核转录因子-κB在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达

目的建立大鼠视网膜缺血再灌注(retinal ischemical reperfusion injury,RIRI)模型,观察不同程度损伤的视网膜组织病理改变,检测凋亡的存在,探讨核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在大鼠RIRI中的表达。方法SD大鼠随机分为角膜损伤组和缺血再灌注组,分别建立角膜损伤模型和建立15kPa、60min高眼压视网膜缺血模型,光镜观察视网膜损伤后的组织病理改变,原位细胞凋亡检测,免疫组织化学检测NF-κB的表达情况。结果角膜损伤组视网膜无改变,缺血再灌注组出现组织病理改变,包括视网膜水肿,空泡变性,核固缩、溶解,结构紊乱等,随再灌注时间的延长,视网膜损害加重。原位细胞凋亡检测中,缺血再灌注组的凋亡细胞阳性表达均分布于神经节细胞层及内核层细胞,24h时表达最强。NF-κB在再灌注6h开始表达,24h表达最强。结论RIRI主要导致神经节细胞层及内核层细胞损伤,NF-κB的表达和凋亡可能是损伤的重要机制,且二者有着密切联系,表现出一致的规律性。     

NF-κB在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的了解NF-κB在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义.方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型,以SABC法检测NF-κB在视网膜中的表达,做统计学处理.结果NF-κB在视网膜缺血再灌注后6h开始表达,第24 h达到最高峰,48h开始表达减弱.结论NF-κB在视网膜缺血再灌注损伤中起重要作用.     

视网膜缺血再灌注损伤后HSP70、NF-κB的表达和细胞凋亡的关系

目的探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后热休克蛋白70（HSP70）、核蛋白因子-κB（NF-κB）表达和损伤神经细胞凋亡的关系。方法前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，28只大鼠随机分为正常组和缺血再灌注组，后者又按照再灌注后不同时间段分为1、6、12、24、48、72h组。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（TUNEL）法检测视网膜神经细胞凋亡指数（AI），过氧化物酶标记的链酶卵白素（SP）免疫组织化学法检测视网膜组织中HSP70、NF-κB的表达。结果视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h，并逐渐递增，24h达到高峰．48h开始下降，72h不明显。HSP70在再灌注后1h即有表达，随时间段延长表达逐渐增加，至再灌注后24h达到高峰．之后渐下降。NF-κB的表达变化与凋亡细胞变化的规律基本一致。结论视网膜缺血再灌注损伤导致神经节细胞的凋亡：HSP70和NF-κB在视网膜缺血再灌注损伤中表达升高，对神经细胞的凋亡起着重要的调节作用。     

核因子-κB诱骗寡核苷酸抑制大鼠视网膜缺血再灌注损伤

目的:研究核因子-κB诱骗寡核苷酸(nuclear factor-κB decoy oligodeoxynucleotide,NF-κB decoy ODN)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用.方法:设计、合成NF-κB decoy ODN和错配NF-κB decoy ODN的核苷酸序列.采用升高眼内压的方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型.缺血前10 min,玻璃体内注射NF-κB decoy ODN或错配NF-κB decoy ODN.再灌注24 h后,观察视网膜的组织学变化,测定视网膜的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活力.检测缺血前10 min和再灌注24 h的闪光视网膜电图(flash electroretinography,F-ERG),计算其b波振幅恢复率.结果:缺血的大鼠视网膜再灌注24 h后,视网膜明显充血、水肿,有许多白细胞浸润,神经节细胞和内核层细胞减少,且视网膜MPO活力增加(P＜0.05)、b波振幅恢复率下降(P＜0.05).玻璃体注射NF-κB decoy ODN的大鼠,视网膜的损伤性组织学改变减轻,MPO活力降低,b波振幅恢复率增加.而玻璃体注射错配NF-κB decoy ODN则无此作用.结论:玻璃体注射NF-κB decoy ODN能有效抑制大鼠视网膜缺血再灌注损伤,保护视网膜功能.     

视网膜缺血再灌注损伤中碱性成纤维细胞生长因子对核转录因子kappa B表达的影响

核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B，NF—κB)属于诱导性反式作用因子，在高等生物接受外界刺激后发生的细胞早期反应和基因表达方面起重要调节作用。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)具有促细胞分裂作用，可促进神经元存活和轴突再生。我们通过免疫组织化学技术对鼠视网膜缺血再灌注损伤中NF—κB的表达以及bFGF对NF-κB表达的影响进行了初步的研究。     

