难治性颞叶癫痫病灶中Cx32与Cx43表达的研究

目的分析难治性癫痫患者脑组织中缝隙连接蛋白32（Cx32）、连接蛋白43（Cx43）表达,探讨缝隙连接在癫痫发生发展中的作用。方法对30例难治性癫痫患者（癫痫灶组）进行皮质电图监测下手术切除痫灶,采用免疫组化染色法（二步法）检测癫痫灶及10例周边脑组织（周边脑组织组）Cx32、Cx43表达,并进行统计学分析。结果癫痫灶组及周边脑组织组Cx43、Cx32均有表达,Cx43在癫痫灶组中表达明显增多（U=4．066,P〈0．001）;而癫痫灶组及周边脑组织组中Cx32的表达比较差别无统计学意义（U=1．866,P〉0．05）。结论缝隙连接在癫痫发生、发展中有重要作用,长期癫痫发作可造成神经元凋亡。     

缝隙连接蛋白Cx43在SD大鼠电点燃癫痫模型中的表达

目的探讨缝隙连接蛋白(Cx)在癫痫形成中的作用。方法将32只雄性SD大鼠随机分为4组,分别造模。观察SD大鼠行为,记录脑电图。通过免疫蛋白印迹的方法检测Cx43在大鼠海马区的表达变化。通过药物对癫痫电点燃模型成模过程的干预来观察癫痫形成与缝隙连接蛋白间的关系。结果模型组大鼠出现癫痫发作。蛋白印迹显示Cx43的表达异常增高。药物干预的2组SD大鼠模型痫性发作滞后,发作频率降低,程度减轻,痫性脑电波波幅降低,蛋白印迹显示Cx43的表达增高受到抑制。结论缝隙连接蛋白是癫痫形成的物质基础。抑制Cx43的过度表达,减少异常缝隙连接的形成,癫痫形成也受到抑制,从而预防癫痫产生。     

缝隙连接蛋白43在阿尔茨海默病中的研究进展

星型胶质细胞的功能异常与多种神经退行性疾病的发生发展关系密切,缝隙连接的异常是其中重要的机制之一。缝隙连接主要是由缝隙连接蛋白（connexin,Cx）构成,是相邻细胞间代谢和离子耦合以及电传递的主要结构。Cx43和Cx30是在脑中含量最多的Cx亚型,其中又以Cx43为主。Cx43在脑中含量或分布与阿尔兹海默病的发生发展关系密切。本文就以Cx43与阿尔兹海默病的关系进行综述。     

甘珀酸对癫痫大鼠脑组织缝隙连接蛋白43表达的干预及其意义

目的 探讨癫痫大鼠脑组织缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达及缝隙连接阻断剂甘珀酸(carbenoxolone,CBX)对其表达的影响.方法 健康SD大鼠64只,随机分为正常对照组、致痫组、致痫+生理盐水组(致痫+NS组)和致痫+CBX干预组(致痫+CBX组).采用免疫组化染色方法和实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应方法分别测定氯化锂-匹罗卡品癫痫模型大鼠脑组织Cx43免疫阳性细胞数及Cx43mRNA表达水平,并观察腹腔注射CBX对Cx43表达的影响.结果 与正常对照组比较,致痫大鼠脑组织Cx43免疫阳性细胞数及其mRNA表达差异倍数在致痫1 h开始明显增多,并持续至7 d(P＜0.05).大鼠注射CBX后Cx43免疫阳性细胞数及其mRNA表达差异倍数均明显低于同一时间点致痫组和致痫+NS组(P＜0.05),海马区Cx43免疫阳性细胞数及其mRNA表达差异倍数在注射CBX 7 d后降至正常水平,而皮层区Cx43免疫阳性细胞数及其mRNA表达差异倍数在注射CBX 3 d后降至正常水平.结论 星形胶质细胞Cx43参与了癫痫发作和发展过程.CBX减少致痫大鼠脑组织Cx43表达,具有较明确的抗癫痫作用.     

