生存素基因在三氧化二砷诱导腺样囊性癌-2细胞凋亡中的作用

目的体外观察三氧化二砷（As2O3）诱导人类腺样囊性癌（ACC）-2细胞凋亡的作用,同时检测此过程中ACC-2内生存素（Survivin）表达水平的变化。方法甲基噻唑基四唑（MTT）法检测As2O3不同处理条件下对ACC-2细胞生长的抑制效应,流式细胞术观察As2O3诱导的各组ACC-2细胞的凋亡率。使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin mRNA的表达,蛋白印迹（Western blot）检测蛋白水平的表达差异。结果As2O3作用下ACC-2细胞生长明显受抑制,其抑制率呈浓度和时间依赖关系,细胞凋亡率也呈相同的趋势。RT-PCR和Western blot检测显示,As2O3作用下ACC-2细胞内Survivin mRNA和蛋白表达明显受抑制,抑制程度也具有时间和剂量依赖性。结论As2O3可通过促进细胞凋亡使体外培养的ACC-2细胞生长受抑制,受抑制的ACC-2细胞内Survivin mRNA和蛋白表达下降。推测Survivin基因在As2O3诱导的ACC-2细胞凋亡中起重要作用。     

牛血浆纤维黏连蛋白对大鼠成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响

目的:研究外源性纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)对大鼠成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,探讨应用FN治疗骨缺损性疾病的可行性。方法:酶消化法分离成骨细胞,通过细胞对染料Alamar蓝摄取检测细胞增殖,ELISA方法检测碱性磷酸酶活性,流式细胞术检测FN对成骨细胞细胞周期及凋亡的影响,Western印迹法检测FN作用后成骨细胞Bcl-2及Bax基因的蛋白表达变化。采用SPSS12.0软件包对实验数据进行单因素方差分析。结果:FN浓度为40μg/mL以上时,能促进大鼠成骨细胞的增殖,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);FN能增加成骨细胞ALP活性,各组与对照组相比均有显著性差异(P<0.05),并有明显的剂量依赖性;不同浓度的FN作用成骨细胞后,可使处于DNA合成期(S期)的细胞百分率增加;增殖指数(proliferation index,PI)增加,细胞凋亡百分率减少,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);FN作用后的细胞,Bcl-2基因的蛋白表达量增加,Bax基因的蛋白表达量减少,有剂量依赖性。结论:外源性FN能促进大鼠成骨细胞增殖、分化,使大鼠成骨细胞的DNA合成期(S期)的细胞百分比增加,同时抑制大鼠成骨细胞的凋亡,使大鼠成骨细胞胞质内Bcl-2基因的蛋白表达量增加,同时减少Bax基因的蛋白表达量。     

藤黄酸衍生物-5诱导人头颈部鳞状细胞癌细胞凋亡的体外研究

目的：：研究藤黄酸(GA)的衍生物5(C5),体外诱导人头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)细胞的凋亡作用。方法：不同时间段分别用不同剂量C5作用于HNSCC细胞系CAL27、HN13和HN30,采用MTT法检测细胞存活率,Logit法测定抑制50%的细胞生长所需的浓度(IC50)值。采用Annexin-V/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡。免疫细胞化学法和Western blot法检测凋亡相关蛋白表达的变化。结果：C5明显抑制CAL27、HN13和HN30细胞的生长,且与剂量和时间呈正相关。 IC50值比GA对照组明显降低。应用5.0μmol/L高浓度的C5,处理CAL27细胞系组24 h、48 h和72 h,细胞凋亡比例分别为52.19%、65.24%和84.53%。 C5引起明显的、剂量依赖性的Bcl-2表达减少和Bax表达增加。结论：C5可以体外通过上调Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白表达诱导头颈部鳞状细胞癌细胞的凋亡。     

Met激酶抑制剂BMS-777607对舌鳞癌细胞CAL27增殖、凋亡的影响

目的: 探讨Met激酶抑制剂BMS-777607对人舌鳞状细胞癌（鳞癌）CAL27细胞增殖、凋亡的影响。方法: 采用MTT、克隆形成实验及EdU细胞成像实验,检测BMS-777607对CAL27细胞增殖的影响。通过Heochst33342染色,观察BMS-777607对CAL27细胞的凋亡形态变化。采用JC-1染色,检测BMS-777607对CAL27细胞线粒体膜电位变化。采用Western免疫印迹检测BMS-777607对CAL27细胞中增殖蛋白Akt、p-Akt,凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Bax、Parp表达的影响。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果: BMS-777607抑制CAL27细胞增殖,促进其凋亡,呈浓度依赖性（P<0.05）。BMS-777607抑制Bcl-2、p-Akt表达,促进Bax、Cleaved caspase-3、Parp蛋白表达（P<0.05）。结论: BMS-777607能够抑制CAL27细胞增殖并促进其凋亡。     

