应用半巢式PCR检测我国北方一些蜱种中的查菲埃立克体

目的 :了解我国北方一些蜱种中是否携带查菲埃立克体 (Ehrlichiachaffeensis,简写为EC)。方法 :应用半巢式PCR检测蜱的带菌率 ,利用 16SrRNA基因测序方法鉴定所测序列。结果 :从内蒙古莫尔道嘎林业局采集的全沟硬蜱和森林革蜱中扩增出查菲埃立克体的 16SrRNA基因 ,阳性率分别是 39.0 6 %和 10 .0 0 % ;并从新疆精河采集的全沟硬蜱和草原革蜱中也测到相同的序列 ,最小阳性率分别为 5.79%和 1.6 7%。对莫尔道嘎采集的蜱标本进行 12 2 0bp的EC16SrRNA基因分析 ,结果与美国 1株查菲埃立克体 (GenBankU2 350 3)的相应序列只差 1个碱基。结论 :所使用的两套半巢式PCR扩增引物 ,可以简便快速地检测和分析蜱标本中可能存在的EC     

东北部分地区蜱传埃立克体DNA的检测

目的 了解东北部分地区一些蜱种中是否携带埃立克体。方法 应用16SrRNA基因构建的特异性引物进行半套式PCR,检测蜱标本中埃立克体DNA,并对扩增产物进行克隆和序列测定,与基因库中已知序列进行同源性比较。结果从辽宁清原和吉林抚松、和龙、敦化、珲春的全沟硬蜱(Lpersuleatus)和森林革蜱(D．silvarum)中均扩增出了查菲埃立克体DNA,扩增片段与美国分离株(基因库M73222)相对应片段完全一致,同源性为100％;另外从吉林抚松、珲春的全沟硬蜱中扩增出了粒细胞埃立克体DNA,扩增片段与美国分离株(基因库U02521)相对应片段相差2个碱基,同源性为99.7％。结论 发现东北部分地区存在埃立克体病的病原学迹象,提示该地区可能存在埃立克体病的自然疫源地。     

应用半巢式PCR检测我国北方一些蜱种中的查菲？…

目的：了解我国北方一些蜱种中是否携带查菲埃痒我体（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｉｓｉｓ,简写为ＥＣ）。方法：应用半巢式ＰＣＲ检测蜱的带菌率,利用１６ＳｒＲＮＡ基因测序方法鉴定所测序列。结果：从蒙古莫尔嘎林业局采集的全沟硬蜱和森林革蜱中扩增出查菲埃立克体的１６ＳｒＲＮＡ基因,阳性率分别是３９．０６％和１０．００％,并从新疆精河采 的全沟硬蜱和草原甘蜱中也测到相同的序列,最小阳必 ５．７８９％     

PCR检测东北地区部分蜱种中埃立克体DNA

埃立克体病是近几年发现的一种自然疫源性疾病 ,可感染人和动物。临床表现为发热、头痛、肌痛、恶心、呕吐 ,白细胞和血小板计数减少 ,严重者有中枢神经系统受损症状和肾衰 ,甚至死亡。目前研究结果表明 ,埃立克体病主要由蜱传播。我国很多地区存在类似于传播埃立克体病的潜在蜱种 ,且人蜱接触机会多。这些地区 ,经常出现发热待查病人或不明原因的热病暴发。我们应用特异性引物对东北地区部分蜱体进行了埃立克体ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增 ,以寻找埃立克体在东北地区存在的证据 ,弄清受感染的蜱种和埃立克体感染的潜在传播媒介。1　材料与方法　 ( …     

半套式反转录PCR检测水中肠道病毒

我们建立了一种半套式反转录ＰＣＲ检测水中肠道病毒的核酸，即采用一对半（三条）引物进行两次ＰＣＲ扩增，其敏感性可检测只含１个ｐｆｕ病毒的水样。本方法特异性强、敏感性高，可避免由于环境污染造成的假阳性结果；成本相对较低。     

湖北省随州市蜱携带埃立克体的核酸检测

埃立克体是一类严格细胞内寄生的革兰阴性菌,属无形体科(richettsiaceae),埃立克体属[1].主要寄生在单核细胞、巨噬细胞内,引起人或动物感染埃立克体病[2],蜱是其传播媒介[1].     

