生长抑素及制剂中多聚体的定量研究

目的:建立高效液相色谱-分子排阻色谱法(HPLC-SEC)测定生长抑素及制剂中的多聚体,并进行了方法学验证。方法:采用TSKgel G2000SWXL色谱柱(7.8 mm×300 mm, 5μm),流动相为乙腈-水-三氟乙酸(20∶80∶0.1,体积比),线性等度洗脱,流速0.5 mL·min^-1,柱温25℃,进样量为100μL;紫外检测器,检测波长为215 nm;标准曲线法和面积归一化法计算多聚体含量。结果:生长抑素二聚体的检测限为5.2 ng,定量限为15.6 ng,线性范围为0.1～5μg·mL^-1(r=0.999 6),平均回收率(n=3)为100.3%(RSD=0.52%)。结论:该方法快速、灵敏、准确,能够对生长抑素及制剂中的多聚体进行质控。     

NP-HPLC法测定他达拉非起始物料中对映异构体杂质

目的:建立正相高效液相色谱法(NP-HPLC法),用于他达拉非起始物料D-色氨酸甲酯盐酸盐中对映异构体杂质的定量分析。方法:采用淀粉衍生物手性色谱柱Chiralpak IC(250 mm×4.6 mm, 5μm),以正己烷-异丙醇-二乙胺(60∶40∶0.1)为流动相进行等度洗脱,流速0.9 mL·min^-1,柱温40℃,检测波长279 nm,进样量10μL。采用外标法计算对映异构体杂质含量。结果:该方法的专属性强;对映异构体杂质质量浓度在0.15～5.00μg·mL^-1范围内线性关系良好;检测限和定量限分别为0.05μg·mL^-1和0.15μg·mL^-1;精密度和稳定性试验的RSD均小于5%;在80%、100%和120%3个浓度水平的加样回收率在99.0%～100.0%。对4批起始物料样品进行测定,对映异构体杂质质量浓度在0.19%～0.22%,符合质量要求。结论:该方法快速、灵敏、准确,适用于他达拉非起始物料中对映异构体杂质的定量分析和质量控制。     

分子排阻色谱法测定生长抑素中的高分子量杂质

目的 通过外标法和自身对照法对比,建立了分子排阻色谱法测定生长抑素中的高分子量杂质的方法。方法 采用TSKgel G2000 SWXL色谱柱(5μm, 7.8 mm×300 mm);流动相：三氟乙酸-乙腈-水(V∶V∶V=0.02∶60∶40);流速：0.7 mL·min^-1;柱温：30℃;DAD检测器,检测波长：210 nm。结果 二聚体杂质有较好的线性关系,相关系数r=0.993;定量限为0.46μg·mL^-1;检测限为0.15μg·mL^-1;回收率为95.43%～105.57%,RSD为2.96%;二聚体杂质溶液、供试品溶液不稳定,需临用新配。结论 本方法操作简单,专属性强,灵敏度高,为生长抑素中高分子量杂质的研究进一步提供参考。     

尿激酶中分子组分比2种测定方法的建立和比较研究

目的:建立尿激酶中分子组分比测定的分子排阻色谱法与十二烷基硫酸钠毛细管电泳法,并对2种方法的方法学验证与样品测定结果比较。方法:分子排阻色谱法采用TSKgel G2000SWXL色谱柱(7.8mm×300 mm,5μm),以0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠缓冲液(pH 3.0)为流动相,流速0.5 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长280 nm,进样量50μL;十二烷基硫酸钠毛细管电泳法采用未涂层熔融石英毛细管(50μm×30.2cm,有效长度20.2 cm),分离电压为15 kV,柱温25℃,检测波长214 nm,进样端为正极,5 kV压力进样20 s。结果:通过对分子排阻色谱法与十二烷基硫酸钠毛细管电泳法的方法学验证与样品测定结果的比较,证明两种方法测定结果基本一致。分子排阻色谱法:高分子量与低分子量尿激酶质量浓度在0.05~5.1mg·mL^-1范围内呈良好的线性关系;检测下限分别为1.5μg·mL^-1与5.1μg·mL^-1,定量下限分别为5.1μg·mL^-1与16.9μg·m L^-1;8批样品中高分子量与低分子量尿激酶相对含量范围分别为87.0%~96.4%与3.6%~13.0%。十二烷基硫酸钠毛细管电泳法:高分子量与低分子量尿激酶质量浓度在0.1~5.2 mg·mL^-1范围内呈良好的线性关系;检测下限分别为2.5μg·mL^-1与51.8μg·mL^-1,定量下限分别为7.5μg·mL^-1与155.4μg·m L^-1;8批样品中高分子量与低分子量尿激酶相对含量范围分别为88.2%~97.3%与2.7%~11.8%。结论:分子排阻色谱法与十二烷基硫酸钠毛细管电泳法都适用于尿激酶中分子组分比的测定并互为补充。     

