乌头类中药对CHL细胞的DNA损伤作用

[目的]观察乌头类中药盐附子和乌头碱对CHL细胞(中国仓鼠肺成纤维细胞)的DNA损伤作用。[方法]采用单细胞凝胶电泳法检测盐附子、乌头碱对CHL细胞DNA即刻损伤的影响。在加和不加S9时,盐附子均设5个剂量组(终浓度分别为5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药∕ml)、乌头碱设4个剂量组(终浓度分别为100、50、25、5μg/ml),试验同时设PBS阴性对照组和阳性对照组,阳性对照在不加S9时为0.1 mmol/ml重铬酸钾,加S9时为80μg/ml环磷酰胺。[结果]在加和不加S9时,盐附子各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照比较差异无统计学意义(P﹥0.05),乌头碱100μg/ml和50μg/ml组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照之间差异有统计学意义(P﹤0.05),乌头碱各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长存在剂量反应关系。[结论]在本试验条件下,加与不加S9时,乌头碱浓度为100μg/ml和50μg/ml时对CHL细胞有DNA损伤作用;盐附子5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml时未观察到对CHL细胞有DNA损伤作用。     

常用炮制对滇产草乌3种乌头碱减毒情况分析

目的 利用几种常规的炮制方法分析草乌中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的减毒情况。方法 将大小形状不同的草乌样品分别经过水煮法、蒸法及烘烤法进行不同时长炮制,采用超高效液相色谱串联质谱进行含量测定分析,外标法定量。结果 3种乌头碱在0.20～100.0μg/L浓度范围内均具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9997。草乌不同形状减毒效果为粉末＞片状＞完整个头,不同炮制方法减毒效果为水煮＞蒸＞烘烤,烘烤炮制对草乌样品未有良好减毒效果。浓度为1.0μg/mL的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱标准品分别经过0.5h、1.5h和1.5h水煮炮制可达到100%完全降解,但其他炮制样品的减毒效果根据不同的炮制方法显现出较大差异性。结论 3种乌头碱经过足够时长的水煮及蒸法炮制均可达到显著的减毒效果,烘烤法对草乌减毒作用较小,民间食用草乌的安全性应引起高度重视。     

薄层色谱扫描法快速检测乌头碱中毒

目的:建立乌头碱中毒的薄层色谱快速检验方法.方法:样品加乙醚,(NH4)2SO4后调pH到10,分出有机层加盐酸,弃去乙醚层,水层加二氯甲烷和氨水提取,挥干后20μ1乙醇定容,lOμl点于HPGF254板上,环己烷:乙酸乙酯:二乙胺(8:1:1)饱和上行展开5～7 cm,薄层色谱扫描定性和定量检测.结果:乌头碱线性范围为1～32μg/ml,新乌头碱与次乌头碱均为4～28μg/ml,最小检出浓度0.1μg/ml.结论:本法快速、简便,定性定量准确,可用于乌头碱中毒的快速诊断和乌头碱中毒致死的法医学鉴定.     

一起误饮乌头碱药酒引起的中毒事件调查

目的调查一起误服外用药酒引起的中毒事件的原因,为提出有针对性的防控措施提供参考。方法收集病例临床资料、现场流行病学调查资料等。采集剩余食物样本和病例胃内容物、呕吐物、血液样本共12份进行实验室检测。结果共4人发生中毒,其中1人死亡。死者胃内容物检出较高浓度乌头碱(64 000μg/kg);其余3人呕吐物中均检出乌头碱(含量为10～27μg/kg),血液中均检出乌头碱(含量为0.7～1.3μg/L);2份残留食物中检出微量乌头碱(0.18～0.22μg/kg)。结论这是一起因误饮乌头碱药酒造成的中毒事件。为避免此类事件再次发生,应加强乌头类食品、药品安全知识的宣教及监管工作。     