风疹病毒气溶胶的逆转录－半套式PCR检测

将已知浓度的风疹病毒液通过ＴＫ发生器进行气溶胶发生于气溶胶转鼓中，搅匀后用ＡＧＩ－１０和Ｃａｓｅｌｌａ采样器进行气溶胶采样，采样样品以不同浓度稀释后分别进行ＲＴ－ＳＮ－ＰＣＲ和细胞培养。敏感性试验结果表明１００ＴＣＩＤ（５０）的ＲＶ病毒仍可被ＲＴ－ＳＮ－ＰＣＲ检测到，扩增片段为２９３ｈＰ，经ＨｉｎｃⅡ酶切成１２１和１７２ｈＰ的酶切片段与理论设计吻合。相应的Ｖｅｒｏ细胞培养结果均为阴性。通过气溶胶耐喷和耐压试验证明ＲＶ在空气采样过程中因高压冲击衰亡。ＰＣＲ检测微生物核酸，可不过多地考虑其生物衰亡，只要靶基因存在即有检测的可能性。     

CR用于诊断人类埃立克体病方法的建立

「目的」建立一个快速、简便的检测埃立克体感染的实验方法,用于人类埃立克体病的临床诊断及分子流行病学调查。「方法」用查菲埃立克体分离株（９１ＨＥ１７）感染犬巨噬细胞（ＤＨ８２细胞）,感染４０天后收集ＤＨ８２细胞。根据查菲埃立克体１６ＳｒＲＮＡ基因序列设计引物,特生扩增查菲埃立克体ＤＮＡ。运用限制性片段长度多态性分析对ＰＣＲ扩增产物进行鉴定。「结果」扩增产物经过１．５％琼脂糖凝胶电泳和５％聚丙烯酰胺凝     

半套式PCR检测军团菌方法的建立及应用

目的建立检测军团菌的分子生物学方法。方法采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域和嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子(mip)基因编码区域进行扩增,同时采用半套式PCR对常规PCR的扩增结果进行确证。结果采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域进行扩增,5种军团菌(包括3种嗜肺军团菌)扩增产物均可见654bp的特异性扩增带,非军团菌菌株PCR结果为阴性,采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,扩增产物均可见430bp扩增带;同时采用常规PCR对嗜肺军团菌mip基因编码区域进行扩增,3种嗜肺军团菌扩增产物均可见649bp扩增带,非嗜肺军团菌菌株均为阴性,采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,3种嗜肺军团菌扩增产物均可见399bp扩增带。敏感性为10CFU/ml.并且应用此方法成功检测环境水样中分离的疑似军团菌菌株。结论半套式PCR经济、简便、快速、敏感、特异,为军团菌的早期检测、环境监测、控制暴发流行提供了有效手段。     

套式反转录PCR检测水中肠道病毒

依据文献报道的多种肠道病毒的核酸序列，设计合成了可用于多种肠道病毒检测的肠道病毒通用引物（外侧引物），以及可同时检测脊髓灰质炎（简称脊灰）病毒（Ⅰ～Ⅲ型）的特异性引物（内侧引物）。将两者结合起来可进行脊灰病毒的套式ＰＣＲ检验，既可检测多种肠道病毒，又可区分测定出脊灰病毒。此外对实验方法进行了改进，使操作方法更趋简单，中间可能污染的环节较少，结果稳定。与常规反转录ＰＣＲ比特异性强、敏感性高（可检测出只含１个ｐｆｕ病毒的水样）。     

用套式PCR检测b型流感嗜血杆菌

为快速 ，准确地诊断ｂ型流感嗜血杆菌感染，用Ｈｉｂ英膜型特异ＤＮＡ３条引物与氨基甲酸酯杀虫剂复配套式ＰＣＲ扩增Ｈｉｂ，并用Ｈｉａ、ｃ－ｆ英膜标准菌及４种其它细菌对作对照。     

长白山地区几种蜱携带埃立克体的调查

埃立克体是一类专性细胞内寄生的革兰阴性球型小体，该病原所引起的埃立克体病是一种新发现的人畜共患性自然疫源性疾病，通常由蜱传播。为此，我们在东北三省沿长白山一带选择林区边缘或林问小路两侧采集游离蜱，在辽宁省清原县主要采集牛羊体表的寄生蜱，凋查其埃立克体携带情况，以了解这些地区常见蜱种是否存在与人类疾病有关的埃立克体，为防病工作提供科学依据。     

用套式PCR检测b型流感嗜血杆菌

为快速、准确地诊断b型流感嗜血杆菌(Hib)感染,用Hib荚膜型特异DNA3条引物,套式PCR扩增Hib,并用Hia、c～f荚膜标准菌株及4种其它细菌作对照.只有Hib标准株出现特异条带,45例肺炎患儿鼻咽深部分泌物阳性率为22.2%,23例非呼吸道感染患儿阳性率为4.3%,8例化脓性脑膜炎患儿脑脊液2份阳性.认为用PCR检测Hib,比细菌培养更快速、敏感,特异性好,能及时准确诊断Hib感染.     