核因子-κB与视网膜疾病

核因子-κB又称κ基因结合核因子（NF-κB），是一类参与一系列基因表达调控的关键性核转录因子。多种不同的刺激信号可激活核转录因子参与细胞生长、分化、黏附、凋亡及炎症反应。作为一种多向性调节蛋白，全身炎症反应中伴有多器官NF-κB的活化、介导多种炎症基因的表达。NF-κB介导细胞存活信号，防止细胞凋亡，其信号通路可能是TNF受体信号转导途径、诱导抗凋亡基因Bcl-2家族的表达、诱导超氧化物歧化酶的表达增加及调控细胞因子。但某些情况下，NF-κB也能诱导细胞凋亡，提示NF-κB与凋亡的关系可能是随刺激因素的变化、细胞的不同种类及不同发育阶段而变化的。研究表明在许多视网膜疾病中，NF-κB都不同程度地被激活。对NF-κB的分子生物学特性、生理功能及与视网膜疾病的关系作一综述。     

家兔视网膜缺血-再灌注损伤后形态学的动态变化

目的　观察家兔视网膜缺血 -再灌注后视网膜结构的动态变化。方法　通过前房灌注加压至 16 .7k Pa,维持 1h,建立缺血模型 ,观察再灌注 2～ 14d内其结构变化及内层视网膜平均厚度的变化。结果　家兔视网膜在缺血 -再灌注后 2～ 14d内表现为神经细胞持续丢失 ,视网膜层次逐渐不清 ,萎缩、变薄。其中神经节细胞、神经纤维及视锥、视杆对缺血最敏感 ,外颗粒层次之 ,内颗粒层最能耐受缺血 -再灌注后的损伤。结论　视网膜缺血 -再灌注损伤是个持续性、进行性的损伤过程 ,与功能变化相一致     

视网膜缺血--再灌注损伤的保护

视网膜缺血-再灌注损伤是目前研究较多的一个课题,其损伤机制复杂,目前通过各种实验研究探索其损伤机制以及减轻或防止缺血-再灌注损伤的药物和方法很多.现就视网膜缺血-再灌注损伤的保护机制进行总结归纳.     

SN50对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的　探讨核因子-κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ-κＢ,ＮＦ-κＢ）活性抑制剂ＳＮ５０对大鼠视网膜缺血再灌注损伤（ｒｅｔｉｎａｌｉｓｃｈｅｍｉｃａｌｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ,ＲＩＲＩ）的保护作用。方法　２７只成年雄性ＳＤ大鼠随机分为正常对照组、ＲＩＲＩ组、ＲＩＲＩ＋ＳＮ５０组,每组９只,建立ＲＩＲＩ动物模型,ＲＩＲＩ后６ｈ、２４ｈ、７２ｈＨＥ染色观察大鼠视网膜病理变化,免疫组织化学检测ＮＦ-κＢ的表达,实时定量ＰＣＲ检测ＴＮＦ-α的表达。结果　ＲＩＲＩ组ＲＩＲＩ６ｈ后视网膜出现组织轻度水肿,少量细胞变性,随着时间的延长,视网膜的损伤逐渐加重;ＲＩＲＩ＋ＳＮ５０组视网膜的损伤明显减轻。ＲＩＲＩ后６ｈ视网膜上可见ＮＦ-κＢ阳性表达,经过ＳＮ５０注射处理后,ＮＦ-κＢ的阳性表达在ＲＩＲＩ后２４ｈ明显减弱;经过ＳＮ５０注射处理后,与ＲＩＲＩ组比较,２４ｈ后视网膜的ＴＮＦ-α表达差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　ＳＮ５０对ＲＩＲＩ具有保护作用。     

三七总皂甙对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响

目的 建立大鼠高眼压视网膜缺血再灌注(IR)模型,观察三七总皂甙(PNS)对大鼠视网膜IR损伤的防护作用和对核转录因子-kB(NF-kB)表达的影响.方法 SD大鼠随机分为IR组、IR PNS组.建立112.5 mmHg、60 min高眼压视网膜缺血模型,在再灌注后不同时间段处死大鼠取出眼球,光镜观察视网膜损伤后的组织病理学改变,行原位细胞凋亡检测,免疫组织化学法检测NF-kB的表达情况.结果 IR组出现视网膜水肿、空泡变性、核固缩等组织病理学改变.IR PNS组视网膜组织形态学损害明显减轻.原位细胞凋亡检测IR组的凋亡细胞阳性表达明显高于IR PNS组(P＜0.05).IR组NF-kB的表达明显高于IR PNS组(P＜0.05),IR PNS组的NF-kB表达滞后.结论 PNS可通过抑制NF-kB的活化和减少凋亡而减轻视网膜IR损伤.     

