TLR3与外周血单个核细胞HBV宫内感染关系

目的 了解Toll样受体3(TLR3)在外周血单个核细胞(PBMC)上的表达情况,探讨TLR3与PBMCHBV宫内感染的关系。方法 巢式病例对照研究随访228例HBsAg阳性孕妇至分娩,免疫荧光双标记法检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿PBMC涂片上HBsAg及TLR3。结果 228例HBsAg阳性孕妇有64例(28.07%)PBMC HBsAg阳性;161例(70.61%)TLR3表达阳性;TLR3在PBMC HBV感染组和非感染组表达差异有统计学意义(χ²=30.944,P<0.000 1);新生儿有35例(15.35%)PBMC HBsAg阳性;HBsAg阳性孕妇PBMC上TLR3的表达与新生儿PBMCHBV宫内感染有关(χ²=12.354,P<0.000 1)。结论 TLR3可能是HBsAg阳性孕妇PBMC HBV感染的一个保护因素(OR=0.181,95%CI=0.091~340);也是PBMCHBV宫内感染的保护因素(OR=0.279,95%CI=0.133~0.585)。     

缺血性脑卒中患者单个核细胞TLR3、IRF-3、IFN-γmRNA表达及临床意义

目的探讨缺血性脑卒中患者单个核细胞Toll样受体3(TLR3)以及干扰素调节因子-3(IRF-3)、干扰素-γ(IFN-γ)表达及意义。方法选取2016年2月至2019年7月治疗的缺血性脑卒中患者108例(观察组),其中轻度、中度和重度患者分别30例、42例和36例;预后良好66例,不良42例;同时选取健康志愿者80例作为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测单个核细胞TLR3、IRF-3、IFN-γmRNA表达。结果观察组TLR3、IRF-3和IFN-γmRNA相对表达量分别为(7.211±2.121)、(5.801±1.821)和(6.270±1.533),明显高于对照组(P<0.05);重度患者脑梗死体积、TLR3、IRF-3和IFN-γmRNA相对表达量明显高于轻度和中度患者(P<0.05);预后不良患者脑梗死体积、TLR3、IRF-3和IFN-γmRNA相对表达量明显高于预后良好患者(P<0.05);观察组治疗后TLR3、IRF-3和IFN-γmRNA相对表达量较治疗前降低(P<0.05);TLR3 mRNA表达与IRF-3 mRNA、IFN-γmRNA、NIHSS评分和脑梗死体积呈正相关(r=0.561、0.508、0.400和0.311,P<0.05);IRF-3mRNA与IFN-γmRNA呈正相关(r=0.302,P<0.05)。结论缺血性脑卒中患者TLR3、IRF-3和IFN-γmRNA表达明显升高,其中TLR3 mRNA与患者病情程度、脑梗死体积和预后有一定关系。     

肺癌伴感染性发热患者外周血单个核细胞 TLR4及TLR2基因表达的检测价值

目的 分析肺癌伴感染性发热患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体4(TLR4)、Toll样受体2(TLR2)基因表达变化。方法 选择2019年1月-2021年1月医院收治的肺癌患者900例为研究对象,根据是否合并感染性发热,将患者分为感染性发热组(n=163)和非感染性发热组(n=737)。分析肺癌伴感染性发热患者的病原菌检出情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测患者PBMC中TLR4、TLR2基因表达水平。采用酶联免疫吸附试验法检测患者血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8水平。结果 163例肺癌伴感染性发热患者共检出病原菌172株,其中革兰阴性菌113株(65.70%),革兰阳性菌59株(34.30%);感染性发热组患者PBMC中TLR4、TLR2 mRNA表达水平以及血清TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平均高于非感染性发热组患者(P<0.05);感染性发热患者治疗后PBMC中TLR4、TLR2 mRNA表达水平以及血清炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平均低于治疗前(P<0.0...     

