血吸虫重组卡介苗—Sj20GTST疫苗的构建及免疫原性的研究

目的 构建含日本血吸虫相对分子质量为２６０００的抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因的 且卡介菌（ＲＢＣＧ）疫苗,观察其对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的免疫保护作用。方法 采用分子生物学技术,将Ｓｊ２６ＧＳＴ ｃＤＮＡ克隆到人结核杆菌热休克蛋蛋白（ＳＨＰ）７０启动子下游,构成融合基因,再将事基因亚克隆到Ｅ,ｃｏｎｌｉＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ）疫苗,经热诱导,在ＢＣＧ中Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原。用ｒＢＣ     

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗接种后保护力的观察

为了探讨血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用,采用１０６ＣＦＵ和１０８ＣＦＵ重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗皮下接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠,接种后８周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后６周剖杀小鼠,计算减虫率、减卵率,同时进行虫卵肉芽肿周长和面积测量,以及抗体水平和抗原水平测定,同时设有ＰＢＳ对照组。结果表明重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫小鼠后,１０６ＣＦＵ、１０８ＣＦＵ组与对照组相比,减虫率分别为２７．３４％、１６．６４％,减卵率分别为５５．７５％、６０．５０％,虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积、免疫后血清抗体水平差别均具有非常显著意义;１０８ＣＦＵ与１０６ＣＦＵ组相比,血清抗原水平差别具有显著意义,说明血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗是一种比较理想的新型疫苗,值得进一步深入研究     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠免疫应答的影响

采用日本血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫８周时,断头取血,取脾脏,取腹腔巨噬细胞。以淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力,以ＮＯ释放量检测巨噬细胞吞噬活性,以ＥＬＩＳＡ试剂盒检测血清及脾淋巴细胞培养上清的白细胞介素２（ＩＬ－２）和干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）的含量。结果表明,ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗以 １０~６ＣＦＵ剂量经皮下免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞增殖能力明显高于对照组、载体组和ＢＣＧ组（均为Ｐ＜０．０５）;小鼠腹腔巨噬细胞ＮＯ的含量明显高于对照组和载体组（均为Ｐ＜０．０１）;小鼠血清ＩＬ－２的含量明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）和载体组（Ｐ＜０．０５）;而小鼠脾淋巴细胞培养上清ＩＬ－２的含量分别高于对照组４４％、载体组４８％和ＢＣＢ组４２％;小鼠血清ＩＦＮ－γ的含量分别高于对照组２０％、载体组１９％和ＢＣＧ组１３％,均有升高趋势、结果提示,ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗能明显增强小鼠的免疫应答反应,其抗感染作用一方面与ＢＣＧ本身的佐剂特性有关,另一方面与机体产生抗Ｓｊ２６－ＧＳＴ特异性抗体有关。     

血吸虫重组BCG—Sj26GST疫苗接种后保护力的观察

为了探讨血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用，采用１０＾６ＣＦＵ和１０＾６ＣＦＵ重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗皮下接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，接种后８周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染后６周剖杀小鼠，计算减虫率、减卵率，同时进行虫卵肉芽肿周长和面积测量，以及抗体水平和抗原水平测定，同时设有ＰＢＳ对照组。结果表明重组ＢＣＧＴ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫小鼠后，１０＾６ＣＦＵ、     

IL—12对日本血吸虫重组SjGST—Sj32免疫小鼠攻击感染后虫 …

目的 观察白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）对重组日本血吸虫谷胱苷肽－Ｓ－转移酶－３２ｋＤ融合蛋白（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２）蛋白免疫小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小的影响。方法 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠３６只随机分别ＩＬ－１２加ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组、ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组和磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）组，第３次免疫后４周，经腹部贴片感染１０条尾蚴，４５天后杀鼠取肝组织，常规染色，光镜下进行组织学观察及单个虫卵肉芽肿大小     

抗重组Sj26（rSj26）GST多抗金免疫测定法检测日本血吸 …

为探讨ｆＳｊ２６ＧＳＴ抗原诊断日本血吸虫病的应用价值，本研究以抗ｒＳｊ２６ＧＳＴ多克隆抗体为捕获抗体和金标记抗体，建立了夹心斑点金免疫测定法（Ｓ－ＤＩＧＦＡ０检测日本血吸虫循环抗原的简易免疫学方法。同时以ＳＥＡ－ＤＩＧＦＡ和ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ检测抗体作对照。结果三种方法检测慢性血吸虫病人的敏感性分别为７６．７％〉９８．９％和９６．５％；特异性分别为９７．５％，９６．３％和９１．２％。初步试验结果表     

佐剂对日本血吸虫31／32kd蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋｄ蛋白（Ｓｊ３１／３２）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｉｅｆｉｎ（ＰＡＯ）佐剂免疫小鼠，同时比较了Ｓｊ３１／３２辅以福氏完全佐剂（ＦＣＡ）对小鼠保护性免疫力的影响。Ｓｊ３１／３２＋ＰＡＯ组小鼠减虫率为４３．１７％，肝减卵率为６７．０２％，Ｓｊ３１／３２＋ＦＣＡ组小鼠减虫率为２８．７４％，肝减卵率为６４．２４％，Ｓｊ３１／３２组小鼠减虫率为２６．９９％，肝减卵率为５１．     