1-叔丁酯谷氨酸对映异构体的分离和检测

目的 建立1-叔丁基L-谷氨酸的对映异构体的分离和检测方法。方法 采用冠醚手性色谱柱DAICEL CR-I(-)(3 mm×150 mm, 5μm),流动相0.5%高氯酸水溶液-乙腈(60∶40),流速0.4 mL·min^-1,紫外检测波长210 nm。结果 1-叔丁基L-谷氨酸和D-谷氨酸叔丁酯可被有效分离,D-谷氨酸叔丁酯在5.20～156.00μg·mL^-1(r=0.9999)浓度范围内呈现良好线性关系,检测限为2.60μg·mL^-1,平均回收率为97.03%(n=9)。结论 本法可用于1-叔丁酯谷氨酸的对映异构体的分离检测,此法准确、有效、灵敏度高。     

HPLC法测定卡托普利原料及片剂中3种异构体

目的:建立HPLC法同时测定卡托普利原料药及片剂中3种异构体含量。方法:采用Chiralpak IG手性柱(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相A为正己烷-三氟乙酸(100∶0.1),流动相B为无水乙醇-三氟乙酸(100∶0.1),梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;柱温为35℃;检测波长为215 nm;进样量为10μL。结果:该方法专属性良好,片中辅料无干扰,卡托普利与3种异构体彼此间的分离度均良好;各异构体平均加样回收率分别为99.6%、102.1%、93.6%,RSD分别为1.7%、1.4%和2.0%;重复性RSD均小于2.0%;供试品溶液至少在24 h内稳定;非对映异构体Ⅰ、对映异构体、杂质F的定量限分别为0.91、0.99、3.23μg·mL^-1,检测限分别为0.27、0.30、0.97μg·mL^-1;非对映异构体Ⅰ、对映异构体和杂质F分别在1.82～45.51、0.99～39.71、3.23～40.33μg·mL^-1范围内,峰面积与浓度的呈良好的线性关系(r为0.999 ...     

HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中的对映异构体

目的:建立马来酸噻吗洛尔滴眼液对映异构体含量的HPLC测定方法。方法:应用手性液相色谱法,采用InfinityLabPoroshell 120 Chiral-T柱色谱柱(100 mm×4.6 mm, 2.7μm),对左旋噻吗洛尔进行定量分析,以甲酸铵溶液(取甲酸铵1.26 g,加水900 mL使溶解,甲酸调pH至3.5,加水至1 000 mL)-无水乙醇(8∶92)为流动相,流速为0.5 mL·min^-1;柱温为30℃;检测波长为297 nm。结果:在此色谱条件下,测定的2批原料所制的6批样品含量分别为1.1%、1.1%、1.2%、0.053%、0.053%及0.057%;噻吗洛尔峰与对映异构体峰分离度良好(R>2.0),噻吗洛尔在质量浓度0.5～15.3μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=1.000),对映异构体在质量浓度0.7～15.4μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7),噻吗洛尔、对映异构体的定量限分别为0.5和0.6μg·mL^-1;12份供试品对映异构体含量...     

HPLC法检测依折麦布中的有关物质

目的:建立采用高效液相色谱法测定依折麦布有关物质。方法:采用Agilent TC-C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5.0μm)色谱柱,以0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-乙腈-四氢呋喃(60∶20∶20)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长232 nm,进样体积20μL。结果:依折麦布峰与各杂质峰分离良好;依折麦布峰与杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E与杂质F的线性范围分别为0.409～4.090μg·mL^-1(r=0.995 0)、0.402～4.020μg·mL^-1(r=0.998 1)、0.408～4.080μg·mL^-1(r=0.999 1)、0.411～4.110μg·mL^-1(r=0.999 3)、0.4050～4.050μg·mL^-1(r=0.998 1)、0.541～5.41μg·mL^-1(r=0.998 5)、0.657～6.57μg...     

