Ki67抗原在Hp感染GES-1细胞中表达及半夏泻心汤对其表达的影响

目的观察幽门螺杆菌感染GES-1细胞后Ki67抗原量的变化,探讨半夏泻心汤对Ki67抗原表达的影响。方法实验分正常组、模型组和半夏泻心汤组,以1∶50的细胞∶细菌比例感染GES-1细胞,用半夏泻心汤含药血清培养48 h。MTT法检测细胞增殖。免疫组化检测Ki67抗原。结果与正常对照组比较,模型组的MTT A值和Ki67抗原阳性细胞率均显著降低(P0.05);与模型组比较,半夏泻心汤组MTT A值和Ki67抗原阳性细胞率显著提高(P0.05)。结论Hp可抑制GES-1细胞增殖,半夏泻心汤能降低细菌的抑制作用。     

液体培养VacA 幽门螺杆菌上清液粗提蛋白对胃上皮细胞增殖/凋亡的影响

[摘要] 背景：幽门螺杆菌感染可以导致胃上皮慢性炎症、粘膜萎缩、上皮细胞增殖与凋亡的失衡,从而引起慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌等不同临床结局。然而,幽门螺杆菌导致胃癌发生的确切机制还不十分清楚。本研究通过体外实验探讨液体培养幽门螺杆菌上清液粗提蛋白（BCF-P）对人胃永生上皮细胞株（GES-1）和胃癌上皮细胞株（AGS）增殖与凋亡的影响。 方法：以人胃永生上皮细胞株（GES-1）和胃癌细胞株（AGS）作为研究对象,进行了下述研究：1）应用MTT方法分析BCF-P对GES-1和AGS细胞增殖的影响。2）应用流式细胞术分析BCF-P对GES-1和AGS细胞凋亡的影响。3）应用RT-PCR技术检测BCF-P和EGF对GES-1和AGS细胞Fas /COX-2 mRNA表达水平的影响。4）免疫沉淀和酶联法检测BCF-P对GES-1和AGS细胞EGFR酪氨酸激酶活性的影响。 结果：1）BCF-P抑制GES-1和AGS细胞增殖,具有浓度依赖性。2）在与抑制增殖相同的剂量和作用时间下,BCF-P未能诱导出GES-1和AGS细胞凋亡。3）BCF-P作用使GES-1和AGS细胞Fas mRNA表达下调（P<0.05）;与EGF的作用一致。BCF-P使AGS细胞COX-2 mRNA表达下调（P<0.05）;与EGF作用相反（P<0.05）。4）BCF-P作用使GES-1和AGS细胞EGFR酪氨酸激酶活性提高3倍以上。 结论： BCF-P体外抑制AGS和GES-1细胞增殖,其增殖抑制作用与凋亡无关。BCF-P体外对胃上皮细胞的作用不完全等同于EGF。     

幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）对胃黏膜上皮细胞（GES-1）自噬和凋亡的影响。方法：Hp与GES-1体外共培养,同时设立雷帕霉素（RAPA）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预组及空白对照组,于2、4、6、12及24 h终止感染,通过免疫蛋白印迹、荧光染色、透射电镜、流式细胞术及细胞内活菌计数等方法观察Hp对GES-1自噬和凋亡的影响。结果：Hp＋GES-1组在2 h出现自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达及细胞内荧光自噬颗粒,透射电镜观察到细胞内出现双层或多层膜包裹的自噬小体样结构,细胞自噬在4 h达高峰,感染中后期逐渐减弱并消失;RAPA＋Hp＋GES-1组细胞自噬程度进一步增强,细胞凋亡率及细胞内活菌数均降低（P〈0.05-P〈0.01）;3-MA＋Hp＋GES-1组细胞自噬强度显著降低,而其细胞凋亡率和细胞内活菌数均明显升高（P 〈0.01）。结论：Hp可在感染早期诱导GES-1自噬;RAPA和3-MA可增强或降低自噬发生程度,从而减轻或促进细胞损伤。     