视网膜缺血再灌注后即早基因C-FOS、C-JUN的表达

目的观察大鼠视网膜缺血再灌注(retinal ischemia reperfusion，RIR)后，凋亡即早基因c-los、e—jun及白介素1β(IL-1β)多肽在视网膜各层细胞中的表达变化，进一步明确凋亡即早基因和白介素1β与RIR损伤发生机制的关系。方法采用前房灌注生理盐水，形成130mmHg(17．3kPa)高眼压，诱导大鼠视网膜缺血60min，解除高眼压，建立RIR模型。缺血60min，再灌注1h、3h．6h、12h、24h后作视网膜石蜡切片，观察c—fos、c-jun及IL-1β的免疫组化结果。结果正常对照组未见c—fos、c-jun及IL-1β的表达，RIR后，c-fos、c—jun在视网膜神经节细胞层(ganglion cell layer，GCL)和内核层(inner nuclear layer，INE)的表达为，再灌注1h少量表达，3h达到高峰，6h开始下降，12h、24h几乎趋于正常组表达。IL-1β在再灌注12h、24h出现表达。而外核层(outer nuclear layer，ONE)几乎均无无阳性表达。结论c—fos、c-jun及IL-1β参与RIR损伤的发生，RIR中视网膜节细胞层和内核层细胞存在凋亡征象。     

家兔视网膜缺血-再灌注损伤后ERG的动态变化

目的 动脉观察家兔视网膜缺血－再灌注损伤后ＥＲＧ的ｂ波的变化。方法 应用前房灌注加压法使前房内压力高至１６ＫＰＡ,维持１小时,再灌注后的第２、７、１４天分别记录真ＥＲＧ,与缺血前ＥＲＧ相比较,观察Ｂ波的变化幅度。结果 缺血－再灌注后第２天,ＥＲＧ的Ｂ波已经开始下降,随时间延开,Ｂ波振幅呈性、进行性下降。结论 视网膜缺血－再灌注损伤在再灌注呈持续性、进行性改变。     

大鼠视网膜缺血再灌注后IL一1β的免疫组化研究

观察大鼠视网膜缺血再灌注(retinal ischemiareperfusion,RIR)后,白细胞介素1β(IL-1β)多肽在视网膜表达变化.方法采用前房灌注生理盐水,形成1 30mmHg(17.3kPa)高眼压,诱导大鼠视网膜缺血 60min,解除高眼压,建立RIR模型.缺血 60min,再灌注1 2h、48h作视网膜冰冻切片,IL-1β免疫组化观察.结果正常对照组未见IL β表达,RIR后12h、48h,视网膜神经节细层可见IL-1β表达.结论结果提示IL-1β多肽在蛋白质水平参与RIR损伤发生.     

视网膜缺血再灌注损伤后Caspases家族的表达及bFGF对其的影响

目的探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retina ischemia/reperfusion injury,RIRI)后半胱天冬氨酸酶(Caspases)家族的表达及碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对其表达的影响。方法采用升高眼内压的方法,制作实验性RIRI的大鼠模型。将28只Wistar大鼠随机分为正常组、缺血组和治疗组,其中后两组又分为再灌注后1、6、12、24、48、72h组。应用SP免疫组化法检测大鼠RIRI后视网膜组织中Caspase-2、Caspase-3的表达及玻璃体腔内注射外源性bFGF后对其表达的影响。结果正常组视网膜组织Caspase-2、Caspase-3不表达。缺血组6h开始出现Caspase-2的表达,24h达高峰,48h和72h下降;Caspase-3在视网膜组织的表达时段与Caspase-2的表达规律相似。bFGF治疗组各观察指标变化趋势基本同缺血组,但各时间段的表达强度明显减弱,两组比较,于再灌注6、12、24h时段差别具有统计学意义。结论Caspases家族参与了RIRI,导致神经细胞的凋亡;bFGF可以抑制Caspase-2、Caspase-3蛋白的表达,因此,bFGF在RIRI中可能通过抑制细胞凋亡而达到其保护作用。     

盐酸氟桂嗪对家兔视网膜缺血—再灌注损伤保护作用的ERG观察

目的 动态观察盐酸氟桂嗪对家兔视网膜缺血－再灌注损伤的保护作用。方法 应用前房灌注加压法使前房内压力升高至16kPa。维持１h后再灌注,再灌注后第2、7、14天分别记录其ERG,与缺血前ERG相比,观察b波的变化。药物治疗组在造成缺血前12h,缺血－再灌注即刻及再灌注后12h静脉给予药物治疗。结果 药物治疗组ERG的b波与正常眼相比无明显差异。结论 盐酸氟桂嗪对视网膜缺血－再灌注损伤有保护作用。     