HPLC法同时测定五维赖氨酸口服溶液中4种水溶性主成分的含量

目的:建立直接同时测定五维赖氨酸口服溶液中盐酸赖氨酸和三种水溶性维生素含量的RP-HPLC法。方法:采用Phenomenex Gemini C₁₈ 100A(4.6 mm×250 mm, 5μm)色谱柱，以0.03 mol·L^-1磷酸二氢铵溶液(pH 3.0)-甲醇(98∶2)为流动相，检测波长为205 nm,流速1.0 mL·min^-1。结果:盐酸赖氨酸、维生素C、维生素B₆和烟酰胺分别在30.56～488.9μg·mL^-1(r=1.000 0)、24.86～397.8μg·mL^-1(r=0.999 8)、1.018～16.29μg·mL^-1(r=1.000 0)、10.72～171.5μg·mL^-1(r=0.999 0)范围内与峰面积呈良好的线性关系；定量限分别为10.39、0.466 1、0.092 79、0.136 2 ng;平均回收率分别为100.6%、98.5%、98.0%、99.2%,RSD分别为0...     

用HPLC-MS/MS法同时测定人血浆中左氧氟沙星和头孢他啶的浓度

目的 建立超高液相色谱串联质谱同时测定人血浆中左氧氟沙星和头孢他啶浓度的方法。方法 用甲醇沉淀蛋白后,以环丙沙星为内标,色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(2.1 mm×100.0 mm, 1.8μm),流动相∶水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸)=90∶10,等度洗脱,流速：0.2 mL·min^-1,柱温：40℃,进样量：1μL。电喷雾离子源,多离子反应监测,正离子扫描模式进行检测。考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、基质效应及稳定性。结果 血浆样品中左氧氟沙星在0.05～25.72μg·mL^-1线性关系良好,标准曲线为y=4.53x+0.02(r=0.999 6),定量下限为0.05μg·mL^-1;头孢他啶在0.21～107.25μg·mL^-1线性关系良好,标准曲线为y=0.40x+0.02(r=0.999 7),定量下限为0.21μg·mL^-1;2种药物的平均提取回收率均在88.66%～108.21%,日内和...     

HPLC法测定奥卡西平及其制剂中有关物质

目的:建立使用C₁₈色谱柱同时测定奥卡西平及其制剂中8个杂质的高效液相色谱法。方法:采用ACE Excel C₁₈(4.6 mm×150 mm, 3μm)色谱柱,流速1.0 mL·min^-1,以6.8 g·L^-1磷酸二氢钾溶液(每1 000 mL加三乙胺2 mL,用磷酸调pH 6.0)为流动相A,乙腈-甲醇(11∶8)为流动相B,梯度洗脱,检测波长240 nm,柱温45℃。结果:奥卡西平与8个杂质分离度良好,奥卡西平和卡马西平分别在0.05～4.0μg·mL^-1和0.08～40μg·mL^-1浓度范围内呈现良好线性(r≥0.999 9),奥卡西平和卡马西平的定量限分别为1.03、0.65 ng,检测限分别为0.34、0.33 ng。共测定奥卡西平原料2个企业5批样品、奥卡西平片2个企业6批样品,其中1批原料检出杂质E,含量为0.004%;3批片剂检出卡马西平,含量分别为0.008%、0.005%、0.006%;1批片剂检出杂质C和杂质D,含量为0.006%、...     

离子交换层析结合分子排阻色谱法测定注射用尿激酶中分子组分比

目的:建立测定注射用尿激酶分子组分比的离子交换层析样品前处理方法结合分子排阻色谱法的分析方法,以解决长期以来制剂标准中无法控制分子组分比的难题,并对国内6家企业的产品质量进行了考察。方法:根据尿激酶与人血白蛋白等电点的差异,通过离子交换层析去除样品中人血白蛋白辅料的干扰,采用分子排阻色谱法测定。采用TSKgel G2000SWXL色谱柱(300 mm×7.8 mm, 5μm),流动相为0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠缓冲液(pH 3.0),流速为0.5 mL·min^-1,柱温为35℃,检测波长为280 nm,进样量为50μL。结果:尿激酶质量浓度在0.05～5.1 mg·mL^-1范围内,高分子量尿激酶与低分子量尿激酶线性关系均良好(r≥0.998 0);检测限分别为1.5μg·mL^-1与5.1μg·mL^-1,定量限分别为5.1μg·mL^-1与16.9μg·mL^-1;精密度、重复性、24 h稳定性试验的RSD均<4.0%;方法的回...     

