Nrf2/HO-1信号通路在右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用

目的评价核因子-E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用。方法 BV-2小胶质细胞加入含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,以1.5×104个/ml的密度接种于96孔培养板(200 μl/孔)或以2×105个/ml密度接种于6孔培养板(每孔2 ml),置于37 ℃、含5%CO2-21%O2-74 %N2的正常培养箱中培养。采用随机数字表法分为5组(n=30):正常对照组(C组)、右美托咪定组(D组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、氧糖剥夺/复氧复糖+右美托咪定组(OGD/R+D组)和氧糖剥夺/复氧复糖+右美托咪定+ML385组(OGD/R+D+ML组)。C组在正常培养箱中继续培养26 h;D组加入终浓度为10 μmol/L的右美托咪定孵育2 h,随后在正常培养箱中培养26 h;OGD/R组、OGD/R+D组、OGD/R+D+ML组更换为无糖DMEM培养基,置于37 ℃、含5%CO2-1%O2-94 %N2的培养箱中培养2 h,然后换为含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,在正常培养箱中培养24 h;...     

YAP/OPA1信号通路在丙泊酚减轻小鼠海马神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用

目的评价Yes相关蛋白(YAP)/视神经萎缩蛋白1(OPA1)信号通路在丙泊酚减轻小鼠海马神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用。方法取正常培养处于对数生长期的HT22小鼠海马神经元, 采用随机数字表法分为4组(n=54):对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)、丙泊酚组(P组)和丙泊酚+YAP沉默组(P+ siRNA-YAP组)。采用无糖无氧孵育6 h、复氧复糖培养24 h的方法制备神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型。P组于复氧复糖即刻加入丙泊酚终浓度50 μmol/L。P+ siRNA-YAP组于模型制备前48 h转染siRNA-YAP。采用CCK-8法检测神经元活力, 采用流式细胞术检测ROS含量和凋亡率, 采用分光光度法检测MDA含量、SOD活性以及线粒体膜电位(MMP), 采用荧光素荧光酶发光法检测线粒体ATP含量, 采用免疫荧光法观察YAP核转位, Western blot法检测YAP、磷酸化YAP(p-YAP)以及OPA1的表达。结果与C组比较, OGD/R组神经元活力降低, ROS、MDA含量和凋亡率升高, SOD活性、MMP和线粒体ATP含量降低, p-YA...     

hsa_circ_0081596在人神经细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤中的作用

目的:评价 hsa_circ_0081596在人神经细胞氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用。 方法:培养人神经母细胞瘤细胞,采用随机数字表法将细胞(5代以内)分为4组( n＝20)：对照组(C组)、OGD/R组(O组)、OGD/R+小干扰RNA(siRNA)组(S组)、OGD...     

hsacirc0025853在低温减轻神经母细胞瘤细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用

目的评价hsa_circ₀025853在低温减轻神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞)氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用。方法体外培养SK-N-SH细胞至对数生长期, 采用随机数字表法分为4组(n=20):对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(OGD/R组)、低温组(H组)、hsa_circ₀025853干扰RNA(siRNA)+低温组(S+H组)。C组细胞在正常条件下培养;OGD/R组氧糖剥夺3 h后复糖复氧24 h;H组氧糖剥夺3 h后, 在32 ℃低温下复糖复氧24 h。S+H组在氧糖剥夺-复糖复氧模型制备前48 h转染siRNA序列, 余同H组。于复糖复氧24 h时, 采用CCK-8法检测细胞活力, 流式细胞术检测细胞凋亡率, qRT-PCR法检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1) mRNA、hsa_circ₀025853表达, Western blot法检测Drp1表达水平。结果与C组比较, 其余3组细胞活力降低, 细胞凋亡率升高, hsa_c     

Sigma-1受体在喷他佐辛减轻SH-SY5Y细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用：与内质网应激的关系

目的评价Sigma-1受体(Sigma-1R)在喷他佐辛减轻SH-SY5Y细胞氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)损伤中的作用及其与内质网应激的关系。方法将生长良好的SH-SY5Y细胞采用随机数字表法分为4组(n=6):对照组(C组)、OGD/R组(O组)、OGD/R+喷他佐辛组(OP组)和OGD/R+喷他佐辛+BD1047组(OPB组)。C组细胞正常培养;O组、OP组和OPB组将培养基更换为EBSS培养基, 置于培养箱中培养4 h, 然后更换为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基复氧复糖18 h, OP组复氧复糖时加入喷他佐辛(终浓度10 μmol/L), OPB组复氧复糖时加入喷他佐辛(终浓度10 μmol/L)和Sigma-1R阻断剂BD1047(终浓度20 μmol/L)。复氧复糖18 h时采用流式细胞仪检测细胞凋亡率, 采用Western blot法检测Sigma-1R、C/EBP同源蛋白(CHOP)、磷酸化需肌醇酶1(p-IRE1)、剪接型X-框结合蛋白1(XBP1s)和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(c-cas-3)表达。结果与C组比较, O组、OP组和OPB组细胞凋亡率...     

