AML1-ETO融合蛋白致急性髓系白血病机制及靶向治疗

<正>AML1-ETO基因是急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)中最常见的融合基因之一,由t(8;21)(q22;q22)染色体易位导致位于21q22上的AML1基因(又名RUNX1基因)与8q22上的ETO基因(又称为RUNX1T1或MTG8基因)融合而成[1],其表达产物为AML1-ETO融合蛋白。大约12%-15%的AML患者有t(8;21),90%的     

WT1基因在AML中的意义

急性髓细胞白血病(AML)是源于造血干/祖细胞的恶性克隆性疾病,其发生发展过程中常伴多种染色体和基因异常,且与发病机制、疾病诊断、预后密切相关。然而,除基因突变外,转录后和翻译水平的修饰在AML的发病中也发挥着重要作用。肾母细胞瘤基因1(Wilm’s tumor gene1,WT1)具有抑癌基因和原癌基因的双重功能,是一种有效的转录调控因子,在细胞凋亡、存活及促进细胞增殖、生长、转移、分化和发育等方面起着至关重要的作用,在80%~90%的AML患者骨髓和外周血存在高表达,目前已作为AML患者微小残留病(MRD)监测的指标之一,在AML的免疫治疗方面也具有前景。本文就其功能及在AML中的作用作一综述。     

p15基因甲基化在骨髓增生异常综合征中的变化

目的:探索p15基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征中的变化及其在各亚型中的表达。方法:采用MSP(Methylation-specific-PCR)的方法,研究p15基因异常甲基化在32例骨髓增生异常综合征(MDS)及其各亚型中的发生率。结果:在MDS中p15基因异常甲基化占50%(16/32);在各亚型中的比例为:难治性贫血(RA)为0%,难治性贫血伴环状铁粒幼细胞(RA-S)为20%(1/5),难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)为57.1%(4/7),慢性粒单核细胞白血病(CMML)为71.4%(5/7),难治性贫血伴原始细胞转化型(RAEB-T)为85.7%(6/7)。其中4例是在亚型间转型或进展为急性髓性白血病(AML)时发生p15基因异常甲基化。结论:p15基因甲基化可能是MDS发病的原因之一,并与MDS病程进展有关;其各亚型并非独立的分型,亚型间因病情的进展而转型时易有p15基因异常甲基化的发生。     

AML1-MTG16融合基因的构建及其致瘤性的研究

目的　研究用重叠延伸剪接术 (splicing overlaping extension,SOE)方法获取少见融合基因的转录本。了解 AML1- MTG16融合基因的致瘤性。方法　通过 SOE重组 ,将 AML1、MTG16基因的两个片段经 PCR融合起来 ,形成 AML 1- MTG16融合基因的编码部分。将 MTG16 ,AML 1- MTG16融合基因及切除 AML1- MTG16融合基因 、 两个功能域 (motif)的基因片段 (AML1- MTG16 - S )分别插入p EGFP- C1,p Ds Red- N1载体中 ,利用脂质体转染 NIH3T3细胞 ,4 8小时后激光共聚焦显微镜观察。后G4 185 0 0 μg/ ml筛选 1月 ,获稳定转染细胞后绘制生长曲线 ;做软琼脂克隆形成实验及裸鼠致瘤实验。结果　测序结果表明 ,利用 SOE重组获得的 DNA片段含有 AML 1- MTG16融合基因完整的 CDS部分。比较p EGFP- C1、p EGFP- C1- AML1- MTG16质粒稳定转染的 NIH3T3细胞的生长曲线 ,后者增殖明显。软琼脂克隆形成试验显示 ,转染了 p EGFP- C1的 NIH3T3细胞在 6孔板内未形成克隆 ;转染了 p EGFP- C1-AML1- MTG16的 NIH3T3细胞在 6孔板内每孔平均形成 (47.7± 2 .7)个克隆 ,且使裸鼠致瘤。通过激光共聚焦显微镜观察 ,融合有 MTG16、AML 1- MTG16、AML 1- MTG16 - S 基因片段的绿荧光蛋白或红荧光蛋白在胞核表达 ,MTG16与 AML1- MTG16、AML1-     

