MCI-186对高糖环境中受损人真皮微血管内皮细胞的保护作用

目的观察高糖环境对人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)功能的影响,探讨清除自由基对高糖所致HDMEC损伤的保护作用.方法建立高糖环境下HDMEC培养的体外模型,并加人自由基清除剂MCI-186予以干扰,同时检测细胞的增殖、形态、黏附等生物学行为.结果高糖环境可影响内皮细胞的增殖,改变其特异性形态,增加H2O2诱导的细胞毒性.MCI-186可缓解高糖所致的内皮细胞增殖受抑,降低内皮细胞表面黏附性,下调高糖诱导的细胞凋亡.结论控制血糖的同时清除有害自由基,可能对糖尿病合并难愈创面的治疗起到积极作用.     

消可宁颗粒剂对高糖环境下内皮细胞的保护作用

目的 观察消可宁颗粒剂对高糖条件下培养的人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)的保护作用.方法 苏木精-伊红染色观察体外培养的不同消可宁浓度下的ECV-304细胞形态学改变和四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定ECV-304细胞增殖活性.结果 ①高糖对照组ECV-304细胞生长抑制,变小变圆,出现不同程度的空泡变性.各消可宁组ECV-304细胞出现不同程度的细胞恢复.②80 g/L和100 g/L消可宁组可减轻高糖对ECV-304细胞的生长抑制,与高糖对照组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论 高糖引起ECV-304细胞损伤,对其生长增殖具有明显的抑制作用.消可宁可有效减轻高糖对ECV-304细胞的损伤和生长抑制,从而保护内皮细胞.     

高糖对脑微血管内皮细胞活力和内皮素-1的影响

目的：探讨体外培养条件下高糖状态对大鼠脑皮质微血管内皮细胞（Brain microvascular endothelial cells，BMEC）的影响。方法：建立大鼠脑皮质微血管内皮细胞体外培养模型，用透射电镜观察正常浓度（5．05mmol／L）和高浓度（15mmol／L、30mmol／L）葡萄糖培养基中培养24h后内皮细胞的超微结构变化，用MTT法评价内皮细胞活力，采用放射免疫方法测定内皮素-1（Endothelin-1，ET-1）含量，用原位杂交法测定ET-1mRNA表达。结果：高浓度葡萄糖可使内皮细胞超微结构损伤，细胞活力降低，ET-1分泌显著上调，并呈剂量依赖性损伤细胞，但ET-1mRNA表达无明显变化。结论：高糖对脑皮质微血管内皮细胞有显著的损伤作用，ET-1升高在糖尿病微血管病变早期可能起主要作用。     

高糖对脂多糖诱导的大鼠肺微血管内皮细胞自噬的影响

目的:探究高糖(HG)环境对脂多糖(LPS)处理的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMECs)自噬的影响.方法:LPS联合HG处理RPMECs 24 h后;相应商品化试剂盒检测细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.免疫印迹法检测Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC-3...     

高糖对牛视网膜微血管内皮细胞损伤的实验研究

目的　利用体外培养的牛视网膜微血管内皮细胞来观测高浓度葡萄糖在细胞的损伤中所起的作用。方法体外培养牛视网膜微血管内皮细胞。通过MTT (四唑氮盐 )法及3 H -TDR掺入法研究高糖对牛视网膜微血管内皮细胞的损伤作用。结果　内皮细胞在含高糖 (2 8、 4 0mmol/L)DMEM培养基及不同培养时间 (2d、 7d)下MTT测定结果与对照组 (生理浓度葡萄糖 ,5 5mmol/L)比较有显著性差异P <0 0 5 ,3 H -TDR掺入法研究结果显示高糖对视网膜微血管内皮细胞的增殖有明显抑制作用 ,亦呈剂量及时间依赖性损伤细胞。结论　高浓度葡萄糖对牛视网膜微血管内皮细胞有显著的损伤作用     