日本血吸虫重组BCG—Sj26GST疫苗对小鼠免疫应答的影响

采用日本血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫８周时,断头取血,取脾脏,取腹腔巨噬细胞。以淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力,以ＮＯ湫得检测巨噬细胞吞噬活性,以ＥＬＩＳＡ试剂盒检测血清及脾淋巴细胞培养上清的白细胞介素２（ＩＬ－２＿和干扰素γ（ＩＦＮ－γ）的含量。结果表明,ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗以１０＾－６ＣＦＵ剂量经皮下免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞增殖能力明显高于     

重组日本血吸虫SjGST-Sj32蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

应用基因工程技术分别表达出ＳｊＧＳＴＳｊ３２,Ｓｊ３２和ＳｊＧＳＴ,用于保护性免疫的动物实验及其体液免疫机制的初步探讨。结果：与对照组相比,重组ＳｊＧＳＴＳｊ３２组,Ｓｊ３２组,Ｓｊ３２＋ＳｊＧＳＴ组均有明显的减虫效果（Ｐ＜０．０５）。上述三组及ＳｊＧＳＴ组的肝脏虫卵计数均较对照组为少（Ｐ＜０．０１）。提示重组Ｓｊ３２ｋＤ蛋白可诱导小鼠产生明显的抗日本血吸虫攻击感染的保护性免疫及抗生殖免疫效果,而ＳｊＧＳＴ仅表现出一定的抗生殖免疫效果。     

日本血吸虫26ku谷胱甘肽硫—转移酶基因的克隆及分析

目的 扩增日本血吸虫２６ｋｕ谷胱甘肽硫－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因片段,构建其重组原核载体,以研制ＳｊＧＳＴ重组克隆。方法 根据已知基因序列设计一对引物,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增Ｓｊ２６ＧＳＴ目的基因ｃＤＮＡ片段,将其克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ＫＳ）质粒中,并经酶切、ＰＣＲ和测序鉴定。结果 获得ＧＳＴ－ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ＫＳ）重组克隆。结论 本实验获得Ｓｊ２６ＧＳＴ重组克隆,为进一步研     

重组日本血吸虫SjGT—Sj32蛋白诱导小鼠保护免疫的研究

应用基因工程技术分别表达出ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２,Ｓｊ３２和ＳｊＧＳＴ,用于保护性免疫的动物实验及其体液免疫机制的初步探讨。结果：与对照组相比,重组ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组,Ｓｊ３２组,Ｓｊ３２＋ＳｊＧＳＴ组均有明显的减虫效果。上述三组及ＳｊＧＳＴ组的肝脏虫卵计数的均较对照组为少。提示重组Ｓｊ３２ｋＤ蛋白可诱导小鼠产生明显的抗日本血吸虫攻击感染的保护性免疫及抗生殖免疫效果,而ＳｊＧＳＴ仅表现出一定的抗     

血吸虫重组BCG—Sj26GST疫苗对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成？…

目的 检测血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗对小鼠肝虫卵肉芽肿细胞内ＴＮＦ－ｍＲＮＡ表达的影响。方法 用１０＾６ＣＦＵ疫苗皮下注射和腹腔注射分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠,免疫后８Ｗ用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后６Ｗ剖杀小鼠,分离肝脏,运用原位杂交技术检测ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达。结果 疫苗免疫,尾蚴攻击后小鼠肝虫卵肉芽肿细胞内ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达显著加强。结论 血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗Sj22.6kDa的免疫学活性鉴定

目的：对重组Ｓｊ２２．６ｋＤａ抗原（ｒＳｊ２２．６）进行免疫学活性鉴定,了解其作为疫苗候选抗原的潜力。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应确定ｒＳｊ２２．６的抗原性;将ｒＳｊ２２．６注射家兔,制备特异抗血清;以血吸虫尾蚴对Ｃ５７小鼠进行攻击感染,初步鉴定其免疫保护力。结果：ｒＳｊ２２．６可与特异性抗体发生反应,并刺激家兔产生特异性抗体应答,抗体滴度为１∶１２８０。攻击感染中,免疫组小鼠的减虫率达７７．２％。结论：ｒＳｊ２２．６具有良好的免疫学活性,在诱导抗日本血吸虫感染方面具有一定的潜力     

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成过程中TNF-αmRNA表达的影响

目的 检测血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗对小鼠肝虫卵肉芽肿细胞内ＴＮＦ－ｍＲＮＡ表达的影响。方法 用１０～６ＣＦＵ疫苗皮下注射和腹腔注射分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠,免疫后８Ｗ用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后６Ｗ剖杀小鼠,分离肝脏,运用原位杂交技术检测ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ表达。结果 疫苗免疫,尾蚴攻击后小鼠肝虫卵肉芽肿细胞内ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ表达显著加强。结论 血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗能促进宿主Ｔｈ１反应,加强宿主抗血吸虫感染的保护性免疫力。     