心室纤颤时心肌缝隙连接蛋白Cx43的变化

目的 观察心室纤颤(室颤)发生后缝隙连接蛋白Cx43的表达以及缝隙连接改造剂ZP123对Cx43表达的影响.方法 按照随机数字表法将30只家猪分为假手术组、模型组和ZP123干预组,每组10只.以80 V电压持续刺激动物5 s诱发室颤;致颤前15 min ZP123组给予ZP123 1μg/kg静脉推注+ZP12310μg·kg-1·h-1微量泵泵入;模型组泵入生理盐水50 ml;假手术组动物不致颤也不补液.室颤持续8 min后开胸取左心室游离壁心肌,用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测Cx43的分布及水平,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)定量检测Cx43蛋白表达.结果 假手术组Cx43荧光信号强,分布均匀;模型组Cx43荧光信号弱,呈不均一分布;ZP123干预组Cx43荧光信号增强,不均一分布减轻.与假手术组比较,模型组心室肌组织Cx43荧光信号面积百分比、积分吸光度(A)值及蛋白表达均明显下降[面积百分比:(0.64±0.36)%比(1.27±0.19)%,积分A值:15 201±2 613比30 634±4 975,Cx43蛋白表达:0.72±0.08比0.97±0.07,均P＜0.05];与模型组比较,ZP123干预组Cx43表达[面积百分比(0.96±0.16)%,积分A值22 100±4 404,Cx43蛋白表达0.82±0.04]均明显升高(均P＜0.05).结论 室颤发生时心肌组织Cx43表达减少;应用ZP123可减少或逆转Cx43的降解.     

转染Cx43基因对人膀胱肿瘤细胞缝隙连接通讯及其生长变化的研究

目的:研究Cx43基因对膀胱癌细胞的缝隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)及其增殖的抑制作用,探索以Cx43基因治疗膀胱癌的可行性。方法:将含Cx43c DNA的质粒以脂质体介导转染Cx43表达缺失的BIU-87人膀胱癌细胞,通过原位杂交、RT-PCR和免疫组化染色检测Cx43m RNA及蛋白表达,划痕标记荧光染料示踪技术(SLDT)检测GJIC,MTT法测定细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:转染后BIU-87细胞有不同程度的Cx43 m RNA和蛋白表达及GJIC恢复。Cx43高表达的克隆细胞增殖明显下降,细胞凋亡并未增加。结论:Cx43基因及GJIC在膀胱癌的发生、发展过程中起重要作用,可能成为膀胱癌基因治疗的优选靶点之一。     

缝隙连接蛋白43在癫痫持续状态过程中的表达变化

[目的]观察缝隙连接蛋白43(Cx43)在大鼠癫痫持续状态过程中的表达变化及Cx43阻断剂对大鼠痫性发作的作用.[方法]健康雄性大鼠18只随机分为三组,每只6只,分别为Cx43组、Cx43阻断组(干预组)、空白对照组.观察各组大鼠行为学、脑电图(EEG)变化并应用免疫组化方法检测海马Cx43的表达.[结果]致痫后Cx43组大鼠出现典型癫痫持续状态,持续4~6 h,EEG上记录到癫痫波,注药后4 h注药侧海马Cx43表达显著增加(P<0.05);干预组EEG放电次数较Cx43组显著减少(P<0.05);注药后4 h注药侧海马Cx43表达明显低于Cx43组(P<0.05).[结论]缝隙连接蛋白Cx43参与癫痫持续状态过程,Cx43阻断剂可能通过影响神经胶质细胞缝隙连接的形成进而影响癫痫的发生、发展过程.     