不同浓度黄芪总黄酮对高糖诱导人脐静脉系内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨不同浓度黄芪总黄酮对高糖诱导人脐静脉系内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。方法将HUVECs随机分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖模型组(30mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇)及黄芪总黄酮高剂量组(2mg/mL黄芪总黄酮+30mmol/L葡萄糖)、黄芪总黄酮中剂量组(1mg/mL黄芪总黄酮+30mmol/L葡萄糖)、黄芪总黄酮低剂量组(0.5mg/mL+30mmol/L葡萄糖)。37℃,5%CO2培养箱中培养24h后,检测各组HUVECs的一氧化氮(nitric oxide,NO)及总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)水平、病理学改变、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)mRNA及蛋白表达水平。结果培养24h后,与正常对照组比较,高糖模型组NO、T-SOD水平明显降低,细胞数量明显减少,ET-1mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。与高糖模型组比较,黄芪总黄酮高、中、低剂量组NO、T-SOD水平明显升高,细胞数量明显增加,ET-1mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);且黄芪总黄酮高剂量变化最为显著(P<0.05)。     

高糖对大鼠微血管内皮细胞基因表达谱的影响

目的　研究高糖对SD大鼠肺微血管内皮细胞基因表达谱的影响 ,进一步探索高糖导致微血管内皮细胞功能紊乱的可能分子机制。方法　体外培养SD大鼠肺微血管内皮细胞 ,以Affymetrix公司的RG- U34A基因芯片分别检测正常浓度 (5 .5 6mmol/L)和高浓度 (2 0mmol/L)D- 葡萄糖培养基中培养 2 4h后内皮细胞的基因表达谱。结果　高糖培养细胞较正常浓度糖培养细胞有 96 1个基因表达下调 ,5 0 9个基因表达上调 ,其中变化幅度大于 2倍的分别有 2 2个 (P >0 .998)和 11个 (P <0 .0 0 2 5 ) ,这些基因主要与细胞物质代谢、细胞信息传递、细胞膜结构、细胞外基质合成及分解等有关。结论　高糖可能通过影响微血管内皮物质代谢、信号转导、细胞膜结构和细胞外基质等的表达而导致血管内皮功能紊乱。     

清活Ⅰ号中药复方对高糖培养微血管内皮细胞增殖的影响

目的观察清活Ⅰ号中药复方水煎剂及其药物血清对高浓度葡萄糖培养的微血管内皮细胞增殖的影响。方法采用中药血清药理学研究方法制备药物血清。原代培养SD大鼠肺微血管内皮细胞,中药复方水煎剂实验细胞分为NG-1组(葡萄糖5.56 mmol/L)、HG-1组(葡萄糖25 mmol/L)、中药-1组(葡萄糖25 mmol/L 清活Ⅰ号水煎剂)和NAC-1组[葡萄糖25 mmol/L 10 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)];药物血清实验细胞分为NG-2组(葡萄糖5.56 mmol/L)、HG-2组(葡萄糖25 mmol/L)、中药-2组(葡萄糖25 mmol/L 药物血清)和NAC-2组(葡萄糖25 mmol/L 10 mmol/L NAC)。培养24 h后,观察清活Ⅰ号水煎剂及其药物血清对25 mmol/L葡萄糖培养内皮细胞生长形态的影响,并采用锥虫蓝染色细胞计数观察细胞活力。结果NG-1、HG-1、中药-1、NAC-1组的平均细胞数分别为57 000、38 333、57 333和65 000个/孔,活细胞比率分别为96.5%、58.2%、94.0%和95.8%,各组间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。NG-2、HG-2、中药-2、NAC-2组的平均细胞数分别为38 333、10000、37 083和55 000个/孔,活细胞比率分别为96.7%、41.7%、91.0%和94.7%,各组间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。培养24 h后,HG-1组的内皮细胞增殖减少、活细胞减少;中药-1组的细胞生长情况和活细胞数恢复到NG-1组水平,与NAC-1组培养的细胞增殖情况相似;药物血清与中药水煎剂实验各组的细胞增殖情况基本一致。结论清活Ⅰ号水煎剂及其药物血清均能改善高浓度葡萄糖导致的血管内皮细胞损伤,其保护作用可能与其抗氧化作用有关。     

