丝素蛋白-软骨脱细胞外基质复合取向支架的制备及评价

目的 制备丝素蛋白（SF）-软骨脱细胞外基质（CECM）仿生支架材料,检测其理化性能特性。方法 采用改良温度梯度热诱导相分离（TIPS）技术结合冷冻干燥法制备出CECM取向支架,然后将CECM浆料与制备好的SF溶液按照质量比1∶1混合后配制成质量分数6%的浆料,通过TIPS技术制备出SF-CECM复合取向支架。对SF-CECM复合取向支架进行扫描电子显微镜（SEM）观察和组织学染色,同时测定支架孔隙率、吸水性以及力学性能。结果 SEM观察可见,支架横断面呈多孔网状结构,纵剖面呈垂直的管状结构。组织学染色显示复合支架脱细胞彻底,有蛋白多糖、胶原成分,与天然软骨成分相似。支架孔隙率、吸水率和纵向压缩弹性模量分别为95.733%±1.010%、94.309%±1.302%和（65.40±4.09）kPa。结论 SF-CECM复合取向支架具有良好的理化特性和生物力学性能,有望成为较理想的组织工程软骨支架。     

选择性激光烧结多孔钛种植体及其性能研究

目的 分析选择性激光烧结（SLS）多孔钛种植体的机械性能及生物相容性,探讨其与壳聚糖（CS）/羟磷灰石（HA）复合涂层结合后的促骨结合作用。方法 制备Ti6Al4V试件,部分试件表面进行CS/HA涂层处理;对试件进行扫描电子显微镜观察和机械性能检测;体外培养MC3T3-E1细胞,进行活/死细胞染色、甲基噻唑基四唑（MTT）及碱性磷酸酶（ALP）水平检测;将柱状螺纹种植体植入兔股骨髁部,分析其体内生物学性能。结果 试件准弹性梯度随孔隙率增大而减小,孔隙率为30%时与皮质骨接近,70%时与松质骨接近;试件具有良好的生物相容性。复合CS/HA涂层后可促进MC3T3-E1细胞增殖、分化,有利于骨组织长入孔隙,形成良好的骨结合。结论 多孔钛种植体具有良好的机械性能和生物相容性,与CS/HA涂层结合后具有骨诱导性,利于形成稳定的骨结合。     

显微牙周外科技术在种植体周附着龈增宽术中的应用

目的 探讨显微牙周外科技术在种植体附着龈增宽术中的临床应用效果。方法 对20例种植体周附着龈不足或缺失的患者,采用显微牙周外科技术增宽种植体周的附着龈。术后观察游离龈瓣的存活状态,并记录术前、术后即刻、术后1年时附着龈的宽度,计算术后1年附着龈的收缩率。结果 20例患者的游离龈瓣均存活,术后1年附着龈宽度为（3.05±0.44）mm,与术前相比增加了（2.56±0.31）mm,与术后即刻相比减小了（2.13±0.28）mm,附着龈收缩率为41.22%±5.04%。结论 显微牙周外科技术应用于附着龈增宽术可获得较高的成功率,能较好地提高种植体周附着龈的质量。     

软骨组织工程用羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠 复合水凝胶的制备及体外评估

目的 优化羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠（CMCS/OSA）复合水凝胶制备工艺,并应用于软骨组织工程。方法 制备氨基与醛基比例分别为2:1、1:1、1:2的CMCS/OSA复合水凝胶,并通过扫描电子显微镜观察、流变学检测、黏附拉力测试、溶胀率分析及细胞实验等方法评价复合水凝胶的微观形态、物理特性以及生物相容性,以制备满足软骨再生领域需求的水凝胶。结果 氨基与醛基比为1:1时,制备出的水凝胶具有良好的孔隙率、适宜的成胶时间、较强的黏附力及稳定的溶胀率等性质,对细胞有良好的生物相容性。结论 氨基与醛基比为1:1时制备出的CMCS/OSA复合水凝胶是软骨组织工程优异的支架材料。     