高效液相色谱-质谱联用法同时测定全血中雪上一枝蒿中6种生物碱

  目的  采用高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS/MS）建立一种全血中同时测定雪上一枝蒿中6种生物碱（乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、滇乌头碱、雪上一枝蒿甲素及雪上一枝蒿乙素）的快速、灵敏的检测方法。
  方法  采用Waters C18色谱柱，以甲醇-甲酸（两者体积分数为0.1%）水溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.2 mL/min，乙腈蛋白沉淀法进行样品前处理，采用正离子-多反应离子监测模式对6种化合物进行测定。
  结果  乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、滇乌头碱、雪上一枝蒿甲素及雪上一枝蒿乙素在0.5~100 ng/mL范围内线性关系良好，最低定量限依次为0.50、0.26、0.56、0.03、0.30、0.20 ng/mL，3个浓度的平均加标回收率为98.9%~105.8%，平均提取回收率为82.1%~90.3%，日内和日间精密度均 < 7%。
  结论  此方法基质效应良好，准确度高，灵敏度高，前处理简单，可同时、方便、快速检测雪上一枝蒿中6种生物碱，完成低含量的人体中毒毒物检测。
     

HPLC快速测定草乌中毒患者尿液中的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱

目的建立HPLC快速测定乌头类生物碱中毒事件中毒患者尿液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的方法。方法收集乌头碱中毒患者48 h内尿液,经0.1 mol/L HCl酸化,Waters Oasis MCX固相萃取小柱净化,0.5%氨水的甲醇洗脱,氮气吹干,乙腈-10 mmol/L乙酸铵(50∶50,V/V)定容,经Agilent XDB C_8(4.6 mm×250 mm,5.0μm)分离,用紫外检测器,235 nm波长定性定量分析。结果乌头碱中毒患者尿液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的方法检出限为10μg/L,2个水平的平均回收率为76.0%~115.0%,6次平行测定变异系数(CV)为4.1%~8.2%。在草乌中毒患者的尿液中检出新乌头碱,含量为0.28 mg/L~1.60 mg/L,乌头碱和次乌头碱未检出。结论该方法测定乌头类生物碱中毒事件中毒患者尿样的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱方便、快速、准确、可靠、实用性强。     

吴茱萸中吴茱萸次碱的提取工艺及含量测定

目的:建立用高效液相色谱法(HPLC)测量中药吴茱萸中吴茱萸次碱含量的方法。方法:以甲醇为溶剂,进行不同提取方法对吴茱萸次碱提取试验,设计正交试验,考察浸泡时间、提取时间、溶剂用量为3因数,采用L9(34)正交试验表,HPLC法检测。色谱柱:Welchrom-C18(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈—水(67:33),流速:1.0 ml/min,柱温:22℃,检测波长:290 nm。结果:回流提取法提取效率较高,吴茱萸次碱的最佳提取条件为用100 ml甲醇浸泡30 min回流提取75 min。吴茱萸次碱的回归方程为Y=2×106X-9078.7,相关系数r=0.9999,其线性范围为0.1002～1.1952μg,平均回收率为100.21%,RSD1.47%。吴茱萸中吴茱萸次碱的含量为0.279%。结论:方法稳定、重现性好、操作简单、结果准确,是检测吴茱萸中吴茱萸次碱较理想的方法。     

食物中毒样品中的乌头碱的SPE—UFLC／MS／MS快速测定法

目的建立SPE．UFLC／MS／MS快速测定食物中毒事件中乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的方法。方法各种食物样品及呕吐物经0．1mol／LHCl提取,SPE固相萃取小柱净化,经AgilentSBC182．1mm×50mm,1．8μm分离,在正离子模式下用串联质谱仪定性定量分析。结果食物样品及呕吐物中乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的方法检出限为1—3μg／L,2个水平的加标回收率为79．8％～112．5％,相对标准偏差均小于9．4％。结论该方法测定各种食物样品及呕吐物中的乌头碱、次乌头碱、中乌头碱快速,准确,可靠,灵敏度高。     

乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞的毒性。[方法]对25～29日龄雌性SD大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG),无菌制备卵巢颗粒细胞悬液,采用透射电镜观察管嵴状线粒体进行细胞鉴定。试验设4个乌头碱浓度组(0、5×101、5×102、5×103、5×104μg·L-1)和1个溶剂对照组(二甲亚砜)。选用MTT法(四唑盐比色法)测定乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞活力的影响,用雌二醇和孕酮的放免分析药盒测定乌头碱对颗粒细胞激素分泌功能的影响,用丙二醛和超氧化物歧化酶试剂盒测定乌头碱对大鼠颗粒细胞的氧化损伤作用。[结果]与溶剂对照组相比,乌头碱作用24h后,高浓度和次高浓度组(5×103、5×104μg·L-1)可明显抑制大鼠颗粒细胞的增殖,差异有统计学意义(P﹤0.01);高剂量组(5×104μg·L-1)丙二醛含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]在本实验室条件下,乌头碱浓度高于5×103μg·L-1时,对雌性大鼠卵巢颗粒细胞有毒性作用,主要表现为抑制颗粒细胞的增殖及对细胞的氧化损伤作用。     

