Polypeptide from Chlamys farreri inhibits murine thymocytes apoptosis and modulates UVB induced signaling pathway activation

Polypeptide from Chlamys farreri （PCF） has been identified as a potent antioxidant and photoprotective agent. In this study, we investigated whether PCF could inhibit apoptosis of murine thymocytes induced by ultraviolet B （UVB） and modulate UVB induced the mitogen -activated protein kinases （MAPKs） cascade in vitro. Our results show that PCF inhibit UVB - induced apoptotic cell death in murine thymocytes. We also found that PCF potently stimulated the phosphorylation of ERKs, which is involved in the cell survival - signaling cascade. Furthermore, the specific inhibition of the ERKs pathways by PD98059 reduced the cytoprotective effect of PCF. On the other hand, the JNKs and p38 inhibitor SP600125 and SB203580 additively enhanced the cytoprotective effect of PCF.     

扇贝多肽对紫外线辐照小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用

建立体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞紫外线（UV）辐射损伤的病理模型，采用MTT法检测细胞活性；酶生化法测定胞浆超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）含量以及细胞抗超氧阴离子能力（A-SAC）和总抗氧化能力（T-AOC）；流式细胞仪Rhodamine 123荧光染色测定线粒体膜电位（△ψM）等方法，探扇讨贝多肽（PCF）对小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及机制。结果显示PCF能显著提高小鼠胸腺淋巴细胞的活性；抑制紫外线辐射所致淋巴细胞的损伤，显著提高细胞荣中SOD、GSH-Px的活性，降低ROS，MDA含量，提高A-SAC及T-AOC；稳定线拉体的膜电位；表明扇贝多肽对紫外线辐射损伤的小鼠胸腺淋巴细胞具有保护作用。其作用机制与PCF能清除氧自由基、提高抗氧化酶活性，保护细胞膜组织结构有关。     

扇贝多肽对UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用

目的：研究扇贝多肽(polypeptide ftom Chlamys，farreri)对中波紫外线(UVB)辐射损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用。方法：UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞，MTT法检测胸腺淋巴细胞的活性；酶生化法检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性；流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的产生量以及细胞凋亡率。结果：PCF能明显减轻UVB辐射对小鼠胸腺淋巴细胞的损伤；提高细胞GSH-Px、SOD和CAT活性；降低细胞中ROS的产生量和细胞凋亡率。结论：PCF对小鼠胸腺淋巴细胞具有明显的辐射保护作用。     

扇贝多肽对UVB损伤HaCaT细胞的抗氧化作用

目的研究扇贝多肽(PCF)对UVB损伤HaCaT细胞的抗氧化作用。方法HaCaT细胞与PCF孵育1h后，接受UVB辐射，继续孵育18h后，采用酶化学法测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)、过氧化氢酶(CAT)活性、以及测定其总抗氧化能力(T—AOC)、丙二醛(MDA)水平。结果PCF能提高HaCaT细胞内抗氧化酶SOD，GSH—Px，CAT活性，增强细胞总抗氧化能力并减少脂质过氧化产物MDA的产生。结论PCF能增加细胞内抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化反应，具有抗氧化作用。     

扇贝多肽对抗UVB辐照所致小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的研究

目的研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐照损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用。方法以UVB辐照制备损伤模型,预先给予PCF,应用透视电镜观察细胞超微结构的变化;免疫细胞化学检测细胞p53,Bcl-2,Bax基因蛋白的表达;原位杂交检测细胞P38mRNA的基因表达。结果UVB辐照引起小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,PCF能明显减轻UVB辐射损伤引起的细胞超微结构改变。PCF还能抑制突变型p53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表达,增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达以及抑制P38 mRNA基因的表达。结论PCF对UVB辐照的体外小鼠胸腺淋巴细胞具有明显的保护作用。     

