CD133在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探究肿瘤干细胞标记物CD133在口腔正常黏膜、口腔扁平苔藓（OLP）及口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达情况及临床意义,评估其作为OLP恶性转化的早期诊断指标、OSCC治疗干预靶标的临床价值,为进一步研究口腔黏膜癌变机制提供基础。 方法回顾性分析10例正常口腔黏膜、60例OLP、60例OSCC患者的临床资料,运用免疫组织化学技术检测各组病理组织中CD133表达情况,采用Mann-Whiney秩和检验比较各组间CD133表达差异,卡方检验统计分析CD133与各临床因素的关系。采用免疫组织化学技术和免疫印迹技术检测人口腔癌前病变细胞株（DOK）和人OSCC细胞株（CAL-27）中CD133的表达情况,t检验比较CD133在DOK与CAL-27细胞株中含量差异。 结果口腔正常黏膜、OLP、OSCC三组中,CD133的阳性率为0（0/10）、31.67%（19/60）、63.33%（38/60）,表达逐渐增强。CD133在口腔正常黏膜与OLP表达强度差异有统计学意义（Z=-2.046,P= 0.041）。CD133在OLP与OSCC表达强度差异具有统计学意义（Z=-3.777,P<0.001）。CD133在DOK中弱阳性表达,在CAL-27中阳性表达,DOK与CAL-27中CD133含量差异有统计学意义（t=-5.029,P= 0.001）CD133与OSCC的临床分期和淋巴结转移有关。 结论CD133作为评估OLP恶性转化潜能的指标及OSCC早期治疗干预靶标可能具有重要临床价值。     

口腔白斑和口腔鳞状细胞癌中微管相关蛋白1轻链3和雷帕霉素靶蛋白的表达及临床意义

目的 探究自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3（LC3）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在正常口腔黏膜、口腔白斑（OLK）及口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达情况及相互关系,评估其作为OLK恶变早期诊断指标的临床价值。方法 采用免疫组化法检测LC3B和mTOR在20例正常口腔黏膜组织、120例OLK及30例OSCC组织中的表达,回顾性分析120例OLK患者的临床资料,探讨LC3B和mTOR及其与各临床因素之间的关系。结果 正常口腔黏膜、OLK和OSCC组中LC3B阳性率分别为85.0%、65.8%和33.3%（P<0.05）,mTOR的阳性率分别为20.0%、48.3%和76.7%（P<0.05）。LC3B与mTOR二者间的表达具有相关性（P<0.05）,且其表达都与OLK的临床类型相关（P<0.05）。结论 LC3B和mTOR可作为早期监测口腔OLK恶变的分子生物学指标。     

沉默生物钟基因PER1对口腔鳞状细胞癌细胞中生物钟基因网络的影响

目的 探讨口腔鳞状细胞癌细胞中生物钟基因PER1对生物钟基因网络中其他生物钟基因表达的影响。方法 采用RNA干扰技术沉默人口腔鳞状细胞癌SCC15细胞中PER1基因,应用流式细胞仪检测沉默后细胞的增殖和凋亡水平,实时荧光定量聚合酶链式反应检测生物钟基因CLOCK、BMAL1、PER1、PER2、PER3、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2、TIM、CKIE、RORA、NPAS2、REV-ERBA mRNA的表达情况。结果 PER1基因沉默后,SCC15细胞增殖指数上升,凋亡指数下降（P<0.05）;PER1、PER2、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2和NPAS2 mRNA的表达水平降低（P<0.05）,PER3、TIM、RORA和REV-ERBA mRNA的表达水平升高（P<0.05）,CLOCK、BMAL1和CKIE mRNA的表达水平无统计学改变（P>0.05）。结论 生物钟基因PER1能够调控生物钟基因网络中众多其他生物钟基因PER2、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2、NPAS2、PER3、TIM、RORA和REV-ERBA的表达,PER1在生物钟基因网络中具有重要调控作用。     