缝隙连接蛋白43在人食管胃连接部的表达及意义

目的 探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在人食管胃连接部的表达水平及临床意义.方法 选取高位食管中段癌患者8例,在行根治性食管癌切除食管胃吻合术时切除食管胃连接部,分离出食管下括约肌的套索纤维和钩状纤维,以及部分下段食管环行肌和胃底环行肌,应用Western blot法检测Cx43在各环行平滑肌中的表达水平.结果 下段食管环行肌和胃底环行肌之间Cx43的表达水平没有差异(153.77±13.54与139.34±16.54,P>0.05),套索纤维和钩状纤维平滑肌细胞之间Cx43表达量也没有差异(259.01±16.70与303.32±22.02,P>0.05);但套索纤维和钩状纤维平滑肌细胞Cx43的表达水平高于下段食管和胃底环行肌的表达水平(P<0.05).结论 人食管下括约肌的套索纤维、钩状纤维以及下段食管和胃底环行肌中Cx43的表达水平不同.     

Cx43 蛋白在丰富环境改善脑外伤大鼠学习记忆能力中的作用

目的观察Cx43 蛋白在丰富环境改善脑外伤(TBI)大鼠学习记忆能力中的作用。方法选用成年Sprague-Dawley 大鼠,采用液压颅脑损伤仪制作TBI 模型,将模型大鼠分为丰富环境刺激组(A 组)、常规饲养组(B 组)、Cx43 特异性反义寡聚核苷酸(Cx43-ASODN)+丰富环境刺激组(C 组)和乱序ODN(scrambled sequence ODN)+丰富环境刺激组(D组),每组6 只。另设6 只正常大鼠作为对照组。C组和D组分别在海马区注射Cx43-ASODN(2 μl/d/rat, 1.5 mmol/L)和ScrbASODN(2 μl/d/rat, 1.5 mmol/L)。饲养14 d,采用水迷宫测试评估大鼠的学习记忆能力。结果B组大鼠潜伏期大于对照组(P<0.05),穿越次数少于对照组(P<0.05)。A组潜伏期小于B组(P<0.05),且从第9 天起与对照组比较无显著性差异(P>0.05);穿越平台次数多于B组,与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。C组大鼠的潜伏期大于A组(P<0.05),穿越平台次数少于A组(P<0.05)。结论Cx43 蛋白参与丰富环境改善TBI 大鼠学习记忆能力的调控。     

大鼠脑内囊出血后脊髓缝隙连接蛋白Cx32和运动诱发电位的变化及意义

目的　观察大鼠脑内囊出血后皮层运动传导束功能改变以及脊髓灰质中细胞缝隙连接的改变及可能意义。方法　制备大鼠右侧内囊出血模型 ,应用电生理学方法检测运动诱发电位 ,同时采用免疫组织化学方法观察脊髓组织中缝隙连接蛋白Cx32的表达变化。结果　动物内囊出血后经右侧皮层刺激的MEP波幅较左侧显著降低 (P <0 .0 1 ) ,且经右侧皮层刺激的MEP潜伏时显著延长 (P <0 .0 1 )。脑出血后 1和 2周 ,脊髓左侧灰质中Cx32表达明显增加 ,而脊髓前角几乎没有表达 ;相反右侧脊髓灰质中未能观察到其表达。结论　大鼠脑内囊出血后引起皮层运动传导通路的电生理改变 ,而该出血侧通路所支配的对侧脊髓灰质中细胞表达Cx32明显增加 ,这可能是皮质脊髓束损害后脊髓γ环功能亢进的原因     

室性心动过速时连接蛋白43含量与分布的变化

目的　探讨室性心动过速 (室速 )时心肌细胞连接蛋白 4 3(Cx 4 3)含量和分布的变化。方法　实验用日本大耳白兔 2 0只 ,随机分为对照组、30min室速组、6 0min室速组、12 0min室速组 4组。分别通过心室刺激复制室性心动过速动物模型 ,应用激光共聚焦显微镜技术和荧光免疫组织化学方法对其发生心律失常心肌连接蛋白 4 3的含量和分布进行定量分析。结果　 30min室速组连接蛋白 4 3像素密度较对照组减少 18.4 % (P <0 .0 5 ) ,6 0min室速组减少 38.0 % (P <0 .0 1) ,12 0min室速组减少 5 4 .8% (P <0 .0 1)。对照组各层间心肌细胞连接蛋白 4 3含量比较无显著差异 ,但心律失常后 ,中间层心肌细胞连接蛋白 4 3含量较其他层心肌细胞含量下降更明显 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论　室性心动过速时连接蛋白 4 3迅速降解 ,其分布也发生明显的改变 ,各层心肌细胞连接蛋白 4 3的降解程度也明显不均一。     