TLR3对乙型肝炎疫苗无弱应答婴儿脐血单个核细胞Th1/Th2型细胞因子的影响

目的  探索能否通过上调乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg)阳性母亲脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cells, CBMCs)TLR3改变其Th1/Th2型细胞因子表达水平及其程度。 方法  收集40例HBsAg阳性母亲脐血, 分离CBMCs进行体外实验, 分对照组、HBV(hepatitis B virus, HBV)刺激组和聚肌苷酸胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid, Poly I:C)+HBV刺激组。用流式细胞术和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分别检测TLR3蛋白和Th1/Th2型细胞因子水平, 以化学发光免疫分析法测定婴儿12月龄外周血抗-HBs水平判定乙型肝炎疫苗(简称乙肝疫苗)应答情况。 结果  经TLR3激动剂协同HBV干预后, 乙肝疫苗无/弱应答者CBMCs TLR3上升37.41%, 高于强应答者(22.48%)(P=0.262), Th1/Th2型细胞因子表达水平均低于强应答者(均有P < 0.001)。HBV刺激可下调Th1/Th2型细胞因子表达水平, Poly I:C+HBV刺激可上调Th1/Th2型细胞因子表达水平(均有P < 0.05);经Poly I:C+HBV刺激后, 无/弱应答者γ干扰素(interferon-γ, IFN-γ)、白细胞介素4(interleukin 4, IL-4)和白细胞介素10(interleukin 10, IL-10)表达水平接近强应答者HBV刺激后的表达水平(均有P > 0.05)。 结论  HBV感染对HBsAg阳性母亲婴儿的免疫损伤与乙肝疫苗无/弱应答可能有关, 上调CBMCs TLR3蛋白表达水平可以提高无/弱应答者Th1/Th2型细胞因子表达水平。     

重型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体基因表达变化与预后关系的研究

目的探讨重型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体2、4 mRNA的表达和患者血浆内毒素水平与预后的关系。方法分离外周血单个核细胞,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TLR2、TLR4基因表达的变化,同时利用鲎试剂定量检测血浆内毒素水平的变化。结果死亡组患者治疗前TLR4、TLR2 mR-NA的表达及血浆内毒素的水平稍高于存活组,但治疗后死亡组明显高于存活组,差异有统计学意义(P<0.05),且与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);TLR4 mRNA、TLR2 mRNA的表达均与血浆内毒素的表达水平呈正相关。结论TLR2、TLR4及内毒素在重型病毒性肝炎的发病机制中起着重要的作用,能较好地预测重型病毒性肝炎的发展趋势,可用作评价重型病毒性肝炎预后的指标。     

TLR基因多态性对广西汉族儿童乙型肝炎疫苗初次免疫应答水平的影响

  目的  探讨Toll样受体(toll-like receptors,TLR)基因多态性与广西汉族儿童乙型肝炎(以下简称乙肝)疫苗初次免疫应答水平的关联。  方法  收集2014-2016年到广西自治区妇幼保健院、南宁市妇幼保健院儿科就诊的8~9月龄汉族儿童513例为研究对象。采集外周血标本,采用微粒子酶免疫法检测乙肝血清标志物"两对半",用套式聚合酶链式反应法检测乙肝病毒DNA,应用SNPscanTM多重SNP分型技术检测TLR基因10个位点的基因多态性。采用非条件Logistic回归分析TLR等位基因、基因型与儿童乙肝疫苗免疫后应答的关联。  结果  TLR3基因rs13126816的基因多态性与广西汉族儿童初次乙肝疫苗免疫后应答情况有关(OR=1.79,95% CI:1.11~2.89,P=0.018);A/A基因型[238.04(519.75) mIU/L]和G/A基因型[347.96(619.68) mIU/L]儿童的乙肝病毒表面抗体(hepatitis B surface antibody,抗-HBs)水平明显低于G/G基因型[489.08(854.76) mIU/L]的儿童,差异均有统计学意义(均有P < 0.05);携带等位基因A[317.20(608.72) mIU/L]儿童的抗-HBs水平也明显低于携带等位基因G[457.01(852.66) mIU/L]的儿童,差异有统计学意义(Z=-3.055,P < 0.05)。TLR基因其余位点均与乙肝疫苗免疫应答无关(均有P>0.05)。  结论  TLR3基因rs13126816位点等位基因A可能是汉族儿童产生初次乙肝疫苗免疫低应答的影响因素。     

脐血单个核细胞TLR及SOCS mRNA的表达及意义

目的:观察LPS刺激新生儿脐血单个核细胞(MNC)TLR4、TLR2及SOCS1、SOCS3mRNA的表达变化,探讨新生儿感染时机体防御反应机制。方法:分离脐血MNC,LPS(1μg/m l)培养0,1,3,6,12 h后收集细胞及上清液,RT-PCR方法测定TLR及SOCSmRNA表达情况,ELISA检测上清的TNF-α水平。结果:脐血MNC在LPS刺激1,3,6,12 h后,TLR 4、TLR 2、SOCS 1、SOCS 3 mRNA及TNF-α水平均增高,与0 h组比较,差异有极显著或显著性意义(P<0.01或P<0.05)。TLR 4 mRNA在1h表达最高,TLR 2 mRNA在3 h表达最高,SOCS 1、SOCS 3在1 h表达最强,TNF-α水平在3 h增加尤为明显。结论:TLR参与了LPS诱导炎症因子的产生,SOCS可能是TLR信号通路的负反馈调节因子。     

