Protective effects of bendazac lysine on early experimental diabetic nephropathy in rats

Aim: To investigate the preventive and protective effects of bendazac lysine (BDL) on experimental early diabetic nephropathy (DN) rats. Methods: After an early DN model was induced by streptozotocin, rats were administered BDL at doses of 100, 200, and 400 mg/kg for 8 weeks. Blood glucose, microalbuminuria,kidney index, total antioxidative capacity, laminin, advanced glycation end products (AGE), aldose reductase (AR) activity, and the relative quantity of transforming growth factor β1 (TGF-β1) mRNA were measured by different methods.The ultrastructural morphology was observed by transmission electron microscope. Results: The physical behaviors of early DN rats were hypopraxia,cachexia, and polyuria, while those treated with high doses of BDL were vibrant and vigorous. For BDL-treated DN rats, when compared with vehicle-treated DN rats, the blood glucose level and the intensity of oxidative stress were ameliorated.Also, the microalbuminuria level, AGE either in serum or in renal, and AR activity were significantly reduced. Furthermore, the expression of TGF-β1 mRNA in the kidney cortex was declined and the thickness of glomerular base membrane was decreased significantly. The ultrastructure of glomerulus and mesangial matrix of BDL-treated DN rats were ameliorated. Conclusion: BDL has protective effects on several pharmacological targets in the progress of DN and is a potential drug for the prevention of early DN.     

有氧运动对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响及机制

摘要：目的 观察长期有氧运动对自发性高血压大鼠（SHR）心肌纤维化的影响,并探讨调控胶原代谢的信号分 子——转化生长因子-β（1 TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和组织金属蛋白酶抑制 物-2（TIMP-2）在其中的作用机制。方法 30只雄性SHR随机分为安静对照（SHR-RC）组和有氧运动（SHR-AT） 组,同时将15只Wistar-Kyoto大鼠作为正常血压对照（NC）组。NC组和SHR-RC组动物在鼠笼安静饲养,SHR-AT组 进行24周跑台训练。实验结束后利用无创血压仪测定尾动脉血压,超声心动术检测心脏结构与功能,Masson染色获 取心脏胶原容积分数（CVF）,实时荧光定量 PCR 检测心钠素（ANP）、脑钠素（BNP）和 β-肌球蛋白重链（β-MHC） mRNA表达量,Western blotting检测TGF-β1、CTGF、MMP-2［包括总MMP-2（72 ku）和活化型MMP-2（64 ku）］、TIMP- 2和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达量。结果 与NC组比较,SHR-RC组大鼠心腔扩张同时室壁变薄,心脏 CVF 增加,心功能下降,ANP、BNP 和 β-MHC mRNA 以及 TGF-β1、CTGF、TIMP-2 和 α-SMA 蛋白表达量上调（P＜ 0.05）,活化型MMP-2蛋白表达量以及活化型MMP-2/TIMP-2比值下降（P＜0.05）;与SHR-RC组比较,SHR-AT组心 脏扩张减轻,心脏CVF下降,心功能增强,ANP、BNP和β-MHC mRNA以及α-SMA蛋白表达量下调,活化型MMP-2 蛋白表达量以及活化型 MMP-2/TIMP-2 比值增加（P＜0.05）,而 TGF-β1、CTGF 和 TIMP-2 蛋白表达量无明显变化 （P＞0.05）。结论 长期规律有氧运动能够改善SHR心肌纤维化,并延缓心脏重塑和心力衰竭进程,其机制与胶原 降解增加（但对胶原合成无影响）以及抑制成纤维细胞向成肌纤维细胞分化有关     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶2表达的影响

