慢性HBV感染者树突状细胞体外经HBsAg活化后的免疫效应

目的研究慢性HBV感染者、健康人的外周血树突状细胞(DC)经HBsAg活化后免疫功能的差异。方法从慢性HBV感染组及健康组外周血中培养扩增(以HBsAg刺激)DC和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)。用流式细胞仪检测DC、CIK的表型,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测DC、CIK上清液中的白细胞介素-12(IL-12)的浓度,用CCK-8比色法测定DC共培养的CIK对HepG2.2.15细胞的杀伤活性。结果经HBsAg致敏的健康组DC表面标志CD1a、CD80、HLA-DR及CD83阳性率明显高于慢性HBV感染组,差异具有统计学意义(P<0.01);慢性HBV感染组中经HBsAg致敏的DC表面标志阳性率与未经HBsAg致敏者相比差异无统计学意义(P>0.05)。健康组DC经HBsAg致敏后诱导的CIK对HepG2.2.15细胞的杀伤率显著高于慢性HBV感染组(P<0.01)。结论慢性HBV感染组与健康组DC经HBsAg活化后,对HepG2.2.15细胞的免疫效应差异有统计学意义,健康组高于慢性HBV感染组。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤效应研究

树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是肿瘤免疫治疗的两个重要部分,DC是人体内专职抗原递呈细胞,CIK是高效肿瘤杀伤细胞,前者识别病原,启动获得性免疫系统,后者通过发挥自身细胞毒性与分泌性细胞因子杀伤肿瘤,两者联合可以更好的杀伤肿瘤细胞,被认为是肿瘤过继免疫治疗的新希望。     

HBsAg、HBcAg活化树突状细胞治疗慢性乙型肝炎的体外研究

目的 研究慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)经HBsAg、HBcAg活化后的免疫功能.方法 从慢性乙型肝炎患者外周血中培养扩增DC,在DC成熟前,加入纯的HBsAg、HBcAg刺激,用流式细胞仪检测DC表型,用液闪计数仪观察DC对T细胞的增殖作用,用ELISA法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中细胞因子的分泌水平.结果 经HBcAg刺激DC的CD86表达率为(92.14±5.12)%,明显高于HBsAg刺激组和未加抗原组(P＜0.01);经HBcAg刺激组DC诱导同种异体静止T细胞增殖的能力每分钟液闪计数值(cpm)为34259±3127,明显高于HBsAg刺激组(20258±2917)和单个核细胞组(3469±417),P＜0.01;经HBcAg刺激组DC MLR中IL-12浓度为(342±42.3)ng/L,分别高于HBsAg刺激组和未加抗原组(P＜0.01).结论 体外经HBcAg刺激DC可有效提呈抗原病毒,并可进一步刺激T细胞产生.     

体外培养的树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞相互作用的研究

目的 观察同源的树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞于体外同一培养体系共同培养时的相互影响,为临床联合应用DC和CIK细胞进行肿瘤生物治疗提供依据.方法 用无血清培养基进行DC和CIK细胞的体外培养制作,共同培养1 w后,检测CIK细胞免疫表型、杀瘤活性的变化以及DC分泌IL-12的变化.结果 DC与CIK细胞的共培养会增加CIK细胞的CD3CD56双阳性细胞的比例和非特异性增强对K562细胞的杀伤活性;同时增强DC分泌IL-12的能力.结论 体外共培养DC与CIK细胞可相互增强抗肿瘤免疫活性.     