日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离、纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原（ｒＳｊ３２）；用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原、日本血吸虫成虫抗原（ＡＷＡ）和可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）分别检测慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人、钩虫病人和健康人血清抗体。结果表明：纯化的ｒＳｊ３２分子量为３７ｋＤ，有较好的免疫活性；用其检测日本血吸虫病的敏感性和特异性与虫源性抗原（ＡＷＡ和ＳＥＡ）无显著性差异。提示ｒＳｊ３２可代替ＡＷＡ和ＳＥＡ用于日本血吸虫病诊断     

日本血吸虫未成熟卵对小鼠肝肉芽肿形成的免疫学影响

目的探讨日本血吸虫未成熟卵诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚免疫的效果及其对小鼠肝肉芽肿形成的影响。方法采用未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及其不同组分抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠产生的抗病免疫能力。结果经ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫后，均可明显地降低攻击感染后免疫鼠的肝肉芽肿数目和大小。与对照组比较，上述两者免疫后的小鼠，其肝肉芽肿平均直径分别下降了２９．２６％和４９．６４％，尤以ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原的免疫效果为佳，且感染鼠脾重明显下降（Ｐ＜０．０１）。但是成熟虫卵可溶性抗原以及ＳＩＥＡ－１分部抗原免疫对降低肝卵肉芽肿数量和大小以及脾肿大程度均无明显作用，甚至刺激肉芽肿反应增强。结论ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫可诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚发育的作用，并明显抑制虫卵肉芽肿的形成。     

中山医科大学博士后吴忠道发现新的日本血吸虫基因

中山医科大学基础医学博士后吴忠道在站研究发现新的日本血吸虫基因，已被ＧｅｎＢａｎＫ接受进入新序列号。吴博士在站２年间由余新炳教授指导下开展研究工作。通过对已构建的日本血吸虫（中国大陆株）成虫ｃＤＮＡ文库（ＳｊｃＤＮＡ）的免疫学筛选分离和鉴定血吸虫重组抗原ｃＤＮＡ克隆，应用对再感染具有抵抗力的个体混合血清，从ＳｊｃＤＮＡ文库中筛选到５个日本血吸虫抗原基因（ｃＤＮＡ）克隆，１个为ＳｊＧＳＴ基因克隆，另４个为日本血吸虫未知基因重组克隆，其ＥＳＴ序列均已被ＧｅｎＢａｎＫ接受并获得进入新序列号，经初步的免…     

日本血吸虫26ku抗原基因在分枝杆菌和大肠杆菌中的高效表达

构建了大肠杆菌－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００，并将日本血吸虫２６ｋｕ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因在分枝杆菌中进行了克隆和表达。以质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ｓｋ为骨架，分别克卫生玫分枝杆菌质粒复制基因、Ｎｅｏ基因（编码卡那霉素抗性）以及人结核杆菌热休克蛋白７０（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｓｐ７０）的启动子，并带有质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ的多克隆位点，构建成分枝杆菌－大肠杆菌穿梭     

日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫的研究

为探讨血吸虫ＤＮＡ疫苗保护性免疫效果,首先构建、鉴定和表达日本血吸虫ＤＮＡ疫苗（ｐＣＤ－Ｓｊ３２）。实验结果表明：ｐＣＤ－Ｓｊ３２免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠能诱导产生抗日本血吸虫感染免疫力,减虫率为３５．６％￣４４．４％,减卵率为３９．４％￣６９．０％;１００μｇＤＮＡ一次肌肉注射,免疫后８周攻击感染组的效果好;ＣＤ８＾＋淋巴细胞、ＩＬ－２、ＴＮＦ和ＩＮＦ－γ可能在血吸虫病免疫功能调控中起重要作用;ｐＣ     

日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫的研究

为探讨血吸虫ＤＮＡ疫苗保护性免疫效果,首先构建、鉴定和表达日本血吸虫ＤＮＡ疫苗（ｐＣＤ－Ｓｊ３２）。实验结果表明：ｐＣＤ－Ｓｊ３２免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠能诱导产生抗日本血吸虫感染免疫力,减虫率为３５．６％～４４．４％,减卵率为３９．４％～６９．０％;１００μｇＤＮＡ一次肌肉注射,免疫后８周攻击感染组的效果好;ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞、ＩＬ－２、ＴＮＦ和ＩＮＦ－γ可能在血吸虫病免疫功能调控中起重要作用;ｐＣＤ－Ｓｊ３２能诱导宿主产生高滴度特异性抗体,并在体外能介导巨噬细胞产生抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）免疫效应。结果提示,ｐＣＤ－Ｓｊ３２有可能发展为新的预防血吸虫病的亚单位疫苗。