目的 观察银杏叶提取物(GbE)对雄性SD糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶2(MMP-2)和Ⅳ型胶原表达的影响,从而探讨银杏叶对糖尿病肾病的保护机制.方法 24只链脲佐菌素诱导的SD大鼠完全随机分成糖尿病对照组(DM组)和GbE组,并以12只正常雄性SD大鼠作为正常对照组(NC组).分别于4、8周后,观察各组大鼠体重、肾重、随机血糖、尿蛋白排泄率等生化指标,并用免疫组化和逆转录聚合酶链反应方法 观察糖尿病大鼠肾脏MMP-2及Ⅳ型胶原的表达.结果 糖尿病大鼠的随机血糖、体重、肾脏/体重明显下降,尿白蛋白排泄率明显升高[DM组(31.59±4.59)mg/24 h比NC组(8.74±2.08)mg/24 h,P＜0.05],GbE组糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率[(21.38±3.86)mg/24 h]较DM组有所下降(P＜0.05).8周时,与正常对照组相比,DM组大鼠肾小球MMP-2蛋白的表达水平明显下降[(0.49±0.07)mg/24 h比(0.15±0.04)mg/24 h,P＜0.05],而GbE组DM组大鼠肾小球MMP-2蛋白的表达水平[(0.48±0.07)mg/24 h]较DM组无明显下降(P＞0.05);DM组大鼠Ⅳ型胶原的表达水平较NC组明显升高[(3.48±0.54)mg/24h比(1.68±0.51)mg/24 h],而GbE组糖尿病大鼠较NC组无明显升高[(2.55±0.50)mg/24 h比(1.68±0.51)mg/24 h].结论 GbE可通过抑制糖尿病大鼠MMP-2过表达,进而对糖尿病肾病发挥保护作用.

Abstract：

Objective To study the effect of ginkgo biloba extract (GbE) on the expression of matrix metalloproteinase (MMP)-2 in kidneys of diabetic rates and to analyze the protecting mechanism of GbE on diabetic nephropathy. Methods Totally 24 SD rats of diabetic nephropathy induced by streptozotocin were randomly divided into two groups: diabetes group and treatment group with GbE, and 12 rats with placebo therapy were enrolled as the normal control group. Rats were killed after 4 ～ 8 weeks treatment and the expression of MMP-2 and type Ⅳ collagen were studies by immunohistochemistry and RT-PCR. Results In diabetic rats, blood sugar, weight and kidney/body weight ratio were decreased significantly and the excretion of 24 hour urinary protein was increased significantly compared to the diabetes group. But the excretion of 24 hour urinary protein was improved in GbE group ( P ＜0.05 ). The expression level of MMP-2 protein and mRNA was decreased significantly in renal glomduri of diabetic rats ( P ＜ 0.05 ) but showed no changes in GbE treatment group compared to diabetes group( P ＞ 0.05 ). The expression level of type Ⅳ collagen was significantly increased in diabetic rats( P ＜0.05 ) but showed no changes in GbE group( P ＞0.05). Conclusion GbE can improve diabetic nephropathy by inhibiting the expression of MMP-2 in diabetic Rat.     

伊贝沙坦预防链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠肾损伤的作用机制(英文)

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂伊贝沙坦(Irb)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠的肾保护作用机制。方法:SD大鼠随机分为3组:正常对照组(N组,n=7),糖尿病肾病组(DN组,n=6)Irb治疗组(DNI组,n=7)。SD大鼠单侧肾切除后,腹腔注射STZ诱导糖尿病模型,观察治疗后第4, 8,12周的血糖(BG)、体重(BW)、尿白蛋白排泄、24小时尿总蛋白的改变,同时观察12周时肌酐清除率(Ccr)、肾重(KW)、肾脏肥大指数(KW/BW)、肾组织总蛋白含量(RTP)、肾小球面积(A_G)和体积(V_G)、肾小球毛细血管基底膜(GBM)厚度的改变。通过免疫组化观察肾组织结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的表达。结果:DN组和DNI组间BG无差异(p>0.05)。Irb可显著抑制大鼠尿白蛋白、24小时尿总蛋白的排泄,抑制过度增高的Ccr(均为P<0.01)。而且Irb可显著抑制糖尿病大鼠KW、KW/BW、RTP、A_G和V_G的增加(P<0.05或P<0.01)。我们首次证实Irb能够显著抑制GBM的增厚和CTGF的表达(均为P<0.01)。另外,大鼠肾脏CTGF的表达与TGF-β_1的表达和肾小球体积呈显著正相关(均为P<0.01)。结论:早期应用Irb对糖尿病大鼠的肾保护作用可能与抑制肾脏肥大和肾脏CTGF表达有关。     

