YAC-1细胞冻存方法的研究

目的研究YAC-1细胞保种的冻存方法。方法用3种不同的冻存方法对YAC-1细胞进行冷冻保存,在冻存1年内不同时间段对细胞存活率及复苏24小时后细胞的生长状况进行比较。结果用不同的冻存方法冻存YAC-1细胞,不同时间段复苏后细胞存活率不同,3种方法无显著性差异,生长状况均良好,为实验室选择适合的冻存方法提供了依据。     

人类胚胎冻存技术的初步研究

研究了不同冷冻与复芳方法以及不同移植周期法对人类胚胎冻存结果的影响。共复１４９个胚胎,８９个（５９．７％）得以存活。在２０个移植周期中,５例（２５．０％）获得临床妊娠,２例已经分健康的婴儿。结果表明,采用缓慢降温至－１２０℃再浸入液氮中冷冻及快速升温、逐步置换冷冻保护剂的方法复苏胚胎的存活率（７２．７％）较高,但不同移植周期对冻胚移植的临床妊娠情况影响不大。     

不同冻存条件下HepG_2细胞存活率的比较

目的探讨不同冻存条件下对HepG_2细胞存活率的影响,以提高复苏细胞的存活率。方法取对数生长期HepG_2细胞,分别配制传统冻存液A、改良冻存液B,采用方法1(人工梯度降温法)和方法2(程序降温盒法)两种冻存方法进行冻存,在冻存1个月、6个月、12个月后分别对细胞进行复苏,检测细胞的存活率并观察复苏细胞的生长状态。结果冻存1个月后复苏,冻存液A、B两组细胞的存活率差异无统计学意义(P>0.05),冻存6个月、12个月后复苏,冻存液A组细胞存活率显著低于B组(P<0.01);B组细胞复苏的生长状态及增殖速度都明显优于A组,两组细胞的数量差异有统计学意义(P<0.05);以方法1、2冻存的细胞,在冻存1个月、6个月、12个月后复苏细胞,方法2细胞的存活率均显著高于方法1(P<0.01)。结论采用含高浓度血清的冻存液及缓慢降温有利于提高细胞复苏的存活率。     

人类胚胎冻存技术的初步研究

研究了不同冷冻与复苏方法以及不同移植周期法对人类胚胎冻存结果的影响。共复苏了１４９ 个胚胎,８９ 个（５９．７％ ）得以存活。在２０ 个移植周期中,５ 例（２５．０％ ）获得临床妊娠,２ 例已经分娩健康的婴儿。结果表明,采用缓慢降温至－ １２０℃再浸入液氮中冷冻及快速升温、逐步置换冷冻保护剂的方法复苏,胚胎的存活率（７２．７％ ）较高,但不同移植周期对冻胚移植的临床妊娠情况影响不大     

人骨髓基质细胞冻存技术的初步研究

目的　探索适合于人骨髓基质细胞 - 196℃冷冻保存条件和方法。方法　以人髂骨区骨髓为材料进行体外人骨髓基质细胞培养 ,传代后以不同浓度二甲亚砜 (DMSO)的冻存液及不同的细胞浓度在液氮中保存 ,2个月后复苏接种培养 ,对其存活率、贴壁率和体外成骨能力进行检测。结果　不同DMSO浓度保存细胞复苏后细胞的存活率从高到低依次为 10 %DMSO组、5 %DMSO组、15 %DMSO组、2 0 %DMSO组 ;在条件培养液中 2周形成多层结构 ,并出现细胞结节 ,碱性磷酸酶染色阳性 ;冻存时细胞浓度为每毫升 (5 .0～ 8.0 )× 10 6个细胞组复苏后细胞存活率高于每毫升 (1.0～2 .5 )× 10 6个细胞组。结论　 5 % - 10 %DMSO浓度适合于骨髓基质细胞的长期保存 ,高浓度组骨髓基质细胞的冻存效果优于低浓度组。     

造血干细胞冻存时间与细胞活性关系的初步探讨

目的 探讨造血干细胞冷冻保存时间与细胞活性之间的关系。方法 造血干细胞中加入细胞冷冻保护剂,通过程控冷冻,放入液氮保存。根据保存的时间不同,复苏后测定细胞活力的变化。结果 细胞液氮保存复苏后,绝大部分的细胞活力得以保存。结论 造血干细胞贮存在液氮中,深低温阻断了酶的活性和细胞代谢,贮存时间长短与细胞活性无关。     

杂交瘤细胞冻存方法实验研究

杂交瘤细胞用三种不同程序冻存后取细胞复苏,观察细胞活力及分泌 McAb能力。实验结果表明,杂交瘤细胞在液氮中至少可保存2年,且冻存前不必进行梯度降温;细胞于-80℃环境下,保存4个月是安全的。这在实际工作中很有意义,因为在不增加液氮设备情况下,可对更多细胞进行冻存,既节省了时间,又有可能对更多初筛阳性克隆进一步进行鉴定。     

