内皮祖细胞的来源及应用

内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPC）是能自我更新、增殖分化为内皮细胞的多能干细胞，具有迟发性高增殖潜能及定向归巢特性。EPC细胞表面既存在造血干细胞表面标志，如CD34、CDl33，又存在内皮细胞表面标志VEG—FR-2，它可以摄取乙酰化低密度脂蛋白，具有yon Willebrand因子，在体外培养中具有特异的形态特征。它与血管新生、心血管组织工程内皮化等关系密切，在基础研究、肢体缺血性疾病及心血管疾病等领域有关EPC的研究非常活跃，从而为治疗缺血性疾病、血管组织工程及肿瘤治疗提供了新的思路和手段。     

绵羊骨髓来源内皮祖细胞的培养与鉴定

背景:当今,组织工程化静脉瓣的研究刚刚起步,种子细胞的选择是其关键,内皮祖细胞可以作为组织工程化静脉瓣体外构建理想的种子细胞。目的:通过体外培养与鉴定绵羊骨髓来源内皮祖细胞,探讨绵羊骨髓来源内皮祖细胞培养方法,为绵羊组织工程静脉瓣种子细胞选择提供实验基础。方法:绵羊骨髓经条件培养基进行选择培养获取骨髓单个核细胞,传代扩增后用磁珠分选出CD133+细胞再培养,流式细胞检测确认分前细胞CD133的表达情况;分选传代后绘制细胞生长曲线观察细胞生长能力,用免疫细胞化学检测细胞特异性分子CD133,D34,VWF的表达情况;FITC标记BS-1-lectin和DiI标记ac-LDL标记细胞检测细胞吞噬功能。结果与结论:绵羊骨髓单个核细胞原代培养2d细胞开始贴壁,7d细胞完全融合,传代后第2天进入对数生长期,传代3～5d形成为典型的铺路石样,传代后第7d细胞进入增殖平台期;细胞传代后磁珠分选率为12.6%,流式细胞仪检测显示CD133阳性率为12.64%;免疫细胞化学检测显示细胞呈CD133、CD34、血管性血友病因子阳性表达。细胞能同时吞噬FITC-labeledBS-1-lectin,DiI-ac-LDL阳性率达85.3%。证实实验成功地从绵羊骨髓单个核细胞中分离培养出内皮祖细胞。     

不同来源内皮祖细胞培养及其生物学特性比较

背景:在缺血性疾病中,机体的代偿性反应包括细小动脉形成和血管新生,而内皮祖细胞在其中发挥着重要的作用,参与了机体多种生理、病理性血管重建过程。目前对内皮祖细胞的来源、生物学特性还存在许多争议。目的:分离培养人外周血、脐带血、骨髓以及脐带来源的内皮祖细胞,并对其生物学特性进行比较。方法:采用密度梯度离心法分离人外周血、脐带血以及骨髓单个核细胞进行贴壁培养,脐带来源的内皮祖细胞通过植块贴壁培养或胶原酶消化脐静脉内膜获得的单个核细胞进行贴壁培养。对获得的贴壁细胞进行细胞形态学、增殖活力、细胞周期、免疫表型的检测。结果与结论:①外周血与脐带血来源的贴壁细胞呈长梭形,集落状生长,其上附有成簇圆形细胞,随着培养时间延长,圆形细胞渐脱落,梭形细胞无明显增殖趋势,消化后细胞不能传代;流式显示细胞高表达CD45,部分表达KDR,但不表达CD31。②骨髓和脐带来源的贴壁细胞呈短梭形、多角形;传代后细胞增殖迅速,且细胞形态与增殖活力没有明显下降;多数细胞处于G0/G1期;流式检测显示细胞均不表达CD14、CD45,也不表达CD106、HLA-DR,但高表达CD44、CD90、CD62E、CD73、CD95、CD105;部分表达内皮系标记KDR、vWF;酶消化法获得的脐带内皮祖细胞还表达CD31;共聚焦显微镜扫描显示细胞具有吸收ac-LDL并结合UEA-1的能力。结果说明外周血、脐带血、骨髓与脐带组织中可分离培养出分化程度、增殖活力不同的内皮祖细胞。     