软骨组织工程用羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠复合水凝胶的制备及体外评估

目的 优化羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠（CMCS/OSA）复合水凝胶制备工艺,并应用于软骨组织工程。方法 制备氨基与醛基比例分别为2:1、1:1、1:2的CMCS/OSA复合水凝胶,并通过扫描电子显微镜观察、流变学检测、黏附拉力测试、溶胀率分析及细胞实验等方法评价复合水凝胶的微观形态、物理特性以及生物相容性,以制备满足软骨再生领域需求的水凝胶。结果 氨基与醛基比为1:1时,制备出的水凝胶具有良好的孔隙率、适宜的成胶时间、较强的黏附力及稳定的溶胀率等性质,对细胞有良好的生物相容性。结论 氨基与醛基比为1:1时制备出的CMCS/OSA复合水凝胶是软骨组织工程优异的支架材料。     

抑菌浓度米诺环素对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 研究抑菌浓度的米诺环素对成骨细胞增殖、分化和矿化及Runt相关转录因子2（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）mRNA表达的影响。方法 将米诺环素溶液（0、0.1、0.5、1、10 μg·mL^-1）与原代成骨细胞共培养,CCK-8检测增殖活性,通过ALP活性检测、茜素红染色、荧光定量聚合酶链反应检测探讨米诺环素对成骨细胞分化、矿化的影响。结果 0.1、0.5、1 μg·mL^-1的米诺环素可以促进细胞的增殖,上调ALP、Runx2 mRNA的表达水平,增加钙含量及钙化结节的形成,其中1 μg·mL^-1具有最大促进作用（P<0.05）;当浓度为10 μg·mL^-1时这种促进作用开始下降,并对ALP活性和OPN表达有显著抑制作用（P<0.01）。结论 适宜抑菌浓度的米诺环素能促进成骨细胞增殖,上调Runx2、ALP、OPN的表达水平,促进成骨细胞分化和矿化。     

靶向舌癌多功能纳米粒的制备和体外实验

目的 制备一种基质细胞衍生因子-1（SDF-1）修饰的载多西紫杉醇（DOC）包裹吲哚菁绿（ICG）和液态氟碳全氟己烷（PFH）靶向多功能纳米粒（DOC-SINPs）,检测其性质。方法 双乳化法制备纳米粒,硫醚键连接SDF-1,得到靶向纳米粒。Malvern粒径仪检测其粒径及表面电位,激光扫描共聚焦显微镜观察SDF-1在纳米粒表面的连接情况,高效液相色谱法（HPLC）测定其DOC包封率（ELC）和载药量（DLC）及体外释放规律,热成像仪记录其体外光热特性,光声仪及超声诊断仪观察其体外显像,流式细胞仪评估其体外靶向能力,CCK-8法检查其对舌癌SCC-15细胞活力的影响。结果 靶向多功能纳米粒形态规则,呈球状。平均粒径（502.88±17.92） nm,平均电位（-11.5±3.15） mV。平均ELC为54.12%±1.74%,平均DLC为1.08 mg·mL^-1。体外药物释放规律呈初期爆发性释放,接着是持续缓慢释放。其光热特性呈浓度相关,浓度越高温度越高。纳米粒可检测到明显光声信号和超声信号。体外靶向连接率89.99%。细胞活性实验结果表明,SINPs组在各个浓度下细胞活性无明显差异（P>0.05）。在浓度为150、200 μg·mL^-1时,DOC-SINPs无论有无激光辐照均较SINPs有明显的细胞活性抑制（P<0.05）。结论 成功制备了集诊断与治疗一体的多功能纳米粒,具有超声/光声双模成像,同时具备化疗和光热治疗的抗肿瘤作用。     

猪软骨脱细胞基质对人脂肪干细胞增殖及分化的影响

目的 研究猪软骨脱细胞基质（pACM）对人脂肪干细胞（hADSCs）增殖及分化的影响。方法 将猪关节软骨进行脱细胞处理制备pACM并进行鉴定。分离培养hADSCs并分化鉴定。将不同浓度pACM与hADSCs共培养,以不添加pACM为对照组,通过CCK-8法检测pACM对hADSCs增殖能力的影响,通过荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测pACM对hADSCs成软骨分化的影响。结果 0.5、1.0、2.0 mg·mL ^-1 pACM组hADSCs细胞增殖速率与对照组无统计学差异,而4.0、8.0 mg·mL ^-1pACM组hADSCs细胞增殖速率低于对照组（P<0.05）。0.5、1.0、2.0 mg·mL ^-1 pACM组成软骨相关基因SOX-9、抗Ⅱ型胶原纤维α1（COL2A1）、抗蛋白聚糖（ACAN）及细胞黏附相关基因层黏连蛋白（LAMININ）的表达均高于对照组（P<0.05）,细胞干性相关基因Notch-1的表达低于对照组（P<0.05）,成脂相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAr-γ）的表达各组间均无统计学差异（P>0.05）。成软骨相关蛋白SOX-9、COL2A1及ACAN的表达高于对照组（P<0.05）。结论 适宜浓度的pACM不会影响hADSCs的增殖,并且可以在基因水平上诱导其向成软骨方向分化。     