利用聚合酶链反应在t(8;12)转录AML_1/ETO融合的检测

在见于急性粒细胞性白血病(AML)和偶见于骨髓增殖症(MDS)的t(8;21)(q22;q22),其结果导致22q22上的AML_1基因与8q22上的ETO基因相融合,产生嵌合AML_1/ETO转录产物,它是一种易位的分子标记物。     

骨髓增生异常综合征患者FHIT基因启动子甲基化改变

目的 研究骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者中脆性组氨酸三联基因(fragile histidine triad,FHIT)启动子的甲基化状况及其临床相关性.方法 应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术对54例不同阶段MDS患者骨髓标本FHIT基因甲基化状态进行检测.结果 54例MDS患者中26例(48.1%)发生FHIT基因甲基化,FHIT基因甲基化改变与患者的性别、血象、染色体异常等结果均无相关性,但与患者年龄具有显著的相关性(R:-0.291,P=0.033).FHIT基因甲基化频率在难治性贫血/伴有环形铁粒幼细胞的难治性贫血(refractory anemia/refractory anemia with ringed sideroblasts,RA/RAS)(1/6,16.7%)、伴多系病态造血的难治性血细胞减少症(refractory cytopenia with multilineage dysplasia,RCMD)和伴环形铁粒幼细胞的RCMD(refractory cytopenia with multilineage dysplasia with tinged blasts,RCMD-RS)(6/19,31.6%)、难治性贫血伴有原始细胞增多-1型(refractory anemia with excess blasts-1,RAEB-1)(7/11,63.6%)、难治性贫血伴原始细胞增多2型(refractory anemia with excess blasts-2,RAEB-2)(4/7,57.1%)和难治性贫血伴有原始细胞增多转化型/急性髓性自血病(refractory anemia with excess blasts in transformation/acute myeloid leukemia,RAEBt/AML)(8/11,72.7%)之间的差异无统计学意义(X2=8.417,P=0.077),但早期阶段(RA/RAS和RCMD)、晚期阶段(RAEB-1和RAEB-2)以及RAEBt/AML患者之间的差异具有统计学意义(X2:7.938,P:0.019),并且FHIT基因甲基化频率与国际预后评分系统分组预后危险程度也具有显著的正相关性(X2=10.110,P=0.018).结论 FHIT基因甲基化可能是促进MDS疾病进展的分子事件之一.     

AML1基因分子生物学研究进展

AML1基因定位于21号染色体q22，它编码的蛋白是一种锌指类转录因子，它在造血细胞中有普遍表达，它可与不同的基因发生融合导致不同类型的白血病的产生，与它相关的另－β亚单位基因也可同其他基因发生融合产生另一种类型白血病，这说明AML1基因在调控造血细胞的增殖、分化中发挥重要作用，它的结构改变可导致白血病的发生。本文主要综述有关AML1基因的研究进展。     

t(8;21)急性髓细胞白血病发病机制的研究进展

t(8;21)(q22,q22)是急性髓细胞白血病最常见的染色体易位，易位形成的AML1/ETO融合基因在白血病中起重要作用。AML1/ETO可抑制AML1靶基因的活化，也可通过多种途径影响多种转录因子，干扰细胞正常的增殖与分化而致细胞转化。     

