化学诱导小鼠先天性肾积水动物模型的实验研究

目的:探讨一种化学诱导小鼠先天性肾积水动物模型的方法。方法:将C57BL/6J孕鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。在第12个妊娠日(GD),对照组采用玉米油灌胃,实验组采用2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(TCDD)灌胃。GD18,统计胎鼠的数量、存活率以及畸形发生情况。分析胎鼠及孕鼠各主要脏器组织学结构,电镜观察胎鼠输尿管和肾脏的超微结构。结果:GD18,对照组胎鼠的输尿管和肾脏均正常。实验组胎鼠肾积水发生率为100%(3级86.2%,4级13.8%)。实验组胎鼠下段和中段输尿管黏膜层移行上皮增生,管腔狭窄,输尿管上皮细胞核仁明显,靠边,核大,染色质丰富,异染色质少,常染色质发达;肾间质纤维化,肾小管结构模糊,上皮细胞肿胀,膜性结构破裂。对照组胎鼠肾积水发生率低于实验组。结论:TCDD所诱导的胎鼠肾积水动物模型,与人类肾盂输尿管连接处梗阻(UPJO)在病理学表现上类似,可用于UPJO发病机制与病因学等方面的研究。     

2,3,7,8-四氯二苯二噁英诱导腭裂发生的差异蛋白筛选

目的:以蛋白质组学方法筛选2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致先天性腭裂发生的差异表达蛋白.方法:以TCDD诱导建立胎鼠先天性腭裂模型,行腭部的大体解剖及组织学检查.取实验组和对照组胎鼠的腭组织,分别提取组织总蛋白.通过双向电泳和质谱分析,...     

2,3,7,8-四氯二苯并二噁英作用下鼠胚及乳鼠心脏组织ANF mRNA的表达变化

目的 目前认为心房利钠因子或多肽(atrial natriuretic factor,ANF)mRNA的表达水平可作为心脏疾病严重程度的诊断标准,研究2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)作用下SD大鼠胎鼠及乳鼠心肌组织ANF mRNA表达变化特点,探讨TCDD是否对心脏功能产生一定影响.方法 将实验动物分为0.05、0.5、5、10 μg/kg 4个实验组,采用RT-PCR半定量法,检测对照组及TCDD实验组胎鼠及乳鼠心肌组织ANF mRNA表达的变化.结果 与对照组比较,实验组心脏组织中ANF mRNA的表达出现不同程度的增加.结论 TCDD染毒可以使胎鼠及乳鼠心脏组织ANF mRNA表达升高,从而推测TCDD可能对心脏功能产生一定的损伤.     

胎盘四氯二苯二(噁)英表达在胰岛素样生长因子2诱导胎鼠发育异常中的作用

目的 研究四氯二苯二噁英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD）对胎鼠生长发育的影响及与胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor2，IGF2）的关系。方法 经灌胃给予孕10d大鼠10μg／kg TCDD，20d剖宫取胎，比较实验组和对照组孕鼠妊娠结果，测量两组活胎的身长、体重及胎盘重；用逆转录-实时定量PCR和免疫组化方法检测两组活胎胎盘组织昭F2 mRNA及蛋白的表达水平，用甲基化敏感限制酶HpaⅡ酶切-PCR法检测两组胎盘组织IGF2基因DMR1的甲基化程度。结果 实验组死胎及吸收胎发生率为12．2％。致畸率为11．6％，活胎身长、体重及胎盘重明显低于对照组；实验组活胎胎盘组织IGF2mRNA及蛋白的表达明显高于对照组；两组IGF2基因DMRl的甲基化程度无差异。结论 孕10d给予大鼠10μg／kgTCDD灌胃可导致死胎、吸收胎、畸形胎和胎儿宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation，I-UGR）。TCDD所致胎鼠发育异常可能与胎盘组织IGF2表达增高有关。     

胰岛素样生长因子I受体在宫同内发育心缓胎鼠中的表达研究

目的 探讨宫内发育迟缓（IUGR）时胰岛素样生长因子I受体（IGFD－1R）表达的变化及其在组织和细胞中的定位。方法 将21只SD孕鼠随机分为实验组12只和对照组9只。钳夹实验组孕鼠双侧子宫动、静脉20分钟,建立宫内发育迟缓动物模型。对照组仅作开腹和关腹术。两组均于孕22天剖宫取出胎鼠,采用免疫组化法观察孕晚期胎鼠肝脏和肺组织中IGF－1R的表达。结果 实验组胎鼠的体重、身长及胎盘、肝、肺组织重量按对照组明显降低（P＜0．05）;实验组胎鼠肝脏IGF－1R表达面积比较对照组明显增加,平均灰度明显降低（P＜0．01）;实验组胎鼠肺组织IGF－1R表达面积也比较对照组明显增加（P＜0．05）,但平均灰度则无显著性差异（P＞0．05）。结论 宫内发育迟缓时IGF－1R在肝脏和肺组织的表达增加,可能是机体对IGF－1降低的代偿机制。     