扇贝多肽对紫外线B辐射人真皮成纤维细胞线粒体的保护作用

目的:研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐射人真皮成纤维细胞线粒体的影响。方法:检测丙二醛(MDA)含量以及细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-PX)的活性;流式细胞术测定线粒体膜电位;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:UVB(1.176×10~(-4)J·cm~(-2))导致真皮成纤维细胞线粒体损伤,PCF(0.25％-1％)剂量依赖性地减轻UVB对线粒体的损伤;而且,PCF也可剂量依赖性地维持线粒体膜电位的相对稳定,PCF能够减少MDA的生成量,提高SOD及GSH-PX的活性,PCF各组与UVB模型组相比差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:PCF保护成纤维细胞的线粒体免受UVB的损伤。     

扇贝多肽抗紫外线A对无毛小鼠皮肤的氧化损伤

目的:探究扇贝多肽(PCF)抗紫外线UVA对无毛小鼠皮肤氧化损伤的作用.方法:昆明种无毛小鼠,随机分为双蒸水未照射组和模型组(双蒸水照射组、5％PCF组、20％PCF组、10％维生素 C组).酶法测定皮肤匀浆抗氧化酶(GSH-Px、T-AOC、SOD)活性和MDA的含量;免疫组织化学法测定皮肤Bc1-2和NOS蛋白表达;电镜观察皮肤组织超微结构.结果:PCF能明显增加皮肤组织匀浆总抗氧化能力及GSH-Px、SOD活性,降低MDA含量.免疫组化结果表明,PCF能上调Bcl-2蛋白的表达;抑制NOS蛋白的表达.超微结构显示20％PCF组表皮细胞结构正常,成纤维细胞的细胞器结构正常;模型对照组表皮细胞损伤,胞质内可见空泡形成,真皮成纤维细胞内可见囊泡状扩张的滑面内质网,粗面内质网等细胞器减少,PCF组与模型对照组比较各项指标均有改善(P<0.05).结论:扇贝多肽具有抗紫外线UVA对无毛小鼠皮肤氧化损伤的作用.其机制与扇贝多肽上调BCl-2蛋白表达,下调NOS蛋白的表达,提高抗氧化酶含量,抑制脂质过氧化有关.     

扇贝多肽保护Hela细胞免受紫外线UVA氧化损伤

目的:建立紫外线UVA(辐照强度为3650μJ·cm~(-2)对Hela细胞氧化损伤模型.探究扇贝多肽(PCF)对Hela细胞紫外线UVA氧化损伤的保护作用.方法:MTT法测定细胞活性;酶法测定抗氧化酶(GSH-Px、CAT、SOD)活性;流式细胞仪AnnexinV法测定细胞的凋亡率和死亡率;Fluo-3 AM为荧光染料,流式细胞仪测定细胞内游离Ca~(2 )的含量.结果:PCF(0.5％-2％)能明显增加 Hela细胞的增殖活性和细胞内游离Ca~(2 )的浓度.显著提高Hela细胞GSH-Px、CAT、SOD活性,且呈量效关系.同时降低Hela细胞的凋亡率和死亡率.PCF组与模型对照组比较各项指标均有统计学意义(P< 0.0 5,P<0.01).结论:扇贝多肽具有抗紫外线UVA对Hela细胞氧化损伤的作用.其机制与扇贝多肽提高抗氧化酶含量,抑制脂质过氧化有关.     

Inhibitory effect of polypeptide from Chlamys farreri on ultraviolet A-induced oxidative damage on human skin fibroblasts in vitro.