蛋白质O-GlcNAc修饰在氧糖剥夺/复氧复糖小鼠神经细胞氧化应激损伤中的作用

目的评价蛋白质糖基化(O-GlcNAc)修饰在氧糖剥夺/复氧复糖小鼠神经细胞氧化应激损伤中的作用。方法标准小鼠海马神经细胞系, 以5×104个/ml的密度接种于培养板或培养皿, 采用随机数字表法分为4组(n=20):正常组(N组)、O- (连接) N-乙酰葡糖胺水解酶(OGA)抑制剂Thiamet G组(T组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(D/R组)以及Thiamet G+氧糖剥夺/复氧复糖组(T-D/R组)。采用低糖培养基在94%N2-5%CO2-1%O2混合气体培养6 h进行糖氧剥夺, 随后更换正常培养基进行复氧复糖12 h。T-D/R组在氧糖剥夺/复氧复糖前4 h时细胞培养液中加入终浓度1 mmol/L的Thiamet G, T组于提取细胞蛋白前4 h换成含终浓度1 mmol/L Thiamet G的培养基。复氧复糖完成后, 采用DCFH-DA染色法检测细胞ROS累积量, Jc-1染色法检测线粒体膜电位, 免疫荧光法检测O-GlcNAc修饰水平, Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p53抑癌基因...     

丙泊酚后处理对小鼠N2a细胞氧糖剥夺/复糖复氧模型内质网IRE1-XBP1信号通路的影响

目的 探讨丙泊酚后处理对小鼠神经母细胞瘤(N2a)细胞氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型内质网肌醇酶1(IRE1)-X盒连接蛋白1(XBP1)信号通路的影响。方法 培养小鼠N2a细胞至对数生长期,采用随机数字表法将细胞平均分为三组：对照组(C组)、OGD/R组(O组)和OGD/R+丙泊酚后处理组(P组)。C组在正常条件下培养,O组氧糖剥夺3 h后在正常条件下培养进行复糖复氧24 h, P组氧糖剥夺3 h后于复糖复氧即刻加入丙泊酚50μmol/L孵育2 h,随后在正常条件下培养22 h。三组均采用流式细胞学技术检测细胞凋亡率,CCK-8法检测细胞存活率,Western blot法检测IRE1、XBP1蛋白含量,qRT-PCR法检测IRE1、XBP1 mRNA表达量,透射电镜法观察细胞内质网形态。结果 与C组比较,O组和P组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞存活率明显降低(P<0.05),IRE1、XBP1蛋白含量和mRNA表达量明显升高(P<0.05)。与O组比较,P组细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞存活率明显升高(P<0.05),IRE1、...     

HO-1在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用.方法 出生48 h内的Wistar大鼠,体外培养海马神经元,随机分为6组,每组108孔,正常对照组(C组):不做任何处理;2%七氟烷预处理组(S1组):2%七氟烷预处理60 min后正常培养24 h;OGD组:缺糖缺氧45 min后复糖复氧,再正常培养24 h以制备氧糖剥夺模型;2%七氟烷预处理+OGD 组(S1+OGD组)和4%七氟烷预处理+OGD组(S2+OGD组):分别经2%、4%七氟烷预处理后制备氧糖剥夺模型;4%七氟烷预处理+ZnPPⅨ+OGD(Z组):4%七氟烷预处理同时在培养液中加入ZnPPⅨ(终浓度10 μmol/L),其余处理同S2+OGD组.正常培养24 h时检测神经元存活率、凋亡率和HO-1蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与C组比较,OGD组、S1+OGD组、S2+OGD组和Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,S1组海马神经元HO-1 mRNA 及其蛋白表达上调(P<0.01),神经元存活率、凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与OGD组比较,S1+OGD组、S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,Z组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与S1+OGD组比较,S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调(P<0.01);与S2+OGD组比较,Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达下调(P<0.01).结论 HO-1可能参与了七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡的机制.     