不同幽门螺杆菌临床菌株对人胃黏膜细胞系GES一1增殖和凋亡的影响及其致癌性的研究

比较不同幽门螺杆菌（H.pylori）临床菌株对人胃黏膜细胞系GES-1细胞增殖、凋亡的影响,了解不同毒力菌株对胃黏膜的影响及致癌性。方法：选用临床分离自胃癌、胃炎患者的菌株各10例分别与GES-1细胞以不同浓度比例共培养,在不同时间点进行MTT和流式细胞仪检测,筛选出对GES-1细胞的增殖影响最大（A菌株）和最小（B菌株）的两株菌株,利用蒙古沙土鼠感染模型了解其导致胃黏膜病变情况及致癌性。结果：当细肜细菌浓度比为1：1,1：50共培养12h和细胞／细菌浓度比为1：50共培养24h时,分离自胃癌患者的麒H.pylori临床菌株可以不同程度地促进GES-1细胞增殖,与胃炎菌株组的吸光度值比较差异有统计学意义（P〈0．05）。当细肜细菌浓度比为1：50,1：200共培养时,胃炎菌株纽和胃癌菌株纽细胞凋亡率较对照组明显增加（P〈0．05）,胃炎菌株组与胃癌菌株组间差异无统计学意义（P〉0．05）。筛选出的2株菌株感染蒙古沙土鼠模型后28周,A菌株引起蒙古沙土鼠胃黏膜肠化及癌变,与B菌株组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：不同来源的Hpylori临床菌株对GES-1细胞的增殖影响具有差异性,分离自胃癌黏膜的菌株可明显促细胞增殖,并可以引起蒙古沙土鼠严重的胃黏膜癌前病变及胃癌发生。     

幽门螺杆菌慢性感染诱导胃上皮细胞产生凋亡耐受

目的：建立幽门螺杆菌（Hp）慢性感染胃上皮细胞模型,并分析Hp慢性感染与胃上皮细胞凋亡的关系。方法：用HpSS1与人非肿瘤性胃上皮细胞株GES-1共培养16周,建立GES-1模型细胞,然后采用流式细胞术分析这种模型细胞对Hp和其它肠道细菌以及抗肿瘤药物凋亡诱导剂的应答。结果：成功获得了Hp慢性感染胃上皮细胞模型（GES-1模型细胞）。这种模型细胞不仅对Hp诱导的凋亡耐受,而且对其他肠道细菌和一些凋亡诱导剂也是耐受的。结论：幽门螺杆菌慢性感染诱导胃上皮细胞产生凋亡耐受,由此可能增加了胃上皮细胞癌变的危险性。     

幽门螺杆菌及其相关细胞因子对胃上皮细胞凋亡的调控及相关机制

目的研究幽门螺杆菌（Hp）及其相关细胞因子对胃上皮细胞凋亡的影响,以探讨Hp的致病机理。方法以人胃永生化上皮细胞株（GES-）和人胃癌细胞株（AGS）作为研究对象。流式细胞术检测Hp毒力菌株（NCTC11637）单独及分别联合Hp相关细胞因子[白细胞介素（IL）-1β、IL-8及IL-10]对两种细胞系凋亡的影响;检测IL-1β、IL-8及IL-10对外源性Fas配体（FasL）诱导的两种细胞系凋亡的影响。逆转录-聚合酶链反应检测Hp及其相关细胞因子（IL-1β、IL-8及IL-10）对两种细胞系FasmRNA基础表达水平的影响。结果（1）Hp能诱导GES-1和AGS细胞凋亡增加113．0％和47．0％（均P〈0．05）;IL-1β、IL-10能抑制Hp诱导的GES-1（29．6％、25．8％）和AGS（19．7％、21．1％）细胞凋亡（均P〈0．05）;IL-8能增强Hp诱导的GES-1细胞凋亡（19．9％,P〈0．05）。（2）Hp能上调GES-1和AGS细胞FasmRNA基础表达水平（89．0％和36．0％,P〈0．05）;IL-1β、IL-10对两种细胞FasmRNA基础表达无显著影响（P〉0．05）;IL-8能上调GES-1（33．0％）细胞FasmRNA基础表达（P〈0．05）。（3）IL-1β、IL-10能抑制FasL诱导的GES-1（30．3％、32．5％）和AGS（44．2％、51．5％）细胞凋亡（P〈0．05）;IL-8能增强FasL诱导的GES。1细胞凋亡（100％,P〈0．05）。结论Hp可通过上调Fas受体表达直接介导胃上皮细胞凋亡。Hp相关细胞因子IL-8可能通过上调Fas受体表达来增强Hp诱导的胃上皮细胞凋亡;IL—1β和IL-10可能通过其他机制来抑制Hp诱导的胃上皮细胞凋亡。     