套式PCR检测骨髓移植人巨细胞病毒感染的研究

骨髓移植受体由于免疫抑制或免疫缺陷诱发人巨细胞病毒感染常常造成移植失败。应用套式ＰＣＲ对骨髓移植３３例受体和９８例供体检测发现，受体人巨细胞病毒的感染率（７５．８％，２５／３３）明显高于普通正常人（５７％，５６／９８），移植后４０天可达９３．９％（３１／３３），呈感染上升趋势。结果提示有必要在ＢＭＴ时对供受体进行人巨细胞病毒感染检测，便于ＢＭＴ术前选择和术后治疗，以提高移植的成功率。     

绥芬河口岸媒介蜱携带埃立克体及无形体感染的调查

目的 调查黑龙江绥芬河口岸地区蜱携带埃立克体及无形体感染的情况。方法 采集2019年4-6月343只活蜱（全沟硬蜱251只、嗜群血蜱84只和日本血蜱8只）样本,通过巢式PCR扩增无形体属和埃立克体属16SrRNA片段并与GenBank中相应基因序列进行比对分析。结果 在全沟硬蜱中扩增到4例无形体和1例埃立克体16SrRNA片段,而在其它三种蜱类（嗜群血蜱和日本血蜱）未扩增到目的片段,扩增片段经测序、比对后确定为Anaplasma phagocytophilum和Ehrlichia chaffeensis。在251只全沟硬蜱中,无形体检出率为1.59%(4/251),埃立克体为0.40%(1/251)。结论 绥芬河口岸地区中存在无形体和埃立克体病原,全沟硬蜱可能是该地区这两种病原的主要传播媒介蜱。     

套式PCR快速检测单增李斯特氏菌

根据GenBank数据库的单增李斯特氏菌iap基因设计两对引物,建立了套式PCR快速检测单增李斯特氏菌的方法。两对引物分别扩增出约1500bp和500bp片段,与预期大小一致。对菌液、模拟样品的检测表明,本方法能有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对PCR检验的干扰作用。套式PCR方法具有很好的特异性;灵敏性实验检测极限为101CFU／ml;人工污染猪肉检测极限为103CFU／ml;可在7h内完成检测,很适宜于进出口食品中单增李斯特氏菌的快速检测。     

土拉菌套式PCR检测技术的研究

[目的]为快速诊断土拉菌病拟建立套式PCR技术。[方法]设计出2对特异引物,取1986年1月收集的13名土拉菌病患者的抗凝血及对照组细菌,提取DNA并进行套式PCR扩增。[结果]套式PCR检测到患者血液中土拉菌阳性率为84.6%,对照组细菌均为阴性。用直接PCR能观察到10条位于900 bp的暗带。而行套式PCR后能观察到11条亮度较高为于550 bp处的条带。[结论]套式PCR方法检测土拉菌具有特异性强、敏感性高,简便快速的特点。     

套式PCR应用于恙虫病东方体媒介、鼠类血块及脾脏标本的实验检测研究

目的 :检测恙螨幼虫体内及鼠类标本中恙虫病东方体携带情况 ,预测流行趋势 ,评价套式PCR反应的敏感性和特异性 ,以进一步开展分子流行病学研究。方法 :参照文献中恙虫病东方体Karp株Sta 58群特异性抗原基因序列 ,合成两对DNA引物 ;应用套式PCR检测现场鼠体表恙螨幼虫体内及鼠类标本的恙虫病东方体DNA ;PCR扩增产物通过 2 %琼脂糖凝胶电泳分析和12 %PAGE电泳分析 ,并用PGEM - 3Zf( ) /HaeⅢDNA作为核酸分子量参照物 ,证实扩增产物是恙虫病东方体Sta 58kDa群特异性抗原基因 88bp片段。结果 :从送检的 2 9份鼠血块和 112份脾组织中均检出阳性 1份 ;从 39份恙螨幼虫体内检出阳性 8份。实验感染小鼠后 3d ,其血块及脾组织均未检出恙虫病东方体 ;而在感染后 6和 9d ,能从血块及脾组织中检出恙虫病东方体。结论 :套式PCR具有很高的敏感性和特异性 ,是疫源地及现场流行病学调查的有效手段