高效液相色谱-质谱联用同时测定尿液中4种生物碱

目的:建立快速、灵敏、准确的高效液相色谱-质谱联用法同时测定尿液中乌头碱、士的宁、马钱子碱和麻黄碱的分析方法。方法:样品经盐酸酸化后,用W aters Oasis MCX小柱净化、提取,在XB ridgeTMSh ield RP18柱(250 mm×3.0 mm×5μm)上进行分离,柱温30℃,通过电喷雾电离离子化在选择离子监测(SIM)模式下测定,定量分析离子乌头碱m/:z 646[M+H〗+;士的宁m/:z 335[M+H]+;马钱子碱m/:z 395[M+H]+;麻黄碱m/:z 166[M+H]+,外标法定量。结果:乌头碱、士的宁、马钱子碱在5.0~500.0 ng/m l、麻黄碱在10.0~1 000.0 ng/m l的浓度范围内线性关系良好,尿液中最低定量检出限乌头碱、士的宁、马钱子碱、麻黄碱分别为0.02、0.04、0.05和0.13 ng,方法回收率为86.6%~103.0%,RSD<5.69%。结论:该方法具有快速、简捷、准确、专属性强,适用于中毒病人的中毒诊断。     

枸杞子芦丁微波提取-高效液相含量测定法研究

目的建立一种微波提取-反相高效液相测定枸杞子芦丁含量的方法。方法色谱条件:Dikma Kromasil C18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),以甲醇-0.3%磷酸(37∶63)为流动相,采用等度洗脱的方式,流速为1ml.min-1,检测波长为257nm,柱温为25℃,进样量为5μl;用回流提取、超声提取、微波提取三种方法前处理样品,考察它们对枸杞芦丁含量测定的影响;对枸杞芦丁微波提取-反相高效液相色谱含量测定方法进行了方法学考察。结果芦丁的线性范围为0.004～0.11mg/ml(相关系数为0.9998),平均回收率(n=5)为101.48%,不同产地枸杞子样品中的芦丁含量存在着较大的差异,真伪枸杞子样品中的芦丁含量存在着极大的差异。结论该方法准确可靠,重现性好,适用于测定枸杞子中芦丁的含量,为枸杞子的质量标准研究提供了实验数据。     

不同碱化处理方法对黄芪中四种皂苷类成分含量影响的研究

目的:采用HPLC-ELSD法比较三种不同碱化方法对黄芪中四种皂苷类成分含量的影响,考察它们之间的转化关系。方法:Agilent 1100系列高效液相色谱仪;美国Alltech 2000型蒸发光散射检测器;Allti-ma C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.3%甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.8 ml/min;柱温:25℃,蒸发光散射检测器,ELSD参数:漂移管温度110℃,氮气流速3.0 L/min;色谱图记录时间为80 min。结果:不同碱化处理方法对黄芪中四种皂苷类成分含量有影响。结论:直接对药材进行碱化,黄芪皂苷之间的转化更彻底。可作为黄芪中的皂苷类成分的含量测定及其制剂的质量控制标准基础。     

高效液相色谱法测定母乳多不饱和脂肪酸

目的建立测定母乳中四种主要多不饱和脂肪酸(PUFA)的高效液相色谱法(HPLC)。方法用(甲醇:正己烷:1mol/L磷酸=15:25:3)提取,ω-溴代苯乙酮衍生化,流动相为(乙腈:水=81:19,v/v),流速1.0 ml/min,柱温35℃,分析柱依利特Hypersil BDS C18(4.6mm×150mm,5μm),紫外检测波长为252 nm。结果α-亚麻酸(18:3n-3,α-LNA)、二十二碳六烯酸(22:6n-3,DHA)、花生四烯酸(20:4n-6,AA)和亚油酸(18:2n-6,LA)可以完全分离,峰形良好。平均回收率均在(98±5)%以内,提取回收率均≥75%。各PUFA质控母乳的日内RSD≤4.6%,日间RSD≤5.9%。结论本方法稳定、可靠,适用于母乳中PUFA浓度测定。     