半夏泻心汤及其拆方对Hp感染小鼠胃黏膜保护作用的研究

目的 探讨半夏泻心汤及其拆方对幽门螺杆菌相关性胃炎胃黏膜保护作用和对IFN-γ的影响.方法 采用灌胃造模的方法建立Hp感染性胃炎动物模型,检测半夏泻心汤给药后小鼠胃黏膜炎性细胞浸润程度和血清中IFN-γ含量的变化.将70只C57BL小鼠随机分为7组,分别为全方组、辛温组、甘温组、苦寒组、阳性对照组、空白组和模型组.除正常组外,其余小鼠以幽门螺杆菌悉尼菌株(SS1)灌胃造模并分别给予相应药物灌胃干预.治疗结束后,检测IFN-γ含量.结果 模型组小鼠血清中IFN-γ含量较空白组升高,差异具有统计学意义(P＜0.01);全方组、辛温组、甘温组、苦寒组、阳性对照组中IFN-γ含量降低显著,与模型组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 半夏泻心汤治疗Hp感染小鼠的作用机制可能与调节细胞免疫,下调血清中IFN-γ有关.     

半夏泻心汤治疗幽门螺杆菌性胃炎疗效观察

目的：探讨半夏泻心汤治疗幽门螺杆菌性胃炎（Hp性胃炎）的治疗效果。方法将84例Hp性胃炎患者随机分为试验组与对照组,试验组采用半夏泻心汤治疗,对照组采用常规三联治疗,对比治疗后的效果。结果试验组总有效率为92.10%,对照组为89.13%,2组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;试验组Hp根除率为81.58%,对照组为76.09%,2组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论半夏泻心汤治疗Hp性胃炎疗效显著,Hp清除率高,临床症状改善明显,值得推广。     

调衡方对Lewis肺癌细胞增殖及JAK—STAT信号通路的影响

目的：观察调衡方对Lewis肺癌细胞增殖凋亡及JAK-STAT通路的影响。方法：实验动物分为4组,灌服给药,制备调衡方小、中、大剂量含药血清,正常血清。又将细胞分为5组,即正常血清组（不含药血清）,小、中、大剂量含药血清组,中剂量含药血清＋AG490（JAK-STAT信号通路特异性抑制剂）干预组,分别孵育Lewis肺癌细胞株24 h后,MTT法检测对Lewis肺癌细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察Lewis肺癌细胞凋亡状况,RT-PCR法检测其对Lewis肺癌细胞Stat3、Stat5 mRNA的影响。结果：Lewis肺癌细胞经调衡方中、大剂量含药血清作用后,与对照组比较,细胞内Stat3含量降低至0.622±0.004、0.62±0.007（P〈0.01）,Stat5表达分别降低至0.700±0.034、0.649±0.033（P〈0.01）。结论：调衡方含药血清能显著抑制Lewis肺癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与下调stat3、stat5的基因表达,抑制细胞信号转导通路有关。     

补肾健脾方含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和细胞凋亡的影响

目的：探讨中药补肾健脾方含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法：制备补肾健脾方含药血清,分为高、中、低浓度组;另设复方斑蝥组和甲状腺素组作为阳性对照组,并以空白细胞组作为空白对照组。培养人肝癌细胞株SMMC-7721进行体外实验,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测各组培养24、48、72 h时细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：各药物组含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用与浓度呈负相关、与作用时间呈正相关,在5%浓度、48 h作用下达到抑制率的高峰。中药干预组细胞凋亡率呈现浓度依赖性,高浓度组显著高于低浓度组（P〈0.05）;复方斑蝥组的细胞凋亡率略低于中药高浓度组（P〉0.05）,甲状腺素片组略高于中药低浓度组（P〉0.05）。结论：补肾健脾方含药血清可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的增殖,具有诱导人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡的趋势。     

