HPLC法测定艾司奥美拉唑钠中3个潜在基因毒性杂质的研究及控制

目的:建立HPLC法测定艾司奥美拉唑钠中潜在基因毒性杂质E、杂质I、2-氯甲基-3,5二甲基-4-甲氧基吡啶。方法:杂质E色谱条件：YMC-Triart C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾缓冲液,流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为302 nm,柱温为30℃;杂质I色谱条件：Agilent Microspher C₁₈色谱柱(100 mm×4.6 mm, 3μm),流动相A为水-磷酸盐缓冲液(pH 7.6)-乙腈(80∶10∶10),流动相B为乙腈-磷酸盐缓冲液(pH 7.6)-水(80∶1∶19),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为302 nm,柱温为30℃;2-氯甲基-3,5二甲基-4-甲氧基吡啶色谱条件：GL Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.01 mol·L^-1磷酸氢二钠溶液(pH...     

HPLC法结合LC-MS法测定硫酸鱼精蛋白含量及肽段鉴定

目的:建立了一种同时测定硫酸鱼精蛋白中主成分纯度和含量的HPLC方法，并采用LC-MS法对肽段氨基酸序列进行鉴定。方法:HPLC方法采用的色谱柱为ThermoHypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8),流动相B为乙腈-0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8)(6.5∶93.5),梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1,柱温55℃,紫外检测波长为214 nm,进样量100μL。LC-MS法先采用馏分收集方式对各肽段进行提取富集，然后液质联用采用Waters ACQUITY UPLC Peptide BEH C₁₈色谱柱(15 cm×0.21 cm, 1.7μm),流速为0.2 mL·min^-1,流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为5%乙腈-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱；Thermo Q-Exactive Plus, ESI离子源，阳离子检测模式，雾化电压为...     

盐酸二甲双胍原料药及其固体制剂中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的测定方法(LC-MS/MS)的建立及评价

目的 建立盐酸二甲双胍原料药及其固体制剂中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的测定方法。方法 采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),色谱条件为色谱柱：ACE Excel 3 C₁₈-AR(4.6×100 mm, 5μm),流动相：0.1%甲酸溶液-0.1%的甲酸乙腈溶液,采用梯度洗脱的方式,流速：0.8 mL·min^-1,柱温：40℃;进样量：20μL;质谱条件为采用大气压化学离子源(APCI)进行电离,多离子反应监测(MRM)模式扫描。结果 N-亚硝基二甲胺浓度在1～100 ng·mL^-1范围内呈良好的线性关系,相关系数r²=0.9998,加标回收率为95.8%～107.3%,相对标准偏差(RSD%)为0.8%,检出限为0.1 ng·mL^-1,定量限为0.3 ng·mL^-1。结论 该方法灵敏准确,可用于盐酸二甲双胍原料药及其固体制剂中NDMA的定性与含量测定。     

液质联用技术用于醋酸阿托西班注射液中杂质结构鉴定

目的:采用高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱-四极杆串联静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q Orbitrap MS)技术对醋酸阿托西班注射液中杂质结构进行鉴定。方法:HPLC法采用Inertsil ODS-2 C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为乙腈-甲醇-三氟乙酸溶液(pH 3.2)(15∶10∶75),流动相B为乙腈-甲醇(60∶40),梯度洗脱，流速1.2 mL·min^-1,检测波长220 nm。UPLC-Q Orbitrap MS法采用BEH300 C₁₈色谱柱(150 mm×2.1 mm, 1.7μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱，流速0.2 mL·min^-1;采用电喷雾离子源，选择正离子模式进行Full MS/dd-MS²扫描。结果:对5家企业各1批醋酸阿托西班注射液进行了有关物质测定，以面积归一化计算，含量>0.1%的杂质峰个数分别为9、10、13、9和6,总杂含量分别为0.35...     