小鼠神经细胞氧糖剥夺-复糖复氧时miR-93-5p与线粒体融合蛋白2的关系

目的评价小鼠神经细胞氧糖剥夺-复糖复氧时微小RNA-93-5p(miR-93-5p)与线粒体融合蛋白2(Mfn2)的关系。方法体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞至对数生长期。实验Ⅰ采用随机数字表法将细胞分为5组(n=20):对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(OGD/R组)、miR-93-5p抑制剂组(I组)、siRNA-Mfn2+miR-93-5p抑制剂组(siMfn2+I组)和miR-93-5p阴性对照组(NC组)。氧糖剥夺:在低糖平衡盐溶液、37 ℃ 5%CO2-95%N2的环境中培养3 h, 复糖复氧:在正常培养基、37 ℃ 5%CO2-95%空气中复氧24 h。I组、siMfn2+I组与NC组在模型制备前48 h分别转染miR-93-5p抑制剂、miR-93-5p抑制剂+siRNA-Mfn2及阴性对照miRNA。采用CCK-8法检测细胞活力, 流式细胞术检测细胞凋亡率, qRT-PCR法检测miR-93-5p、Mfn2 mRNA表达水平, Western blot法检测Mfn2表达水平。实验Ⅱ构建野生型(WT)-Mfn2和突变型(MUT)-Mfn2质粒, 并分别与miR-93-5...     

自噬在吗啡预处理减轻小鼠原代皮层神经元氧糖剥夺/复糖复氧损伤中的作用及其与JNK的关系

目的评价自噬在吗啡预处理减轻小鼠原代皮层神经元氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与c-Jun氨基末端激酶(JNK)的关系。方法选择出生24 h内的C57BL/6乳鼠, 培养原代皮层神经元, 采用随机数字表法分为9组(n=24):对照组(C组)、OGD/R组、吗啡预处理组(M组)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(3-MA组)、3-MA+吗啡预处理组(3-MA+M组)、自噬抑制剂氯喹组(Ch组)、氯喹+吗啡预处理组(Ch+M组)、JNK抑制剂SP600125组(SP组)和SP600125+吗啡预处理组(SP+M组)。吗啡预处理:OGD/R前加入吗啡3 μmol/L孵育2 h。3-MA组、Ch组和SP组分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP6001252 5 μmol/L, 孵育150 min。3-MA+M组、Ch+M组和SP+M组于吗啡预处理前30 min时分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP600125 25 μmol/L。随后氧糖剥夺1 h, 复糖复氧24 h。采用CCK-8法测定神经元活力;Western b...     

吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖时PKCε膜转位的影响

目的 探讨吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖(OGD/R)时蛋白激酶Cε(PKCε)膜转位的影响.方法 成年近交系BALB/C小鼠40只,体重18～22 g,雌雄不拘,制备海马脑片,将脑片置入无糖无氧的人工脑脊液中,培养20 min后再置于正常人工脑脊液(nACSF)中培养(复氧复糖)2h,以建立小鼠海马脑片OGD/R模型.脑片随机分为5组(n=40),对照组(C组):在nACSF中培养4 h;吗啡预处理组(M组):在含吗啡3μmol/L的nACSF中孵育30 min后用nACSF洗脱,随后制备OGD/R模型;纳洛酮+吗啡预处理组(N+M组):在含纳洛酮50 μmol/L的nACSF中孵育30 min后,加入吗啡至3 μmol/L,孵育30 min,随后制备OGD/R模型;纳洛酮组(N组):在含纳洛酮50μmol/L的nACSF中孵育1h,随后制备OGD/R模型;OGD/R组:制备OGD/R模型.于脑片OGD/R期间测定PKCε膜转位情况和神经元存活情况.结果 与C组比较,其余各组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05或0.01);与OGD/R组比较,M组神经元存活率升高,膜相关蛋白中PKCε表达下调,胞溶蛋白中PKCε表达上调(P＜0.05),N+M组和N组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,N+M组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05).结论 吗啡预处理诱导小鼠海马脑片缺血耐受的机制可能与抑制PKCε膜转位有关.     

hsacirc0008039和miR-484在SK-N-SH细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用：与Fis1的关系

目的评价hsa_circ₀008039和miR-484在人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞氧糖剥夺-复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与线粒体分裂蛋白1(Fis1)的关系。方法体外培养SK-N-SH细胞至对数生长期, 采用随机数字表法分为5组(n=25):对照组(C组)、OGD/R组、hsa_circ₀008039 siRNA组(S组)、hsa_circ₀008039过表达组(E组)和hsa_circ₀008039 siRNA+miR-484抑制剂组(S+I组)。C组细胞在正常条件下培养;S组、E组和S+I组分别转染has_circ₀008039 siRNA、has_circ₀008039过表达载体、has_circ₀008039 siRNA和miR-484抑制剂后, 氧糖剥夺12 h复糖复...     