高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸的方法研究

目的建立一种果汁、酱菜、腐乳等食品中脱氢乙酸防腐剂的高效液相色谱法。方法采用C18(5μm,250×4.60mm)色谱柱,流动相为甲醇-0.02mol/L乙酸铵(体积比为5∶95),流速1.00ml/min;紫外检测波长306nm;柱温25℃;进样量10μl;外标法定量。结果方法所采用的标准曲线有良好的线性关系(r=0.9997),方法的检出限为0.05mg/kg,加标回收率为96.5%~99.5%,对不同的样品基质相对标准偏差为1.09%~5.85%。结论该方法操作简便、准确,回收率高,精密度良好,重现性好,可用于果汁、酱菜、腐乳和月饼等食品中脱氢乙酸的测定。     

不同产地泽泻有效成分的含量测定

目的考察全国不同产地泽泻有效成分的含量,为泽泻的质量标准提供一定的依据。方法采用HPLC测定不同产地泽泻中24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B的含量,实验以SymmetryC18（200mm×4.6mm5μm）为色谱柱;流动相：乙腈-0.1%磷酸（65∶35）;流速：1.0ml/min;柱温：25℃;检验波长：208nm。结果 24-乙酰泽泻醇A在0.202μg～4.04μg的线性关系良好;平均回收率为97.8%,RSD为2.71%;23-乙酰泽泻醇B在0.406μg～8.120μg的线性关系良好;平均回收率为98.3%,RSD为3.11%。结论不同产地的泽泻中24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B含量差异较大。     

中国常见植物性食品中嘌呤的含量

目的应用HPLC测定中国常见植物性食品中嘌呤的含量。方法采用Waters Atlantis T3柱(4.6mm×250mm×5μm),以10.0mmol/L甲酸铵(pH3.6)-甲醇(99∶1,V/V)为流动相,流速:1.0ml/min,柱温:30℃,检测波长:254nm。结果不同种类植物性食品中嘌呤含量有明显差别。干菌类和干豆类及制品中嘌呤含量普遍高于其他食品,蔬菜类及制品和水果类及制品中嘌呤含量普遍较低。总体上呈现出干菌藻类>干豆类及制品>鲜菌藻类>坚果、种子类>谷类及制品>蔬菜类及制品>薯类、淀粉及制品>水果类及制品。结论植物性食品中干菌藻类和干豆类及制品中嘌呤含量较高,其他种类食品嘌呤含量较低,不同种类植物性食品中嘌呤含量差异较大。     

葡萄酒中生物胺多组分的UVD/FLD串联HPLC方法研究

目的建立葡萄酒中多组分生物胺的柱前衍生反相高效液相色谱-荧光/紫外串联检测器的测定方法。方法以正丁醇/氯仿(1∶1)为萃取液提取葡萄酒中生物胺,丹磺酰氯为衍生剂,1,7-二氨基庚烷为定量内标,采用C18色谱柱分离,甲醇/水为流动相梯度洗脱,流速1.5ml/min,紫外检测波长254nm,荧光激发波长(Ex)350nm,发射波长(Em)520nm。结果色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺在30分钟内得到良好分离。在给定的浓度范围内,各组分生物胺呈现良好线性相关(r>0.99)。在葡萄酒中添加生物胺混合标准溶液,平均回收率为79.2%~127.9%,相对标准偏差RSD小于10%。结论采用荧光/紫外检测器串联方法检测,满足了葡萄酒中多组分生物胺检测的需要。     