造血干细胞冻存时间与细胞活性关系的初步探讨

目的　探讨造血干细胞冷冻保存时间与细胞活性之间的关系。方法　造血干细胞中加入细胞冷冻保护剂 ,通过程控冷冻 ,放入液氮保存。根据保存的时间不同 ,复苏后测定细胞活力的变化。结果　细胞液氮保存复苏后 ,绝大部分的细胞活力得以保存。结论　造血干细胞贮存在液氮中 ,深低温阻断了酶的活性和细胞代谢 ,贮存时间长短与细胞活性无关。     

甲状腺细胞的简易冷冻保存方法

以含４０％小牛血清、８％二甲亚砜的Ｅａｇｌｅ培养液作为冻存液，采用温度梯度冷冻法保存人正常或Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）甲状腺细胞，结果显示，冷冻保存３、６或１２个月的甲状腺细胞成活率均大于８５％，各冻存时相的细胞对ＴＳＨ刺激生成ｃＡＭＰ的反应性无明显差异，并与非冷冻甲状腺细胞的反应强度相似。提示冻存一年内的甲状腺细胞仍保持良好的活力与功能，可以作为体外，研究甲状腺生理功能和病理变化的材料。     

深低温保存角膜缘干细胞活性实验研究

目的：评价深低温冷冻保存兔眼角膜缘干细胞活性。方法：１２只（１２眼）新西兰白兔，制备２ｍｍ周边角膜和２ｍｍ球结膜的环形浅层角膜缘植片及解膜干细胞缺乏眼表疾病模型。角膜缘植片通过程序温仪程序降温后－１９６℃深低温保存，３０天和６０天后行角膜缘自体移植。组化及免疫组化证实深低温保存的角膜缘干细胞活性。结果：角膜干细胞缺乏导致角膜上皮愈合延迟，上皮结膜化，ＰＡＳ染色阳性，ＡＥ５染色弱阳性；基质水肿，角膜     

玻璃化冷冻法保存人类胚胎干细胞

[目的]探讨玻璃化冷冻方法保存人类胚胎干细胞的效率.[方法]冷冻保存人类胚胎干细胞,按冷冻方法的不同分为玻璃化冷冻组和慢速冷冻组,比较两组解冻后人类胚胎干细胞的细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并比较分析解冻后的与未经冷冻的胚胎干细胞的生长、分化情况,鉴定解冻后人类胚胎干细胞的全能性.[结果]玻璃化冷冻组与慢速冷冻组解冻后的细胞复苏率分别为81.9%和22.8%(P＜0.001).慢速冷冻组解冻后克隆生长较玻璃化冷冻组缓慢且更易分化.两组未分化的胚胎干细胞继续培养的生长与分化情况一致.玻璃化冷冻组解冻后第6代人类胚胎干细胞染色体核型正常,SSEA-4、SSEA-3阳性,表达OCT-4基因.人类胚胎干细胞来源的畸胎瘤包含了来源于3个胚层的组织细胞.[结论]玻璃化冷冻是保存人类胚胎干细胞的有效方法,解冻后的干细胞在继续培养过程中仍可保持其正常核型和全能性.     

不同条件低温保存血小板的对照研究

目的探讨低温条件保存血小板的最佳方法。方法随机选取10人份血小板,在5%二甲基亚砜(DMSO)的条件下分别放入低温冰箱(-80℃)及液氮中冷冻保存。分别检测经两种方式保存2月后的血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、PH值、乳酸脱氢酶(LDH)浓度、磷脂酰丝氨酸(PS)阳性率及CD62p阳性率。结果两组低温保存复温后的血小板与新鲜血小板相比PH值无显著差异(P>0.05),PLT、MPV、PDW、LDH、PS阳性率及CD62p阳性率均有显著差异(P<0.05)。两组低温保存方式间各项指标比较均无显著差异(P>0.05)。结论液氮及低温冰箱保存均会在一定程度上损伤血小板,两种保存方式比较无明显区别。     