神经营养素3促进人牙囊细胞成骨分化

目的 研究神经营养素3（NT-3）对人牙囊细胞（hDFCs）成骨分化的影响。方法 体外分离并培养hDFCs,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,CCK-8法检测不同质量浓度NT-3对hDFCs增殖活性的影响,同时检测NT-3对hDFCs的碱性磷酸酶（ALP）活性,以及骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、骨钙素（OCN）mRNA相对表达量的影响,并用茜素红染色法检测矿化情况。结果 波形丝蛋白和角蛋白染色结果表明hDFCs为间充质细胞来源。NT-3对hDFCs增殖活性无明显影响;当NT-3质量浓度为25、50、100 ng·mL^-1时能明显增强ALP活性,提高BMP-2、OCN mRNA的相对表达量,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）,NT-3质量浓度为100 ng·mL^-1时BMP-2、OCN mRNA的相对表达量达到最高。当NT-3质量浓度为50、100 ng·mL^-1时矿化结节数量最多。结论 适宜质量浓度的NT-3能促进hDFCs的成骨分化。     

微波烧结与常规烧结对牙科用氧化锆摩擦磨损性能的影响

目的 采用微波烧结与常规烧结牙科用氧化锆与滑石瓷进行摩擦磨损实验,探讨其摩擦磨损性能及对磨物的磨耗程度。方法 选取Lava品牌氧化锆试件10个,随机分为微波烧结组和常规烧结组。使用粗糙度轮廓仪测量氧化锆表面粗糙度;以滑石瓷球为对磨物进行磨损实验,记录摩擦系数曲线,计算磨损体积;采用光学显微镜观察氧化锆和滑石瓷球的磨损形貌,场发射扫描电子显微镜（SEM）观察氧化锆显微结构。结果 微波烧结和常规烧结氧化锆磨损量依次为（6.940±1.382）×10^-2、（7.952±1.815）×10^-2 mm³,对磨滑石瓷磨损体积依次为（14.189±4.745）×10^-2、（15.813±3.481）×10^﹣2 mm³,两种烧结方式氧化锆耐磨性及造成对磨物磨损量差异均无统计学意义。光学电镜显示氧化锆可见明显的犁沟;对磨滑石瓷可见裂纹,同时伴有犁沟。SEM显示两种烧结方式氧化锆均已致密烧结,微波烧结氧化锆晶粒更加细小均匀。结论 两种烧结方式氧化锆摩擦磨损性能接近。     

纤维软骨和透明软骨不同染色方法的对比研究

目的 研究不同软骨染色方法在髁突软骨、股骨软骨和生长板软骨中的染色差异。方法 取健康雌性新西兰大白兔颞下颌关节髁突、膝关节股骨,分别进行苏木精-伊红（HE）染色、甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色、番红O 阿利新蓝染色、番红O染色、番红O 快绿染色,光学显微镜下观察分析各软骨组织结构。结果 HE染色髁突纤维软骨各层结构清晰,关节软骨基质呈嗜碱性蓝染,骨组织呈嗜酸性红染;甲苯胺蓝染色关节软骨基质呈蓝紫色,骨组织不着色;阿利新蓝染色软骨基质呈淡蓝色,骨组织不着色;番红O 阿利新蓝染色关节软骨呈浅蓝色,骨组织呈淡红色,但是髁突软骨纤维层和增殖层红染;番红O染色中髁突软骨基质呈红色,股骨软骨和生长板软骨呈橘黄色,骨组织呈淡红色;番红O 快绿染色关节软骨基质呈红色,骨组织呈绿色,在髁突纤维软骨中纤维层呈明显绿染。结论 不同的染色方法可以特异性展现软骨组织结构。在今后透明软骨和纤维软骨的研究中,因根据研究对象、研究目的等选用适合的染色方法,以期最佳的反映研究部位的形态结构。     