三七皂苷Fc对高糖损伤血管内皮细胞保护作用

目的 探讨三七皂苷Fc对体外高糖诱导大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 体外培养大鼠血管内皮细胞（RAOEC）,加入30mmol/L D-葡萄糖造成细胞损伤。加入不同浓度三七皂苷Fc进行干预,采用CCK-8法测定细胞活性,筛选出最适用药浓度。将细胞均匀接种于6孔板内,分为4组,即正常对照组、高糖组、正常对照+Fc组、高糖+Fc组,用Hochest33342荧光染色法对各实验组进行细胞凋亡的检测;采用细胞划痕实验检测各组细胞的伤口修复情况;采用Western blot法观察各组过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的蛋白表达。结果 高糖+Fc组内皮细胞凋亡率明显低于高糖组,而修复率却明显高于高糖组,差异均有统计学意义（P<0.05）;高糖+Fc组PPAR-γ蛋白表达量明显高于高糖组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 三七皂苷Fc可抑制高糖引起的血管内皮细胞凋亡,并促进高糖状态下血管内皮细胞的增殖修复。其作用机制可能与三七皂苷Fc促进高糖状态下血管内皮细胞的PPAR-γ蛋白表达有关。     

脂联素预处理对高糖诱导下HRMECs细胞损伤的保护

目的 观察脂联素(adiponectin, APN)预处理对高糖诱导下人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)凋亡及增殖的影响。方法 将生长状况良好的HRMECs随机分为对照组(DMEM培养基,无干预)、高糖组(DMEM培养基+25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+APN组(细胞先用10μg/ml APN预处理2 h,然后用高糖培养基培养)。各组分别培养24 h后,Western blot检测HRMECs凋亡过程中Bax、Bcl-2以及Caspase-3的蛋白表达水平,流式检测HRMECs凋亡率,CCK-8法检测HRMECs增殖。结果 与对照组比较,高糖组HRMECs的Bax、Caspase-3蛋白水平以及细胞凋亡率均明显增高,但Bcl-2的表达量及细胞增殖率均明显降低(均P<0.001)。与高糖组比较,高糖+APN组HRMECs的Bax、Caspase-3蛋白水平以及细胞凋亡率有所回落,Bcl-2的蛋白水平及细胞增殖率有所回升(均P<0.001)。结论 高糖诱导下HRMECs凋亡增加,增殖减少,APN预处理可以抑制凋亡,促进增殖,提示APN对高糖下视网膜微血管内皮细胞损伤...     

MCI-186对癫痫大鼠海马组织中细胞色素C表达的影响

目的:探讨MCI-186对海人酸(KA)诱导癫痫大鼠海马组织细胞色素C(CytC)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为癫痫对照组、癫痫组、药物对照组组和MCI-186组。采用脑室注射KA制作大鼠癫痫模型。应用Western-blot法检测细胞质和线粒体中Cyt C。结果:癫痫组和药物对照组CytC在线粒体的表达均较MCI-186组减少(P<0.01),癫痫组和药物对照组CytC在细胞质的表达均较MCI-186组增加(P<0.01)。结论:MCI-186可以减少KA诱导CytC由线粒体向细胞质的释放,通过抑制线粒体凋亡通路对海马细胞发挥保护作用。     

辛伐他汀对高糖损伤血管内皮细胞的保护作用研究

目的：观察辛伐他汀对高糖损伤血管内皮细胞的保护作用,并探讨其作用的机制。方法实验分为4组：对照组（健康体检者,A组）,高血糖组（B组,33．3 mmol/L葡萄糖）,高血糖＋低浓度辛伐他汀组（C组,33．3 mmol/L葡萄糖＋1．0μmol/L辛伐他汀）,高血糖＋高浓度辛伐他汀组（D组,33．3mmol/L葡萄糖＋10．0μmol/L辛伐他汀）。细胞增殖使用CCK-8实验检测,细胞凋亡使用 TUNEL 检测法,蛋白表达使用 Western blot 方法检测,基因检测采用实时荧光定量 PCR（real time PCR）。结果 B、C、D组的内皮细胞存活率分别为（42．5±6．4）％、（58．6±7．8％）和（71．3±11．7）％,各组之间差异有统计学意义（ P＜0．05）。A、B、C、D组内皮细胞的凋亡率分别为（1．8±0．6）％、（45．8±8．9）％、（22．7±6．4）％和（12．6±4．2）％,各组之间差异有统计学意义（ P＜0．05）。B组（0．13±0．03）内皮细胞Bcl-2蛋白的表达明显低于A组（1．02±0．16）,C组（0．28±0．04）明显高于B组,D组（0．68±0．11）又明显高于C组（P＜0．05,P＜0．01）。B组内皮细胞bax基因的表达明显高于A组,C组明显低于B组, D组又明显低于C组（ P＜0．05,P＜0．01）。结论辛伐他汀可以明显抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白表达和下调bax基因表达可能是其主要的作用机制。     

