基于体外消化/MDCK细胞模型测定地龙中镉和砷的生物可给性及风险评估

为了考察动物药地龙中镉(Cd)和砷(As)的生物可给性,并对Cd和As的风险进行评估,本研究采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定了地龙中Cd和As的残留量;建立in vitro PBET (physiologically based extraction test)体外模拟消化/MDCK细胞模型考察地龙中Cd和As的生物可给性;分别采用危害指数法(HI)和暴露限值法(MOE)对于地龙中Cd和As的残留总量以及生物可给量的风险进行评估。结果表明:6批地龙中Cd和As的残留总量范围分别为8.319～33.606 mg·kg^-1和0.532～16.412 mg·kg^-1。经过MDCK细胞转运后,地龙中Cd的生物可给性在10.13%～64.16%之间; As的生物可给性在2.72%～46.57%之间。风险评估的结果表明:MDCK细胞转运前,所有批次地龙中As的MOE值以及Cd的HI值均大于1, As的风险可接受, Cd的风险不可接受; MDCK细胞转运后,除了1批地龙外,其余5批地龙中Cd的HI值均小于1 (风险降低至安全范围内)。本研究为...     

基于靶器官毒性剂量法的板蓝根中镉和砷的联合暴露评估

目的:对板蓝根中镉(Cd)和砷(As)的残留量进行测定,探索靶器官毒性剂量法在评估中药中重金属及有害元素联合暴露风险中的应用。方法:根据板蓝根中Cd和As的残留量监测数据,计算其暴露量。采用危害指数(HI)法对Cd和As联合暴露产生的健康风险进行初步筛查。进一步针对不同毒理学终点,采用靶器官毒性剂量(TTD)法,对Cd和As的累积风险进行更加精确的评估。结果:29批板蓝根中Cd的合格率为100%,5批As的含量超过限量标准。HI法的初步评估结果表明,5批板蓝根中As的危害商(HQ)值高于1。TTD法评估结果表明,对于作用终点心血管、血液、神经系统,5批板蓝根的HI值>1,健康风险需要被关注。结论:本研究探索了中药材板蓝根中Cd和As的累积风险评估方法,为中药中外源性有害残留物风险评估方法开发提供新的思路,为制定更加科学的限量标准提供技术支撑。     

白花蛇舌草总黄酮体外对人肝癌细胞HepG-2的作用

目的:观察白花蛇舌草总黄酮体外对HepG-2肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法:以HepG-2细胞为实验细胞株,观察白花蛇舌草中的总黄酮对HepG-2肿瘤细胞形态的影响;用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:白花蛇舌草总黄酮对HepG-2肿瘤细胞形态有影响,抑制其生长并诱导HepG-2肿瘤细胞的调亡。结论:白花蛇舌草中的总黄酮通过诱导凋亡对人肝癌细胞HepG-2有抑制增殖作用。     

晕可平糖浆中重金属的含量测定与风险评估

目的：对晕可平糖浆中重金属有害元素进行含量测定及风险评估。方法：采用ICP-MS法测定晕可平糖浆中Cu、As、Cd、Hg和Pb的含量,并结合《中药中外源性有害残留物安全风险评估技术指导原则》,分别采用危害指数法（HI）和暴露限值法（MOE）对晕可平糖浆的重金属风险进行评估。结果：10 批晕可平糖浆中重金属Cu、As、Cd、Hg和Pb残留量范围分别为0.048~0.198 μg·mL-1、0.073~0.129 μg·mL-1、0.003~0.005 μg·mL-1、未检出和0.002~0.019 μg·mL-1;Cu和Cd的HI值均小于1,As、Pb的MOE值均大于1,提示重金属引起的健康风险在安全范围内。结论：本研究考察了晕可平糖浆中重金属残留情况,科学地评估其重金属对人体的健康风险,为中成药的安全性评价提供了研究思路。     

靶器官毒性剂量法在玉竹中铅、镉和砷联合暴露评估中的应用

目的:对于玉竹中铅(Pb)、镉(Cd)和砷(As)的残留量进行测定,探索靶器官毒性剂量法在评估中药中重金属联合暴露风险中的应用.方法:根据玉竹中Pb,Cd和As的残留量监测数据,计算其暴露量.采用危害指数(HI)法对Pb,Cd和As联合暴露产生的健康风险进行初步筛查.若危害指数(HI)值>1或其中2种或2种以上重金属的...     