周期性机械应力诱导的自噬抑制caspase通路依赖的成肌细胞凋亡

目的 观察大鼠成肌细胞（L6 myoblast,L6）在周期性机械应力作用下细胞凋亡与自噬的水平变化,探讨机械应力诱导的细胞自噬对凋亡的作用。方法 构建大鼠成肌细胞力学刺激模型,加载参数为细胞拉伸形变率15%,加力周期包括 3 s 拉伸及 3 s 舒张,加力时间为 6、12、24 h,以不加力0 h组为对照组。通过Hoechst染色及AnnexinV-FITC/PI染色观察各组细胞凋亡情况;通过MDC染色及透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）评价各组细胞自噬变化;应用 Western 免疫印迹检测各组凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax及自噬相关蛋白LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、P62表达变化。加入自噬抑制剂3-MA后重复实验,检测各组细胞凋亡情况。采用 SPSS 17.0 软件包对数据进行统计学分析。结果 Hoechst染色及AnnexinV-FITC/PI流式结果表明,大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生凋亡,24 h 时达到凋亡最大值。Western 免疫印迹结果显示,凋亡相关蛋白表达水平随加力时间延长而逐渐升高, caspase抑制剂z-VAD-fmk有效抑制应力诱导的细胞凋亡。MDC染色及TEM扫描电镜显示,大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生自噬,24 h细胞自噬达到最大值。Western 免疫印迹结果显示,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ随加力时间延长而升高,P62的表达随着加力时间延长而降低。加入自噬抑制剂3-MA后重复试验,发现应力诱导的成肌细胞凋亡被明显抑制。结论 周期性机械应力诱导大鼠成肌细胞发生自噬与caspase通路依赖的细胞凋亡,细胞自噬作为一种代偿机制,保护性地抑制应力诱导的细胞凋亡。     

Genistein对涎腺腺样囊性癌细胞生长及Survivin表达的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC- 83细胞增殖及Survivin表达的影响。方法以不同浓度Genistein作用于SACC- 83细胞不同时间后,用MTT法分析细胞的生长增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western印迹分析及电泳凝胶成像分析软件定量检测Survivin的表达。结果Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;SACC- 83细胞经220 μmol/L Genistein作用3 d其生长明显受到抑制,并显著诱导细胞凋亡（P<0.01）,同时伴有抗凋亡蛋白Survivin的表达下调。结论Genistein能明显抑制人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC- 83细胞生长并诱导凋亡;Survivin的表达减少可能是Genistein诱导凋亡的机制之一。     

姜黄素联合紫杉醇对人口腔鳞癌细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨姜黄素和紫杉醇对人口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖和凋亡的影响.方法:培养人口腔鳞癌细胞系CAL27,采用不同浓度的姜黄素和紫杉醇及联合用药处理细胞24 h、48 h及72 h.MTT法检测对细胞增殖的影响,Tunel法检测对细胞凋亡的影响,Western印迹法检测对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和活性caspase-3表达的影响.采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:相对于姜黄素或紫杉醇对CAL27的单独作用,两者联合用药能更显著地抑制CAL27细胞增殖和促进CAL27细胞凋亡,更显著地下调Bcl-2表达和Bcl-2/Bax表达比例,上调Bax和活性caspase-3的表达.结论:相比于单一用药,姜黄素和紫杉醇联合用药对CAL27有更好的增殖抑制和凋亡诱导作用.     

牛血浆纤维黏连蛋白抑制大鼠成骨细胞凋亡的实验研究

目的研究外源性牛血浆纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)对体外培养的大鼠成骨细胞凋亡的影响。方法采用体外培养技术原代培养大鼠成骨细胞,Western blotting法检测FN作用后成骨细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax的蛋白表达变化。结果体外培养的成骨细胞呈梭形、三角形或多角形,多角形细胞有多个矢状突起,核卵圆形常居一侧,Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。FN作用后细胞凋亡相关基因Bcl-2的蛋白表达增强;Bax基因的蛋白表达减弱。结论一定浓度的牛血浆FN能够抑制成骨细胞凋亡,其机制之一是增强大鼠成骨细胞胞浆内Bcl-2基因所表达的蛋白,同时减弱Bax基因的蛋白表达。     