萝卜硫素通过调控OGG1基因抑制动脉粥样硬化相关巨噬细胞脂质积聚的研究

目的 探讨萝卜硫素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞脂质积聚的影响和作用机制。方法 将细胞分为对照组、ox-LDL组(100μg·mL^-1 ox-LDL)、萝卜硫素低剂量组(100μg·mL^-1 ox-LDL+5μmol·L^-1萝卜硫素)、萝卜硫素高剂量组(100μg·mL^-1 ox-LDL+10μmol·L^-1萝卜硫素)、si-OGG1组(100μg·mL^-1 ox-LDL+10μmol·L^-1萝卜硫素+转染si-OGG1)。以蛋白质印迹法检测各组细胞蛋白表达水平,以酶联免疫吸附测定法检测各组细胞炎性因子及8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达水平,以氧化酶法检测细胞内胆固醇水平,以探针法检测活性氧(ROS)水平,以流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 对照组、ox-LDL组、萝卜硫素低剂量组、萝卜硫素高剂量组、si-OGG1组的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶1(OGG1)蛋白相对表达水平分别为0.80±0.03、0.26±0....     

二维柱切换高效液相色谱法测定美白类化妆品中氢醌和苯酚

目的:建立二维柱切换高效液相色谱法测定化妆品中氢醌、苯酚的分析方法。方法:二维色谱柱均为C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),捕获柱为2条串联的C₁₆色谱柱(20 mm×4.0 mm, 5μm),10 mmol·L^-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH3.5)-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长280 nm,进样量2μL。结果:氢醌和苯酚线性范围分别为5.570～111.5μg·mL^-1(r=0.999 7)和5.410～108.1μg·mL^-1(r=0.999 6),方法提取回收率分别为91.9%～92.6%和94.4%～94.7%,精密度试验的RSD分别为3.9%～4.1%和0.9%～2.1%,检测下限分别为0.70μg·g^-1和0.69μg·g^-1。市场随机抽取40批美白类化妆品样品(包含乳剂、霜剂、水剂等)均单次进样即可快速完成样品分析,无基质干扰。结论...     

磁性碳纳米管萃取-高效液相色谱联用法测定唾液中的诺氟沙星

目的:开发1种基于磁性碳纳米管的固相萃取-高效液相色谱联用技术,用于快速、简便、高效地测定唾液中的诺氟沙星。方法:合成1种以传统的碳纳米管材料为基础的新型磁性碳纳米管材料,作为固相萃取吸附剂,采用傅立叶红外光谱(FT-IR)、X射线衍射(XRD)、场发射透射电镜(TEM)对其物性进行表征;经萃取条件优化后,利用其吸附性能分离富集唾液中的诺氟沙星,联合HPLC,采用C₁₈色谱柱,以0.025 mol·L^-1磷酸水溶液-乙腈(87∶13)为流动相,在278 nm检测波长下,测定诺氟沙星浓度。结果:本研究制备的磁性碳纳米管磁性反应灵敏,吸附率大于90%,重复使用12次性能良好,与HPLC联用测定人工唾液中诺氟沙星含量,质量浓度在0.4～20μg·mL^-1范围内线性关系良好(r~2=0.999 8),该方法下的检测限为0.01 ng·mL^-1,定量限为0.025 ng·mL^-1,日内和日间精密RSD均小于5%,萃取回收率RSD小于2%,测得诺氟沙星唾液样品浓度为1.902μg·mL     

高效液相色谱法测定曲伏噻吗滴眼液中曲伏前列素有关物质含量

目的 建立高效液相色谱法测定曲伏噻吗滴眼液中曲伏前列素有关物质的含量。方法 采用Phenomenex LUNA苯基己基色谱柱(3.0 mm×150 mm, 3μm)色谱柱;流动相A为20 mmol·L^-1庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调pH值至2.5),流动相B为甲醇,流动相C为乙腈,洗脱梯度;检测波长220 nm;柱温40℃;流速0.5 mL·min^-1。结果 在该色谱条件下,曲伏前列素与各杂质均可良好分离;曲伏前列素、曲伏前列素杂质A、曲伏前列素15-表非对映异构体、曲伏前列素5,6-反式杂质异构体、曲伏前列素15-酮衍生物分别在0.02～219.29μg·mL^-1(r=1.000 0),0.02～3.10μg·mL^-1(r=0.999 9),0.02～3.87μg·mL^-1(r=1.000 0),0.02～4.37μg·mL^-1(r=1.000 0),0.02～3.98μg·mL^-1(r=0.999 9)浓度范围内与峰面积呈良好线性关系...     