与重症低龄儿童龋病相关的唾液微生物群落研究

目的通过高通量测序技术研究重症低龄儿童龋病和健康者唾液的菌群结构及其差异。方法 在青岛市崂山区儿童中,经口腔检查选取健康（H组）和重症低龄龋病（C组）儿童各24名,采取唾液样本,提取其DNA进行聚合酶链式反应扩增,利用454测序平台对16S rRNA V1—V3区进行双端测序,对细菌群落结构及多样性进行差异分析。结果 C组唾液菌群物种丰度高于H组（P<0.05）,两组唾液菌群结构的差异有统计学意义（P<0.01）,且C组的群落结构更为相似和保守（P<0.001）;鉴别出C组高表达的可疑致龋微生物（P<0.1）及H组高表达的健康相关微生物（P<0.1）;基于唾液菌属图谱建立的龋病风险评估模型区分健康和龋病者的准确率可高达70%以上。结论 唾液菌群和特定细菌种类,如比例升高的Prevotella菌属有助于评估和筛选低龄儿童龋病风险。     

P120-连环蛋白介导钙黏蛋白转换促进口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的实验研究

目的 探索P120-连环蛋白（P120^ctn）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞钙黏蛋白转换中的作用及其对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法 采用质粒pGFP-V-RS-P120^ctn shRNA转染OSCC细胞株TSCCA,采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blot检测细胞中P120^ctn、E-钙黏蛋白（E-cad）和N-钙黏蛋白（N-cad）的mRNA和蛋白表达的变化,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移实验检测转染前后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 质粒pGFP-V-RS-P120^ctn shRNA转染TSCCA细胞后,P120^ctn表达明显降低,E-cad的mRNA和蛋白表达水平也明显降低,而N-cad的mRNA和蛋白表达水平明显提高,细胞迁移和侵袭能力也明显提高,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 在OSCC中P120^ctn可能通过介导钙黏蛋白转换来调节肿瘤的浸润和转移过程。     

半乳糖凝集素-3基因在口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭、凋亡中的作用及机制研究

目的 探讨抑制口腔鳞状细胞癌（OSCC）中半乳糖凝集素-3（Galectin-3）基因的表达对癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测OSCC中Galectin-3 mRNA和蛋白表达;人OSCC Tca8113分为空白组、阴性对照组和Galectin-3转染组,转染48 h后,Western blotting检测各组细胞中Galectin-3、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、细胞周期素D1（Cyclin D1）蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 OSCC中Galectin-3 mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织（P<0.01）;RNA干扰Galectin-3表达后Tca8113细胞中Galectin-3蛋白表达明显降低;Galectin-3转染组细胞存活率、细胞侵袭能力及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达均显著高于空白组（P<0.01）。结论 抑制OSCC中Galectin-3基因表达可显著降低癌细胞的增殖及侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在舌鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（Pyk2）和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（p-AKT）在舌鳞状细胞癌（TSCC）及其癌旁非肿瘤组织中的表达差异及临床意义。方法 采用免疫组织化学法检测45例TSCC组织及30例癌旁非肿瘤组织中Pyk2和p-AKT蛋白的表达情况,并分析两者蛋白表达与临床病理参数的关系。结果 在TSCC组织中Pyk2和p-AKT蛋白均呈高表达,而在癌旁非肿瘤中呈低表达或无表达（P<0.05）。并且两者的表达呈正相关（γ_s=0.412）。Pyk2蛋白的表达与病理分化程度、有无淋巴结转移及TNM临床分期有关（P<0.05）,与性别、年龄无关。而p-AKT只与病理分化程度有关（P<0.05）。结论 Pyk2和p-AKT蛋白异常表达与TSCC的发生、发展密切相关,联合检测两者有望成为明确TSCC恶性程度的指标。     