高糖对培养肾小球内皮细胞细胞膜流动性影响的研究

目的 观察高糖状态下肾小球内皮细胞过氧化损伤与内皮细胞膜流动性改变的关系。方法 采用体外人肾小球内皮细胞培养,八木组织测量之TBA法测定脂质过氧化物丙二醛、Prendergast法测定细胞膜流动性,Fura-2双波长荧光法检测细胞内钙离子含量的变化。结果 高糖对肾小球内皮细胞可致过氧化损伤,使细胞膜流动性明显增高,细胞内钙含量增加,随着培养时间的延长,糖浓度愈高,作用愈明显。结论 高糖致内皮细胞过氧化损伤影响细胞膜流动性改变,可能是糖尿病肾病发生的始动因素。     

MCI-186对脊髓损伤大鼠炎症因子释放及神经营养因子表达的影响

目的：研究MCI-186对脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）大鼠炎症因子的释放及神经营养因子表达的影响。方法：建立大鼠脊髓半切SCI模型,随机分成两组,分别予MCI-186或磷酸盐缓冲液（PBS）治疗,在术后1、3、7 d和14 d动态测定受损伤脊髓组织丙二醛（MDA）超氧化物歧化酶（SOD）的含量以及脑原性神经生长因子（BDNF）mRNA的表达,ELISA法测定血清及受损伤脊髓局部组织白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）;神经营养因子-3（NT-3）、BDNF蛋白表达。并同时与假手术组对比。结果：与模型组比较,MCI-186能显著降低SCI大鼠血清炎性因子IL-6、IL-8的浓度,促进脊髓组织NT-3、BDNF表达。结论：MCI-186可抑制炎症因子释放,增加内源性神经营养因子表达。     

糖尿病大鼠深二度烫伤创面血管化现象

目的建立糖尿病大鼠深二度烫伤模型,研究创面愈合过程中血管化现象及其与创面愈合的关系。方法60只清洁级SD大鼠,随即分为正常组(对照组,n=30)和以链脲霉素(STZ)诱导的速发型糖尿病组(糖尿病组,n=30)。制备占总体表面积(TBSA)20%的深二度烫伤模型,分别取伤后1、3、7、10、14、21 d创面皮肤组织样本,行组织学观察并计算创面愈合率;荧光显微镜下观察创面组织的血管化;免疫组化法检测创面组织中CD31抗原表达,以了解微血管内皮细胞的改变。结果伤后14 d,糖尿病组大鼠创面愈合较对照组显著延迟,为(31.5±1.0)%vs(59.4±4.2)%(P<0.01)。伤后1、3、7、14、21 d,糖尿病组新生血管化荧光密度值分别为1±0.1、7±0.8、12±1.4、15±2.1和17±1.8,对照组分别为8.5±0.5、35±1.5、60±3.0、72±3.4和72±3.4。各时间点糖尿病组创面血管化均较对照组显著降低(P<0.01)。各时间点两组创面组织中CD31抗原表达无显著差异(P>0.05),但糖尿病组大鼠仅少量血管内皮细胞周边有代表血管化的蓝色荧光微球。结论糖尿病深二度烫伤难愈创面存在血供不良特征,表现为血管内皮细胞增殖活跃与血管化低下的分离现象,其本质是新生血管形成障碍。     