吲哚布芬中基因毒性杂质邻苯二甲醛液质联用分析方法的建立

目的 建立HPLC-MS/MS法测定吲哚布芬中的基因毒性杂质：邻苯二甲醛。方法 采用Agilent Eclipse Plus C₁₈(100 mm×4.6 mm, 3.5μm)色谱柱，水为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱，流速为0.55 mL·min^-1,进样体积为10μL,柱温35℃;采用电子喷雾源ESI,正离子模式采集分析，多反应监测(MRM),离子源温度为550℃。结果 邻苯二甲醛的检测下限为0.102μg·L^-1;平均加样回收率为96.2%(n=9),加样回收率良好；邻苯二甲醛在0.41～4.07μg·L^-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.997);对照品溶液和样品加标溶液在8 h内稳定性良好。5批吲哚布芬中均未检测到杂质邻苯二甲醛。结论 所建立的方法简单、准确且专属性好，适用于吲哚布芬中具有基因毒性警示结构的杂质邻苯二甲醛的测定。     

LC-MS／MS法分析注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠中未知降解杂质的结构

目的：分析和鉴定注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠中的未知降解杂质。方法采用液相色谱-质谱（ LC-MS／MS）法,采用强制降解的破坏条件,制备杂质含量较高的受试样品;以0.1%的甲酸水溶液为流动相A,乙腈为流动相 B,采 C18色谱柱进行梯度洗脱;以电喷雾串联质谱电离源正离子模式进行质谱数据采集,对热降解破坏样品进行LC-MS／MS测定。结果获得注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠的液相色谱图,以及与液相色谱图对应的一级、二级质谱图,对谱图进行分析归纳,推测注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠中2个未知杂质为头孢哌酮杂质 A进一步水解的产物,并推导了降解途径。结论本方法灵敏、可靠、快速,对头孢哌酮钠及其制剂的生产、质量监控具有指导意义。     

复杂抗生素多黏菌素E甲磺酸钠的组分与杂质谱研究及在质量控制中的应用

目的:建立二维液质联用方法确定多黏菌素E甲磺酸钠(CMS)杂质的结构及来源,进而用于药物质量控制研究。方法:一维系统：采用Acquity UPLC^?Peptide CSH C₁₈(150 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱,以磷酸盐缓冲液(7.8 g·L^-1磷酸二氢钠,用1 mol·L^-1氢氧化钠溶液调节pH至6.4)-乙腈(19∶1)为流动相A,磷酸盐缓冲液-乙腈(1∶1)为流动相B,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃;二维系统：采用Acquity BEH C₁₈柱(50 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱,以甲酸铵(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1,柱温40℃,检测波长210 nm。质谱检测器采用ESI源,负离子扫描模式。结果:采用2D-LC-Q TOF MS法,推定了CMS中55个杂质的结构,并推测其主要来源为多黏菌素E1-I、多黏菌素E1-7MOA、多黏菌素E3及多黏...     

琥珀酸美托洛尔中潜在的环氧乙烷类基因毒性杂质含量测定研究

目的 对琥珀酸美托洛尔中潜在的环氧乙烷类基因毒性杂质含量进行测定。方法 采用高效液相色谱法测定琥珀酸美托洛尔中含有环氧乙烷结构的杂质XI含量。色谱柱采用Wondasil C₁₈-WR柱(250 mm×4.6 mm, 5.0μm),以流动相A为缓冲液(取磷酸二氢钾2.72 g,高氯酸钠一水合物6.13 g,加水1 000 mL溶解后,用1.0 mol·L^-1氢氧化钠溶液调pH值至6.0),流动相B为甲醇的梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,进样量40μL,柱温30℃,检测波长280 nm。结果 杂质XI在线性范围为0.852 3～6.818 3μg·mL^-1内,r=0.999 9,检测限浓度为0.426 1μg·mL^-1,定量限浓度为0.852 3μg·mL^-1,平均回收率为94.21%。结论 本研究准确可靠、专属性强且重现性好,可为琥珀酸美托洛尔中潜在的环氧乙烷类基因毒性杂质的质量控制和安全性评价提供科学依据。     