Biological monitoring of occupational exposure to sevoflurane

Sevoflurane has been used in the last few years in brief surgical operations, either alone or in combination with nitrous oxide. Occupationally exposed groups include anesthesiologists, surgeons and operating room nurses. In 1977 the National Institute for Occupational Safety and Health (NIOSH) recommended that occupational exposure to halogenated anesthetic agents (halothane, enflurane, and isoflurane), when used as the sole anesthetic, should be controlled so that no worker would be exposed to time-weighted average concentrations greater than 2 ppm during anesthetic administration. When halogenated anesthetics are associated with nitrous oxide, NIOSH recommends that the limit value should not exceed 0.5 ppm. We think these recommendations can be extended to sevoflurane. Metabolism of sevoflurane is catalyzed by cytochrome P-450; this involves oxidation of the fluoromethyl side chain of the molecule, followed by glucuronidation. Two urinary metabolites of sevoflurane have been identified: inorganic fluoride (which, however, is not specific) and a non-volatile compound that yields hexafluoroisopropanol (HFIP) when digested with the enzyme beta-glucuronidase. In order to investigate the role of urinary HFIP as an indicator of occupational exposure to sevoflurane (CI, ppm), CI was measured in 145 members of 18 operating room staffs. The measurements of the time-weighted average of CI in the breathing zone were made by means of diffusive personal samplers. Each sampler was exposed during the whole working period. Sevoflurane was desorbed with CS2 from charcoal and the concentrations were measured on a gas chromatograph (GC) equipped with a mass selective detector (MSD). The GC was equipped with a 25 meter cross-linked phenylmethylsilicon column (internal diameter 0.2 mm). GC conditions were as follows: injector column temperature = 200 degrees C; column temperature = 30 degrees C; carrier gas = helium; injection technique of samples = splitless. The analytical conditions for the MSD were the following: ion mass monitored = 131 m/e; dwell time = 50 msec; selected ion monitoring window time = 0.1 amu; electromultiplier = 400 V. Urine samples were collected near the end of the shift and were analyzed for HFIP by head-space gas chromatography after glucuronide hydrolysis. 0.5 ml of urine and 1.5 ml of 10 M sulfuric acid were added to 21.8 ml headspace vials. The vials were immediately capped, vortexed, and loaded into the headspace autosampler. Samples were maintained at 100 degrees C for 30 min, after which glucuronide hydrolysis was 99% complete. Analyses were performed on a GC equipped with a MSD. The analytical conditions for urine analysis were as follows: cross-linked 5% phenylmethylsilicon column (internal diameter 0.2 mm, length 25 m); column temperature = 35 degrees C; carrier gas = helium. The analytical conditions for the MSD were: monitored ions = 51.05 and 99; dwell time = 100 ms; selected ion monitoring window time = 0.1 amu; electromultiplier voltage = 2000 Volt. With our analytical procedure, the detection limit of HFIP in urine was 20 micrograms/L. The variation coefficient (CV) for HFIP measurement in urine was 8.7% (on 10 determinations; mean value = 1000 micrograms/L). The median value of CI was 0.77 ppm (Geometric Standard Deviation = 4.08; range = 0.05-27.9 ppm). The correlation between CI and HFIP (Cu, microgram/L) was: Log Cu (microgram/L) = 0.813 x Log CI (ppm) + 2.517 (r = 0.79, n = 145, p < 0.0001). On the basis of the equation it was possible to establish tentatively the biological limit values corresponding to the respective occupational exposure limit values proposed for sevoflurane. According to our experimental results, HFIP values of 488 micrograms/L and 160 micrograms/L correspond to airborne sevoflurane concentrations of 2 and 0.5 ppm respectively.     

化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱测定

目的建立化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱检测方法,用于监测化妆品中维生素D2、维生素D3的使用情况.方法通过考察不同型号液相色谱柱、不同类型流动相及配比,确定了最佳色谱条件,并进行了线性范围、检出限、精密度、准确度试验.结果在Alltima C18(250mm×4.6mm I.D.,5μμm)色谱柱;流动相为甲醇乙腈=9010;流速为1.0 ml/min;检测波长为265nm;柱温为25℃时,维生素D2、维生素D3在0.5～100mg/L浓度范围内具有良好的线性关系,检出限分别为0.12mg/L和0.06mg/L;不同浓度维生素D2、维生素D3的变异系数分别小于3.8%和3.5%;加标量为20μg/g时,维生素D2、维生素D3的加标回收率分别在94.2%～101.4%和91.6%～97.2%之间.结论该方法具有操作简便、准确、快速等特点,适于同时测定化妆品中的维生素d2、维生素D3.