3种药物对饲服TCDD的胎鼠腭突超微结构的影响

目的：观察叶酸、白藜芦醇和α-萘黄酮拮抗四氯二苯二噁英（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD）诱导胎鼠腭裂发生的效应,及对饲服TCDD的胎鼠腭突表面超微结构的影响。方法：妊娠第10天（gestation day 10,GD10）孕鼠随机分组,每组8只。TCDD组以TCDD 28 μg/kg灌胃,对照组以玉米油0.1 ml灌胃,叶酸组以叶酸10 mg/kg + TCDD 28 μg/kg灌胃、白藜芦醇组以白藜芦醇50 mg/kg+TCDD 28 μg/kg灌胃、α-萘黄酮组以α-萘黄酮5 mg/kg+TCDD 28 μg/kg灌胃,于GD17.5在解剖显微镜下观察胎鼠腭裂的发生率。另取15只孕鼠随机分组,每组3只,处理方法同前,分别于GD13.5、14.5、15.5剪取胎鼠头部,扫描电镜观察腭突表面的超微结构。结果：TCDD组胎鼠腭裂发生率为92.86%,对照组未见胎鼠腭裂形成。叶酸组、白藜芦醇组和α-萘黄酮组胎鼠腭裂发生率分别为73.08%、74.51%、65.52%,与TCDD组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。TCDD组腭中嵴上皮细胞表面逐渐破裂、皱缩,伪足结构逐渐减少、消失,最终形成腭裂;对照组、叶酸组、白藜芦醇组和α-萘黄酮组腭中嵴上皮细胞表面光滑整齐、饱满膨胀,表面丝状伪足逐渐增多、延长,一直持续到腭突融合结束。结论：叶酸、白藜芦醇和α-萘黄酮均能恢复小鼠腭中嵴上皮细胞表面的超微结构,从而拮抗TCDD的致腭裂效应。     

缺氧诱导因子1α 在宫内缺氧缺血性脑损伤的胎鼠脑组织中的表达

 目的探讨宫内缺氧缺血性脑损伤后不同复氧时间胎鼠脑组织中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达规律。方法孕19 d Wistar大鼠36 只,随机分为对照组和8 个实验组,每组4 只。实验组建立宫内缺氧缺血性脑损伤动物模型后,分别于子宫恢复血供后0、0.5、2、4、8、12、24 及48 h 取胎鼠脑组织;对照组只暴露双侧子宫15 min 后,取胎鼠脑组织,应用免疫组织化学方法检测HIF鄄1琢蛋白的表达。结果实验组缺氧诱导因子1琢蛋白表达在术后8 h 明显升高,12 h 达到高峰,24 h 后明显下降。结论HIF鄄1琢在宫内缺氧缺血性脑损伤的胎鼠脑组织中的表达随着复氧时间的延长呈现先升高后降低的趋势。     

结缔组织生长因子在肾积水模型大鼠肾组织中的表达研究

目的观测结缔组织生长因子（CTGF）在肾积水模型大鼠肾组织中的表达,并与先天性肾积水患儿进行对比,为先天性肾积水的靶点防治研究提供可靠的动物模型。方法将48只成年健康雄性Wistar大鼠分为模型组和对照组各24只。模型组行左侧肾盂输尿管处游离并结扎输尿管,对照组仅行左侧肾盂输尿管处游离。两组在术后1、2、4、8周各随机选取6只,行肾脏病理学检查,用免疫组织化学染色及Westernblot法检测CTGF在组织中的分布及蛋白的表达水平。结果CTGF蛋白含量随着梗阻时间延长而增加。CTGF在模型组肾脏中各时点的表达明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。结论CTGF在大鼠肾积水模型中为阳性表达,且与梗阻时间呈正相关,与前期先天性肾积水患儿的研究结果相一致,此模型可用于先天性肾积水的CTGF靶点防治。     