软骨细胞外基质在软骨组织工程中的研究进展

软骨组织工程是修复软骨缺损的有效方式,需要理想的支架材料促进干细胞发挥再生性能。软骨细胞外基质（CECM）能够有效地模仿软骨细胞生存环境,不仅对软骨细胞和干细胞具有良好的生物相容性,满足支架材料的基本要求,还能够促进软骨细胞分泌基质和诱导干细胞向软骨细胞分化,是一种极具优势的支架材料。CECM良好的促基质分泌和诱导分化作用与其含有多种软骨相关蛋白有关。在实际应用中,CECM存在力学性能不强和细胞渗透不足等问题,联合其他材料能在一定程度上弥补其不足,因此寻找性能更加优化的复合方式是CECM的应用趋势。本文对CECM材料在软骨组织工程中的研究进展作一综述。     

富血小板纤维蛋白对兔脂肪干细胞成骨分化的影响

目的：体外分离培养兔脂肪干细胞（adipose—derived stem cells,ADSCs）,鉴定其分化能力并观察富血小板纤维蛋白（platelet—rich fibrin,PRF）对ADSCs成骨分化的影响。方法：取新西兰兔腹股沟处的脂肪组织,将其分离获得脂肪干细胞,培养至第三代用于实验。分别以油红O、茜素红染色鉴定其成脂和成骨分化能力。取兔耳中央动脉血一次离心法制备PRF膜。将脂肪干细胞分为2组：对照组不含PRF膜;实验组含PRF膜。用碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测不同时间点PRF对ADSCs成骨分化的影响。结果：脂肪干细胞呈长梭形贴壁生长;油红O及茜素红染色均呈阳性;在不同的时间点,实验组ALP活性值均高于对照组（P〈0．05）。结论：ADSCs具有成骨的潜能,且PRF可以促进ADSCs向成骨细胞分化。     

茜素红与阿利新蓝双染色法对小鼠下颌骨发育的整体观察

目的:探索用茜素红/阿利新蓝双染色法观察小鼠下颌骨的整体骨架发育。方法:应用不同条件的茜素红/阿利新蓝染色液对E15.5、E16.5、 E18.5和P90的小鼠进行整体骨架双染色,观察小鼠下颌骨的整体发育情况,重点关注Meckel's软骨和髁突软骨发育。结果:骨和软骨能被分别染成红色和蓝色,在体视显微镜下可清楚地观察到下颌骨的整体发育形态。Meckel's软骨与周围的骨组织在组织学上和空间上无连续性。髁突软骨独立于Meckel's软骨,与下颌骨骨膜紧密相连。结论:应用不同条件的茜素红/阿利新蓝整体骨架双染色法成功观察了小鼠下颌骨的整体发育过程。Meckel's软骨可能不直接参与下颌骨的骨化,髁突可能是来源于下颌骨末端骨膜间质细胞。[关键词] 阿利新蓝 茜素红 双染色法 下颌骨发育 整体观察     

脂肪干细胞促进可注射性"软骨细胞砖-富血小板血浆"复合体形成异位软骨的实验研究

目的:将脂肪干细胞(ADSCs)负载入可注射性软骨细胞砖-富血小板血浆(CB-PRP)复合体中,探究其作为种子细胞能否促进异位软骨的形成.方法:成膜培养软骨细胞并制备CB;扩增培养ADSCs和骨髓间充质干细胞(BMSCs);取静脉血制备PRP;将ADSCs和BMSCs分别与CB-PRP混合并注射至裸鼠皮下,12 周后取材观测软骨形成情况.结果:体外实验显示CB由软骨细胞及细胞外基质构成;体内生长12 周后,大体观察2 组复合体均形成软骨样组织;HE染色、番红O(Safranin-O)和甲苯胺蓝(TB)染色及定量检查结果显示2 组复合体均有软骨组织形成,Safranin-O和TB染色阳性区域面积无统计学差异.结论:ADSCs能够作为种子细胞促进可注射性"软骨细胞砖-富血小板血浆"复合体形成异位软骨.     