DC—CIK治疗慢性乙型肝炎患者疗效观察

目的研究乙型肝炎表面抗原（HBsAg）活化后的树突状细胞（DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对慢性乙型肝炎的治疗效果。方法抽取慢性乙型肝炎患者自体外周血,培养自体DC-CIK,经HBsAg活化后回输患者体内。检测治疗前和治疗24周后患者外周血HBVDNA、ALT和HBsAg水平。结果DC—CIK细胞治疗可抑制乙型肝炎患者外周血HBVDNA复制E（6．84±1．06）log10拷贝／mL对（5．29±1．77）log10拷贝／mL,P=0．000],病毒学应答率为63．6％。同时可减少HBsAg表达、降低ALT水平,但差异无统计学意义[（176．8±112．7）ng／mL对（153．0±120．6）ng／mL,P=0．085];（199．1±108．2）IU／mL对（166．2±131．8）IU／mL,P=0．121]。结论DC—CIK治疗是一种有效的抗乙型肝炎病毒方法。     

树突状细胞增强细胞因子诱导的杀伤细胞抗神经胶质瘤细胞作用及机制研究

目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与树突状细胞（DC）共培养后DC-CIK混合细胞抗神经胶质瘤细胞的免疫作用。方法分离健康人外周血单个核细胞,分别于体外诱导DC和CIK,然后共培养成DC-CIK细胞。实验分DC组、DC-CIK组、DC-T组和CIK组。Elisa试剂盒检测各组培养上清中IL-12和IFN．1的含量,流式细胞仪检测细胞表型,CCK一8法体外检测对神经胶质瘤细胞的杀伤活性。结果DC-CIK组培养上清中IL-12和IFN-1的含量分别为（110．24±2．22）mg／L和INF·Y／（913．46±20．64）mg／L,明显高于其它三组（P〈0．05）。DC—CIK组cDi细胞（61．34-1．31）％、CD3／CD56细胞（29．4±1．03）％也明显增加（P〈0．05）。对神经胶质瘤细胞的杀伤活性,DC—CIK组为（54．67±2．62）％,与DC组（19．44±1．07）％、DC—T组（21．27±1．85）％和CIK组（36．52±2．06）％比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DC—CIK细胞能诱导明显的神经胶质瘤细胞杀伤活性,为颅内肿瘤的免疫治疗提供了依据。     

HBsAg疫苗冲击树突状细胞联合乙肝免疫球蛋白对慢性乙型肝炎及HBV携带者的疗效

目的:观察HBsAg疫苗冲击的树突状细胞与乙肝免疫球蛋白联合应用对慢性乙型肝炎的疗效．方法:慢乙肝患者66例每月1次注射HBsAg疫苗(106／次)冲击的树突状细胞,乙肝免疫球蛋白200 U／次,6次为1疗程,共2疗程,治疗结束后检查肝功能,HBV DNA定量及乙肝标志．结果:HBeAg阳性慢乙肝27例治疗后有7例显示完全应答,14例显示部分应答．HBeAg阴性的慢乙肝15例中有4例出现完全应答,8例显示部分应答．慢性HBV携带者13例中5例显示完全应答,2例表现为部分应答．11例非活动性 HBsAg携带者中2例出现完全应答．结论:HBsAg疫苗冲击的树突状细胞与乙肝免疫球蛋白联合可试用于慢乙肝的治疗．     

转survivin基因树突状细胞抗慢性粒细胞白血病的免疫效应

树突状细胞（DC）是目前为止发现的机体内功能最强的专职抗原呈递细胞（APC），它参与淋巴细胞的生长分化，在激活T细胞介导的免疫反应中起关键性作用。survivin（SVV）基因是一个抗凋亡基因，它在人类大多数肿瘤组织中表达，而在正常成人组织中不表达，故可认为是肿瘤组织较为特异的基因。为开展DC瘤苗的抗白血病免疫治疗，我们拟以重组腺病毒介导SVV基因修饰DC，观察诱导产生的特异性抗白血病免疫效应。     