贝那普利对糖尿病大鼠心肌细胞外基质重塑中基质金属蛋白酶及转化生长因子表达的影响

目的研究贝那普利对糖尿病大鼠心肌基质重塑的作用机制。方法 SD大鼠ip注射链脲佐菌素制备糖尿病模型。治疗组ig给予BZ 10 mg.kg-1,连续12周。光镜及电镜下观察左心室心肌组织改变,测定心脏质量指数;Western印迹法测定左心室心肌组织胶原Ⅰ型及Ⅲ型含量,基质金属蛋白酶2(MMP-2),金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)表达及转化生子因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠心脏质量指数明显升高,胶原Ⅰ型及Ⅲ型表达明显增加(P<0.05),MMP-2表达减少、TIMP-2表达增加(P<0.01),TGF-β1和CTGF表达明显增强(P<0.05),心肌间质纤维增生。大鼠连续ig给予贝那普利12周后,心脏质量指数明显降低〔(4.13±0.18)vs(3.42±0.13)mg.g-1〕;胶原Ⅰ型及Ⅲ型表达明显减少(P<0.05),MMP-2表达增加,TIMP-2表达减少(P<0.05),TGF-β1及CTGF表达明显减弱(P<0.05),心肌间质纤维增生减轻。与正常对照组相比,贝那普利组大鼠心肌MMP-2表达减少,TIMP-2及CTGF表达仍增加。结论贝那普利可能通过抑制糖尿病大鼠心肌组织TGF-β1和CTGF表达以及增强基质金属蛋白酶表达,从而抑制糖尿病心肌间质纤维化,改善心肌细胞外基质重塑。     

2型糖尿病大鼠心肌间质胶原代谢的变化及罗格列酮的干预研究

目的观察糖尿病(DM)大鼠心肌间质胶原含量的变化及心肌组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织抑制物-1(TIMP-1)的表达变化及罗格列酮(RSG)对上述指标的影响。方法高脂高糖饮食加小剂量链尿佐菌素腹腔注射制备2型DM大鼠模型,将大鼠分为12周对照组和DM组,24周对照组、DM组和RSG组,分别检测各组大鼠心肌组织胶原含量、MMP-2,MMP-9,TIMP-1 mRNA表达变化及MMP-2,MMP-9,TIMP-1蛋白水平的变化。结果DM大鼠心肌间质胶原含量明显增加,MMP-2的表达明显减低,MMP-9,TIMP-1的表达均明显增加,但MMP-9/TIMP-1的比值下降。RSG治疗组胶原含量明显减少,MMP-2表达明显上调,MMP-9下调,TIMP-1明显下调,MMP-9/TIMP-1增加。结论MMP-2,MMP-9及其组织抑制物-1的调节失衡参与了DM心肌间质纤维化的发生与发展,RSG治疗可以通过调节基质金属蛋白酶-2、9及其组织抑制物-1的表达变化,抑制心肌纤维化,减轻心肌损伤。     

银杏叶提取物对肝星状细胞TGF-β_1,CTGF及细胞外基质表达的影响

目的:研究银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及转化生长因子(TCF)-β1、结缔组织生长因子(CTCF) mRNA表达及细胞外基质分泌的影响。方法:用不同浓度(0,1,10,100,500 mg·L-1)的银杏叶提取物处理 HSC-T6 24 h及48 h后,用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法检测各组细胞及空白对照组中TGF—β1,CTGF mRNA的表达;放射免疫法分析上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量;MTT及流式细胞仪检测其对肝星状细胞增殖及细胞周期的影响。结果:银杏叶提取物10,100,500 mg·L-1能明显抑制 TGF-β1和CTGF mRNA的表达,降低上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量 (P<0．01或P<0．05),在一定范围内呈随剂量增加及时间的延长,抑制效率增加;并可抑制肝星状细胞的增殖,影响HSC-T6的细胞周期,使细胞周期阻滞于G1期。结论:银杏叶提取物可明显抑制HSC-T6的增殖,降低其细胞因子基因表达及细胞外基质的分泌。     