miR-124-3p在电刺激预处理减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用：与小胶质细胞极化的关系

目的评价miR-124-3p在电刺激预处理减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与小胶质细胞极化的关系。方法将生长良好的BV2小胶质细胞采用随机数字表法分为4组(n=30):对照组(C组)、OGD/R组、电刺激预处理组(E组)和miR-124-3p抑制剂组(I组)。C组在正常条件下培养, OGD/R组氧糖剥夺2 h后复糖复氧24 h, 制备OGD/R损伤模型;E组在氧糖剥夺前给予100 mV/mm的直流电刺激4 h, 余同OGD/R组;I组在氧糖剥夺前48 h转染micrOFF? mmu-miR-124-3p抑制剂, 余同E组。采用CCK-8法检测细胞存活率, ELISA法检测上清液TNF-α、IL-1β及IL-10浓度;分别采用免疫荧光法和Western blot法检测M1型小胶质细胞表面标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型小胶质细胞表面标志物精氨酸酶1(Arg-1)的表达;采用q-PCR法检测iNOS和Arg-1的mRNA及miR-124-3p表达。结果与C组比较, 其余3组细胞存活率降低, 上清液TNF-α、IL-1β和IL-10浓度升高, 细胞i...     

血红素加氧酶-1对氧糖剥夺海马神经元CDK5-ATM-P53信号转导通路的影响

目的 评价血红素加氧酶-1(HO-1)对氧糖剥夺神经元细胞周期蛋白依赖激酶5(CDK5)-共济失调-毛细血管扩张突变基因(ATM)-P53信号转导通路的影响.方法 培养7d的海马神经元,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):正常培养组(C组)、氧糖剥夺组(D组)、氧糖剥夺+血晶素(HO-1诱导剂)组(D+H组)和氧糖剥夺+血晶素+锌原卟啉(HO-1抑制剂)组(D+H+T组).C组采用正常培养方法培养.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D+H组神经元用10μmol/L血晶素处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D+H+T组神经元同时用10μmol/L血晶素和10 μmol/L锌原卟啉处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.培养24h后,MTT法检测神经元存活情况,TUNEL法检测神经元凋亡情况,RT- PCR法检测HO-1 mRNA表达,Western blot 法检测HO-1、CDK5、ATM和P53蛋白表达.结果 与C组比较,D组神经元HO-1 mRNA、HO-1、CDK5、ATM和P53蛋白表达上调,神经元存活率降低,神经元凋亡率升高(P＜0.01);与D组比较,D+H组神经元HO-1 mRNA和HO-1蛋白表达上调,CDK5、ATM和P53蛋白表达下调,神经元存活率升高,神经元凋亡率降低(P＜0.01);与D+H组比较,D+H+T组神经元HO-1 mRNA和HO-1蛋白表达下调,CDK5、ATM和P53蛋白表达上调,神经元存活率降低,神经元凋亡率升高(P＜0.01).结论 HO-1可通过阻断氧糖剥夺海马神经元CDK5- ATM-P53信号转导通路抑制神经元凋亡.     

miR-188-5p在N2a细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用：与SENP3的关系

目的:评价miR-188-5p在N2a细胞氧糖剥夺-复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)的关系。方法:小鼠N2a细胞采用随机数字表法分为5组( n＝23)：对照组(C组)、OGD/R组、NC组、转染miR-188-5p激动剂组(M组)和转染miR-188-5p抑制剂组...     

艾司氯胺酮对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及其与线粒体应激的关系

目的评价艾司氯胺酮对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及其与线粒体应激的关系。方法实验Ⅰ SPF级雄性C57BL/6小鼠18只, 8～12周龄, 体质量28～30 g, 采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)和艾司氯胺酮+脑缺血再灌注组(E+IR组)。采用大脑中动脉栓塞1 h, 再灌注24 h的方法制备脑缺血再灌注损伤模型;E组造模前20 min腹腔注射艾司氯胺酮10 mg/kg。采用Zea Longa评分及平衡木实验(Feeney评分)评估小鼠神经功能;TTC染色法测定脑梗死体积。实验Ⅱ将原代皮层神经元采用随机数字表法分为3组(n=42):对照组(C组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)和艾司氯胺酮+OGD/R组(E+OGD/R组)。采用氧糖剥夺1 h, 复氧复糖24 h的方法制备OGD/R模型。E+OGD/R组加入25 μmol/L艾司氯胺酮处理40 min后制备模型。采用CCK-8法检测神经元活力, 透射电镜下观察神经元超微结构, 检测ROS、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)和MDA的水平, JC-1试剂盒检测线粒体膜电位, TUNEL染色法...     