Toll样受体4在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义

目的:观察感染性早产患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达变化,探讨其与感染性早产发生的关系以及在早期预测中的价值。方法:收集31例早产(28～36+6周)患者部分胎盘胎膜组织行病理检查,根据病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组(17例)和早产非感染组(14例),门诊进行孕检的同孕周正常孕妇作为正常对照组(10例)。①采用酶联免疫吸附法测定血清中的IL-6水平;②应用流式细胞术观察早产患者和正常对照组孕妇外周血CD14+单个核细胞上TLR4分子的表达率和平均荧光强度(MFI);③检测血常规。结果:①TLR4在早产感染组患者外周血CD14+单个核细胞的阳性率为(39.22±13.17)%,平均荧光强度为(48.45±11.66),显著高于早产非感染组和正常对照组(P0.05);而TLR4分子在早产非感染组和正常对照组外周血CD14+单个核细胞的阳性率和MFI相比,差异无统计学意义(P0.05);②早产感染组孕妇血清中IL-6水平为(2.56±0.36)pg/ml,明显高于早产非感染组孕妇和正常对照组孕妇,差异有统计学意义(P0.05),但早产非感染组和正常对照组血清中IL-6水平比较,差异无统计学意义(P0.05);③感染性早产患者外周血TLR4的MFI与血清中IL-6水平成正相关(r=0.727,P0.05),与血常规中的白细胞总数和中性粒细胞百分比无明显相关性。结论:①感染性早产患者外周血单个核细胞表面TLR4及血清IL-6表达明显增强,提示TLR4的信号通路可能与感染性早产的发生发展密切相关;②TLR4平均荧光强度与血清中IL-6水平成正相关,可作为早期预测早产宫内感染的指标。     

TLR9信号通路在深静脉穿刺致全身性炎症感染患者外周血中的表达及意义

目的 分析Toll样受体9(TLR9)信号通路在深静脉穿刺致全身性炎症感染患者外周血中的表达及意义。方法 选取宁波市医疗中心李惠利医院东部院区2018年2月-2019年12月192例中心静脉导管(CVC)置管术后疑似导管相关性血流感染(CRBSI)患者为研究对象,其中54例根据血培养确诊为CRBSI(CRBSI组),138例为非CRBSI(非CRBSI组),比较两组患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TLR9、核因子-κB(NF-κB)信使核糖核酸(mRNA)表达水平及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,受试者工作特征(ROC)曲线评估上述指标对CVC置管后CRBSI的预测价值。结果 CRBSI组股静脉插管率、CVC置管时间、糖尿病患病率高于非CRBSI组(P<0.05),血清白蛋白水平低于非CRBSI组(P<0.05)。CRBSI组外周血PBMCs中TLR9、NF-κB mRNA表达及血清TNF-α、IL-6水平均高于非CRBSI组(P<0.05),ROC曲线分析结果,外周静脉血PBMCs中TLR9、NF-κB mRNA及血清TNF-α、IL-6检测对CRBSI具有较高预测价值,曲线下面积(AUC)分别为0.944、0.924、0.913、0.882。结论 TLR9信号通路可能参与深静脉穿刺置管所致全身性感染的发生发展,积极监测相关指标对深静脉穿刺致全身性感染诊疗有利。     

TLR7和TLR9在系统性红斑狼疮中的作用

近年来,关于天然免疫在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发病机制中的作用逐渐成为研究重点。核酸免疫复合物通过与Toll样受体结合激活天然免疫并促进自身抗体的增殖,因此对Toll样受体直接通路的药物调节可能为SLE提供新的治疗途径。     

Toll样受体与慢性乙型肝炎的研究进展

Toll样受体(TLRs)是天然免疫应答的主要模式识别受体.近年来的研究表明,一方面HBV通过某种方式抑制了TLRs的表达,从而逃避宿主的免疫清除,造成}HBV的持续感染和慢性化;另一方面,TLRs与其相应配体结合后,通过诱导抗病毒细胞因子IFN-α/β、TNF-α等的表达,对机体产生保护性免疫,在抗HBV感染中发挥重要作用.此文就TLRs与慢性乙型肝炎的研究进展进行了综述.     