The antioxidative effects of astragalus saponin I protect against development of early diabetic nephropathy

It has been known that oxidative stress plays an important role in the development of diabetic nephropathy (DN). The antioxidative effects of Astragalus saponin I (AS I) were studied in vitro and in vivo. In the presence of high glucose and H2O2, the total antioxidative capability, catalase, reduced glutathione, and superoxide dismutase level of rat mesangial cells were significantly decreased, and transforming growth factor beta1 (TGF-beta1) mRNA level, collagen IV, and laminin level were significantly increased. When compared with those in the high glucose group, these 4 indexes of cells incubated in 2.0 and/or 20 micromol/L of AS I were significantly enhanced, and levels of TGF-beta1 mRNA, collagen IV and laminin were statistically decreased. By flowcytomery, percentages of S phase of cells incubated in high glucose and H2O2 were lowered, while those in AS I were increased. Furthermore, the physical behaviors of rats treated with 12 mg/kg of AS I restored with vigor and weight gaining, while the level of HbAlC was significantly reduced. Thus, AS I has antioxidative effects and is a potential compound worth further study because it may prevent the development of DN.     

氯沙坦联合卡托普利治疗早期糖尿病肾病的临床研究

目的探讨氯沙坦联合卡托普利治疗早期糖尿病肾病(DN)的临床疗效及安全性,为临床合理选择用药提供依据.方法88例2型糖尿病肾病患者随机分为3组,分别为氯沙坦组、卡托普利组及联合用药组,疗程均为24周.观察治疗前后各组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血钾(K )、血总胆固醇(CH)、甘油三酯(TG)变化.结果联合用药组、氯沙坦组和卡托普利组治疗早期DN,均有明显降压、降尿蛋白的作用,各组治疗前后比较差异有显著性(P＜0.01、P＜0.05);联合用药组舒张压降低程度与单独用药两组比较,差异有显著性(P＜0.05);联合用药组UAER降低幅度较氯沙坦组和卡托普利组明显,分别为59%、53%、50%;各组BUN、Cr、HbAlc、K 、CH、TG治疗前后及各组间比较无统计学意义(P＞0.05).结论氯沙坦联合卡托普利治疗早期糖尿病肾病更有效、更合理,并无明显不良反应.     

银杏达莫治疗早期糖尿病肾病20例

目的 探讨银杏达莫治疗早期糖尿病肾病的疗效及其作用机制。方法 40例早期糖尿病肾病患者，随机分为治疗组和对照组各20例，治疗组给予0．9％氯化钠注射液250mL＋银杏达莫注射液30mL静脉滴注；对照组给予0．9％氯化钠注射液250mL＋维生素C1g静脉滴注，疗程均为3周。观察两组患者治疗前后空腹血糖（FBG）、餐后2h血糖（PBG2h）、糖化血红蛋白（HbA1C）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、24h尿清蛋白、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、24h尿量变化情况。结果 治疗组24h尿清蛋白定量、CHO和TG水平与治疗前比较显著下降（P〈0．05），与对照组比较亦显著下降（P〈0．05）。治疗组Cr、BUN与治疗前比较有所下降，与对照组比较亦有所下降，但差异均无显著性（P〉0．05）。治疗组24h尿量与治疗前比较有所增加，与对照组比较也增加，但差异均无显著性（P〉0．05）。结论银杏达莫可以降低早期糖尿病肾病患者尿清蛋白及血脂水平，对糖尿病肾病有治疗作用。     

Attenuating effect of Fufang Xueshuantong Capsule on kidney function in diabetic nephropathy model