1种新来源的内皮祖细胞提取分离方法

目的探索1种新来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的提取分离方法,以增加EPCs细胞数量、提高增殖活性。方法拟从胎鼠肺提取分离培养EPCs,分别从形态学、表面标志物、吞噬功能和体外管腔形成等方面验证所提取细胞为EPCs。同时将其与骨髓中提取的内皮祖细胞的细胞增殖活力进行比较。结果从胎鼠肺提取分离培养的细胞,其形态特征与EPCs一致,细胞表达CD31、CD34、CD133、VEGFR2等EPCs特异标志物,可同时吞噬Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1;体外可形成管腔样结构,功能上符合EPCs的表现。胎鼠肺提取的细胞增殖活力明显高于传统从骨髓提取的EPCs。结论胎鼠肺中可提取出数量和质量较好的EPCs,为进一步实验提供可靠的细胞来源。     

内皮祖细胞临床应用的研究进展

内皮祖细胞是内皮细胞的前体细胞,在某些生理、病理状态下,可随血液流至相应组织,分化为内皮细胞,并进一步形成血管。内皮祖细胞参与血管新生的作用,对于创伤修复、缺血性疾病的治疗以及肿瘤的靶向治疗具有重要意义,在临床上具有广阔的应用前景。     

内皮祖细胞的研究及进展

内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)是一种起源于骨髓的原始细胞,类似于胚胎期的成血管细胞(angio-blast),在一定条件下可定向分化为成熟的内皮细胞。在体外,EPC能吸收乙酰化低密度脂蛋白,结合荆豆凝集素(ulexeuropeas lectin),形成毛细血管管腔样结构;在体内,EPC能募集、归巢到血管损伤区,分化为内皮细胞,促进血管再生。除骨髓之外,骨骼肌、血管软组织中都可检测到EPC。外周血中的循环EPC来源于骨髓,脐带血EPC来源于胎肝。EPC最早是作为CD34 单个核细胞从成人外周血中分离出来[1]。分离EPC的方法有多种,例如密度梯度…     

内皮祖细胞研究进展

自从1997年Asahara等首次从外周血液中分离出内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs）以来，EPC的分离、纯化、扩增、功能和应用已成为近来研究的热点，动物试验和早期临床试验都表明EPC具有改善缺血肢体血供、促进心梗后侧枝循环的形成及加快血管损伤后的内皮修复、抑制内膜增生等作用，并且发现有多种细胞因子和药物调节其从骨髓至外周循环的动员、迁移、分化、增殖和归巢等步骤，本文对此作一综述。     

大鼠骨髓与外周血来源内皮祖细胞生物学特性比较

背景：内皮祖细胞不仅参与胚胎血管生成,也参与出生后血管发生和血管内膜损伤后修复,对治疗缺血性疾病意义重大,但目前对内皮祖细胞的分离、培养、鉴定还存在争议。 目的：体外分离、培养大鼠骨髓与外周血来源的内皮祖细胞,并比较其生物学特性。 方法：密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓和外周血单个核细胞,接种于纤维连接蛋白铺被的培养瓶中贴壁培养,用加入血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子的完全培养基诱导培养,对获得的贴壁细胞进行细胞形态学,免疫细胞化学染色,流式细胞仪,透射电镜,以及Dil-acLDL、FITC-UEA-1双荧光染色法检测。 结果与结论：骨髓来源的内皮祖细胞数量多,集落状生长,增殖能力强;外周血来源的内皮祖细胞数量较少,散在生长,消化后能贴壁但不能传代。两种不同来源的内皮祖细胞免疫细胞化学检测贴壁细胞CD133、CD34、Flk-1、Ⅷ因子在不同时段呈阳性表达;激光共聚焦显微镜观察,Dil-acLDL、FITC-UEA-1均为双染。透射电镜检查外周血来源的内皮祖细胞发现W-P小体。提示大鼠骨髓和外周血均能分离培养出内皮祖细胞,但前者是早期内皮祖细胞,后者为晚期内皮祖细胞,两者生物学特性各不相同。     

人外周血单个核细胞来源内皮祖细胞的生物学性状

目的 探讨从成人外周血单个核细胞中分离、培养内皮祖细胞（EPCs）的方法以及EPCs的生物学特征。方法 密度梯度离心法获得单个核细胞（MNCs），种植于纤连蛋白包被的培养板中。每2h去除1次未黏附细胞共2次，然后隔日换液1次，7d后计数早期集落。每例血样均分为2等份，1份在获得早期集落后进行实验；另1份持续培养至晚期集落出现进行相同实验。流式细胞技术检测细胞表面抗原表达，ELISA法测定上清液中血管内皮生长因子（VEGF）浓度。胶原凝胶细胞种植实验测定体外血管生成功能。结果 早期集落中心为圆形细胞，周边是放射状排列的纺锤形细胞，再种植不能形成第二代集落且无体外血管形成功能，细胞表面主要表达CD14和CD45，培养上清液中可测到高浓度的VEGF。晚期集落在培养21至28d间出现，再种植可形成第二代内皮细胞集落，并能在胶原凝胶中形成管腔样结构。其构成细胞与早期集落相比CD45、CD14表达显著减少（P<0.001）而CD146表达明显增加（P<0.01）。结论 人外周血单个核细胞在内皮培养条件下可形成早期和晚期集落，构成早期集落的绝大多数细胞属于单核细胞系列，可分泌VEGF但不能分化成内皮细胞，晚期集落具有内皮祖细胞的形态和生物学特征。     