ALOX5基因启动子SP-1结合位点多态性与急性髓系白血病易感性的关系

目的探讨花生四烯5-脂氧合酶基因(arachidonate 5-lipoxygenase gene, ALOX5)基因启动子SP-1结合位点的多态性与成人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)的相关性。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析236例成人AML(实验组)和179例健康体检者(对照组)中ALOX5基因启动子SP-1结合位点的多态性,经PCR产物直接测序法进行验证,利用DNAStar软件对测序结果进行分析。结果检测到ALOX5基因启动子SP-1结合位点有6种基因型,包括4/4、4/5、4/6、5/5、5/6和6/6。在实验组和对照组中,基因型4/4的分布频率为20.30%和10.10%(OR=1.976,95%CI:1.050～3.719,χ~2=4.539,P0.05);基因型4/6的分布频率为10.60%和26.80%(OR=0.386,95%CI:0.215～0.692,χ~2=10.513,P0.05);等位基因6的分布频率为26.90%和30.20%(OR=0.736,95%CI:0.528～1.025,χ~2=3.291,P0.05);SP-1位点的其余基因型、等位基因在实验组和对照组中分布频率差异无统计学意义(P0.05),其可能不是成人AML发病风险的预警指标。结论 ALOX5基因启动子区SP-1结合位点的基因型4/6,等位基因6可能与AML发病风险降低有关,而携带基因型4/4人群可能易患AML。     

骨髓增生异常综合征患者的asxli基因变异分析

目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者ASXL1基因变异的发生情况及其与其他基因变异和部分临床参数之间的相关性。方法采用PCR扩增产物直接测序法检测149例MDS患者ASXU、U2AF1、SF3B1、DNMT3A、TET2、IDH1/2、NPM1、FLT3-ITD.C-KIT等基因的变异情况。结果在149例患者中,ASXU基因变异的检出率为24.8%(37/149),变异率>5%的基因分别是U2AF1(22.8%)、TET2(11.4%)、DNMT3A(9.4%)、NPM1(8.1%).SF3B1(6.0%)。ASXL1变异最常见的共存变异基因为U2AF1(27.0%,10/37)及TET2(18.9%,7/37)。ASXL1变异组与野生组患者在中位年龄、MDS亚型、染色体核型、外周白细胞、血红蛋白、血小板水平及骨髓原始细胞计数等方面的差异均无统计学意义(P>0.05)o对29例ASXL1变异患者进行了有效的随访,其中11例进展为急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML),白血病转化率为37.9%。在92例野生型患者中,13例进展为AML,白血病转化率为14.1%。ASXL1变异组白血病转化率明显高于野生组,差异有统计学意义(PV 0.01)。结论ASXL1变异在MDS中有较高的发生率,并常与U2AF1及TET2基因变异共存,伴有该变异的患者具有更高的白血病转化率。     

一个MECP2重复综合征家系的临床特征及基因突变分析

目的 分析1个MECP2重复综合征家系的临床和分子遗传学特点,探讨MDS的临床表现、诊疗、鉴别诊断及基因结果,为MDS家庭提供遗传咨询,并提高临床医生对MDS的认识。方法 报道一个家系5例男性患者临床表型,提取该家系13名成员基因送检并进行相关分析。结果 5例患者有肌张力障碍,运动发育迟缓,智力低下,无语言交流能力,癫痫等临床表现,基因检测示5例患者和先证者的母亲在X染色体Xq28区段均存在重复,证实5例患者均为遗传自母亲。结论 该家系5例患儿具有MDS典型的临床特点,存在MECP2基因重复变异并有伴X染色体连锁遗传性,根据基因检测结果可以对该家系进行遗传咨询和产前诊断。     

融合蛋白AML1-ETO对C/EBPα基因表达的影响

背景：已有研究显示AML1-ETO可以通过包括抑制C/EBPα的功能在内的机制引起分化的阻滞。 目的：观察AML1-ETO对髓系分化相关基因C/EBPα表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。 方法：应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937、U937-MOCK和U937-A/E1细胞表面抗原CD11b、CD14 的表达;荧光实时定量PCR检测C/EBPα mRNA的表达;免疫印迹法检测C/EBPα蛋白的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与C/EBPα基因启动子之间直接的相互作用情况。 结果与结论：AML1-ETO转染细胞的细胞表面分化抗原CD11b 和CD14的表达明显下降,且转染了AML1-ETO的U937细胞系中,C/EBPα的mRNA与蛋白水平均下调,转染细胞沉淀富集的DNA中含有C/EBPα基因的启动子序列。结果提示C/EBPα是AML1-ETO 的直接靶基因,AML1-ETO能下调C/EBPα的表达。     