角膜深低温冷冻保存的实验研究

目的 :探讨复方氨基酸在角膜深低温保存中的应用价值。方法 :4 0对兔角膜随机配对分为对照组和实验组 ,对照组的冷冻保护液为 92 .5 % (V/V)人血白蛋白 (HSA)和 7.5 % (V/V)二甲基亚枫 (DMSO) ;实验组的保护液为92 .5 % (V/V)的复方氨基酸 (AA)和 7.5 % (V/V)二甲基亚枫 (DMSO)。按不同保存时间分别进行内皮细胞密度(ED)、内皮细胞存活率 (ESR)的计算及穿透性角膜移植。结果 :AA组角膜与HSA组角膜无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,在保存 1个月、3个月、6个月时 ,AA组角膜的ED和ESR分别是 ( 2 4 97± 2 2 9)个 /mm2 ,( 2 5 96± 2 0 2 )个 /mm2 ,( 2 5 4 3± 197)个 /mm2 及 ( 86.9± 2 .2 ) % ,( 88.4± 1.8) % ,( 85 .3± 2 .5 ) % ;HSA组角膜的ED和ESR分别是( 2 671± 2 0 9)个 /mm2 ,( 2 696± 2 12 )个 /mm2 ,( 2 662± 195 )个 /mm2 及 ( 89.6± 2 .4 ) % ,( 87.3± 1.9) % ,( 86.7±2 .1) % ;各行 10例穿透性移植后两组角膜的植片透明率都是 80 %。结论 :复方氨基酸可代替人血白蛋白应用于角膜的深低温保存     

小鼠精子冷冻的研究

目的：探索、建立一套小鼠精子冷冻方法。方法：通过CPS和RS318两种冷冻液对比试验；进行不同解冻法试验；对B6DF1、CD-1、DBA、C57BL／6四种品系小鼠精子分别进行快速冷冻和缓速冷冻，将解冻精子、鲜精与卵母细胞进行体外受精，并进行体外培养、胚胎移植，通过受精率和受孕率对冷冻方法进行筛选。结果：两种冷冻液试验、不同解冻法试验的受精率差异均无显著性。B6DF1、CD-1、C57BL-6品系小鼠快速冷冻精子解冻后与卵母细胞的体外受精率(35％、34％、17％)显著低于鲜精(60％、59％、34％)、缓速冷冻精子的受精率(62％、58％、30％)，此三种品系小鼠快速、缓速冷冻精子体外受精试验的受孕率均显著低于鲜精试验的受孕率。结论：缓速冷冻法是小鼠精子冷冻的适宜方法，干解冻法和稀释法处理冷冻液可简单有效地解冻精子。     

人胎大脑皮质细胞的冷冻保存

目的：筛选人胎大脑皮质细胞冷冻保存的适宜条件。方法：将胎龄４～６月人胎大脑皮质制成细胞悬液并分别保存于４℃和液氮中，分别于保存第１ｄ，５ｄ，１５ｄ和３０ｄ用台盼蓝染色法观察细胞存活率。结果：①胎龄４～６Ｍ人胎大脑皮质细胞在冷存后均可存活，以胎龄４Ｍ细胞存活率较高。②冷存１ｄ～５ｄ时，４℃保存的细胞存活率高于液氮保存的细胞存活率，但随着保存时间的延长细胞存活率显著下降。③冷存１～３０ｄ时，液氮保存的细胞存活率无明显变化，且在１５ｄ和３０ｄ时细胞存活率明显高于４℃保存者。结论：人胎大脑皮质细胞的保存条件以胎龄４Ｍ、４℃短期保存和慢速冷冻、快速复温的液氮长期保存为宜。     

人胚血管平滑肌细胞的体外培养、冻存与复苏

目的：介绍人胚动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）体外培养和保存方法。方法：从人工流产的胎儿主动脉分离动脉中膜组织。应用组织块培养方法进行人胚VSMCs培养,并行形态学观察及免疫组化鉴定;将第4代的人胚VSMCs冻存,2周,1、2、6个月后将细胞复苏,观察复苏后人胚VSMCs的生长情况。结果：培养的人胚VSMCs经鉴定为平滑肌细胞,培养的人胚VSMCs经冻存,复苏率超过80％。结论：人胚VSMCs体外培养、冻存及复苏成功,使人胚VSMCs培养体系更加完善,为心血管疾病药物的研究及组织工程化血管提供丰富的细胞来源。     

EFFECT OF HUMAN AMNIOTIC MEMBRANE ON CORNEAL EPITHELIUM AND YAC-1 CELL

Objective To study the effect of the amniotic membrane on enhancing the proliferation ofcorneal epithelia and YAC-1 cell. Methods After the primary culture of the rabbit's corneal epithelia and YAC-1 cells, they were seeded on the upper surface or stromal matrix side of amniotic membrane respectively. The proliferation results were observed by MTT test. Results The amniotic membrane was found significantly enhancing the proliferation of corneal epithelia on the d1 ,d3 , and d5 after culture. The proliferation rate was 28.93% ,23.32% ,23.41 % (P<0 .05) respectively, but the d7 proliferation rate was 20.72% (P> 0.05). On the dl , d3 , d7 after culture , the YAC-1 cells proliferation rate was 34 .87% ,36 .28% ,33 .86% (P< 0.01) respectively. Conclusion Our results demonstrated that the amniotic membrane could enhance the proliferation of both corneal epithelia and YAC-1 cells significantly. Although amniotic membrane has been suggested as an ideal material for reconstruction of ocular surface, special atte