先天性肛门直肠畸形胎鼠肠管BMP4表达及意义

目的研究先天性肛门直肠畸形（ARMs）胎鼠小肠、结肠和直肠骨形成蛋白4（BMP4）的表达情况,并探讨其在自身肠神经系统（ENS）发育过程中的作用。方法利用全反式维甲酸（ARTA）诱导大鼠产生肛门直肠畸形胚胎,孕20d剖宫取胎,选取对照组正常胎鼠12只,实验组ARMs胎鼠24只,在大体显微镜下解剖整个肠管,选取距盲肠10cm处小肠,距盲肠3cm处结肠,距肛门0.5cm处直肠各一段,应用SP免疫组化方法检测对照组和实验组小肠、结肠和直肠BMP4的表达情况。结果对照组肠壁肌间及粘膜下神经丛可见BMP4抗体染色阳性细胞,实验组胎鼠小肠阳性细胞的MOD值与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;而实验组胎鼠直肠、结肠的阳性细胞的MOD值与对照组相比明显减小,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论ARMs胎鼠结肠、直肠BMP4表达水平减低,可能与其远端肠管ENS发育不良有关。     

腺嘌呤致大鼠雄性不育的实验研究

目的：探讨腺嘌呤致大鼠雄性不育的可能机制。方法：用含0．5％的腺嘌呤饲料饲喂大鼠30d，在实验第30天活杀取睾丸组织，常规连续病理切片。观察睾丸组织的病理改变情况；免疫组化检测睾丸曲细精管TGF－β1蛋白表达水平，脱氧核苷酸末端转移酶缺口末端标记法（TUNEL）检测生精细胞凋亡。结果：实验组大部分曲细精管退行性变性，各级精细胞变性，数量减少；睾丸间质细胞和Sertoli细胞均可见TGF－β1蛋白表达，而对照组只有睾丸间质细胞可见TGF－β1蛋白表达，且实验组TGF－β1蛋白表达强度较对照组为高（P＜0．01）；睾丸生精细胞凋亡细胞百分率较对照组明显增多（P＜0．01）。结论：腺嘌呤诱导的大鼠雄性不育可能与TGF－β1的抑制生精作用及促进生精细胞凋亡有关。     

急性压力灌注对不同程度肾积水模型兔肾脏的损伤

目的:探讨输尿管套扎法建立兔肾积水模型的可行性及急性压力灌注对不同程度积水肾肾脏损伤的影响,为临床经皮肾镜和输尿管镜过程中灌注压力的选择提供依据。方法:健康新西兰大白兔45只,随机分为正常组(N组,n=5)、轻度积水组(M组,n=20)和重度积水组(S组,n=20)3组。轻度积水及重度积水组模型采用套管法构建。轻度积水组与重度积水组分别于结扎后3,7d行彩色多普勒超声检查以判别积水程度。M组和S组随机分为M0-M3和S0-S3 4个压力灌注亚组,M0-M3和S0-S3分别行0,20,60,100mmHg压力灌注,N组行100mmHg压力灌注。术后48h取肾脏标本,免疫组化检测标本中TNF-α及IL-8的表达。结果:输尿管套扎法模型构建成功率达90%,与正常肾脏相比,结扎后3d行彩色多普勒超声检查,M组可见集合系统分离,有少量液性暗区;结扎后7d检查,S组可见集合系统分离明显,肾皮质变薄,液性暗区占据肾脏大部分区域。M组行0,20,60mmHg灌注时IL-8、TNF-α表达量均无明显变化(P>0.05),行100mmHg灌注时IL-8及TNF-α表达量明显增加(P<0.05);S组行0,20mmHg灌注时IL-8、TNF-α表达量均无明显变化(P>0.05),行60,100mmHg灌注时IL-8、TNF-α表达量明显增加(P<0.05);N组行100mmHg灌注时IL-8、TNF-α表达量与M0、S0相比无明显差别(P>0.05)。结论:输尿管套扎法建立兔肾积水模型具有可行性,不同程度积水肾对急性压力灌注的耐受能力不同,高灌注压力更容易对积水程度重的肾脏造成损伤,在经皮肾镜和输尿管镜治疗结石过程中应尽量减少过高压力灌注以保护积水肾脏。     

胎儿肾盂扩张的超声诊断和预后的探讨

目的探讨胎儿肾盂扩张积水的超声诊断和预后。方法对孕20~41周的胎儿进行超声检查,共诊断胎儿肾盂扩张30例,按肾盂扩张的程度分3型:A型:单纯肾盂扩张,扩张范围1.0~1.5 cm;B型:肾盂扩张虽在1.5 cm以内,但肾实质扩大;C型:肾盂明显扩张,超过1.5 cm,肾实质变薄。生后随访3 d~9个月。结果共24例胎儿肾脏先后恢复正常,其中A型19例,B型3例,孕末期即恢复正常而未分型2例;有4例婴儿行手术治疗;有2例胎儿行引产。结论胎儿期肾盂积水若仅为肾盂扩张(1.0~1.5 cm)生后积水可消失。若同时伴有肾实质扩大,部分胎儿生后肾积水持续存在。若肾盂扩张>1.5 cm,伴肾实质变薄,生后肾积水均持续存在,需行手术治疗。     

