体效价为1∶106,纯化后的抗体对大肠肿瘤细胞株具有特异结合活性,并在高分化大肠腺癌组织中表现出更高选择性(P<0.01)。结论G蛋白亲和层析法操作简便,所得单抗的纯度高,特异性强,生物学活性好。对临床上早期诊断大肠肿瘤将具有较大的意义。     

BLCAP蛋白多克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定

目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达BLCAP融合蛋白并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:构建原核表达重组质粒pET32a(+)-BLCAP并转化到宿主菌BL21中,诱导表达带有His标签的目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收后免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性和亲和性。结果:成功获得分子质量约为28 kU纯化的融合蛋白,免疫日本大耳白兔后得到抗BLCAP的多克隆抗体。ELISA测定显示抗体效价可达到1∶10 000。通过Western blot检测证明该抗体有较好的针对BLCAP蛋白的专一性。结论:重组质粒表达的BLCAP融合蛋白具有良好的抗原性。制备的特异性和效价良好的抗BLCAP的多克隆抗体,能够满足针对BLCAP免疫印迹和细胞免疫组化检测等实验要求,为今后深入研究BLCAP蛋白性质与功能提供了有用的实验工具。     

日本血吸虫26kDa谷胱苷肽-S-转移酶抗血清的制备

目的制备日本血吸虫26kDa谷胱苷肽-S-转移酶免疫血清。方法大量诱导表达日本血吸虫26kDa谷胱苷肽-S-转移酶，予亲和层析纯化；用纯化蛋白免疫家免，制备谷胱苷肽-S-转移酶的免疫血清。结果亲和层析纯化获得26kDa谷胱苷肽-S-转移酶，融合蛋白免疫家免三次后获得谷胱苷肽-S-转移酶的免疫血清，其滴度达1：12800。结论纯化的谷胱苷肽-S-转移酶免疫家兔诱导产生了高滴度的抗体。     

重组登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII的融合表达和免疫学特性研究

目的：构建含登革病毒（DENV）1-4型包膜蛋白（E蛋白）EDIII区的融合蛋白,并通过动物实验分析该融合蛋白的免疫机制。方法：通过生物信息学分析获得具有广泛代表性的DENV 1-4型EDIII区的氨基酸序列;将编码DENV 1-4型EDIII区的基因序列通过GS linker进行串联后插入原核表达载体pColdIII的多克隆位点,并将构建的重组质粒pColdIII-EDIII转化至大肠杆菌BL21（DE3）;通过SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BABL/c小鼠,初次免疫之后再加强免疫2次。通过ELISA法检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果：重组蛋白EDIII免疫小鼠后可以诱导产生高滴度的特异性抗体,抗体效价为1:40 000。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以诱导Th1和Th2细胞免疫应答。结论：成功表达了含DENV 1-4型E蛋白EDIII的融合蛋白,并通过动物实验证实该融合蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答,为DENV四价重组疫苗的研制奠定了基础。     

牛朊蛋白理化性质分析及其多克隆抗体的制备

目的:研究酸诱导牛正常细胞朊蛋白(BoPrPC)变性过程中间体的结构,同时制备其多克隆抗体。方法:表达纯化蛋白质后通过荧光光谱法和圆二色法分析酸性条件下BoPrPC二级结构变化。同时制备多克隆抗体,通过ELISA测定多克隆抗体效价,Western blot测定其特异性。结果:酸诱导BoPrPC去折叠并在pH 4.0条件下形成去折叠中间体,易于形成淀粉样纤维聚集体。制备的多克隆抗体效价可达到1∶6 400,能特异性结合朊蛋白。结论:折叠中间体二级结构类似致病BoPrPSc能形成淀粉样纤维聚集体,成功地制备了效价及特异性良好的兔抗BoPrPC多克隆抗体,为研究阻断致病朊蛋白形成淀粉纤维聚集体防治神经细胞损伤以及临床特异性检测奠定基础。