Diosmin protects rat retina from ischemia/reperfusion injury

Abstract Objective: Diosmin, a natural flavone glycoside, possesses antioxidant activity and has been used to alleviate ischemia/reperfusion (I/R) injury. The aim of this study was to clarify whether the administration of diosmin has a protective effect against I/R injury induced using the high intraocular pressure (IOP) model in rat retina, and to determine the possible antioxidant mechanisms involved. Methods: Retinal I/R injury was induced in the rats by elevating the IOP to 110?mmHg for 60?min. Diosmin (100?mg/kg) or vehicle solution was administered intragastrically 30?min before the onset of ischemia and then daily after I/R injury until the animals were sacrificed. The levels of malondialdehyde (MDA) and the activities of total-superoxide dismutase (T-SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), and catalase (CAT) in the retinal tissues were determined 24?h after I/R injury. At 7 days post-I/R injury, electroretinograms (ERGs) were recorded, and the density of surviving retinal ganglion cells (RGCs) was estimated by counting retrograde tracer-labeled cells in whole-mounted retinas. Retinal histological changes were also examined and quantified using light microscopy. Results: Diosmin significantly decreased the MDA levels and increased the activities of T-SOD, GSH-Px, and CAT in the retina of rats compared with the ischemia group (P<0.05), and suppressed the I/R-induced reduction in the a- and b-wave amplitudes of the ERG (P<0.05). The thickness of the entire retina, inner nuclear layer, inner plexiform layer, and outer retinal layer and the number of cells in the ganglion cell layer were significantly less after I/R injury (P<0.05), and diosmin remarkably ameliorated these changes on retinal morphology. Diosmin also attenuated the I/R-induced loss of RGCs of the rat retina (P<0.05). Conclusion: Diosmin protected the retina from I/R injury, possibly via a mechanism involving the regulation of oxidative parameters.     

视网膜缺血再灌注损伤中Ref-1的表达及bFGF对其的影响

目的研究缺血再灌注损伤视网膜组织中无嘌呤／无嘧啶核酸内切酶／氧化还原因子-1（APE／Ref—1，Ref—1）表达的变化及玻璃体腔内注射碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对其的影响。方法建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤动物模型，于再灌注开始即刻玻璃体腔内注射bFGF2μg，利用SABC免疫组织化学法检测不同时段Ref—1蛋白在视网膜组织表达的变化，分析Ref—1蛋白与细胞凋亡的关系以及bFGF对其表达的影响。结果Ref—1蛋白在视网膜组织中的表达随着缺血再灌注时间的延长明显减少。bFGF治疗组Ref-1蛋白表达规律与缺血组相同，但其阳性表达率较同一时段缺血再灌注组有所增加。结论大鼠玻璃腔注射bFGF，可以上调Ref—1的表达，对视网膜缺血再灌注损伤起到修复的作用。     

特异性阻断剂Nec-1对视网膜缺血再灌注损伤模型小鼠坏死性凋亡的影响及作用

目的 探讨特异性阻断剂Nec-1对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia reperfusion injury,RIRI)模型中坏死性凋亡的影响及作用.方法 取60只野生型C57小鼠随机分为实验组、对照组及空白组.每组20只.在进行Nec-1对坏死性凋亡影响研究中,空白组15只小鼠不做任何处理,实验组15只小鼠给予玻璃体内注射2 μL Nec-1 (2 mol·L-1)预处理,对照组15只小鼠无预处理;预处理4h后实验组及对照组通过前房灌注法建立RIRI模型;再灌注损伤后3d,每种检测方法各取5只小鼠分别于取材后行Western blot、免疫荧光定量PCR、免疫荧光染色,检测以下基因mRNA和蛋白的表达变化:IL-13、IL-6、TNF-α、RIP3、RIP1及Caspase-8.在进行Nec-1对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的影响研究中,实验组、对照组及空白组各5只小鼠纳入荧光金标记.空白组小鼠荧光金标记后不做任何处理.荧光金标记7d后,实验组小鼠给予玻璃体内注射2μL Nec-1(2 mol·L-1)预处理,对照组无预处理.预处理4h后实验组及对照组通过前房灌注法建立RIRI模型.再灌注损伤后3d,收集视网膜组织行铺片RGC计数研究.结果 与对照组相比,实验组RIP3、RIPI的mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(均为P ＜0.001);IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达亦均明显降低,差异均有统计学意义(均为P＜0.001);Caspase-8的表达变化不明显,与对照组相比差异无统计学意义(P =0.654 8).通过Western blot检测发现,实验组RIP3蛋白表达较对照组明显降低,其变化趋势与RIP3 mRNA水平的变化基本一致.通过视网膜切片免疫荧光染色检测亦发现,实验组RIP3蛋白表达较对照组明显降低.实验组全视网膜铺片中每个视野下荧光金逆行标记RGC数(197.3±3.6)较对照组(107.5±6.1)明显增多,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 实验性RIRI模型中,Nec-1能阻断坏死性凋亡,并显著增加RGC数.