We have previously reported that polypeptide from Chlamys farreri (PCF) inhibits the oxidative damage of ultraviolet A (UVA) on HeLa cells in vitro [Acta Pharm. Sin. 23 (2002) 961]. To further elucidate a possible role for PCF on UVA-damaged normal human cells, we established the oxidative damage models of normal human dermal fibroblasts (NHDF) exposed to UVA to study the protective effect of PCF on human dermal fibroblasts in vitro. In this study, 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) method was used to detect the cell viability. The intracellular superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-px), catalase (CAT), xanthine oxidase (XOD), malondialdehyde (MDA), reactive oxygen species (ROS), total antioxidative capacity (T-AOC), and anti-superoxide anion capacity (A-ASC) were measured. The effect of PCF on UVA-induced apoptosis were investigated by Annexin V-FITC assay. Intracellular calcium was determined with the calcium-sensitive fluorochrome Fluo-3, and mitochondrial transmembrane potential with rhodamine 123. Comet assay was employed to detect the UVA-induced DNA damage. The ultrastructure of cell was observed under transmission electron microscope. The results indicated that PCF could greatly enhance the viability of NHDF and markedly promote SOD, GSH-px, T-AOC, and A-ASC, while the amounts of MDA and ROS, the activity of XOD were decreased. PCF could inhibit UVA-induced apoptosis and DNA damage in NHDF. The concentration of cellular free calcium was decreased and the mitochondrial transmembrane potential was increased by PCF. In ultrastructure of NHDF, PCF could greatly decrease UVA-induced damage, especially membrane. Our results suggest that the supplementation of PCF appears to reduce the UVA-induced normal human dermal fibroblasts damage efficiently. It may be involved in the PCF's abilities of scavenging oxygen free radical, inhibiting lipid peroxidation, increasing antioxidative enzymes, decreasing intracellular calcium and protection of membrane structure in NHDF irradiated by UVA.     

扇贝多肽保护单次UVA氧化损伤HaUaT细胞

目的探讨扇贝多肽对单次长波紫外线辐射HaCaT角质形成细胞氧化损伤的保护作用机制。方法从栉孔扇贝中提取扇贝多肽(PCF,Mr=879)。UVA辐射强度为5J·cm-2。酶生化法测定胞质SOD,GSH-px活性,ROS、MDA水平;透射电镜观察细胞超微结构的改变;原位杂交技术检测细胞内p21mRNA的变化。结果在5J·cm-2UVA辐射下,在给定浓度范围内PCF能剂量依赖性降低胞质ROS、MDA水平;提高SOD,GSH-px活力;电镜下可见PCF可保护细胞超微结构;p21mRNA原位杂交发现PCF可明显抑制其表达。结论扇贝多肽对单次UVA诱导的人HaCaT细胞氧化损伤有保护作用。其机制与清除氧自由基、提高抗氧化酶活性、抑制p21mRNA表达及细胞凋亡有关。     

扇贝多肽保护单次UVA氧化损伤HaCaT细胞

目的探讨扇贝多肽对单次长波紫外线辐射HaCaT角质形成细胞氧化损伤的保护作用机制。方法从栉孔扇贝中提取扇贝多肽(PCF,Mr=879)。UVA辐射强度为5J·cm-2。酶生化法测定胞质SOD,GSH-px活性,ROS、MDA水平;透射电镜观察细胞超微结构的改变;原位杂交技术检测细胞内p21mRNA的变化。结果在5J·cm-2UVA辐射下,在给定浓度范围内PCF能剂量依赖性降低胞质ROS、MDA水平;提高SOD,GSH-px活力;电镜下可见PCF可保护细胞超微结构;p21mRNA原位杂交发现PCF可明显抑制其表达。结论扇贝多肽对单次UVA诱导的人HaCaT细胞氧化损伤有保护作用。其机制与清除氧自由基、提高抗氧化酶活性、抑制p21mRNA表达及细胞凋亡有关。     

Molecular mechanisms of polypeptide from Chlamys farreri protecting HaCaT cells from apoptosis induced by UVA plus UVB

Aim： To investigate the mechanism of polypeptide from Chlamysfarreri （PCF） protecting HaCaT cells from apoptosis induced by UVA plus UVB in vitro. Methods： An apoptotic model of UV irradiation-induced HaCaT cells was established. The 3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay, agarose gel electrophoresis, biochemical methods, and Western blotting were employed in the study. Results： PCF inhibited the UV irradiation-induced apoptosis of HaCaT cells. PCF strongly reduced the intracellular reactive oxygen species level, enhanced activities of superoxide dismutase and glutathione per- oxidase and increased the total anti-oxidative capacity in HaCaT cells following UV irradiation. Furthermore, we found that PCF could inhibit the phosphorylation of c-Jun amino-terminal kinase and the activity of caspase-3 in a concentration- dependent manner. Conclusion： PCF protected HaCaT cells from apoptosis induced by UVA plus UVB, mainly through decreasing the intracellular ROS level and increasing the activities of anti-oxidative enzymes to block the ROS-JNK-caspase-3-apoptosis signaling pathway.     