HPLC法测定复方氨氯地平缬沙坦片有关物质

目的:建立测定复方氨氯地平缬沙坦片有关物质的HPLC方法。方法:用Agilent Extend C₁₈（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,以0.01mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（pH 3.5）-（甲醇:乙腈=10:40）为流动相,梯度洗脱,流速1.0ml·min^-1,柱温40℃,检测波长250nm,进样量20μl。结果:有关物质各杂质峰与主峰之间的分离良好,且已知单个杂质分离良好。结论:该方法准确可靠,专属性强,可用于复方氨氯地平缬沙坦片有关物质测定。     

超高效液相色谱法快速分析盐酸溴己新及其片剂中的有关物质

建立了超高效液相色谱(UHPLC)法测定盐酸溴己新(1)中15种有关物质。采用Zorbax Eclipse Plus C₁₈柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm),以甲酸铵缓冲液和乙腈(体积比60∶40)为流动相。通过对流动相pH值、缓冲盐浓度、柱温等条件进行考察,确定了最终色谱条件。分别采用本法和药典标准方法对3个厂家的共16批次1原料药和1片进行对比分析,并采用高分辨质谱对发现的未知杂质结构进行初步推断。结果表明,15个已知杂质和主成分分离良好,强制降解后产物对目标峰的分离没有干扰,表明本法专属性良好。所有1原料药和1片中的已知杂质和总杂含量均满足药典要求。通过LC-MS对其中未知单杂进行了分析,推断其可能为2,4-二溴-6-[[甲基-(4-甲基环己基)氨基]甲基]-苯胺。该方法为开展一致性评价研究奠定了基础。     

瑞格列奈片有关物质检查的研究

目的:建立HPLC法测定瑞格列奈片剂中的有关物质,并对5家企业瑞格列奈片的有关物质进行分析。方法:采用CAPCELL PAK MGⅡC₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为磷酸盐缓冲液(0.2%磷酸二氢钾溶液,用磷酸调pH至2.5),流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长240 nm,柱温35℃。结果:瑞格列奈主峰与5个已知杂质峰及其他降解杂质峰分离度良好;瑞格列奈与5个已知杂质分别在各自浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r>0.999 8,n=6);瑞格列奈和杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、C定量限分别为0.03、0.02、0.02、0.10、0.05、0.04μg·mL^-1,检测限分别为0.009、0.006、0.006、0.031、0.015、0.012μg·mL^-1;瑞格列奈杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、C的低、中、高3种浓度的平均回收率分别为100.5%、103.7%、103.5%、104.2%、103.6%。5家企业25批样品的最大单个未知杂质含量为0.03...     

HPLC法测定阿莫西林钠克拉维酸钾中的22个杂质

目的 建立HPLC法同时测定阿莫西林钠克拉维酸钾原料中22个已知杂质含量的方法。方法 采用YMC Triart C₁₈色谱柱(4.6×250 mm, 3μm);流动相A为0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(pH=5.9)-乙腈(99∶1),流动相B为0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(pH=5.9)-乙腈(80∶20),梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为215 nm,柱温为25℃。结果 该方法下主峰与各杂质间分离良好,各成分在各自线性范围内与峰面积线性关系良好(r>0.999);对各杂质的校正因子进行了计算,定量限、检出限及回收率等均符合规定。结论 该法专属性强、灵敏度高、准确度和重复性好,可用于检测阿莫西林钠克拉维酸钾的有关物质。     