不同预后重症脓毒症患者外周血单核细胞Toll样受体4表达水平与内毒素耐受的临床研究

目的 观察不同预后重症脓毒症患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达与内毒素耐受之间的关系.方法 选取35例重症脓毒症患者(重症脓毒症组)和15例健康体检者(对照组),分别在入住ICU 24 h内和体检当天用流式细胞术测定外周血单核细胞TLR4表达情况及酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10浓度.同时分离外周血单核细胞,加入40 μg/ml脂多糖培养24h,同样测定单核细胞TLR4表达情况及细胞培养上清液TNF-α、IL-10浓度.结果 35例重症脓毒症患者死亡10例(死亡组),生存25例(生存组),28 d病死率为28.6％(10/35).重症脓毒症组外周血单核细胞TLR4表达显著低于对照组[(11.09±8.90)平均荧光强度(MFI)比(33.72±12.59) MFI],差异有统计学意义(P＜0.01);血清TNF-α、IL-10浓度显著高于对照组[(96.66±45.33) ng/L 比(2.53±1.21) ng/L、(149.79±67.15) ng/L比(34.56±19.08) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.01).生存组与死亡组外周血单核细胞TLR4表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).给予脂多糖刺激后对照组外周血单核细胞TLR4表达较脂多糖刺激前明显升高[(50.22±19.23) MFI比(33.72±12.59) MFI],差异有统计学意义(P＜0.05);生存组与死亡组脂多糖刺激后外周血单核细胞TLR4表达均明显降低[(4.55±2.30) MFI比(11.21±7.92) MFI、(5.46±3.44)MFI比(10.15±9.70) MFI],差异有统计学意义(P＜0.01).生存组与死亡组细胞培养上清液TNF-α、IL-10浓度均显著低于对照组[(22.34±8.27)、(19.49±5.35) ng/L比(88.70±34.21) ng/L,(54.29±32.89)、(98.04±40.26) ng/L比(146.56±52.18) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.01),但死亡组IL-10浓度显著高于生存组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 不同预后重症脓毒症患者,均存在内毒素耐受,在内毒素耐受情况下,单核细胞分泌炎性因子的能力是不同的.     

北京市房山区291名儿童乙型肝炎疫苗免疫应答研究

目的了解房山区291例15岁以下儿童接种乙肝疫苗的低、无应答率,为探讨适合儿童人群乙肝疫苗低、无应答者的再免方案提供依据。方法多阶段整群系统随机抽样法抽取8个乡镇的在房山区居住半年以上且按照＂0-1-6程序＂完成乙肝疫苗接种的15岁以下儿童291人为本次调查对象,同时检测乙肝抗体。结果 15岁以下儿童无应答率9.28%,低应答率15.81%;随着年龄增加,无应答率逐渐上升、低应答率和正常应答率逐渐下降,各年龄段之间低、无应答率与正常应答率差异有统计学意义;男性无应答率9.09%,低应答率14.94%;女性无应答率9.49%,低应答率16.79%;男性与女性低、无应答率差异无统计学意义。结论对于处于低、无应答状态人群应何时进行乙肝疫苗复种,接种剂量和针剂有待于探索。     

外周血单核细胞髓样分化因子88与Toll样受体4在早产儿窒息后多器官功能障碍综合征中的表达及其意义

目的 探讨外周血单核细胞髓样分化因子88(MyD88)与Toll样受体4(TLR4)在早产儿窒息后多器官功能障碍综合征(MODS)中的表达,为早产儿窒息后MODS的早期诊断及预后评估提供新思路.方法 连续性纳入2019年1月—2020年12月唐山市妇幼保健院新生儿科收治的115例窒息早产儿进行前瞻性研究,按照1 min...     

外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒对新生儿宫内感染的影响

目的探讨HBsAg、HBeAg阳性孕妇外周血单个核细胞(PBMC)内乙型肝炎病毒(HBV)DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用.方法对HBsAg/HBeAg双阳性共67对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯PBMC后,经抽提、纯化后的DNA进入PCR扩增反应,引物为HBV C区基因序列.结果67例HBsAg及HBeAg双阳性的孕妇中有35例(52.2%)PBMC中HBV DNA阳性,25例孕妇在血清及PBMC中均发现HBV DNA.67例新生儿有22例感染HBV DNA,感染率32.8%,其中血清HBV DNA阳性者10例,PBMC HBV DNA阳性者19例,二者均阳性者7例.结论母亲PBMC内HBV DNA阳性可能导致新生儿PBMC中HBV DNA阳性,PBMC内的HBV DNA可能是HBV母婴垂直传播的一条重要途径,同时,HBsAg及HBeAg阳性母亲若血清HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染HBV的危险性.     