Nanofibrous scaffolds for dental and craniofacial applications

Tissue-engineering solutions often harness biomimetic materials to support cells for functional tissue regeneration. Three-dimensional scaffolds can create a multi-scale environment capable of facilitating cell adhesion, proliferation, and differentiation. One such multi-scale scaffold incorporates nanofibrous features to mimic the extracellular matrix along with a porous network for the regeneration of a variety of tissues. This review will discuss nanofibrous scaffold synthesis/fabrication, biological effects of nanofibers, their tissue- engineering applications in bone, cartilage, enamel, dentin, and periodontium, patient-specific scaffolds, and incorporated growth factor delivery systems. Nanofibrous scaffolds cannot only further the field of craniofacial regeneration but also advance technology for tissue-engineered replacements in many physiological systems.     

丝素蛋白/左旋聚乳酸支架材料与软骨细胞体外细胞相容性研究

目的:观察静电纺丝支架材料丝素蛋白/左旋聚乳酸(SF/PLLA)的体外细胞相容性,探索其作为软骨组织工程支架材料的可行性,为进一步的体内及动物实验奠定基础。方法:将兔膝关节软骨细胞与丝素蛋白/左旋聚乳酸(SF/PLLA)支架材料复合培养,在第3、7、14天分别作HE染色和阿利新蓝+核固红染色,扫描电镜检验细胞黏着情况,MTT试验检测细胞在支架上的增殖情况。结果:细胞在支架上可以获得良好的粘附,细胞增殖良好,无细胞表型的变化。结论:丝素蛋白/左旋聚乳酸(SF/PLLA)具有良好的细胞相容性,可作为软骨组织工程支架材料。     

人髁突骨髓间充质干细胞体内成骨的实验研究

目的 探讨人髁突来源骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSC)体内分化成骨的能力,为构建组织工程髁突提供种子细胞.方法取切除的人髁突冲洗收集骨髓细胞,采用密度梯度离心和贴壁培养法进行培养和纯化BMSC,取第3或4代BMSC进行成骨细胞和成软骨细胞诱导分化后接种于珊瑚骨支架表面,扫描电镜观察细胞在支架表面的黏附和增殖状况.将成骨或成软骨细胞-珊瑚骨支架植入裸鼠背部皮下,6和9周后观察体内成骨和成软骨情况.结果 培养3～7d后扫描电镜显示细胞黏附于珊瑚骨支架表面,呈多层生长,并跨越微孔连成网状或片状;植入裸鼠体内9周,髁突形珊瑚骨支架均基本维持最初的形态,可见散在或片状的新生骨形成,新生软骨呈岛状分布.结论从人髁突骨髓中分离出的BMSC具有体内形成新骨和软骨组织的能力,可作为构建组织工程髁突的种子细胞.     

Chondrogenic potential of stem cells from human exfoliated deciduous teeth in vitro and in vivo

Objective. The aim of this study was to investigate the chondrogenic potential of stem cells from human exfoliated teeth (SHED). Materials and methods. SHED cultures were isolated from human exfoliated deciduous teeth. Colony-forming capacity, odonto/osteogenic and adipogenic potential were measured. SHED were cultured for 2 weeks in chondrogenic differentiation medium containing dexamethasone, insulin, ascorbate phosphate, TGF-β3 and bFGF. Toluidine blue staining and safranin O staining were used for chondrogenesis analysis. The related markers, type II collagen and aggrecan, were also investigated using immunohistochemistry. SHED were seeded onto the β-TCP scaffolds and transplanted into the subcutaneous space on the back of nude mice. The transplants were recovered at 2, 4 and 8 weeks post-transplantation for analysis. Results. SHED showed colony-forming capacity, odonto/osteogenic and adipogenic differentiation capacity. Chondrogenic differentiation was confirmed by toluidine blue staining, safranin O staining, type II collagen and aggrecan immunostaining. After in vivo transplantation, SHED recombined with β-TCP scaffolds were able to generate new cartilage-like tissues. Conclusions. The ?ndings demonstrate the chondrogenic differentiation capacity of SHED both in vitro and in vivo models, suggesting the potential of SHED in cartilage tissue engineering.