口腔鳞癌组织中Ki-67和p53蛋白的表达

目的 探讨口腔鳞癌组织中Ki-67和p53蛋白的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学S-P法对10例正常口腔黏膜组织、16例口腔白斑（OLK）组织、48例口腔鳞癌（OSCC）组织中的Ki-67和p53蛋白表达进行检测,结合患者临床病理资料进行分析,使用SPSS17.0 软件包对数据进行统计学处理。结果Ki-67蛋白在正常口腔黏膜组织、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为30.0%、56.3%和79.2%;p53的阳性表达率分别为0.0%、43.8%和70.8%,Ki-67和p53在正常黏膜组与口腔白斑和口腔鳞癌组差异均具有显著性（P<0.05）;Ki67蛋白在口腔鳞癌组织中的表达与肿瘤的临床分期、分化程度、有无淋巴结转移有关（P<0.05）,p53蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05);Ki-67和p53蛋白在口腔鳞癌组织中的表达呈正相关（P<0.05）。结论Ki-67和p53蛋白在口腔鳞癌组织中高表达,可能在口腔鳞癌的发生、发展过程中起着重要作用。     

口腔干预措施对牙周炎大鼠颈动脉牙龈卟啉单胞菌检出量及C-反应蛋白表达的影响

目的 建立慢性牙周炎（CP）合并高脂血症（HL）的SD大鼠模型并对其进行口腔干预,检测大鼠颈动脉局部C-反应蛋白（CRP）的表达情况及牙龈卟啉单胞菌的检出量,探讨牙周炎与动脉粥样硬化的相关性。方法 SD大鼠随机分为3组,A组为对照组,B组为HL组,C组为CP+HL组。C组分为C1组（不治疗组）,C2组（基础治疗组）,C3组（拔牙组）;C2组又分为C2-1组（单纯牙周基础治疗组）,C2-2组（牙周基础治疗+米诺环素+抗生素组）;C3组又分为C3-1组（拔除患牙组）,C3-2组（拔除患牙+抗生素组）。建模开始15周后随机处死B组大鼠1只,取颈动脉分叉血管组织进行油红O染色,观察到泡沫细胞形成则HL建模成功。建模成功后进行2次口腔干预,干预结束后5周处死所有大鼠,取双侧颈动脉血管分叉处组织,分别采用免疫组织化学法检测CRP相对含量,16sRNA半定量法检测样本中的牙龈卟啉单胞菌的相对含量。结果 免疫组织化学结果显示,B、C组CRP阳性表达明显高于A组（P<0.05）,与C1组相比,C组各干预组的CRP表达均降低（P<0.05）,其中辅助抗生素组较不加抗生素组阳性表达更低（P<0.05）,C2-2组在各干预组中阳性表达最低。牙龈卟啉单胞菌检测结果显示,C1组检出量最高,明显高于A、B组（P<0.05）;C组各干预组的检出量均较C1组低（P<0.05）,C3-2组最低（P<0.05）。结论 伴HL的牙周炎大鼠不加干预任其发展,颈动脉血管中CRP的表达及牙龈卟啉单胞菌检出量都明显增加,血管病变逐渐加重。牙周基础治疗和拔牙均可有效降低颈动脉血管中CRP的表达及致病菌含量,其中牙周基础治疗对CRP表达的降低作用更明显,拔牙对降低牙周致病菌的作用更有效;基础治疗或拔牙时若辅以局部及全身抗炎药物,均可以有效提高CRP和牙周致病菌的降低作用。     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

骨桥蛋白及其受体CD44v6在口腔鳞状细胞癌中的定量表达及意义

目的探讨骨桥蛋白（OPN）及其受体CD44v6在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的蛋白定量表达、临床意义及二者之间的关系。方法应用EnVisionTM法检测正常口腔黏膜（n=12）和OSCC患者（n=59）肿瘤组织中OPN和CD44v6的表达,结合图像分析系统进行定量分析,统计不同临床、病理指标下OSCC肿瘤组织中OPN的表达情况以及两种蛋白表达的相互关系。结果OPN在OSCC肿瘤组织中的表达显著高于正常口腔黏膜（P<0.05）。OPN的表达与OSCC不同临床分期、颈淋巴结转移有相关性,在OSCC高分化和中低分化者间差异无统计学意义。CD44v6在OSCC与正常口腔黏膜中差异无统计学意义,且其表达与临床病理指标关系不密切。在OSCC中,OPN与CD44v6表达无显著相关性。结论OPN在OSCC存在过度表达,其表达水平与肿瘤临床分期以及有无淋巴结转移存在一定的相关性,CD44v6与肿瘤临床病理特征无关,而且与OPN表达无相关性。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的变化及临床意义