过氧化物酶1对人肝癌细胞HepG2细胞皮下移植瘤生长的影响

目的  探讨过氧化物酶1（Prx 1）在肝癌形成和恶性进展中的作用。方法  蛋白质印迹法（Western blot）检测远癌肝组织和近癌肝组织中Prx 1、pAkt及Akt表达差异。肝细胞饥饿培养24 h后,10 ng/ml表皮生长因子（EGF）处理10 min,提取总蛋白,Western blot检测Prx 1、pAkt、不同位点磷酸化表皮生长因子受体（EGFR）和总EGFR。Western blot检测检测未处理组、转染无义shRNA组及转染Prx 1 shRNA组HepG2细胞中Prx 1蛋白的表达。DCFH-DA法检测3种HepG2细胞中活性氧簇总量。转染无义shRNA组及转染Prx 1 shRNA组HepG2细胞皮下注射至SCID小鼠,注射后每周测量1次皮下肿瘤体积。Western blot检测两组小鼠皮下肿瘤组织中Prx 1和pAkt的表达情况。结果  与正常肝细胞比较,Prx 1在肝转化细胞中表达升高。Prx 1增强了EGF介导的EGFR和Akt激活。Prx 1表达沉默抑制了HepG2体内成瘤能力。减少HepG2皮下移植瘤的肝转移。Prx 1表达沉默还抑制了Akt体内激活。结论  Prx 1具有调控人肝细胞中EGFR介导信号通路的潜在作用。Prx 1能够通过EGFR-Akt信号通路介导细胞正常至异常转化、肿瘤形成及转移

     

折叠术在严重上尿路扩张手术中的应用

目的：探索合理矫正严重上尿路扩张、较大程度地恢复上尿路形态和功能的方法。方法：对 ６ 侧巨输尿管症的下段管腔和９ 例严重肾积水的萎缩皮质进行手术折叠，缩小上尿路扩大的内腔。结果：手术后随访６ 个月～１ 年，尿路造影显示：４ 侧巨输尿管管径缩小，具备了一定的抗膀肮尿液返流能力，肾功能改善；５ 例肾积水患者的肾体积和内腔缩小，尿液引流通畅，肾功能改善。结论：折叠手术有利于严重扩张的上尿路形态和功能的恢复，保护肾功能，减少手术后并发症。     

川芎嗪对宫内生长受限幼鼠生长发育及脑损伤GAP-43蛋白表达的影响

目的:研究钳夹子宫血管致宫内生长受限幼鼠(FGR)脑神经相关生长蛋白-43(GAP-43)的表达及川芎嗪对FGR幼鼠及脑海马GAP-43蛋白表达的影响。方法:通过钳夹子宫血管30 min建立FGR模型,测出生当天及生后7 d假手术组、模型组、川芎嗪低剂量组及川芎嗪高剂量组幼鼠的体重、脑重、肝重,应用免疫组化方法观察川芎嗪对FGR幼鼠脑海马GAP-43蛋白表达的影响。结果:出生当天,模型组幼鼠的体重、脑重、肝重、GAP-43蛋白的表达均明显低于假手术组(P<0.01);川芎嗪低剂量组体重、脑重、肝重、GAP-43蛋白的表达与模型组无显著差别(P>0.05),川芎嗪高剂量组体重、脑重、肝重、GAP-43蛋白的表达明显高于模型组(P<0.01)。生后7 d,4组幼鼠体重无明显差异(P>0.05),但模型组的脑重、肝重及GAP-43蛋白的表达仍显著低于假手术组及川芎嗪高剂量组(P<0.05);同川芎嗪低剂量组无显著差异。结论:足够剂量的川芎嗪对钳夹子宫血管致FGR幼鼠脑组织有明显的保护作用。     