Fufang Xueshuantong Capsule (FXST) can reduce urinary albumin and whole blood viscosity in early diabetic nephropathy (DN) patients. This research aimed to investigate the effect of FXST on kidney function in DN rats and to identify the underlying molecular mechanisms. We performed Illumina RatRef-12 Expression BeadChip gene array analysis, and found that 3-month treatment with FXST significantly decreased 24-h urinary albumin, serum creatinine and blood urea nitrogen, and increased urinary creatinine in DN model rats. Kidney hypertrophy and glomerular mesangial matrix expansion were also ameliorated. Kidneys from the high-dose FXST group had 67 genes with significantly changed expression (34 increased, 33 decreased). DAVID analysis showed that the fold enrichment score of ??collagen type 1?? was the highest in all GO functional categories. DAVID function annotation cluster analysis indicated that the top annotation cluster included three GO function categories: ??response to nutrient??, ??response to nutrient levels?? and ??response to extracellular stimulus??. Based on KEGG pathway analysis, we found that the most two significant pathways were ??metabolism of xenobiotics by cytochrome P450?? and ??drug metabolism??. Real-time PCR showed that relative levels of Col1a1 (collagen type 1 alpha 1), Ctgf (connective tissue growth factor) and Tgfb1 (transforming growth factor beta 1) were significantly decreased in the FXST group, while Cyp2c23 (cytochrome P-450 family 2 subfamily C polypeptide 23) and Nphs1 (nephrin) were increased. The increased expressions of TGF?? and collagen (type 1, ??2) in the kidneys of DN rats were attenuated by FXST. Our data suggest that FXST can moderate kidney function in DN rats. The mechanism may involve the BMP2?CTGF?¨CCTGF pathway, CYP2C23 and podocyte proteins.     

葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织MMP-2与TIMP-2表达的影响

目的探讨葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其组织抑制剂2（TIMP-2）表达的影响。方法单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型。用原位杂交法检测肾小球MMP-2及TIMP-2 mRNA表达，流式细胞术和免疫组织化学检测肾皮质TGFβ1，MMP-2，TIMP-2,IV型胶原及层粘连蛋白表达。结果 糖尿病组较对照组肾小球MMP-2 mRNA及蛋白表达降低而TIMP-2 mRNA及蛋白表达升高，TGFβ1，IV型胶原及层粘连蛋白表达亦增加，肾功能恶化；葛根素用药组较糖尿病组肾小球MMP-2 mRNA及蛋白表达升高，而TGFβ1，TIMP-2，IV型胶原及层粘连蛋白表达减少，肾功能改善。结论葛根素对糖尿病大鼠肾功能具有保护作用，除降低血糖外，调节肾小球MMP-2及TIMP-2表达，从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

硫化氢供体对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺动脉胶原含量及代谢的影响

目的探讨硫化氢供体硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺动脉胶原含量及代谢的影响。方法32只♂SD大鼠随机分为分流组(n=8)、分流+NaHS组(n=8)、假手术组(n=8)和假手术+NaHS组(n=8)。对分流组和分流+NaHS组大鼠行腹主动脉-下腔静脉穿刺建立高肺血流动物模型。分流11wk后,以右心导管法测定大鼠肺动脉收缩压(systolic pulmonary arteryp ressure,SPAP)、以敏感硫电极法测定肺组织硫化氢(hydro-gen sulfide,H2S)含量、以免疫组织化学法测定肺动脉胶原Ⅰ和胶原Ⅲ、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase,MMP-13)及其抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)的表达。结果分流11wk后,大鼠SPAP明显增高(P<0.05);肺组织H2S含量明显降低(P<0.05);应用NaHS干预11wk后,分流+NaHS组大鼠H2S含量明显升高,而SPAP明显降低(P<0.05);分流+NaHS组大鼠胶原Ⅰ和胶原Ⅲ蛋白表达比分流组明显降低(P<0.05);分流+NaHS组大鼠MMP-13、TIMP-1的蛋白表达及MMP-13/TIMP-1比值比分流组明显升高(P<0.05)。结论NaHS可能通过增加肺动脉壁胶原成分的降解、减少胶原含量,从而在高肺血流性肺动脉高压形成中发挥调节作用。     