MCI-186对H_2O_2所致PC12细胞氧应激损伤及细胞内活性氧的影响

目的研究MCI186对PC12细胞氧应激损伤的保护作用及其机制。方法以过氧化氢(H2O2)造成的PC12细胞氧应激损伤模型,采用MTT比色法、乳酸脱氢酶(LDH)活力测定,探讨了MCI186对PC12细胞氧应激损伤的影响;再用荧光染色技术及流式细胞仪测定在静息状态下的神经细胞内产生的过氧化氢含量。结果MCI186(1×10-6,1×10-5mol/L)可显著改善氧应激损伤引起的PC12细胞形态学变化,提高活细胞比率,对损伤的抑制率分别为407%及627%,并抑制细胞LDH释放;MCI186(1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L)还可降低静息状态下的神经细胞内过氧化氢的含量。结论MCI186可减少由H2O2诱导的细胞死亡,对PC12细胞氧应激损伤具有显著的保护作用;MCI186可能影响正常生理条件下细胞内过氧化氢的生成和/或神经细胞的氧化代谢过程,提示MCI186的自由基清除作用和抗氧化作用与其对脑缺血和脑缺血引起的脑水肿及组织损伤的保护作用密切相关。     

去甲斑蝥素对人真皮淋巴管内皮细胞的影响

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人真皮淋巴管内皮细胞（HDLEC）增殖、迁徙的抑制以及诱导凋亡的作用,以寻找一种安全、有效、实用的“抗淋巴管生成”制剂。方法通过HDLEC二维培养,应用MTT法计算NCTD对HDLEC的抑制率：应用Hoechst33258荧光染色、划线法和倒置显微镜、透射电镜检测、观察NCTD对HDLEC增殖、迁徙的抑制和诱导凋亡作用。结果MTT法测得不同浓度和时间的NCTD对HDLEC的增殖有明显抑制作用（P〈O．01）,其半数有效浓度（IC50）为0．0068mg／ml;应用Hoechst染色、倒置显微镜、透射电镜以及划线法,可观察到NCTD对HDLEC的形态和细胞的增殖具有显著的抑制和直接杀伤作用,并能促进、诱导HDLEC凋亡,其作用随NCTD浓度而加强（P〈0．01）,同时可见NCTD对HDLEC的迁徙亦有明显的抑制作用（P〈0．01）。结论NCTD对HDLEC的增殖和迁徙有明显的抑制作用,且有剂量依赖性。     

法舒地尔对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:观察法舒地尔对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响,探讨其作用机制.方法:用0.1%的Ⅰ型胶原酶消化分离HUVECs,加入内皮细胞完全培养基中培养,采用胰蛋白酶进行消化传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态并进行免疫组织化学鉴定.将HUVECs随机分为对照组(内皮细胞培养基培养)、LPS组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS)和法舒地尔组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS+3.275 μg/mL法舒地尔),Western blot法检测RhoA、ROCK2、p-ERM蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测RhoA、ROCK2和p-ERM mRNA表达量.结果:原代培养的内皮细胞在接种后24 h后完全贴壁生长,第3天融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组织化学检测可见第Ⅷ因子相关抗原阳性反应,证实为内皮细胞.LPS组RhoA、ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达水平均显著高于对照组(P<0.01);而法舒地尔组ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达均低于LPS组(P<0.05~P<0.01),但2组RhoA蛋白和基因表达水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论:Rho/ROCK/ERM通路在LPS诱导的HUVECs细胞骨架改变中起重要作用,法舒地尔可拮抗LPS诱导的骨架蛋白重排等HUVECs损伤,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路活化有关.     

肺微血管内皮细胞的培养液对血管平滑肌细胞的效应

目的 观察缺氧条件下培养的肺微血管内皮细胞（ＰＭＥＣ）培养液对大鼠主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的作用,方法 应用倒置显微镜和电镜观察细胞形态,同位素放射测定＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）摄取量,流式细胞仪测定细胞的周期和蛋白含量。结果 单纯缺氧可使ＡＳＭＣ Ｇ０／Ｇ１期数目增多,＾３Ｈ－ＴｄＲ摄取量降低,蛋白质含量减少;缺氧的ＰＭＥＣ培养液能促进大鼠ＡＳＭＣ从Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期,＾３Ｈ－