X线对ACC细胞NF-κB-P65蛋白表达与细胞凋亡的影响

目的:将唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞在高能X线照射后,对细胞中NF-κB信号转导通路亚单位—p65蛋白表达及细胞凋亡情况进行检测,探讨两者的相关性。方法:将处于对数生长期的ACC-2细胞进行5种剂量(2、4、6、8、10Gy)的高能X线照射,照射后1、3、6、10t、24、48h,采用免疫细胞化学及免疫蛋白印迹(Western blotting)法,检测ACC-2中p65蛋白的表达情况;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,并进行TUNEL试验,观察凋亡细胞核形态;采用SPSS11.5软件包中的Spearman等级相关法进行放射线照射剂量强度与细胞凋亡率之间的分析。结果:通过免疫细胞化学观察,正常对照组细胞中p65蛋白多被定位于核周,而很少出现在胞核内;放射线照射后,该蛋白穿过胞膜,渐进入胞核中心;借助Western印迹法检测,p65蛋白在总蛋白中的含量可随时间逐渐变化,在各组细胞中表达峰值约在照射后6～10h;在同一时间点上,蛋白表达量随放射剂量的增加而增大。照射后,细胞凋亡率不断改变,其变化曲线最低点位于放疗后10h,并表现出对放射线剂量和p65蛋白含量的负相关关系(P=0.010<0.05);凋亡细胞在TUN...     

滇重楼总皂苷对涎腺腺样囊性癌ACC-83细胞增殖抑制及其机制的研究

目的 探讨滇重楼总皂苷对涎腺腺样囊性癌ACC-83细胞的增殖抑制作用及其相关机制,为滇重楼治疗涎腺腺样囊性癌提供理论依据。方法 通过体外细胞培养,采用CCK-8法检测不同药物质量浓度（5、10、20、40、60、80、100 μg·mL^-1）的滇重楼总皂苷对ACC-83细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞仪检测不同药物质量浓度（25、50、100 μg·mL^-1）的滇重楼总皂苷对ACC-83细胞的凋亡率,Western blot及逆转录聚合酶链反应法检测巨噬细胞游走抑制因子（MIF）和CD74的表达。结果 滇重楼总皂苷可促进ACC-83细胞凋亡,并呈剂量-效应关系。ACC-83细胞中存在MIF和CD74的表达,滇重楼总皂苷可抑制MIF和CD74的表达。结论 滇重楼总皂苷对ACC-83细胞的生长有明显抑制作用,可以抑制MIF及CD74的表达,诱导细胞凋亡,为其临床应用提供了依据。     

姜黄素和乳香酸对人口腔表皮样癌KB细胞中花生四烯酸代谢通路COX-2和5-LOX的作用

目的：观察姜黄素和乳香酸对人口腔表皮样癌细胞系KB中花生四烯酸代谢通路环氧化物酶（cyclooxygenase,COX）-2和5-脂氧化物酶（lipoxygenase,LOX）的作用。方法：培养人口腔表皮样癌KB细胞,采用不同浓度的姜黄素和乳香酸及二者联合处理KB细胞24、48、72h,光镜下观察不同浓度药物作用时,细胞形态的变化及贴壁生长的情况,MTT方法检测其对细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI染色法检测对KB细胞凋亡的影响;RT-PCR及Western-blotting法检测花生四烯酸代谢通路中COX-2、5-LOX表达。结果：光镜下观察发现,姜黄素和乳香酸能一定程度上抑制KB细胞的贴壁生长。MTT结果显示,姜黄素和乳香酸均能抑制KB细胞增殖,呈现一定的浓度和时间依赖关系。流式细胞检测结果表明,姜黄素和乳香酸均能促进KB细胞凋亡,呈现一定的浓度依赖关系。两种药物联合应用抑制细胞增殖和促进凋亡的作用明显强于单独作用。RT-PCR及Western-blotting结果提示,姜黄素能抑制花生四烯酸代谢通路中限速酶COX-2和5-LOX的表达,乳香酸可以抑制5-LOX表达,且成一定的剂量相关性,两者联合应用时对COX-2和5-LOX的表达均有抑制作用,尤其是对5-LOX通路的抑制,联合应用较任何一种药物单独应用作用显著增强。结论：姜黄素能抑制人口腔表皮样癌细胞KB的增殖,促进凋亡,并能抑制炎症代谢通路中COX-2和5-LOX的表达,乳香酸能抑制人口腔表皮样癌细胞KB的增殖,促进凋亡,且能抑制5-LOX表达,提示天然植物药姜黄素和乳香酸可能通过抑制花生四烯酸代谢通路中COX-2、5-LOX的表达而发挥一定的口腔癌化学预防作用。     

IGF-1对体外培养髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的：：研究IGF-1对IL-1β诱导的颞下颌关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：组织块培养法分离培养人髁突软骨细胞,通过细胞形态观察和免疫细胞化学染色进行鉴定。将培养的细胞分为：对照组、IL-1β组(10μg/L)、 IL-1β+IGF-1组(0、1、10、50、100μg/L), MTT法检测各组细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3以及p38 MAPK/NF-κB蛋白表达变化。结果：人髁突软骨细胞生长状态良好,甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,II型胶原呈阳性表达。与对照组比较,IL-1β组细胞增殖能力、Bcl-2/Bax比值明显降低,早凋与晚凋细胞百分数、Caspase-3、p38 MAPK/NF-κB蛋白表达均明显增加;与IL-1β组比较,1~100μg/L IGF-1预处理组细胞增殖能力、Bcl-2/Bax比值逐渐上升(P<0.05),细胞凋亡率、Caspase-3、p38 MAPK /NF-κB蛋白表达则逐渐下调(P<0.05),均呈现一定的浓度依赖性。结论：IGF-1可抑制IL-1β诱导的髁突软骨细胞凋亡并减轻p38 MAPK/NF-κB的活化。     