白皮杉醇对糖尿病肾病大鼠ERK1/2通路及CTGF蛋白表达的影响

目的：探究白皮杉醇（PIC）对糖尿病肾病（DN）大鼠细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）通路及其调控的结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达的影响。方法：取健康雄性SD大鼠,采用高脂高糖喂养+腹腔注射链脲霉素建立大鼠DN模型,并将造模成功的50只SD大鼠随机分为模型组（DN组）、PIC低（50 mg·kg^-1）、中（100 mg·kg^-1）、高（200 mg·kg^-1）剂量组,阳性对照组（厄贝沙坦25 mg·kg^-1）,每组10只;另取10只大鼠,正常饲养,作为正常对照组。各组均于造模成功后开始给药,PIC低、中、高剂量组及阳性对照组分别灌胃给予相应剂量的PIC及厄贝沙坦溶液,正常对照组和DN组灌胃给予10 mL·kg^-1生理盐水,各组大鼠连续给药4周,每天1次。给药期间观察大鼠饮食状况,于末次给药12 h后,称重、收集大鼠尿液,麻醉处死大鼠,取腹主动脉血和肾脏组织;用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测血液肾功能指标血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、空腹血糖及尿液中24 h尿蛋白量及空腹血糖（FBG）含量;取肾脏组织,称重,并用苏木精-伊红染色法检测大鼠肾脏组织病理形态;用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸缩合法检测肾组织氧化指标超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测肾脏组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血红素加氧酶-1（HO-1）、ERK1/2、CTGF蛋白相对表达水平。结果：与正常对照组相比,DN组大鼠精神萎靡、形体消瘦及肾小球基底膜增厚、肾小管扩张、肾间质炎性浸润等病理损伤严重,肾脏/体质指数、FBG、血清Scr和BUN、尿液中24 h尿蛋白量、肾脏组织中MDA含量、HIF-1α、HO-1、p-ERK1/2、CTGF蛋白表达升高（P<0.05）,SOD活性明显降低（P<0.05）;与DN组相比,PIC低、中、高剂量组及阳性对照组大鼠精神萎靡、形体消瘦及肾小球基底膜增厚、肾小管扩张、肾间质炎性浸润等病理损伤现象缓解,肾脏/体质指数、FBG、血清Scr和BUN、尿液中24 h尿蛋白量、肾脏组织中MDA含量、HIF-1α、p-ERK1/2、CTGF蛋白表达降低（P<0.05）,HO-1、SOD活性明显升高（P<0.05）,且PIC各剂量组上述指标呈剂量依赖性。阳性对照组上述指标变化与PIC组相比差异无统计学意义。结论：PIC可抑制ERK1/2-CTGF信号通路激活,升高HO-1表达、降低HIF-1α表达,抑制肾脏氧化应激损伤,改善DN大鼠肾脏损伤     

苄达赖氨酸对大鼠糖尿病肾病的防治作用

目的：在大鼠肾系膜细胞及整体大鼠上观察卞达赖氨酸（bendazac lysine,BDL）对糖尿病肾病（di-abetic nephropathy,DN）的防治作用。方法：大鼠肾系膜细胞分别在3种浓度的BDL中培养36h后,流式细胞仪测定细胞S期百分率;RT-PCR法测定转化生长因子（transforming growth factorβ1,TGF-β1）mR-NA水平;放免法测定细胞内Ⅳ型胶原和层粘蛋白含量;糖尿病模型大鼠灌胃3种剂量的BDL8周后,亲和层析法测定大鼠血清糖化血红蛋白。结果：高糖和H2O2可使S期细胞百分数大幅度降低,TGF-β1 mRNA相对含量、Ⅳ型胶原和层粘蛋白含量明显升高。低中高3个浓度的BDL皆可使S期细胞比例分别有不同程度的升高;使TGF-β1 mRNA相对含量、Ⅳ型胶原和层粘蛋白含量显著降低。中高剂量的BDL可显著降低大鼠血清糖化血红蛋白,并明显改善其生理和精神状态。结论：BDL升高大鼠肾系膜细胞的S期百分数,降低TGF-β1 mRNA、Ⅳ型胶原和层粘蛋白水平的作用与DN密切相关,是潜在的DN防治药物。     