枸橼酸莫沙必利片杂质研究

目的 建立测定枸橼酸莫沙必利片有关物质检测条件下特定杂质莫沙必利柠檬酰胺2个色谱峰的超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法。方法 HPLC条件，色谱柱为Agilent C₁₈柱(150 mm×4.6 mm,5μm)，流动相为枸橼酸盐溶液-乙腈(梯度洗脱)，流速为1.0 mL/min，检测波长为274 nm，柱温为30℃，进样量为10μL;UPLC-Q-TOF-MS条件，色谱柱为YMC-Triant C₁₈柱(150 mm×2.1 mm,1.9μm)，检测器为DAD检测器，流动相为含0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸铵(A)-乙腈(B)、梯度洗脱，流速为0.5 mL/min，检测波长为274 nm，柱温为40℃，进样量为0.5μL。电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI⁺)，二级质谱碰撞能量30 e V，毛细管电压4 k V，锥孔电压45 V，碎裂电压60 V，干燥气流速8 mL/min，干燥气温度300℃，雾化气压力35 psi，扫描模式MS/MS；扫描范围m/z 50～700；按不加校正因子的...     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中阿托伐他汀的浓度

目的:建立一种快速、准确、灵敏度高、专属性强的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中阿托伐他汀的浓度。方法:以氟伐他汀为内标,血浆样本经乙腈(含0.05%甲酸)沉淀蛋白后进行LC-MS/MS分析测定。色谱条件：采用MSCB-2C (3.0 mm×50 mm, 3.3μm) C₁₈为色谱柱,以0.05%甲酸-10%甲醇-水为流动相A,0.05%甲酸-40%甲醇-60%乙腈为流动相B,等度洗脱(流动相A∶B=36∶64,V/V),流速为0.5 mL·min^-1,柱温为45℃,进样量为5μL;质谱条件：采用电喷雾(ESI)正离子模式,多反应监测(MRM)方式进行检测,阿托伐他汀及氟伐他汀(内标)的离子对分别为559.45→250.20,412.25→224.15。结果:阿托伐他汀在1.0～100 ng·mL^-1范围内线性关系良好(R²≥0.999 5),定量下限为1.0 ng·mL^-1;低、中、高3水平血浆质控浓度批间及批内精密度在±10%以内,准确度在92.9%～...     

富马酸丙酚替诺福韦片中有关物质测定及杂质鉴定

目的 建立检测富马酸丙酚替诺福韦片中有关物质含量的高效液相色谱法,以及鉴定制剂中未知湿热降解杂质化学结构的二维液相色谱-三重四极杆串联质谱法。方法 有关物质测定中,色谱柱为Waters XTerra MS C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.02 mol/L磷酸盐(1 mol/L氢氧化钾溶液调pH至6.0)-甲醇(95∶5,V/V)-甲醇(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。化学结构鉴定中,色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C₁₈柱(50 mm×3.0 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇(55∶45,V/V),流速为0.4 mL/min,柱温为35℃,采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,质荷比(m/z)扫描范围为100～1 000,雾化气体(氮气,N₂)压力为45 psi,干燥气(N₂)流速为6 L/min,温度为350℃,碎裂电压为150 V,二级质谱碰撞裂解能量...     

UHPLC-MS/MS法测定盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔

目的 建立盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法。方法 Waters ACQUITY UPLC CSH^TM C₁₈色谱柱(3.0 mm×150 mm, 1.7μm),10 mmol·L^-1甲酸铵的水溶液(含0.1%甲酸)作为流动相A,乙腈溶液(含0.1%甲酸)作为流动相B,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1,柱温为50℃,进样器温度为5℃,进样体积为10μL,采用多反应监测(MRM)模式,对盐酸普萘洛尔缓释片中的N-亚硝基普萘洛尔进行定量检测。结果 N-亚硝基普萘洛尔在1～20 ng·mL^-1范围内具有良好的线性关系。低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)在98.4%～103.2%之间,RSD≤2.7%。检测限和定量限分别为0.09 ng·mL^-1和0.3 ng·mL^-1。检出盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔含量为1.8μg·g^...     