灵芝酸D通过调控p53/Bax通路对人结直肠肿瘤细胞的作用机制研究

目的 探究灵芝酸D（GAD）对人结直肠肿瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 将直肠癌细胞系SW620分为6组：空白对照组（完全培养基）、低(5μmol·L^-1 GAD)、中(10μmol·L^-1 GAD)、高(20μmol·L^-1 GAD)3个剂量实验组、Pifithrin-α组(3μg·mL^-1 Pifithrin-α)和联合组(3μg·mL^-1 Pifithrin-α+20μmol·L^-1 GAD)。用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖能力,用Caspase-3/Caspase-8/Caspase-9检测试剂盒检测相应蛋白活性,用蛋白质印迹法检测抑癌蛋白p53（p53）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白质的表达水平。结果 空白对照组和低、中、高3个浓度实验组细胞增殖活性分别为（96.33±2.62）%,（95.00±1.63）%,（70.33±5.91）%和（49.00±3.56）%;4组Caspase-...     

反相高效液相色谱法同时测定伊马替尼及伏立康唑血药浓度

目的:建立同时测定人血浆中伊马替尼及伏立康唑浓度的高效液相色谱法。方法:血桨样品经乙酸乙酯-正己烷(75∶25)萃取,选择卡马西平为内标,氮吹浓缩、复溶后采用HPLC分析。ZORBAX SB-C18柱反相柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-醋酸铵缓冲液(25 mmol·L^-1 CH_3COONH_4,CH_3COOH调pH值至4.5)=20∶32∶48(V/V/V),检测波长264 nm,流速为1 mL·min^-1,柱温35℃,进样量为20μL。结果:伊马替尼、伏立康唑血药浓度线性范围分别为0.10~5.00μg·mL^-1和0.10~6.00μg·mL^-1,两者的线性均良好(r分别为0.998和0.999),最低定量下限均为0.10μg·mL^-1。伊马替尼和伏立康唑低、中、高质量浓度的提取回收率分别为69.21%,71.23%,73.53%和76.23%,78.12%,79.34%,二者批内RSD均小于15%。结论:该方法简便、快速、灵敏度高可满足同时检测伊马替尼和伏立康唑的临床血药浓度监测及药动学研究。     

胶体果胶铋胶囊含量测定方法的建立与比较

目的:建立准确度高,适用性强的胶体果胶铋胶囊的含量测定方法。方法:紫外-可见分光光度法以10%抗坏血酸溶液-20%碘化钾溶液-1 mol·L^-1硝酸溶液(2∶5∶1)为显色剂,测定波长463 nm;电位滴定法以光度电极为指示电极,测定波长590 nm,以二甲酚橙为指示剂,用0.05 mol·L^-1乙二胺四醋酸二钠滴定液进行滴定;原子吸收分光光度法以223.1 nm为测定波长。结果:紫外-可见分光光度法、电位滴定法与原子吸收分光光度法分别在2～20μg·mL^-1、30～70 mg、5～30μg·mL^-1范围内线性良好,平均回收率分别为100.0%(RSD=0.40%)、100.4%(RSD=0.49%)和100.3%(RSD=0.51%)。18批次样品按上述3种方法测定,含量范围分别为97.1%～104.8%、97.4%～105.0%和97.5%～104.8%。建立的3种方法均能准确测定胶体果胶铋胶囊含量,测定结果之间无统计学差异。结论:考虑仪器的普适性及方法的灵敏度,紫外-可见分光光度法更适用于胶体...     

建立超高效液相色谱法测定莫匹罗星软膏含量

目的:建立莫匹罗星软膏含量测定超高效液相色谱法,提高检测效率。方法:采用超高效液相色谱法(Ultra performance liquid chromatography, UPLC),色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C₁₈(2.1 mm×100 mm, 1.7μm);流动相为0.01 mol·L^-1磷酸二氢钠(1 mol·L^-1 NaOH调节pH至6.3)-乙腈(75∶25);检测波长为230 nm;流速为0.4 mL·min^-1。结果:建立了莫匹罗星软膏含量测定超高效液相色谱方法,此方法精密度好,准确度高,其线性范围为0.01～1 mg·mL^-1,R²为0.999 6。结论:相比于高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)法,本文所提方法更便捷高效,可有效地控制莫匹罗星软膏含量。