目的 观察CD4+CD25+调节性T细胞特异性转录因子FOXP3在口腔鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达情况,以探讨其在口腔鳞癌发生发展中的临床意义。方法 通过免疫组化SP法检测10例正常口腔黏膜组织和36例口腔鳞状细胞癌中FOXP3的表达。结果 FOXP3阳性的CD4+CD25+调节性T细胞在高分化组中的阳性率为26.4%、中分化组为42.7%、低分化组为63.5%,与正常组2.81%相比,差异有统计学意义(P<0.05),且其阳性率与与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。结论 FOXP3阳性的CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平的增加与机体免疫功能低下密切相关,其在口腔鳞癌的发生发展中可能起着重要的作用。     

CD44s、CD44v6在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的　研究细胞粘附分子 CD4 4 s及 CD4 4 v6与口腔鳞状细胞癌 ( OSCC)的发生、淋巴结转移的关系。方法　采用免疫组织化学 S- P法对 2 6例口腔鳞癌及其 11例转移淋巴结进行 CD4 4 s、CD4 4 v6的检测。结果　CD4 4 s、CD4 4 v6在口腔鳞癌中的表达较正常鳞状上皮中显著下降 ( P<0 .0 5 ,P<0 .0 0 1) ;高度恶性口腔鳞癌中CD4 4 v6的表达水平较低度恶性者显著降低 ( P<0 .0 1) ;有淋巴结转移的原发灶较无淋巴结转移的原发灶的CD4 4 v6表达水平显著降低 ( P<0 .0 0 1)。结论　 CD4 4 s、CD4 4 v6表达下降在 OSCC的发生中有一定的作用 ;CD4 4 v6表达下降可作为预测 OSCC发生淋巴结转移可能性大小的一个指标。     

CD44与CD33在77例口腔黏膜良性淋巴组织增生病中的表达及临床意义

目的：探讨CD44与CD33在口腔黏膜良性淋巴组织增生病（benign lymphoadenosis of oral mucosa,BLOM）中的表达及临床意义。方法：选择2017年1月—2020年3月青岛市中医医院病理科77例BLOM蜡块作为实验组，另取同时间段63例正常口腔黏膜组织蜡块作为对照组。采用免疫组织化学法检测2组CD44、CD33阳性表达情况，采用Spearman分析BLOM患者病变组织中CD33与CD44阳性表达的相关性。收集患者一般资料，分析BLOM患者病变组织中CD33、CD44表达与临床病理特征的关系。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果：对照组、实验组CD33阳性表达率分别为95.24%、63.64%，差异有统计学意义（P<0.05）;CD44阳性表达率分别为93.65%、67.53%，差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman分析结果显示，BLOM患者病变组织中CD33与CD44阳性表达呈正相关（r=0.834,P=0.002）;CD33、CD44表达与临床分型、炎症程度、有无淋巴滤泡、淋巴细胞浸润有关（P<0.05...     

E-cad、CD44V6在口腔鳞癌组织中的表达及其相关性研究

目的 :分析E 钙粘蛋白 (E cadherin ,E cad)和CD44V6在口腔黏膜鳞癌及其癌变过程中的表达规律 ,探讨它们的异常表达与口腔黏膜癌变、转移的关系。方法 :采用免疫组织化学SP法分别检测E cad、和CD44V6在 17例正常口腔黏膜、6例口腔黏膜异常增生和 5 2例口腔黏膜鳞癌的不同表达。结果 :其中 ,E cad在正常口腔黏膜、口腔黏膜异常增生的阳性表达率明显高于在口腔黏膜鳞癌中的阳性表达率 ;而CD44V6在正常口黏膜、口腔黏膜异常增生的阳性表达率明显高于在口腔黏膜鳞癌中的阳性表达率 ;同时 ,E cad的阳性表达率随肿瘤的分化程度降低而降低 ,CD44V6的阳性表达率随肿瘤的分化程度降低而升高 ;E cad和CD44V6之间的关系表现为负相关 ,同时 ,CD44V6与肿瘤的转移密切相关。结论 :E cad和CD44V6在口腔黏膜鳞癌的分化和转移过程中起重要作用 ,CD44V6的表达与肿瘤的不良分化和转移密切相关 ,而E cad的表达则对患者有保护趋势。     