内皮祖细胞的研究进展

出生后骨髓中存在着一群祖细胞能够迁移到外周循环中,并且可以分化为成熟的内皮细胞,这一群细胞被定义为内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）.在胚胎发育的过程中,EPCs参与了最初的血管形成（vasculogenesis）.     

内皮祖细胞的研究进展

骨髓含有内皮祖细胞, 能够迁移至外周血并分化为成熟内皮细胞,参与胚胎时期的血管生成、出生后的微血管新生以及肿瘤组织的发生。体内内皮祖细胞数量和活性受多种生理性及病理性因素的的影响。体外扩增后回输体内可以修复受损组织、器官的血管,促进器官功能恢复;抑制其活性,在一定程度上可以抑制肿瘤组织的生长。内皮祖细胞为缺血性疾病以及肿瘤的治疗提供了另一新的靶点。     

鼠骨髓来源的内皮祖细胞的体外培养及生物学特性的研究

培养和鉴定从鼠骨髓中分离的内皮祖细胞（EPCs），观察其在体外增殖、分化过程中相关细胞表型的变化。采用密度梯度离心方法获得鼠骨髓单个核细胞，用EGM-2培养基诱导其分化，于培养4d、7d、10d、14d、21d后用免疫荧光双标技术（CD34、VWF和FLK1）鉴定EPCs，用MTT法分析EPCs的增殖情况。于诱导分化后的1d、4d、7d、10d、14d、21d，用蛋白免疫印迹法检测VWF蛋白的水平，用实时聚合酶链式反应法检测VEGFR 2（FLK1）、VWF的mRNA表达变化，并与未诱导培养的细胞进行比较。鼠骨髓单个核细胞经诱导培养，4d细胞开始贴壁，7d细胞大多变为梭形，排列成铺路石样。MTT结果表明，10d时EPCs达到增殖高峰（P〈0．05）；免疫染色表明，培养7d的细胞约90％呈VWF—CD34双荧光阳性；蛋白免疫印迹法检测结果表明，培养1d的细胞无VWF表达，培养4d后表达逐渐增强，10～14d达到高峰，21d后减弱；实时聚合酶链式反应法检测结果表明，培养1d的细胞FLK1和VWF的mRNA表达低（P〈0．01），4d后表达逐渐增强，14d达到高峰，21d后减少，未诱导细胞无表达。试验成功地从鼠骨髓单个核细胞中分离培养出EPCs，在其体外扩增分化为成熟内皮细胞的过程中，P0～P3在1～21d期间FLK1和VWF等内皮细胞标志蛋白表达逐渐增强，P3在21d后略有下降。该细胞可作为构建血管组织工程支架的较为理想的种子细胞。     

内皮祖细胞的研究进展

出生后骨髓中存在着一群祖细胞能够迁移到外周循环中,并且可以分化为成熟的内皮细胞,这一群细胞被定义为内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs).在胚胎发育的过程中,EPCs参与了最初的血管形成(vasculogenesis).     

内皮祖细胞与高血压病的应用研究进展

BACKGROUND: Structural and functional changes of endothelial cells are the common pathological basis of cardiovascular disease. Severe structural and functional damage of endothelial cells are found in patients with hypertension or coronary heart diseases.     