急性髓细胞白血病患者CD56抗原表达与MDR1基因表达量的关系研究

目的 研究初治急性髓细胞白血病(AML)患者CD56抗原表达与多药耐药(MDR)1基因表达量的关系,探讨CD56抗原表达与MDR1基因表达量在AML耐药中的作用及相互关系.方法 采用流式细胞术(FCM)和建立实时荧光定量PCR技术分别检测79例AML患者CD56抗原表达及MDR1基因表达水平并分析两者之间的关系及临床意义.结果 24.1%AML患者表达CD56抗原,FAB亚型中M5 AML患者表达阳性率高于其他亚型.遗传学危险度分级高危组患者CD56抗原表达阳性率显著高于中危组(P<0.01),伴t(8:21)AML患者CD56抗原表达阳性率(57.1%)显著高于其他低危组AML(P<0.05).CD56抗原表达阳性初治AML患者MDR1基因表达水平显著高于表达阴性患者(P<0.001).MDR1基因高表达且CD56抗原阳性AML组的CR率(58.8%)显著低于MDR1基因低表达且CD56表达阴性组(89.2%,P<0.01).结论 AML患者CD56抗原表达与MDR1基因表达水平存在相关性;同时定量检测MDR1基因表达及CD56抗原表达更有助于判断预后.     

多探针荧光原位杂交检测急性髓系白血病常见细胞遗传学异常

目的:评价多探针荧光原位杂交(FISH)在检测急性髓系白血病(AML)常见细胞遗传学异常中的价值,探讨细胞遗传学异常与临床诊断、治疗、预后的关系。方法:采用针对AML/MDS的FISH多探针诊断系统,即以针对AML1/ETO融合基因、PML-RARα融合基因、CBFβ/MYH11融合基因、MLL基因、P53基因、Del(5q)、Del(7q)、Del(20q)8种DNA探针对40例患者进行多探针FISH检测,同时联合染色体核型、临床资料进行研究。结果:40例AML中,共22例多探针FISH检出了细胞遗传学改变,包括:AML1/ETO、PML-RARα、MLL基因断裂重排、Del(5q)、Del(7q)、P53基因缺失、8号染色体三体7种细胞遗传学异常。而常规染色体核型分析仅检出11例遗传学异常。多探针FISH与染色体核型分析的总阳性率分别为57.50%及27.50%。AML1/ETO、PML/RARα阳性者首次诱导化疗效果较理想;而Del(7q)、MLL基因断裂重排阳性、伴复杂细胞遗传学改变者可能预示不良预后。结论:FISH多探针诊断系统检测AML患者常见遗传学异常更省时、准确、高效,有利于完善白血病的分层诊断及指导临床个体化治疗。     

化疗诱发dup(11)(q21q23)和MLL基因串联重复的MDS白血病

随着近年来化疗方法的进步 ,白血病患者的长期生存病例在增加 ,但另一方面 ,由于化疗后的损害而造成治疗相关性白血病 ( TRL)的报道也在逐渐增加。本文报道的是恶性淋巴瘤 ( ML)在采用含有Etoposide的多种抗癌药治疗后 ,出现伴有 dup( 1 1 )( q2 1 q2 3)和其他染色体克隆性变化的混合细胞白血病 ( MLL )基因重组 ,以及由骨髓增生异常综合征( MDS)→急性骨髓性白血病 ( AML) - M5b→ MDS→AML→M6转变的 TRL过程。患者 ,42岁 ,女性。 1 991年 1 2月出现扁桃体及右颈部淋巴结肿大。 1 992年 3月 ,淋巴结活检结果诊断为滤泡样的小分…     