HPLC法测定奥卡西平及其制剂中有关物质

目的:建立使用C₁₈色谱柱同时测定奥卡西平及其制剂中8个杂质的高效液相色谱法。方法:采用ACE Excel C₁₈(4.6 mm×150 mm, 3μm)色谱柱,流速1.0 mL·min^-1,以6.8 g·L^-1磷酸二氢钾溶液(每1 000 mL加三乙胺2 mL,用磷酸调pH 6.0)为流动相A,乙腈-甲醇(11∶8)为流动相B,梯度洗脱,检测波长240 nm,柱温45℃。结果:奥卡西平与8个杂质分离度良好,奥卡西平和卡马西平分别在0.05～4.0μg·mL^-1和0.08～40μg·mL^-1浓度范围内呈现良好线性(r≥0.999 9),奥卡西平和卡马西平的定量限分别为1.03、0.65 ng,检测限分别为0.34、0.33 ng。共测定奥卡西平原料2个企业5批样品、奥卡西平片2个企业6批样品,其中1批原料检出杂质E,含量为0.004%;3批片剂检出卡马西平,含量分别为0.008%、0.005%、0.006%;1批片剂检出杂质C和杂质D,含量为0.006%、...     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中他达拉非的浓度

目的 建立一种测定人血浆中他达拉非浓度的液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)法。方法 用蛋白沉淀法对样品进行前处理。色谱柱：Waters ACQUITY UPLC^TM BEH C₁₈(2.1 mm×50.0 mm, 1.7μm),流动相：100%水含2 mmol·L^-1醋酸铵和0.1%甲酸-95%乙腈含2 mmol·L^-1醋酸铵和0.1%甲酸,流速：0.50 mL·min^-1,柱温：40℃,进样量：10μL。用电喷雾离子化源,正离子模式,多反应监测。考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、稀释效应和稳定性。结果 他达拉非在0.80～500.00 ng·mL^-1内,线性关系良好,其标准曲线为y=1.91×10^-2x+1.17×10^-3(r=0.998 8),定量下限为0.80 ng·mL^-1<...     

液-质联用测定Nrf2野生型和基因敲除型小鼠肝脏中16种胆汁酸

目的:建立测定小鼠肝脏中16种胆汁酸浓度的LC-MS/MS法,并将测定结果应用于比较Nrf2野生型和基因敲除型小鼠胆汁酸代谢谱。方法:小鼠肝脏样品加入70%乙腈匀浆,用甲醇沉淀匀浆液中的蛋白并高速离心,取上清液置进样瓶, 用Xtimate^TM C₁₈柱分离,以甲醇-醋酸铵及甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 ml·min^-1,进样5 μl分析。结果:16种胆汁酸在0.013~8.000 μmol·L^-1范围内,线性关系良好,定量下限浓度为0.013 μmol·L^-1,肝脏匀浆液加样回收率在94.9%~112.8%之间,日内、日间RSD均小于10.8%。结论:该方法准确可靠,灵敏度高,处理简便,适用于肝脏中胆汁酸浓度的测定,为生物样品中胆汁酸含量测定提供参考。     

加校正因子的主成分自身对照法同时测定利培酮中2种氧化性杂质

目的:建立加校正因子的主成分自身对照法测定利培酮中2种氧化性杂质的含量。方法:采用ZORB-AX Extend C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以流动相A:0.1%三氟乙酸溶液-乙腈(80∶20)(用氨水调pH 3.0)和流动相B:0.1%三氟乙酸溶液-甲醇(61∶39)(用氨水调pH 3.0)作为流动相,梯度洗脱,流速为2.5 mL·min^-1,检测波长为275 nm,进样量为10μL,柱温为30℃。测定利培酮与2种氧化性杂质的标准曲线方程,以斜率比值计算氧化性杂质相对于利培酮的校正因子,用系统适用性试验溶液结合相对保留时间对氧化性杂质进行定位。结果:2种氧化性杂质的相对保留时间分别为1.55与1.71,校正因子分别为1.14与1.15。结论:本方法可用于利培酮中2种氧化性杂质的定性及定量分析,采用加校正因子的主成分自身对照法更加准确测定2种氧化性杂质的含量。