树突状细胞（DC）疫苗治疗慢性乙型肝炎的展望

树突状细胞(DC)是目前已知的体内功能最强的抗原提呈细胞(APC)。它最大的特点是能显著刺激初始T细胞(naive T cells)增殖,为机体免疫反应的始动者,并可诱导免疫耐受,因此研究者们利用其能诱导免疫反应的特点治疗肿瘤和感染性疾病;利用其诱导免疫耐受的特点治疗过敏性疾病、自身免疫病和器官移植排斥反应。DC疫苗作为天然佐剂治疗肿瘤和感染性疾病是目前免疫治疗的热点,用DC疫苗治疗淋巴瘤、黑色素瘤和前列腺癌已经进入临床试验阶段。在治疗感染性疾病的研究方面,最令人关注的手段是利用DC细胞的功能,诱导出机体针对HBV的免疫反应,达到治疗慢性乙型肝炎(简称慢乙肝)的目的。 1 慢乙肝治疗的现状尽管乙型肝炎疫苗的应用大大减低了乙型肝炎的发病率,但全世界仍有20亿人被乙型肝炎病毒(HBV)感染,其中     

负载HBcAg对慢性HBV感染患者树突状细胞的活化作用及功能影响

目的:探讨免疫耐受期慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DC)负载HBcAg后细胞表型及免疫功能的改变。方法:从CHB免疫耐受期患者外周血分离培养DC,在DC成熟前,加入重组HBcAg表位肽,诱导HBV特异性DC分化成熟,流式细胞仪检测DC表面共刺激分子CD1a、CD80、CD83的表达水平,应用淋巴细胞增殖试验评估DC功能。结果:负载不同剂量的HBcAg后,DC细胞活化增强,DC细胞共刺激分子标志物CD1a、CD80以及CD83表达率均明显上升,且随着抗原负载剂量的增加,表达率进一步增加,各组之间差异具有统计学意义(均P<0.001);未负载HBcAg的DC细胞激活的淋巴细胞反应较弱,负载HBcAg的DC细胞刺激同种异体健康成人T淋巴细胞增殖能力增强,且随着负载抗原剂量的加大,T淋巴细胞的增殖能力进一步提高,与未负载抗原的对照组相比,差异具有统计学意义(F=428.14,P=0.000)。结论:体外负载HBcAg刺激CHB患者DC细胞可增强其有效抗原提呈能力,促进T淋巴细胞增殖。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能的研究

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)的免疫功能.方法从慢性乙型肝炎患者外周血中分离单个核细胞,用无血清培养法分离培养DC,用流式细胞仪检测DC表型,用液闪计数仪观察DC对T细胞的增殖作用,用ELISA法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中细胞因子的分泌水平.结果患者组DC的CD86的表达率为(70.2±5.2)%,明显低于正常人组(95.3±3.8)%,P＜0.01;其诱导T细胞增殖能力每分钟液闪计数cpm为10000±2000,明显低于正常人组(cpm为30000±3000),P＜0.01患者MLR中IL-12为(120.0±19.7)pg/ml,γ-干扰素为(799.0±161.3)pg/m1,明显低于正常人组的(280.0±41.1)pg/ml和(3359.0±635.4)pg/ml,P＜0.01.结论慢性乙型肝炎患者外周血DC免疫功能低下,并与DC表面CD86的表达率下降及DC分泌IL-12减少密切相关.     

Effects of lamivudine on the function of dendritic cells derived from patients with chronic hepatitis B virus infection

AIM: To investigate if the nucleoside analogue lamivudine (LAM), a potent inhibitor of HBV replication, could restore the function of dendritic cells derived from patients with chronic hepatitis B (CHB) in an Asian population. METHODS: Dendritic cells (DCs) derived from mononuclearcytes of patients with chronic HBV infection were cultured in the presence of IL-4, granulocyte-macrophage colony-stimulating factors (GM-CSF) and gradient concentrations of LAM (0-2 mmol/L). Cell morphology was observed under light microscopy. Cell surface molecules, including HLA-DR, CD80, CD83, and CD1α, were analyzed with flow cytometry. The concentrations of IL-6 and IL-12 in the supernatant were assayed by ELISA. T cell proliferation was assayed by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT). RESULTS: The expression of CD1α on DC treated with 0.5 mmol/L LAM (LAM-DC 0.5 mmol/L) was significantly higher than that of DC untreated with LAM (54.1 ± 4.21 vs 33.57 ± 3.14, P < 0.05), and so was the expression of CD83 (20.24 ± 2.51 vs 12.83 ± 2.12, P < 0.05) as well as the expression of HLA-DR (74.5 ± 5.16 vs 52.8 ± 2.51, P < 0.05). Compared with control group, LAM-DC group (0.5 mmol/L) secreted significantly more IL-12 (910 ± 91.5 vs 268 ± 34.3 pg/mL, P < 0.05), had lower levels of IL-6 in the culture supernatant (28 ± 2.6 vs 55 ± 7.36 pg/mL, P < 0.05), markedly enhanced the stimulatory capacity in the allogeneic mixed leukocyte reaction (MLR) (1.87 ± 0.6 vs 1.24 ± 0.51, P < 0.05).CONCLUSION: The lower expression of phenotypic molecules and impaired allogeneic mixed lymphocyte reaction function of dendritic cells derived from patients with HBV infection could be restored in vitro by incubation with LAM.     