血管内皮祖细胞研究进展

血管内皮祖细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ，ＥＰＣ）是血管内皮的前体细胞 ,亦称为血管母细胞(ａｎｇｉｏｂｌａｓｔｓ)。新近研究表明 ,血管内皮祖细胞不仅参与胚胎期的血管发育 ,也存在于成年机体的骨髓及外周血 ,在成体血管新生中起重要作用。这一目前血管发育生物学的重大发现 ,不仅为揭开血管新生机制之谜提供了重要线索 ,也为缺血性疾病及恶性肿瘤的治疗提供了新的靶点。本文报告其有关进展。１血管内皮祖细胞的来源在胚胎期 ,随着卵黄囊所提供养分的耗尽 ,胚胎须从母体获得营养。因此在人胚胎的第１３…     

内皮祖细胞与雌激素

背景：研究发现雌激素对血管内皮具有明显的保护作用,而内皮祖细胞作为内皮细胞的前体细胞参与内皮的修复。 目的：总结内皮祖细胞生物特点及雌激素对内皮祖细胞作用的研究进展。 方法：应用计算机检索PubMed数据库及CNKI数据库,在标题和摘要中以“内皮祖细胞,雌激素”或“Endothelial progenitor cells,estrogen”为检索词进行检索。选择与内皮祖细胞生物学特点及雌激素对其作用研究相关的文献。 结果与结论：内皮祖细胞存在于骨髓和外周血中,是具有增殖、迁移、黏附能力并分化为血管内皮细胞潜能的原始细胞,可作为未来治疗心血管疾病的重要的靶点。雌激素对内皮祖细胞有保护效应,能增强内皮祖细胞增殖、迁移、黏附等生物活性,同时还能延迟内皮祖细胞衰老、拮抗其凋亡。但雌激素影响内皮祖细胞生物活性的具体靶点及机制尚有待进一步研究。     

内皮祖细胞来源的外泌体减轻血管内皮细胞缺氧性损伤

目的:分析内皮祖细胞(EPCs)来源的外泌体(EXOs)对血管内皮细胞缺氧性损伤的影响。方法:体外培养EPCs,提取培养基中的EXOs并通过透射电镜和Western blot检测膜性标志物进行鉴定。将体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为3组:(1)正常对照组,常规培养的HUVECs;(2)缺氧组,将HUVECs于低氧环境中培养8h;(3)缺氧+EPCs-EXOs组,HUVECs于缺氧处理前加入EPCs来源的EXOs(EPCs-EXOs)处理,再在低氧环境中培养8h。于0h、24h和48h采用CCK-8增殖检测试剂盒、划痕实验及流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移和凋亡情况。结果:EPCs-EXOs在电镜下呈椭圆形或杯状膜性囊泡,直径约40-110nm,其膜性标志蛋白CD63、CD81呈阳性表达。与正常对照组比较,缺氧组细胞增殖和迁移能力下降,细胞凋亡率增加(P<0.05)。与缺氧组比较,缺氧+EPCs-EXOs组细胞增殖和迁移能力得到一定程度的恢复(P<0.01),与正常对照组相比无明显差异(P>0.05),同时其细胞凋亡率较缺氧组下降(P<0.01),但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论:EPCs-EXOs可改善缺氧内皮细胞的增殖和迁移能力,减少内皮细胞凋亡,减轻血管内皮细胞的缺氧性损伤。     

内皮祖细胞生物学特征及其临床应用

背景：内皮祖细胞已经广泛用于研究缺血性疾病,能促进内皮再生、血管修复及组织中新生血管形成。 目的：综述内皮祖细胞生物学特征及其临床应用的研究进展。 方法：应用计算机检索1997-01/2010-12 PubMed数据库相关文章,检索词为“endothelial progenitor cells,ischemic cerebrovascular disease,early endothelial progenitor cells,late endothelial progenitor cells”,共检索到文献219篇,最终纳入符合标准的文献28篇。 结果与结论：内皮祖细胞定居于成体骨髓,现已证实胎肝、人脐血、成人外周血及骨髓中均存在,且人脐血、外周血中的内皮祖细胞均来源于骨髓。此外在心脏、血管、脂肪组织和骨骼肌等外周组织中也发现内皮祖细胞的存在。内皮祖细胞具有促进内皮再生及血管修复的功能,能促进组织中新生血管形成,在防治血管成形术后再狭窄等血管性疾病中发挥重要作用,其中晚期内皮祖细胞比早期内皮祖细胞更易形成毛细血管,在干细胞移植临床应用于缺血性脑卒中具有广泛的前景。     

内皮祖细胞与氧化应激

内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是成熟内皮细胞的前体细胞,参与损伤组织的血管新生和再内皮化。研究表明,氧化应激能引起EPCs的数量减少和功能减弱。虽然EPCs存在抗氧化酶系统,但是当细胞正常的氧化还原稳态失衡时,活性氧过度产生而聚积,引起氧化应激,导致细胞的衰老或凋亡。     

糖尿病内皮祖细胞的研究

<正>自1997年Asahara从人外周血单个核细胞首次分离出内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)[1]以来,人们对其进行了大量研究。结果表明,EPCs是具有迁移