结缔组织生长因子在糖尿病肾病发生发展中的作用

目的 动态观察大鼠糖尿病肾病(DN)的不同阶段肾皮质结缔组织生长因子(CTGF)表达的变化及其与肾功能及肾组织形态学变化的相关性,探讨尿液中CTGF含量的检测作为DN诊断指标的意义.方法 以链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠为研究对象.63只大鼠分为糖尿病组33只和对照组30只.应用逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学及蛋白质印迹法研究在糖尿病的不同时期肾皮质CTGF表达的动态变化,并研究其与DN早期肾肥大、ECM的聚积及后期肾小球硬化及肾间质纤维化之间的关系,同时以ELISA法检测糖尿病大鼠尿液中CTGF含量.结果 糖尿病大鼠肾皮质mRNA及CTGF蛋白质表达2周时开始增加,12周时达高峰,分别为(0.905±0.028)、(0.802±0.028),为正常对照组的4.38倍和9.97倍(均P＜0.05);其表达早期出现在肾小球,而后随着病程的发展出现于肾小管间质区域.相关性分析显示CTGF的表达与肾指数、肾小球体积、系膜基质指数、肾小管间质纤维化程度呈正相关(均P＜0.01);糖尿病大鼠尿液中CTGF的含量随着病程的发展逐渐升高,最高为(277.679±10.372)ng/L,与24h尿微量白蛋白、BUN、Cr呈正相关(均P＜0.01).结论 CTGF表达的增加贯穿了DN发病的整个过程,早期介导了肾肥大,肾小球ECM的积聚,晚期又介导了肾小球硬化及肾小管间质纤维化的发生;尿液CTGF的检测可以作为DN诊断的一个指标.     

2型糖尿病大鼠肺组织基质金属蛋白酶－2、9及其抑制因子－1的表达变化

目的通过检测2型糖尿病大鼠肺组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶－9（MMP-9）及基质金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP—1）的表达变化,探讨MMP－2、MMP－9及TIMP－1在糖尿病肺损伤中的作用。方法通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）的方法,建立2型糖尿病大鼠模型,采用光镜动态观察12周、24周时对照组、糖尿病组的大鼠肺组织的形态学改变,用MassoN三色染色观察肺组织胶原沉积情况,应用免疫组织化学方法检测2组大鼠肺组织MMP－2、MMP－9及TIMP－1的动态表达变化情况。结果糖尿病大鼠肺组织胶原含量明显增多,糖尿病大鼠肺组织MMP－2、MMP－9、TIMP－1表达增多,同时MMP－2／TIMP－1、MMP-9／TIMP－1比例也增加。随病情进展,上述变化更加明显。结论糖尿病大鼠出现了肺间质纤维化,MMP-2、9及TIMP－1表达增多及其比例紊乱参与了糖尿病肺组织病变的发生发展,可能是糖尿病肺纤维化发生的机制之一。     