Effect of enhancer of zeste homolog 2 inhibitor GSK126 on the proliferation and apoptosis of tongue squamous cell carcinoma

目的 观察zeste基因增强子同源物2（EZH2）抑制剂GSK126对人舌鳞状细胞癌细胞体外增殖与凋亡的影响,并探讨其相关机制,为舌鳞状细胞癌的临床治疗提供新思路。方法 将不同浓度的GSK126作用于舌鳞状细胞癌CAL-27细胞,通过甲基噻唑基四唑（MTT）、克隆形成、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）荧光染色实验检测药物对细胞增殖能力的影响;采用Hoechst33342荧光染色、JC-1法观察细胞凋亡情况;采用Western blot法检测CAL-27细胞内相关蛋白细胞外调节蛋白激酶（ERK）、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-9的表达水平。结果 GSK126能抑制CAL-27细胞增殖并对细胞凋亡有促进作用。GSK126能下调细胞内p-ERK、Bcl-2的表达水平,同时可增加Bax、Cleaved caspase-9的表达（P<0.05）。结论 GSK126可抑制舌鳞状细胞癌CAL-27细胞的增殖,并且能促进其凋亡,其机制可能与抑制MEK/ERK信号通路以及激活Bax/Bcl-2通路有关。     

As_2O_3对人ACC细胞系作用机制的初步研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M、ACC-2的体外生物学作用及其作用机制。方法:采用形态学观察、MTT法检测As2O3对人唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M、ACC-2增殖的影响,应用原位末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测As2O3对ACC-M、ACC-2细胞凋亡作用。结果:As2O3可显著地抑制ACC-M、ACC-2细胞的生长,并且具有时间和剂量依赖性,通过倒置显微镜可明显观察到细胞的形态学改变;通过TUNEL法、流式细胞仪检测显示As2O3可以诱导ACC-M、ACC-2细胞凋亡;并在G2-M期阻滞。结论:As2O3能显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞的体外生长,其主要作用是诱导细胞凋亡。     

丙泊酚对人咽鳞癌FADu细胞系增殖、迁移、侵袭和凋亡的调节作用

目的:探讨丙泊酚对人咽鳞癌FADu细胞系增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的潜在机制.方法:将不同浓度(0、5、10、20 μg/mL)丙泊酚处理的人咽鳞癌FADu细胞系分别进行CCK-8毒性测试,平板克隆实验测试增殖能力,划痕实验检测细胞横向迁移能力,Transwell实验检测细胞纵向迁移能力和侵袭能力,通过Western免...     

NS-398诱导舌鳞癌细胞凋亡及其对E2F-1蛋白表达的影响

目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及其对细胞核转录因子E2F-1蛋白表达的影响。方法NS-398作用于舌癌Tca8113细胞,噻唑蓝法检测细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞周期及其凋亡率的改变,放射免疫法测定细胞上清液中前列腺素E2(PGE2)含量,Western blot法检测细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达的变化。结果NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强。NS-398(50μmol/L)可引起Tca8113细胞G0/G1期细胞的逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例数减少,并随着时间的延长细胞上清液中PGE2含量降低,细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达下调。结论NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,阻断细胞生长停滞于G0/G1期;该效应可能与其诱导细胞凋亡和降低细胞产生前列腺素E2有关;E2F-1蛋白可能参与了这些过程。     

过表达大肿瘤抑制因子2对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨过表达大肿瘤抑制因子2（LATS2）基因对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞增殖和凋亡的影响。方法 应用慢病毒介导的基因过表达技术,使用LATS2过表达慢病毒感染SCC-25细胞株。通过CCK-8检测过表达LATS2对细胞增殖的影响;流式细胞术检测LATS2基因过表达后细胞凋亡情况;Western blot检测LATS2过表达后对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的变化。结果 转染pEGFP-LATS2细胞的LATS2基因表达明显上调;pEGFP-LATS2组细胞增殖明显受到抑制;流式细胞术检测pEGFP-LATS2组凋亡率明显高于空白对照组（control）和空载体组（pEGFP-control）（P<0.05）。与control和pEGFP-control组相比,pEGFP-LATS2组Bax蛋白上调,而Bcl-2蛋白下调。结论 过表达LATS2基因可明显抑制SCC-25细胞增殖并促进细胞凋亡。