丙戊酸钠对AML1-ETO转染细胞中CEBPA基因表达及表观遗传修饰的影响

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对AML1-ETO转染细胞中CCAAT/增强子结合蛋白α(CEBPA)基因表达的影响及诱导沉默基因重新表达的机制。方法:不同浓度VPA处理AML1-ETO转染的急性髓系白血病细胞U937后,CCK-8法和台盼蓝染色活细胞计数检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞表面抗原,RT-qPCR检测CEBPA mRNA的表达,ChIP-qPCR检测组蛋白H3和H4的乙酰化状态。结果:VPA对U937及AML1-ETO转染细胞有明显的生长抑制作用,呈现浓度依赖性和时间依赖性,VPA诱导U937及AML1-ETO转染细胞CD11b和CD14表达升高,VPA明显上调CEBPA mRNA的表达水平,VPA处理组CEBPA基因启动子区核染色质的组蛋白H3和H4乙酰化水平升高(P0.05)。结论:VPA对U937及其AML1-ETO转染细胞均有生长抑制和促分化的作用。VPA可能通过特异性调节CEBPA基因组蛋白乙酰化水平,改变其表观遗传修饰特征,从而诱导CEBPA基因重新表达。     

初发急性髓性白血病患者外周血中高表达TAL1基因及其意义

目的:分析调控造血分化的重要转录因子TAL1在急性髓性白血病(AML)细胞株及原代AML细胞中的表达特点。方法:利用real-time PCR法分别检测47例初发急性髓性白血病患者外周血单个核细胞以及急性白血病细胞株(Jurkat、CCRF-CEM、HL-60和NB4细胞株)中TAL1 mRNA的水平,并以12例健康志愿者外周血样本作为对照组。结果:TAL1 mRNA在AML细胞株(HL-60和NB4)、T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株(Jurkat和CCRF-CEM)和原代AML细胞中的水平均显著高于健康对照组(P0.05)。各AML亚型中TAL1的mRNA表达水平均较对照组显著升高,并以AML-M1和AML-M5 2个亚型升高最为明显(P0.05)。结论:AML细胞中TAL1异常高表达可能与其影响粒系的分化发育有关,其能否作为AML发病相关分子标志物有待进一步研究。     

骨髓间充质干细胞在骨髓增生异常综合征中的研究进展

骨髓增生异常综合征(MDS)是以无效造血并伴有向急性髓系白血病(AML)转化的风险为特点的异质性造血系统的恶性肿瘤。骨髓间充质干细胞(MSCs)的功能异常在疾病的进展和转化中发挥了重要的作用。与正常MSCs相比,MDS患者的MSCs在遗传学、表观遗传学、分化和功能等方面均存在差异,而且骨髓活检中MSCs密度增加是MDS的不良预后因素,其支持正常造血的能力下降,有利于克隆细胞生存并向AML转化。对MDS发病机制关键特点加深认识有助于推进产生新的治疗方式。     

造血干细胞移植治疗骨髓增生异常综合征20例疗效分析

目的评价造血干细胞移植（HSCT）治疗骨髓增生异常综合征（MDS）患者的疗效，探讨MDS患者接受HSCT治疗的适应证和时机。方法1993年11月～2007年4月对20例MDS及MDS转急性髓系白血病（AML）患者（男性12例,女性8例,中位年龄39岁）行HSCT治疗。其中18例接受同胞供者异基因外周血干细胞移植（allo—PBSCT）；1例为同基因骨髓移植（Svn—BMT）；1例为无关脐带血移植（CBT），＋25d时移植失败行自体骨髓移植。预处理主要采用修改的Bu／Cv方案。结果3年总生存率（SO）及3年无病生存率均为53.3％±12％；3年复发率（RR）10．8％±7％，移植相关死亡率（TRM）42．6％±12％。截止随访日期，存活11例，中位生存时间16．5（2.0～112）个月。结论HSCT是治疗MDS的有效方法,如有HLA匹配的同胞供者,HSCT可作为MDS患者的一线治疗。