Nrf2/NLRP3信号通路在丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤中的作用

目的评价核因子E2相关因子2/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nrf2/NLRP3)信号通路在丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤中的作用。方法原代培养孕16～18 d Wistar大鼠胎鼠海马神经元7 d, 采用随机数字表法分为4组(n=42):对照组(C组)正常培养;氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)氧糖剥夺1 h后复糖复氧;丙泊酚后处理组(P组)复糖复氧即刻加入丙泊酚(终浓度1.2 μg/ml)孵育2 h, 更换为正常培养液;Nrf2 siRNA(-)转染组(N组)原代神经元培养第3天行携带Nrf2基因敲除的慢病毒转染, 24 h后更换为正常培养液, 第7天进行模型制备及丙泊酚后处理。于继续培养24 h时收集细胞, 采用流式细胞术检测神经元凋亡率, RT-PCR法检测Nrf2和NLRP3 mRNA表达, Western blot法检测Nrf2和NLRP3表达, ELISA法测定TNF-α、IL-6和IL-1β浓度;试剂盒法检测还原性谷胱甘肽(GSH)、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。结果与C组比较, O组和P组神经元凋亡率升高, TNF-α、IL-6和IL-1β浓...     

PERK途径内质网应激与右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的关系

目的从在体和细胞水平评价蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径内质网应激与右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的关系。方法在体实验健康清洁级雄性小鼠20只, 体重20～30 g, 6～8周龄, 采用随机数字表法将小鼠分为4组(n=5):假手术组(S组)、假手术+右美托咪定组(SD组)、脑缺血再灌注组(IR组)和脑缺血再灌注+右美托咪定组(IRD组)。采用改良二血管阻断联合低血压法制备脑缺血再灌注损伤模型。IRD组于缺血10 min时、SD组于相应时点腹腔注射右美托咪定25 μg/kg。再灌注1 h时采用改良神经系统损伤程度法进行行为学评分, 随后处死大鼠, 取脑组织, 采用Western blot法测定内质网应激蛋白:免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)、真核起始因子2α(EIF-2α)、p-EIF-2α、PERK、p-PERK的表达。细胞实验选取标准小鼠海马神经元细胞系, 采用随机数字表法分为4组(n=12):对照组(C组)、糖氧剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、糖氧剥夺/复氧复糖+右美托咪定组(OGD/R+D组)、糖氧剥夺/复氧复糖+PERK途径抑制剂ISRIB组(OGD/R+ISRIB...     

丙泊酚诱导血红素氧化酶-1表达抑制氧糖剥夺大鼠海马神经元凋亡及机制研究

目的 研究丙泊酚诱导血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白表达抑制氧糖剥夺海马神经元凋亡的机制.方法 将培养7d的新生(出生24～48 h)SD大鼠海马神经元随机均分为五组:C1组,海马神经元全量换液后再继续培养24 h;C2组,海马神经元接受50μmol/L丙泊酚处理1h后,再继续培养24 h;D组,海马神经元进行缺糖缺氧培养1h后复糖复氧,再继续培养24 h;P组,海马神经元缺糖缺氧的同时接受50 μmol/L丙泊酚处理;Z组,在海马神经元进行缺糖缺氧的同时加入锌原卟啉(ZnpplX)使其终浓度为10 μmol/L后处理同P组.每组分别取12孔海马神经元,用Hoechst33342染色法检测细胞凋亡,用免疫细胞化学染色法检测HO-1蛋白和Bcl-2蛋白的表达.结果 与C1组比较,C2、D及P组海马神经元HO-1和Bcl-2蛋白的表达均增加,D、P及Z组凋亡率显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与D组比较,P组海马神经元HO-1和Bcl-2蛋白表达均增加,凋亡率下降(P＜0.01).与P组比较,Z组海马神经元HO-1和Bol-2蛋白的表达均降低,凋亡率则明显升高(P＜0.01).结论 丙泊酚通过诱导氧糖剥夺海马神经元表达HO-1,进而上调Bcl-2,从而抑制氧糖剥夺海马神经元的凋亡,可能是丙泊酚神经保护作用的机制之一.     

铁死亡在高脂高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的:评价铁死亡在高脂高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法:正常培养的H9c2心肌细胞,采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、高脂高糖-缺氧复氧组(HFHG+H/R组)和Ferrostatin-1+高脂高糖-缺氧复氧组(Fer-1+HFHG+H/R组)。采用高脂高糖处理12 h,随后缺氧...