连接蛋白43在颞叶局灶性脑皮层发育不良中的表达

目的探讨连接蛋白43(Cx43)在局灶性脑皮层发育不良(focal cortical dysplasia,FCD)致痫机制中的作用。方法选择手术治疗的颞叶FCD 43例作为观察组,同期正常人脑标本10例作为对照组,采用免疫组织化学方法比较两组Cx43表达情况。结果免疫组织化学检测结果显示观察组平均每个视野Cx43免疫反应阳性细胞为(19.5±3.3)个,对照组平均每个视野Cx43免疫反应阳性细胞为(7.6±3.7)个,观察组明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);单纯型FCD患者平均每个视野Cx43免疫反应阳性细胞为(14.5±4.3)个,结合型FCD患者平均每个视野Cx43免疫反应阳性细胞为(22.6±3.8)个,结合型FCD患者Cx43表达较单纯型FCD患者明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 Cx43参与FCD致痫机制,结合型FCD和单纯型FCD致痫机制可能存在差异。     

癫痫发病机制及治疗的研究进展

癫痫是一种常见的神经系统疾病。其发病原因繁杂,治疗方式从传统药物治疗逐渐拓展到手术治疗、基因疗法、细胞移植、神经刺激等多种治疗方式,但仍未找到特别理想的治疗方案。为进一步加深对癫痫的认识,促进新的抗癫痫治疗方式的发展,现就癫痫的病因、发病机制及治疗进行综述。     

美托洛尔对心力衰竭大鼠连接蛋白43表达及分布模式影响的研究

目的 观察不同剂量美托洛尔(Meto)对心力衰竭大鼠心肌连接蛋白43 (Cx43)表达及分布的影响,探讨其心脏保护机制.方法 SD大鼠100只随机(随机数字法)分为5组,每组20只:(1)假手术组(sham组);(2)心力衰竭模型组(HF组);(3) Meto治疗小剂量组[Meto A组,1.25mg/(k·d)];(4) Meto治疗中剂量组[Meto B组,5 mg/ (kg· d)]; (5)Meto治疗大剂量组[Meto C,20mg/ (kg·d)].缩窄大鼠腹主动脉建立心衰模型,术后第4周开始给药至第8周,术后第8周取材免疫组化观察大鼠心肌Cx43表达量及分布模式,Western blot检测心肌总Cx43 (T-Cx43)、磷酸化Cx43 (P-Cx43)表达水平.结果 (1) HF组大鼠与Sham组比较,心脏T-Cx43分布紊乱明显,Cx43mRNA表达及P-Cx43、T-Cx43蛋白表达显著增加;MetoC组虽较Meto A、MetoB组进一步显著改善HF大鼠心脏T-Cx43分布紊乱情况,但显著抑制HF大鼠心脏T-Cx43表达(P＜0.01);Meto A、MetoB组未显著抑制HF大鼠心脏T-Cx43蛋白的表达.(2)HF组大鼠中P-Cx43表达量显著高于sham组(P＜0.叭),随Meto治疗剂量的逐级增加各治疗组P-Cx43表达量较HF组逐级降低(MetoAvs.HF,P＜0.05;MetoBvs.HF,P＜0.01;MetoCvs.HF,P＜0.01),且Meto治疗组各组间比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 Meto可通过抑制心肌Cx43磷酸化及改善其分布紊乱而发挥心脏保护作用.     