外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒对新生儿宫内感染的影响

目的 :探讨 HBs Ag、 HBe Ag阳性孕妇外周血单个核细胞 ( PBMC)内乙型肝炎病毒 ( HBV) DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用。方法 :对 HBs Ag/ HBe Ag双阳性共 6 7对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯 PBMC后 ,经抽提、纯化后的 DNA进入 PCR扩增反应 ,引物为 HBV C区基因序列。结果 :6 7例 HBs Ag及 HBe Ag双阳性的孕妇中有 35例 ( 5 2 .2 % )PBMC中 HBV DNA阳性 ,2 5例孕妇在血清及 PBMC中均发现 HBV DNA。6 7例新生儿有 2 2例感染 HBV DNA,感染率 32 .8% ,其中血清 HBV DNA阳性者 10例 ,PBMC HBV DNA阳性者 19例 ,二者均阳性者 7例。结论 :母亲 PBMC内 HBV DNA阳性可能导致新生儿 PBMC中 HBV DNA阳性 ,PBMC内的 HBV DNA可能是 HBV母婴垂直传播的一条重要途径 ,同时 ,HBs Ag及HBe Ag阳性母亲若血清 HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染 HBV的危险性     

Toll样受体7激动剂对荷瘤小鼠肾癌的抑制作用及免疫机制

目的　研究Toll样受体7激动剂Imiquimod对荷瘤小鼠肾癌的抑制作用及免疫机制。方法　用Renca肾癌细胞构建BABL/c小鼠肾癌模型,实验分为control组、imiquimod组和sorafenib组。观察3组小鼠肿瘤体积及重量、抑瘤率,qPCR法检测肿瘤组织中炎性相关因子肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）、干扰素α（Interferon-α,IFN-α）、干扰素β（Interferon-β,IFN-β）、干扰素γ（Interferon-γ,IFN-γ）及Toll样受体通路相关因子Toll样受体7（Toll-like receptor 7,TLR7）、髓样分化因子88（Myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88）、核因子κB （Nuclear factor κB,NF-κB）mRNA表达,Western blot法检测瘤组织中TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达。流式细胞术检测脾脏中CD4+T、CD8+T、CD4+IFN-γ和CD8+IFN-γ细胞比例。结果　与control组比较,imiquimod组和sorafenib组小鼠的肿瘤体积及瘤体重量降低（P＜0.05）;与control组相比,imiquimod组TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-α、IFN-β、IFN-γ及TLR7、MyD88、NF-κB mRNA水平升高（P＜0.05）,而sorafenib组各因子略有上升（P＞0.05）;与control组和sorafenib组比较,imiquimod组CD4+T、CD8+T细胞比例有不同程度的升高（P＞0.05）,CD4+IFN-γ和CD8+IFN-γ细胞比例增加（P＜0.05）。结论　Toll样受体7激动剂通过活化TLR7-MyD88-NF-κB信号刺激多种炎性细胞因子分泌,并上调CD4+T、CD8+T比例及功能,对荷瘤小鼠肾癌发挥抑制作用。     

Influence of maternal antibody against hepatitis B surface antigen on active immune response to hepatitis B vaccine in infants

Transplacentally acquired maternal antibodies in infants may inhibit active immune responses to vaccines. In this study, we compared the immunogenicity of the recombinant hepatitis B vaccine, which was intramuscularly injected at 0, 1, and 6 months of age, in 71 infants born to mothers with positive or negative antibody against hepatitis B surface antigen (anti-HBs). Forty-one infants born to anti-HBs positive mothers were all positive at birth. At 2 months after the second injection, anti-HBs in 30 infants with negative maternal antibody was significantly higher than that in 41 infants with positive maternal anti-HBs (191.1mIU/ml vs. 96.2mIU/ml, P=0.018). At one month after the full immunization, the anti-HBs levels had no statistical difference between maternal anti-HBs negative and positive groups, but the antibody response in infants with high maternal anti-HBs (>1000mIU/ml) was significantly inhibited. Nevertheless, all infants had anti-HBs higher than the protective level. In conclusion, passively acquired maternal anti-HBs in infants may to some extent impair the antibody response to hepatitis B vaccine. The long-term efficacy of hepatitis B vaccine in infants with high titers of maternal anti-HBs remains to be further evaluated.