抑菌浓度米诺环素对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 研究抑菌浓度的米诺环素对成骨细胞增殖、分化和矿化及Runt相关转录因子2（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）mRNA表达的影响。方法 将米诺环素溶液（0、0.1、0.5、1、10 μg·mL^-1）与原代成骨细胞共培养,CCK-8检测增殖活性,通过ALP活性检测、茜素红染色、荧光定量聚合酶链反应检测探讨米诺环素对成骨细胞分化、矿化的影响。结果 0.1、0.5、1 μg·mL^-1的米诺环素可以促进细胞的增殖,上调ALP、Runx2 mRNA的表达水平,增加钙含量及钙化结节的形成,其中1 μg·mL^-1具有最大促进作用（P<0.05）;当浓度为10 μg·mL^-1时这种促进作用开始下降,并对ALP活性和OPN表达有显著抑制作用（P<0.01）。结论 适宜抑菌浓度的米诺环素能促进成骨细胞增殖,上调Runx2、ALP、OPN的表达水平,促进成骨细胞分化和矿化。     

CCL5/CCR5生物轴在涎腺腺样囊性癌细胞嗜神经侵袭中的作用

目的 探讨CCL5/CCR5生物轴在涎腺腺样囊性癌（SACC）细胞嗜神经侵袭中的作用。方法 应用细胞免疫荧光技术和流式细胞术检测SACC-LM细胞中趋化因子受体CCR5的表达;应用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测周围神经细胞培养上清液中趋化因子CCL5的表达。应用流式细胞术检测CCL5对SACC-LM细胞内F肌动蛋白的作用,并通过划痕和侵袭实验观察趋化因子CCL5和其受体CCR5对SACC-LM细胞运动能力和侵袭能力的作用。结果 SACC-LM细胞高表达趋化因子受体CCR5;周围神经原代培养上清液中趋化因子CCL5质量浓度为（359.2±15.8）、（696.4±22.6） pg·mL^-1;趋化因子CCL5和其受体CCR5结合后对SACC-LM细胞的运动能力和侵袭能力可以产生促进作用。结论 CCL5/CCR5生物轴可能在SACC细胞嗜神经侵袭中起着重要的作用。     

涎腺腺样囊性癌细胞株p16基因缺失、突变及表达意义

目的　研究 p16基因在涎腺腺样囊性癌细胞株中的缺失和突变等结构变化及其表达之间的关系。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)和 PCR-单链构象多态性 (SSCP)对涎腺腺样囊性癌细胞株 ACC- 2和高转移细胞克隆 ACC- M进行 p16基因缺失、突变的检测 ,应用免疫组化方法检测 p16基因在细胞株中的蛋白表达。结果　涎腺腺样囊性癌细胞株 ACC- 2检测 p16基因阳性 ,高转移细胞克隆 ACC- M缺失 ,两个细胞克隆均无点突变 ,ACC- 2的p16蛋白表达阳性 ,而 ACC- M蛋白表达阴性。结论　 p16基因在高转移涎腺腺样囊性癌克隆中的缺失 ,表明 p16基因在涎腺腺样囊性癌的演进和转移中具有抑癌作用。     

涎腺腺样囊性癌耐药细胞系的建立

目的:建立博莱霉素(BLM)诱导的人涎腺腺样囊性癌耐药细胞株.方法:采用大剂量博莱霉素(20μ/ml)24 h暴露法反复处理腺样囊性癌细胞系ACC-2细胞,获得耐药细胞系ACC-2/BLM;通过MTT法、细胞计数法、流式细胞术等方法,观察ACC-2/BLM的生物学特性.结果:成功建立了博莱霉素诱导的人涎腺腺样囊性癌耐药细胞系ACC-2/BLM,耐药指数为7.299,与环磷酰胺、顺铂等抗癌药有明显的交叉耐药;与ACC-2细胞相比,ACC-2/BLM倍增时间延长,细胞周期中S期细胞减少,G1、G2期细胞增多.在含60μg/ml博莱霉素的培养液中,分别培养9 d后,ACC-2/BLM凋亡细胞明显少于ACC-2细胞.结论:BLM可致ACC-2细胞产生耐药性,ACC-2/BLM细胞系具有多药耐药特性.     