慢性乙型肝炎病毒感染免疫耐受期患者的临床病理特征

目的:了解HBV慢性感染免疫耐受期患者的临床及病理学特征．方法:分析HBV感染不同时期380例患者的年龄、母婴垂直传播感染途径、乙肝家族史、肝细胞内HBsAg、HBcAg表达状况及肝组织病理学特征．结果:HBV慢性感染免疫耐受期患者年龄 16岁以下占61．8％,母婴垂直传播感染者占 55．0％,有乙肝家族史患者占46．6％,免疫耐受期患者89例肝组织内HBcAg阳性表达率 78．7％,均明显高于免疫活动期及感染非活动状态患者(x2=38．73,49．08,17．2,31．69, P<0．01)．免疫耐受期16岁以下的患者肝组织内HBsAg及HBcAg阳性表达率最高,分别占64．3％(45／75)和72．9％(51／79),显著高于免疫活动期和非活动HBV携带状态患者(x2= 17．51,31．17,P<0．001)．免疫耐受期16岁以上的患者肝组织内HBsAg及HBcAg阳性表达率最低,分别占35．7％(25／75)和27．1％(19／70),显著低于免疫活动期和非活动HBV携带状态患者(x2=17．51,x2=31．17,P<0．001)．结论:HBV慢性感染免疫耐受期患者中16岁以下者,母婴垂直传播感染者及乙肝家族史者所占比例明显高;HBV在肝组织复制表达以免疫耐受期患者最多,且16岁以下的患者占多数．     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞表型及抗原提呈能力与HBV载量的关系

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DCs)表型及抗原提呈能力与HBV载量的关系.方法采集23例CHB患者和8例健康人的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),在重组人白细胞介素4和重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的作用下培养使DCs增殖、成熟,以间接免疫荧光流式细胞技术分别检测DCs表面CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达;将培养成熟的DCs与HBsAg共同孵育,用丝裂霉素C处理后再与自体PBMCs共同培养,在培养结束前12 h加入^3H-TDR,收集细胞,以β液闪计数仪测定cpm值;同期用定量聚合酶链反应技术测定CHB患者外周血HBV载量.结果患者DCs表面CD86、HLA-DR和ICAM-1的表达水平及DCs的抗原提呈能力均显著低于健康对照组;CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达与HBV载量呈显著负相关(分别为P＜0.01,P＜0.01,P＜0.001和P＜0.001);DCs的抗原提呈能力也与HBV载量呈显著负相关(为P＜0.001).结论CHB患者外周血DCs的成熟和功能存在障碍,DCs的抗原提呈能力与血液中HBV的载量密切相关,并可能对HBV的清除产生重要的影响.     