超声对胎儿肾盂积水的观察及其临床意义

目的 探讨检查胎儿肾盂积水的不同分级及前后径与其预后的关系,为孕期观察及临床处理提出合理方案。方法检查对象来自我院产科门诊被疑为胎儿肾盂积水的孕妇,共226例,超声检查孕周为20-40周;应用二维超声观察、测量胎儿肾盂形态及大小、肾盏变化和肾皮质的厚度,给以分级,定期超声复查并追踪产后结局。结果 Ⅰ级肾盂积水胎儿共143例186只肾,其肾盂前后径在0.3-1．0cm之间,生后很快消退,预后好;Ⅱ级肾盂积水胎儿共47例52只肾,其肾盂前后径在1．1-1．8cm之间,生后大部分缓解渐消退,只有少部分（约3.9％）随孕周增加渐加重,生后需手术治疗。Ⅲ级肾盂积水胎儿共10例10只肾,其肾盂前后径在1．5-3.3cm之间,约70％生前、后均呈加重趋势需手术治疗,Ⅳ级肾盂积水胎儿共8例11只肾,其肾盂前后径在1．5-7．2cm之间,生后均需手术治疗。结论 对Ⅰ级肾盂积水,一般无随访监测的必要;Ⅱ级以上肾盂积水产前、产后需定期超声检查,采用肾盂前后径线和分级联合应用的方法对胎儿肾盂积水进行评估比较合适。     

芳香烃受体通过介导Th17/Treg分化调控蟑螂过敏原诱导的哮喘

探讨芳香烃受体（AhR）是否能够通过介导肺内Th17/Treg细胞的分化来调控蟑螂过敏原（CRE）诱导的哮喘。方法 通过蟑螂过敏原激发和致敏,建立哮喘小鼠模型。部分哮喘小鼠给予 AhR 激动剂（TCDD）(10 μg/kg)或 AhR 拮抗剂（CH223191）（10 mg/kg）刺激。实验小鼠分为4组：对照组、哮喘组（CRE）、AhR激活组（CRE+TCDD）及AhR拮抗组（CRE+TCDD+CH223191）。通过RT-PCR检测哮喘小鼠肺内AhR及其下游Cyp1a1和Cyp1b1基因的表达;免疫组化染色观察哮喘小鼠肺内炎症变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）监测炎症细胞因子的表达;采用流式细胞术检测肺及纵膈淋巴结中Treg的表达。结果 TCDD和CH223191能够调控哮喘小鼠肺内AhR及其下游基因Cyp1a1和Cyp1b1的表达（P<0.002）;AhR激活后肺内炎症细胞及粘液分泌较CRE组减少,促炎因子IL-4、IL-13和Th17A表达减少（P<0.001）,而抑炎因子IL-10、IL-22和TGFβ1表达增加（P<0.001）,而拮抗AhR后逆转了这一现象,且与CRE组无统计学差异（P>0.05）;AhR激活后肺及纵膈淋巴结中Treg细胞及其转录因子FOXP3表达明显增加（P<0.001）,Th17细胞转录因子RORγt基因表达水平明显降低（P<0.001）,而拮抗AhR后,与激活组相比,肺及纵膈淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及其转录因子FOXP3表达减少（P<0.001）,RORγt基因表达水平增加（P<0.001）;与CRE组相比,差别无统计学意义（P>0.05）。结论 AhR通过介导Th17/Treg细胞分化来调控哮喘小鼠肺部炎症。     

过氧化物酶1,6和GFAP在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及临床意义

目的确定星形胶质细胞瘤中过氧化物酶1(Prx1)、过氧化物酶6(Prx6)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,探讨其表达水平与星形胶质细胞瘤恶性程度的关系。方法采用Western blot、RT-PCR和免疫组化检测52例星形胶质细胞瘤(Ⅱ级23例、Ⅲ级15例、Ⅳ级14例)和12例正常脑组织标本中Prx1、Prx6和GFAP的表达情况。结果 Prx1、Prx6在正常脑组织、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平逐渐升高,具有统计学意义(P<0.05);GFAP在Ⅲ、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平低于Ⅱ级星形胶质细胞瘤和正常脑组织(P<0.05)。结论 Prx1、Prx6和GFAP可能是临床评价星形胶质细胞瘤恶性程度和侵袭性的潜在生物标志物,可作为星形胶质细胞瘤生物治疗的潜在靶分子。     

连接蛋白在小鼠膜迷路积水模型中对耳蜗血-迷路屏障的影响

目的 本研究拟采用自发性膜迷路积水动物模型PHEX基因突变小鼠研究紧密连接蛋白ZO-1在耳蜗血管纹组织中的表达,分析突变体小鼠在病理学、影像学及听力功能上的动态改变.方法 选取出生后21 d(P21)、出生后90 d(P90)、出生后120 d(P120)的PHEX基因突变的Hyp-Duk/Y雄性小鼠为实验组,同龄的野...