半夏泻心汤加减联合雷贝拉唑治疗反流性食管炎的临床观察

目的观察半夏泻心汤加减对反流性食管炎的治疗作用及复发率情况。方法将90例诊断为反流性食管炎的患者,随机分为治疗组和对照组,每组45例,对照组服用雷贝拉唑钠肠溶片及枸橼酸莫沙必利片治疗,治疗组在此基础上,加用半夏泻心汤加减治疗,疗程8周,随访4周。结果综合疗效比较：治疗组有效率为86．7％,对照组为77．8％,治疗组疗效优于对照组（P〈0．05）。症状积分比较：两组症状积分治疗前与治疗后比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。内镜下食管黏膜疗效比较：治疗组总有效率为88．6％对照组为84．1％,两组内镜下食管黏膜炎症改善比较差异无统计学意义（P〉0．05）。复发率比较,治疗组复发率低于对照组（P〈0．05）。结论半夏泻心汤加减联合雷贝拉唑治疗反流性食管炎,疗效明显优于单独使用雷贝拉唑,复发率亦降低,值得临床推广。     

半夏泻心汤加味治疗慢性萎缩性胃炎临床研究

目的：观察加味半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎（CAG）的治疗效果,方法：将73例经胃镜和病理确诊为CAG的患者随机分为两组,治疗组43例,给予加味半夏泻心汤煎剂,每日一剂,分两次服,对照组30例,给予维酶素片,每日三次,每次1．0g,两组均制定专卡统计治疗前后症状总积分,并于治疗两个月后一周内复查胃镜、病理及HP感染情况。结果：治疗组在改善症状、炎症、肠化、异型增生及HP感染等方面均优于对照组（P＜0．01或P＜0．05）。结论：加味半夏泻心汤对CAG有较好的治疗作用。     

miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其靶向调控CTDP1基因表达机制

目的：探讨miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的分子机制。方法：取经病理诊断确诊为胃癌的68例患者的胃癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织、癌旁组织和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞、人胃癌细胞（MKN-28、MGC-803、 MKN-45、 SGC-7901和HGC-27）中miR-431-3p及羧基末端结构域磷酸酶1 (CTDP1)mRNA表达水平,Western blotting法检测上述细胞中CTDP1蛋白和各组SGC-7901细胞中细胞色素C(Cyt C)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析miR-431-3p与CTDP1 mRNA表达水平的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-431-3p和CTDP1的靶向关系。将miR-431-3p mimic和CTDP1过表达慢病毒分别或同时转染至SGC-7901细胞中,将细胞分为空白组、空载过表达（mimic NC）组、miR-431-3p过表达（miR-431-3p mimic）组、空载慢病毒（Ve...     

复方中药紫龙金抑制肾癌ketr-3细胞增殖的血清药理学研究

目的观察复方中药紫龙金含药血清对人肾癌ketr-3细胞生长增殖的抑制作用。方法运用血清药理学方法,选择不同浓度的含紫龙金大鼠血清与ketr-3细胞共同孵育,于不同时间用生物倒置显微镜观察细胞形态变化,W ST-8比色法检测紫龙金含药血清对人肾癌ketr-3细胞的增殖抑制率。结果紫龙金含药血清作用ketr-3细胞48 h后,细胞呈现典型的凋亡形态学改变,可见部分细胞变圆,体积变小,有凋亡小体产生;且抑制作用呈现时间和剂量依赖关系,与对照组比较,各浓度含药血清（5%、10%、20%）作用24 h后细胞增殖抑制率无明显差异（P〉0.05）,作用48 h后细胞增殖抑制率分别为4.9%（P〉0.05）、22.6%（P〈0.01）、28.7%（P〈0.01）。结论紫龙金含药血清可有效抑制人肾癌ketr-3细胞体外增殖。     