扇贝多肽经由死亡受体和线粒体通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡

目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、半胱天冬酶-3(caspase-3)和活性氧(ROS)、细胞色素C的角度,研究扇贝多肽(polypeptide fromChlamys farreri,PCF)抑制UVB引起的人角质HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验设计为5组:对照组、UVB模型组、UVB+5.69mmol.L-1PCF组、UVB+2.84mmol.L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。应用小干扰RNA(siRNA)干扰UVB辐射的HaCaT细胞的Fas表达;琼脂糖凝胶电泳分析Fas siRNA及ROS清除剂NAC对细胞凋亡的影响;以DCFH-DA为荧光探针,检测细胞内ROS的含量;免疫印迹法检测细胞色素C及用RNAi干扰降低Fas表达后caspase-3的表达。结果干扰Fas后,UVB辐射的HaCaT细胞凋亡受到明显抑制及caspase-3的表达降低;NAC对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42~5.69mmol.L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的ROS的生成及细胞色素C的释放。结论PCF可抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas-caspase-3及ROS-细胞色素C通路有关。     

扇贝多肽对UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞PI3K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响

目的 研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对紫外线B(UVB)辐射损伤小鼠胸腺淋巴细胞后P13K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响.方法 UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞,用比色法测定胸腺淋巴细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;western-blot检测Akt的活性,预先加入或不加入P13K/Akt通路特异性抑制剂LY294002检测细胞凋亡信号调节激酶Ⅰ(apoptosis signal regulating kinase-1,ASK1)、JNK的活性、线粒体膜电位(ACM)和DNA ladder.结果 PCF能激活AKT的活性,抑制UVB对小鼠胸腺淋巴细胞ASK1凋亡通路的活化.结论 PCF通过降低细胞内活性氧的含量,提高AKT的活性,引起ASK1的降解,导致ASK1-JNK诱导的细胞凋亡抑制.     

扇贝多肽抑制中波紫外线导致的人皮肤成纤维细胞周期阻滞

目的探讨扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐射导致的细胞周期阻滞的作用。方法应用流式细胞术检测扇贝多肽对细胞周期的影响;蛋白质印迹检测p53和p21Cip1的变化;2,7-二氯氢化荧光素二酯(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)的变化。结果 UVB辐射导致人皮肤成纤维细胞周期发生G1期阻滞,扇贝多肽缓解了UVB辐射诱导的细胞周期阻滞,抑制了细胞的p53及p21Cip1蛋白表达,清除了细胞中的ROS。结论扇贝多肽抑制了UVB辐射引起的人皮肤成纤维细胞G1期阻滞,其保护作用是通过抑制ROS-p53-p21Cip1途径实现的。     

扇贝多肽对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的建立中波紫外线对体外培养的HaCat细胞辐射损伤病理模型,探讨扇贝多肽(PCF)对HaCat细胞辐射损伤的保护作用及机制。方法将培养的HaCat细胞分组并给予相应的药物,经UVB照射后,琼脂糖凝胶电泳观察各组的DNA ladder;流式细胞仪检测细胞内Caspase-3的含量;Western-blot检测ERKs,JNKs和p38的水平。结果PCF能减少UVB所致的HaCat细胞DNA片段的出现,减少UVB诱导的HaCat细胞内的Caspase-3的含量,还能提高ERKs的水平,但降低JNKs及p38的水平。结论PCF能抑制UVB辐射诱导的细胞凋亡,对UVB辐射损伤的细胞具有保护作用。其作用机制可能是通过调节MAPKs的信号通路和Caspase级联实现。     