不同免疫状态慢性HBV感染患者的T淋巴细胞及NKG2D表达差异研究

目的探讨慢性HBV感染者在不同免疫状态下的T淋巴细胞及自然杀伤细胞G2D(NKG2D)表达差异。方法根据免疫状态的不同将80例慢性HBV感染患者分为免疫耐受组(28例)、免疫清除组(30例)、低(非)复制组(22例),另选取30名健康体检者作为对照组。对4组研究对象进行外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、NKG2D细胞频率及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素水平检测。结果4组研究对象的CD3^+T淋巴细胞百分比,差异均无统计学意义(P>0.05)。免疫清除组的CD4^+T淋巴细胞、CD4^+/CD8^+、NK细胞百分比分别为(30.14±5.36)%、(1.10±0.33)%、(9.67±4.31)%,均显著低于另外三组,CD8^+T淋巴细胞、NKG2D+/NK细胞百分比分别为(33.56±5.37)%、(12.96±3.42)%,均显著高于另外三组(P<0.05)。免疫耐受组和低(非)复制组的NKG2D^+/NK细胞百分比分别为(3.46±1.15)%和(3.55±1.07)%均显著低于对照组,免疫清除组的NKG2D+/NK细胞百分比显著高于对照组(P<0.05)。免疫清除组的TNF-α、γ干扰素水平分别为(69.62±16.46)ng/L和(69.85±12.30)ng/L,均显著高于免疫耐受组、低(非)复制组及对照组(P<0.05)。免疫耐受组、低(非)复制组及对照组的TNF-α、γ干扰素水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论慢性HBV感染患者在不同免疫状态下,外周血淋巴细胞及NKG2D细胞表达有明显差异,临床可通过测定HBV感染者外周血T淋巴细胞、NKG2D细胞水平来评估患者的免疫状态,指导临床治疗。     

慢性丙型肝炎患者CIK细胞的诱导培养及细胞亚群分析

目的 探讨慢性丙型肝炎患者细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞体外诱导培养过程中各细胞亚群的变化.方法 外周血单个核细胞(PBMC)在体外应用混合细胞因子(rhlFN-γ、IL-2和α-CD3)诱导培养,分别于0、7、10、13、15d时收集培养细胞,应用流式细胞技术检测各细胞亚群的频率.结果 动态分析发现培养过程中CD3+细胞频率迅速增加,至10d时到达平台期;在整个培养过程中,CD3+ CD8+T细胞和CD3+ CD56+细胞比例持续增加,表现出良好的扩增能力,且与患者基线ALT水平无关.结论 慢性丙型肝炎患者CIK细胞在体外培养的第10天,CD3+细胞呈现高扩增,且CD3+ CD8+T细胞和CD3+ CD56+细胞扩增状态良好,此时回输治疗可能效果较好.     

拉米夫定体外对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的影响

目的:体外研究不同浓度拉米夫定(lamivu- dine,LAM)对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者树突状细胞(dendritic cell,DC)功能影响．方法:分离慢乙肝患者外周血单核细胞,在含GM-CSF IL-4及不同浓度LAM(0,0．125, 0．25,0．5,1,2 mmol／L)培养条件下制备DC．观察DC形态学变化并用MTT法测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪(FCM) 测定其细胞表型分子CD1a,CD83,CD80及 HLA-DR的表达,ELISA法检测培养上清中 IL-12和IL-6含量．结果:在LAM 0．5 mmol／L组,DC表型分子 CD83,CD1a,HLA-DR的表达最高,CD80与 LAM未处理组相比无明显差异．与LAM未处理组相比,LAM 0．5 mmol／L处理组DC膜表面分子CD1a,CD83,HLA-DR表达增高(CD1a: 54．0±9．2 vs 33．6±10．1,P<0．05;CD83:20．3 ±6．1 vs 11．8±6．2,P<0．05;HLA-DR:74．5± 7．1 vs 52．9±7．7,P<0．05);其上清液中IL-12 分泌水平增高(810．0±91．5 ng／L vs 268．0± 34．3 ng／L,P<0．05),IL-6则显著降低(28．1± 2．6 ng／L vs 55．3±7．4 ng／L,P<0．05);刺激同种异体淋巴细胞增殖能力(SI)增强(1．9±0．6 vs 1．2±0．5,P<0．05)．结论:LAM体外可增强慢乙肝患者树突状细胞活性．