MMP-9 -1562C/T基因多态性与2型糖尿病肾病的关系研究

摘要 目的：探讨2型糖尿病（T2DM）患者基质金属蛋白酶-9基因-1562C/T（MMP-9 -1562C/T）多态性与糖尿病肾病（DN）的关系以及与DN不同病期的相关性。方法：将150例T2DM患者按DN诊断标准分为DN组与非肾病（NDN）组,DN组分为微量白蛋白尿期、临床白蛋白尿期和肾功能不全期。另择52例健康人作为正常对照（NC）组。应用限制性片段长度多态性分析各组基因型。结果：DN组的HbA1c、SBP、Cr、BUN、UAER值高于NDN、NC组（P<0.01）。DN组分别和NDN组、NC组之间基因型分布差别均有统计学意义（P<0.01）。T2DM中CC、CT、TT各基因型DN发病率递减,分别为59.7%、56.7%、34.9%。C和T等位基因DN发病率分别为59.2%、40.5%,携T等位基因者发生DN的风险是携C等位基因者的0.47倍（P<0.01,95%CI 0.29～0.75）;DN组内3期TT基因型与T等位基因频率随肾功能降低而递减;结论：MMP-9 -1562C/T基因多态性与DN发生有关,T等位基因是DN患者的保护基因。     

黄连素对糖尿病肾损伤大鼠肾功能、氧化应激、肾脏醛糖还原酶的影响

目的观察黄连素对链脲佐菌素诱导的糖尿病肾损伤大鼠肾功能保护作用,并从抗氧化应激、抑制肾脏醛糖还原酶活性及其基因表达等方面探讨黄连素抗糖尿病大鼠肾损伤的作用机制。方法用腹腔注射链脲佐菌素方法复制糖尿病大鼠肾损伤模型。随机分为正常对照组、模型对照组、黄连素组,每组10只。黄连素经口灌胃200 mg.kg-1.d-1,每周给药6 d,共12 wk。比较各组大鼠血糖、肾脏肥大指数(肾重/体重)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、24h尿蛋白(UP24)等肾功能相关指标,比较各组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量、肾组织醛糖还原酶(AR)活性及其基因表达的改变。结果模型组大鼠血糖维持在较高水平、肾脏肥大指数、BUN、Cr、UP24等较正常组明显升高(P<0.05),血清SOD活性低下,MDA含量增加(P<0.05),肾脏AR活性与其基因表达明显升高(P<0.05)。黄连素组与模型组相比,能明显降低血糖、有效控制体重下降、明显改善肾脏肥大指数、BUN、Cr、UP24等指标(P<0.05),血清SOD活性增强,同时MDA含量减少(P<0.05),肾脏AR活性降低及AR mRNA水平下调(P<0.05)。结论对糖尿病肾损伤大鼠,黄连素在调节血糖的同时,可能通过提高机体抗氧化能力、减少肾脏AR活性与基因表达以抑制多元醇通路的激活发挥其肾功能的保护作用。     

KLF4基因沉默对大鼠肝星状细胞 HSC-T6胶原代谢的影响及机制研究

目的：探讨大鼠KLF4基因沉默,对大鼠肝星状细胞HSC-T6胶原代谢的影响及其机制。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒（pGPU6-1,pGPU6-2,pGPU6-3）以及阴性对照。采用实时荧光定量RT-PCR（ Real-time RT-PCR ）和western blot的方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况,筛选出沉默最好的干扰质粒,将筛选出来的干扰质粒pGPU6-3,转染大鼠HSC-T6细胞。转染24 h和48 h后分别采用Real-time RT-PCR法和western blot的方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA和蛋白的表达。 Real-time RT-PCR法以GAPDH为内参照,用2－ΔΔCt法进行分析计算。 western blot的方法以β-actin蛋白为内参照,进行分析。结果 Real-time RT-PCR结果显示, pGPU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1相对于对照组的mRNA表达分别下降为0敂．358±0．038,0．298±0．041和0．478±0．048;而MMP-13 mRNA的表达则上升为1．712±0．034。 Western Blot检测中,pG-PU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后,以β-actin为内参照,Ⅰ型胶原蛋白,Ⅲ型胶原蛋白和TIMP-1蛋白的表达分别下降为0．326±0．051,0．283±0．074和0．331±0．039;而MMP-13蛋白的表达则上升为1．273±0．038。结论 KLF4基因沉默可以显著减少大鼠HSC-T6细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,其机制与增加MMP-13表达,而抑制TIMP-1的表达有关。