健脾解毒方通过抑制环氧化酶2下调幽门螺杆菌诱导的人胃癌细胞血管内皮生长因子表达

目的：探讨健脾解毒方对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染胃癌细胞诱导的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的调控作用及可能的机制。方法：采用Hp标准株NCTC11637与人胃癌MKN45细胞共培养的方法感染MKN45细胞,实验中共分7组：对照组、Hp感染组、NS398抑制组、空白血清组和5%、10%、20%健脾解毒方药物血清组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测Hp感染对人胃癌MKN45细胞VEGF和环氧化酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）mRNA表达的影响及健脾解毒方血清对Hp感染诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF和COX-2mRNA表达的影响;采用COX-2特异性抑制剂NS398（50μmol/L）抑制COX-2的表达后,检测Hp感染后人胃癌MKN45细胞VEGF mRNA表达的变化。结果：与对照组比较,Hp感染MKN45细胞6h后,Hp感染组COX-2mRNA的表达明显上调（P〈0.01）;感染12h后,VEGF mRNA表达亦明显上调（P〈0.01）;而采用COX-2特异性抑制剂NS398抑制COX-2表达后,Hp感染组VEGF mRNA的表达相比抑制前明显下调（P〈0.01）。与Hp感染组比较,5%、10%和20%健脾解毒方药物血清均可下调Hp诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF和COX-2mRNA的表达,并呈一定的剂量依赖效应。结论：Hp感染可诱导人胃癌细胞VEGF和COX-2表达,健脾解毒方通过下调COX-2表达进而下调VEGF的表达,这可能是其防治胃癌的重要作用机制之一。     

化痰行瘀汤对肝纤维化大鼠血清肝功能及透明质酸含量的影响

[目的]通过实验研究观察化痰行瘀汤对肝纤维化的疗效,并进一步探讨其抗纤维化的作用机制。[方法]60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、化痰行瘀汤低、中、高剂量组、复方鳖甲软肝片组6组,每组10只。采用皮下注射四氯化碳（CCl4）橄榄油溶液复制肝纤维化模型,采用全自动生化仪检测血清肝功能,放免法检测血清透明质酸含量。[结果]与模型对照组比较,化痰行瘀汤高剂量组可明显降低血清天冬氨酸氨基转移酶含量（P〈0.05）;化痰行瘀汤中、高剂量组可明显降低血清透明质酸含量（P〈0.05）。[结论]化痰行瘀汤对实验性肝纤维化大鼠具有护肝、抗纤维化的功效。     

小柴胡汤含药血清诱导SSMC-7721人肝癌细胞株分化研究

目的：观察小柴胡汤含药血清对SMMC-7721人肝癌细胞是否具有分化诱导作用,并探讨其分化诱导的作用机制。方法：经药物作用后,观察细胞形态、MTT抑制率、乳酸脱氢酶（LDH）、琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞周期的情况。结果：小柴胡汤含药血清使SSMC-7721细胞株有向成熟细胞形态分化的趋势;MTT抑制作用增强;细胞内LDH活性降低、SDH活性上升;流式测定S期细胞数减少,细胞周期阻滞于G0/G1期。其中以低剂量组效果最为显著（P〈0.05）。结论：小柴胡汤含药血清可诱导SSMC-7721细胞株向成熟细胞分化,其作用机制可能与降低细胞内LDH活性、升高SDH活性,并且将细胞阻滞于G0/G1期有关。     

依达拉奉对肺泡Ⅱ型上皮细胞NF-κB和IL-6,IL-8表达及凋亡的影响

目的探讨依达拉奉对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响及NF-κB和白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)表达。方法体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞,用过氧化氢氧化应激建立肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡细胞模型,将细胞分为对照组、过氧化氢组、依达拉奉-过氧化氢组。用MTT法检测依达拉奉对肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测依达拉奉对氧化应激肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞凋亡的影响,采用ELISA试剂盒及谷胱甘肽(GSH)、脂质过氧化物(MDA)试剂盒检测IL-6、IL-8及GSH、MDA含量,用Western-blot方法检测氧化应激肺泡Ⅱ型上皮细胞中的NF-κB蛋白表达。结果依达拉奉-过氧化氢组细胞生长抑制率为(22.3±3.1)%,明显低于过氧化氢组[(37.5±2.4)%],差异有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉-过氧化氢组MDA含量低于过氧化氢组,GSH含量高于过氧化氢组,差异均有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉-过氧化氢组IL-6、IL-8含量低于过氧化氢组,差异均有统计学意义(P<0.05)。依达拉奉-过氧化氢组细胞凋亡率[(14.67±0.50)%]明显低于过氧化氢组[(38.88±0.80)%],差异有统计学意义(P<0.05)。过氧化氢+依达拉奉组NF-κB蛋白水平(2.106±0.012)低于过氧化氢组(4.216±0.127),差异有统计学意义(P<0.05)。结论依达拉奉具有抑制氧化应激后所诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡、下调NF-kB和IL-6、IL-8表达的作用。