食管鳞癌间隙连接蛋白Cx32和Cx43的检测及意义

摘要：目的：检测间隙连接蛋白（connexin,Cx）32和43在食管鳞癌的表达,探讨其在食管鳞癌发生、发展中的作用及临床意义。 方法：用免疫组织化学技术（Elivision法）检测78例食管鳞癌组织和22例癌旁食管鳞状上皮组织中Cx32和Cx43的表达情况。 结果：癌旁食管鳞状上皮中Cx32和Cx43主要表达于细胞膜,阳性表达率均显著高于癌组织。Cx32和Cx43在食管鳞癌细胞膜表达与组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均有一定相关性,而与性别、年龄和病变部位无关。 结论：Cx32和Cx43的表达随着食管鳞癌病理分级的增高而降低,其异常表达可能是食管鳞癌发生、发展的重要因素之一。     

The heme oxygenase inducer hemin protects against cardiac dysfunction and ventricular fibrillation in ischaemic/reperfused rat hearts: role of connexin 43

Cardiac expression of cytoprotective gene heme oxygenase‐1 (HO‐1) is modulated by ischaemia and reperfusion (I/R). We therefore hypothesized that pretreatment with hemin, an inductor of HO‐1, would precondition the heart against post‐ischaemic dysfunction and ventricular fibrillation (VF). Male Wistar rats were given either hemin or HO enzyme inhibitor zinc protoporphyrin IX (ZnPP IX). Isolated hearts were subjected to 30?min global ischaemia followed by 120?min of reperfusion or were aerobically perfused in a time‐matched non‐ischaemic protocol. Control animals received no pretreatment. Compared to non‐perfused controls, pretreatment with hemin increased HO‐1 mRNA 13‐fold (p<0.001) and HO‐1 protein 3.5‐fold (p?0.001), improved post‐ischaemic aortic flow, coronary flow, LVDP and ?Dp/dt (p<0.01) and decreased LVEDP (p<0.001) and the incidence of VF (p = 0.001). The improved post‐ischaemic cardiac function and reduction of VF were accompanied by a higher total connexin 43 (Cx43) level compared to non‐pretreated and ZnPP IX pretreated hearts, and accumulation of non‐phosphorylated gap junction protein Cx43 in intercalated discs and lateral plasma membrane of cardiomyocytes. Cardioprotection by HO‐1 appeared to be independent of cGMP. Administration of ZnPP IX had no effect on cardiac function or VF. Our results show that pharmacological modulation of HO‐1 pathway may provide a new therapeutic approach to protect the heart against post‐ischaemic dysfunction and I/R‐induced VF possibly by a Cx43 dependent mechanism.     

脑磁图在癫(癎)诊断和治疗中的应用

目的应用脑磁图(MEG)技术对致灶进行定位,比较其与头皮脑电图(EEG)在神经影像学方法的应用价值,探讨MEG技术对癫灶定位的应用前景。方法对113例癫患者进行手术治疗,术前均通过临床症候学、头皮EEG、MRI、MEG检查,进行MEG与其他检查方法和临床症候学在定侧、定叶诊断的对比研究。手术在皮层EEG及脑深部EEG监测下进行,手术治疗结果以Engel疗效分级评价。所有手术标本常规行光镜检查。结果113例患者中MEG定位局限于单个叶的为91例,头皮EEG仅为30例。术前致灶定位依据多种检查结果和临床症候学综合定位。MEG与MRI、临床症候学在定侧诊断准确性方面比较差异有显著性。MEG与MRI在定叶诊断准确性方面的比较差异有显著性。36例术前头皮EEG表现为双侧或全导癫波的癫患者,其中有34例MEG表现为单侧癫波,具有定侧诊断的意义。结论头皮EEG、MRI、正电子发射计算机断层扫描(PET)、临床症候学均不足以做出独立精确的致灶定位诊断,综合比较MEG比上述方法定侧和定叶的准确性高。MEG空间分辨率、时间分辨率高,有助于区分致灶和镜灶。