Reduced expression of the CD44 variant exons in oral squamous cell carcinoma and its relationship to metastasis

In the present study, we examined the expression of CD44 variant exons in human oral squamous cell carcinoma (OSCC). Of ten cell lines from OSCCs, two (KB and H357), as well as the HeLa cell line, failed to express CD44 variant exons. In surgical specimens, all normal mucosa expressed CD44v9 (both mRNA and protein). Of 40 primary OSCCs, 19 (47.5%) showed downregulation of CD44v9, which correlated with tumor cell differentiation, primary metastasis to lymph nodes and secondary metastasis to lymph nodes. The results suggest that the downregulation of CD44v9 may play a role in lymphatic metastasis of OSCC and changes in its expression may be a useful diagnostic tool to determine the metastatic potential of OSCC to lymph nodes. Moreover, three cell lines that failed to express CD44 variant exons might become a useful experimental model to study the role of variant exons in the progression of OSCC.     

Putative cancer stem cell marker expression in oral epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma

Multifactorial conditions underlie progression of potentially malignant oral lesions (PMOL) to oral squamous cell carcinoma (OSCC) and there is currently need for better prediction of malignant transformation. The hypothesised existence of cancer stem cells in dysplastic oral tissues provides the potential for more informed assessment of PMOL progression. Semi‐quantitative immunohistochemical assessment of four putative cancer stem cell markers (CD24, CD44, CD271 and ALDH1) was conducted with a training cohort of 107 patient biopsies to establish clinically applicable score threshold values that were subsequently applied to a blind diagnosis in an independent validation cohort of 278 biopsies. Stain intensity scores for ALDH1, CD24 and CD44, but not CD271 were greater for OSCC than normal tissues. The intensity of ALDH1 and CD24 immunostaining correlated with increased oral epithelial disease severity, and CD24 was effective in distinguishing OSCC from non‐malignant tissues, correctly diagnosing 71% of OSCC cases in the validation cohort. Importantly, CD24 immunostaining was effective in diagnosing the presence of dysplasia, correctly discriminating 69% of dysplasia tissues from normal tissues, although no distinction between mild and severe grades of dysplasia was achieved. The results highlight CD24 immunostain intensity as an effective marker of oral dysplasia and OSCC. In conclusion, CD24 immunostain intensity scoring may serve as a helpful technique to assist with the histological recognition of dysplasia in oral biopsies, but not for distinguishing between grades of dysplasia.     

Programmable bio‐nanochip‐based cytologic testing of oral potentially malignant disorders in Fanconi anemia

Fanconi anemia (FA) is caused by mutations of DNA repair genes. The risk of oral squamous cell carcinoma (OSCC) among FA patients is 800‐folds higher than in the general population. Early detection of OSCC, preferably at it precursor stage, is critical in FA patients to improve their survival. In an ongoing clinical trial, we are evaluating the effectiveness of the programmable bio‐nanochip (p‐BNC)‐based oral cytology test in diagnosing oral potentially malignant disorders (OPMD) in non‐FA patients. We used this test to compare cytomorphometric and molecular biomarkers in OSCC cell lines derived from FA and non‐FA patients to brush biopsy samples of a FA patient with OPMD and normal mucosa of healthy volunteers. Our data showed that expression patterns of molecular biomarkers were not notably different between sporadic and FA‐OSCC cell lines. The p‐BNC assay revealed significant differences in cytometric parameters and biomarker MCM2 expression between cytobrush samples of the FA patient and cytobrush samples of normal oral mucosa obtained from healthy volunteers. Microscopic examination of the FA patient's OPMD confirmed the presence of dysplasia. Our pilot data suggests that the p‐BNC brush biopsy test recognized dysplastic oral epithelial cells in a brush biopsy sample of a FA patient.