扇贝多肽对长期紫外线A辐射无毛小鼠皮肤所致突变型p53,EGFR和SP表达的抑制作用

探讨局部应用扇贝多肽(PCF)对长期长波紫外线(UVA)辐射无毛小鼠皮肤所致突变型p53,表皮生长因子受体(EGFR)和P物质(SP)表达的影响。建立长期长波紫外线辐射无毛小鼠皮肤模型,免疫组化法测定皮肤组织突变型p53,表皮生长因子受体和P物质的表达。无毛小鼠背部皮肤每天一次应用5％和20％扇贝多肽可显著降低长期长波紫外线辐射(剂量为4556.4 J·cm-2)所致突变型p53,表皮生长因子受体和P物质的过表达。和模型组相比,5％扇贝多肽可分别降低突变型p53,表皮生长因子受体和P物质的表达至86.7％,81.7％和85.2％。20％扇贝多肽几乎可完全对抗长期长波紫外线辐射所致的过表达。扇贝多肽可通过抑制无毛小鼠皮肤中突变型p53,表皮生长因子受体和P物质的过表达,从而可保护皮肤防止光致癌和光老化。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及扇贝多肽在UVA诱导HaCaT细胞凋亡中的作用

目的研究UVA对HaCaT细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumour necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)表达的影响;复制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型,探究TRAIL在UVA诱导的HaCaT细胞凋亡中的作用及扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对UVA诱导的TRAIL凋亡通路的影响。方法实验设计分为5组:对照组、UVA模型组、UVA+5.69mmol·L-1PCF组、UVA+2.84mmol·L-1PCF组、UVA+1.42mmol·L-1PCF组。Real-TimePCR检测TRAIL mRNA表达;蛋白质印迹法检测TRAIL蛋白表达及caspase-8活性;琼脂糖凝胶电泳分析TRAIL中和性抗体对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的影响。结果8J·cm-2UVA照射HaCaT细胞后TRAIL mR-NA及蛋白表达增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);TRAIL中和性抗体对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42~5.69mmol·L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的HaCaT细胞TRAIL mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01);PCF对UVA引起的HaCaT细胞caspase-8的活化有抑制作用,且呈量效关系。结论UVA可增强HaCaT细胞TRAIL表达;TRAIL参与了UVA诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF对UVA诱导的HaCaT细胞TRAIL表达有抑制作用,也可减弱UVA诱导的caspase-8活化,以其抗氧化活性抑制TRAIL凋亡通路而发挥抗凋亡作用。     

扇贝多肽对小鼠免疫功能调节的研究

目的探讨扇贝多肽(PCF)对免疫低下小鼠免疫功能的调节作用。方法应用地塞米松(DEX)建立小鼠免疫抑制模型，通过形态学、细胞功能学和流式细胞分析等方法研究PCF腹腔注射对机体免疫功能的影响。结果：PCF腹腔注射能够明显改善DEX所致的免疫低下反应．脾脏白髓组织明显增大，外周血T淋巴细胞数量增多和脾淋巴细胞对ConA诱导的转化能力明显提高。结论PCF腹腔注射对小鼠免疫功能具有一定的正向调节作用，可能主要是通过影响外周成熟的免疫细胞而发挥作用。     

扇贝多肽对60Co辐射损伤小鼠的保护作用

采用生物化学方法研讨扇贝多肽(PCF)对小鼠^60Co辐射损伤的保护作用。结果表明，PCF能显著升高^60Co辐射小鼠胸腺系数和脾系数；提高组织匀浆中SOD和GSH—Px活性，降低ROS和MDA含量，同时提高总抗氧化能力，且PCF的作用呈剂量依赖性。提示PCF具有一定的抗辐射作用，这可能与其抗氧化及能提高机体免疫功能有关。