CXCL12/CXCR4在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中的作用

目的:探讨CXCL12/CXCR4在人涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭机制中的作用。方法:在基因水平上,应用real-timePCR法检测人施万细胞(human Schwanncell,HSC)和涎腺腺样囊性癌ACC-3细胞中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4的表达。在蛋白水平上,应用流式细胞术检测HSC和ACC-3细胞膜上CXCR4的表达。应用ELISA检测HSC培养上清液中CXCL12的表达。应用趋化实验观察HSC培养上清液对ACC-3细胞的趋化作用。结果:HSC中CXCL12基因有较高的表达,而ACC-3细胞中表达量极少;HSC和ACC-3细胞中CXCR4基因均有表达。HSC和ACC-3细胞膜上CXCR4蛋白均有表达;HSC培养上清液中CXCL12蛋白的质量浓度约为(403.4±16.4)～(785.3±32.3)pg/mL;HSC培养上清液能够对ACC-3细胞产生趋化作用,应用CXCR4单克隆抗体或CXCR4受体激活拮抗剂AMD3100能明显抑制这种作用。结论:CXCL12/CXCR4可能与涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭有关。     

基质金属蛋白酶-1在人涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的:测定基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在人涎腺腺样囊性癌不同转移力细胞系中的表达。方法:以人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞系及其高转移株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型,采用免疫组化法和蛋白印迹(Western blot)法检测MMP-1的蛋白表达水平。结果:MMP-1在ACC-M细胞中的表达水平高于ACC-2细胞。结论:MMP-1在人涎腺腺样囊性癌的侵袭转移过程中可能发挥作用。     

人涎腺腺样囊性癌中表皮生长因子受体的表达及意义

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)在人涎腺腺样囊性癌组织和细胞系中的表达及其临床病理学意义。方法:采用免疫组化S-P法对86例不同亚型的人涎腺腺样囊性癌组织病理切片、20例正常腮腺组织切片及ACC-2细胞爬片进行EGFR的检测;激光共聚焦显微镜对ACC-2细胞中EGFR的表达情况进行检测。结果:在涎腺腺样囊性癌组织中EGFR呈过度表达,其阳性率要明显高于正常腮腺组织(P<0.05);EGFR的表达在腺样囊性癌的恶性程度相关(P<0.05);ACC-2细胞中也检测到了EGFR的过度表达。结论:EGFR表达与腺样囊性癌恶性度及预后密切相关。     

基因表达谱芯片技术筛选涎腺腺样囊性癌ACC-2/BLM细胞耐药相关基因

目的:应用高通量基因芯片技术对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-2及其多药耐药细胞株ACC-2/BLM的基因表达谱进行对比分析,筛选差异表达基因。方法:以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-2及其耐药细胞ACC-2/BLM作为研究对象,提取mRNA,逆转录为cDNA,用Cy3和Cy5荧光染料标记,制备成cDNA探针,与表达谱芯片进行杂交扫描和分析;并应用Real-Time-PCR技术对其中6个基因进行验证。结果:在45 015个基因表达谱的筛选中,2 294个基因表达差异(2倍以上),其中1 310个基因表达水平上调,984个基因表达水平下调。使用RT-PCR和RealTime PCR技术对其中6个基因表达差异进行验证,验证结果与基因芯片结果一致。结论:涎腺腺样囊性癌ACC-2/BLM细胞耐药性与多个基因相关。     

Genistein对涎腺腺样囊性癌细胞生长及Survivin表达的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC- 83细胞增殖及Survivin表达的影响。方法以不同浓度Genistein作用于SACC- 83细胞不同时间后,用MTT法分析细胞的生长增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western印迹分析及电泳凝胶成像分析软件定量检测Survivin的表达。结果Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;SACC- 83细胞经220 μmol/L Genistein作用3 d其生长明显受到抑制,并显著诱导细胞凋亡（P<0.01）,同时伴有抗凋亡蛋白Survivin的表达下调。结论Genistein能明显抑制人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC- 83细胞生长并诱导凋亡;Survivin的表达减少可能是Genistein诱导凋亡的机制之一。     

Survivin在腺样囊性癌细胞ACC-2以及ACC-M中的表达

目的：探讨Survivin在腺样囊性癌（ACC）细胞系中的表达情况及其表达与ACC远处转移的相关性。方法：培养人涎腺腺样囊性癌（ACC-2）和肺转移腺样囊性癌（ACC-M）细胞,观察其形态学特征,采用MTr法检测细胞的生长活性,并采用SP法检测细胞中Survivin的表达。结果：ACC-2和ACC-M细胞均表现有明显的上皮样和腺样细胞的特征。ACC-M细胞的生长活性高于ACC-2细胞,且Survivin在ACC-M细胞中的表达也强于ACC-2细胞。结论：Survivin与涎腺ACC肺部转移的发生具有高度相关性。     

TGF-β1对人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞体外增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨TGF-β1在腺样囊性癌的增殖、迁移和侵袭、浸润过程中的作用和相关机制。方法:以腺样囊性癌ACC-2细胞株为研究对象,采用TGF-β1刺激ACC-2细胞,MTT法检测ACC-2细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western蛋白印迹检测ACC-2细胞MAPK(P38、JNK、ERK)的活化及MMP-2表达的变化,实时定量PCR检测ACC-2细胞中MMP-2的mRNA表达变化。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:TGF-β1刺激后,ACC-2细胞增殖能力无显著变化(P>0.05),但迁移、侵袭能力增强(均为P<0.01);同时,ACC-2细胞p-ERK1/2、p-P38和MMP-2蛋白表达升高(均为P<0.05),MMP-2 mRNA表达亦升高(P<0.01),但p-JNK1/2蛋白无显著变化(P>0.05)。结论:TGF-β1可增强人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞的迁移和侵袭能力,活化p-ERK1/2和p-P38,上调MMP-2的表达。TGF-β1/MAPK/MMP-2通路可能参与人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞侵袭能力的调节。     

姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响

目的体外研究姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响。方法用终浓度为2.5、5、10、15、20mg/L的姜黄素处理SACC-83。应用MTT比色试验,倒置显微镜,Giemsa染色,Annexin-V-FITC和PI双标记活细胞后流式细胞仪和透射电镜检测和观察SACC-83的生长抑制率和细胞凋亡情况。结果姜黄素对SACC-83的生长抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性（P〈0.01）。用药组细胞明显凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异（P〈0.01）。结论姜黄素具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。     

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。     

转化生长因子β1/细胞外信号调节激酶/基质金属蛋白酶通路对腺样囊性癌侵袭和迁移的影响

目的 探讨转化生长因子β1/细胞外信号调节激酶/基质金属蛋白酶2(TGF-β1/ERKl/2/MMP-2)通路在腺样囊性癌(ACC)侵袭和迁移过程中的作用及机制.方法 以腺样囊性癌ACC-2细胞株为研究对象.用转化生长因子β1(TGF-β1)以及ERK通路抑制剂UO126处理ACC-2细胞.MTT检测ACC-2细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Westem blot蛋白印迹检测ACC-2细胞中ERKI/2的活化及MMP-2的表达情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测ACC-2细胞中MMP-2的mRNA的表达情况.结果 TGF-β1及UO126干预后,ACC-2细胞增殖能力无明显变化;TGF-β1刺激可增强ACC-2细胞迁移、侵袭能力,增加ACC-2细胞p-ERKI/2和MMP-2蛋白以及MMP-2 mRNA的表达.而UO126阻断ERK磷酸化后,抑制了TGF-β1刺激的增强作用,ACC-2细胞的迁移、侵袭能力降低,MMP-2蛋白和mRNA的表达均下降.结论 TGF-β1/ERKl/2/MMP-2通路参与了人唾液腺ACC侵袭和迁移能力的调节.TGF-β1可通过上调ERK1/2,继而上调MMP-2,促进人唾液腺ACC细胞的侵袭和迁移能力,ERKl/2可能成为人唾液腺ACC侵袭防治的新靶点.     

生存素基因在三氧化二砷诱导腺样囊性癌-2细胞凋亡中的作用

目的体外观察三氧化二砷（As2O3）诱导人类腺样囊性癌（ACC）-2细胞凋亡的作用,同时检测此过程中ACC-2内生存素（Survivin）表达水平的变化。方法甲基噻唑基四唑（MTT）法检测As2O3不同处理条件下对ACC-2细胞生长的抑制效应,流式细胞术观察As2O3诱导的各组ACC-2细胞的凋亡率。使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin mRNA的表达,蛋白印迹（Western blot）检测蛋白水平的表达差异。结果As2O3作用下ACC-2细胞生长明显受抑制,其抑制率呈浓度和时间依赖关系,细胞凋亡率也呈相同的趋势。RT-PCR和Western blot检测显示,As2O3作用下ACC-2细胞内Survivin mRNA和蛋白表达明显受抑制,抑制程度也具有时间和剂量依赖性。结论As2O3可通过促进细胞凋亡使体外培养的ACC-2细胞生长受抑制,受抑制的ACC-2细胞内Survivin mRNA和蛋白表达下降。推测Survivin基因在As2O3诱导的ACC-2细胞凋亡中起重要作用。     

唾液腺腺样囊性癌中TRPM的表达及意义

目的检测唾液腺腺样囊性癌(ACC)中瞬时受体势M(TRPM)的表达及分布情况的变化,以探究ACC的发病机理。方法采用免疫印迹和免疫组织化学方法,检测TRPM在培养的ACC-2细胞及ACC组织中的表达,采用方差分析,利用OriginPro 7.0软件进行统计学分析。结果ACC-2细胞和ACC组织中TRPM7蛋白的表达水平明显高于正常组织。TRPM7蛋白表达量经灰度值分析,正常腮腺组织为0.42±0.044,多形性腺瘤组织为0.413±0.085,而腺样囊性癌组织为0.85±0.045,差异有显著性意义(P<0.001)。结论ACC中TRPM表达水平的增高可能是ACC发病的组织病理学基础。     

MAB225对体外培养的ACC-2细胞增殖能力影响的研究

目的:研究表皮生长因子受体单克隆抗体(MAB225)对体外培养的人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-2增殖能力的影响.方法:通过MTT比色法、流式细胞分析及克隆形成试验观察经MAB225处理后的ACC-2细胞增殖能力的变化,以观察MAB225在体外对ACC-2细胞增殖能力的影响.结果:MAB225可以在体外抑制ACC-2细胞...