白花蛇舌草总黄酮的提取以及体外对肝癌细胞的作用

目的：提取白花蛇舌草总黄酮,并用MTT法检测其对HepG-2肿瘤细胞的增殖抑制作用。方法：用加热回流的方法提取白花蛇舌草中的总黄酮,标准曲线法测定其含量,然后作用于HepG-2肿瘤细胞,MTT法检测白花蛇舌草中的总黄酮对HepG-2肿瘤细胞生长抑制的影响。结果：成功提取并获得白花蛇舌草总黄酮,其含量约为15％,对人肝癌细胞HepG-2的生长增殖有抑制,48h后效果明显。结论：白花蛇舌草中的总黄酮对人肝癌细胞HepG-2有显著的抑制作用。     

累积风险评估方法在5种植物类中药材中铅和镉联合暴露评估中的应用

目的：利用中药材中铅(Pb)和镉(Cd)的残留量数据,探索不同累积风险评估方法在评估中药外源性有害残留物联合暴露风险中的应用。方法：以5种植物类中药材中Pb和Cd的残留量专项监测数据为基础,计算暴露量。并通过文献检索,获得Pb和Cd的相关毒理学参数。根据分级评估的原则,分别采用危害指数(HI)法、靶器官毒性剂量(TTD)法和证据权重(WOE)法等3种累积风险评估方法,评估 5种植物类中药材中Pb和Cd联合暴露的健康风险。结果：HI法的评估结果表明,艾叶、车前草和黄连的 HI值大于1。TTD 法的评估结果表明,Pb和Cd的联合暴露对于神经系统和肾脏来说,艾叶、车前草、黄连、金银花的HI值＞1;对于心血管和血液来说,艾叶、车前草、黄连的HI值＞1。而 WOE法的评估结果则表明,Pb和Cd的联合暴露对于心血管、神经系统和睾丸来说,艾叶、车前草、黄连、金银花的HI值大于1;对于血液来说,艾叶的HI值大于1;对于肾脏来说,艾叶、车前草、黄连的HI值大于1。结论： 本研究首次建立了中药中铅和镉元素的分级别的累积评估模型。该评估模型的建立,为中药中重金属及有害元素的风险评估打开新的思路,为制定更加科学的限量标准提供技术支撑。     

广东地区巴戟天的重金属污染情况及健康风险评估

目的 了解广东省道地中药材巴戟天中重金属元素的污染情况,评价其对人体健康的风险。方法 采用ICP-MS对19批巴戟天中Pb、Cd、As、Hg和Cu的含量进行检测。采用单因子污染指数法和Nemerow综合污染指数法评价巴戟天中药材的重金属污染状况,利用Monte Carlo模拟技术,分别考虑巴戟天2种不同入药方式,根据靶标危害系数法(THQ)、综合危害指数法(HI)评估Cu、As、Pb、Cd、Hg对人体非致癌健康风险,根据致癌风险(CR)、总致癌风险(TCR)评估As、Pb、Cd对人体致癌健康风险。结果 巴戟天样品中5种重金属均有检出,其中Pb元素超标率为63.16%。单因子污染指数显示Cu、As、Cd、Hg的Pi均低于1.0,63.16%样品Pb的Pi大于1.0;P_综为0.28～3.12,5.26%重污染等级,47.37%轻污染等级,21.05%警戒线等级。非致癌健康风险评估结果显示巴戟天在原粉入药情形下THQ_Pb和THQ_As的最大值均>1,总危害指数HI的P₉₅分位值、极大值均>1。而...     

家种白花蛇舌草中有机氯农药残留量测定

目的：检测家种白花蛇舌草中六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）、五氯硝基苯（PCNB）的残留量。方法：采用2000年版《中国药典》方法进行检测。结果：样品中的农药残留量均在药典规定的限定范围之内。最低检测浓度为10～100pg／mL，精密度RSD为0.72％～1．63％，加样回收率为87．46％-103．33％。结论；药典中有机氯农药残留量的限量标准对家种白花蛇舌草同样适用。     

利用分子方法鉴别白花蛇舌草及其伪品伞房花耳草

目的:建立一种鉴别白花蛇舌草及其常见伪品伞房花耳草的分子方法，确保临床用药安全。方法:根据白花蛇舌草和伞房花耳草内转录间隔区2(ITS2)序列的差异设计特异探针，采用多重连接探针扩增(MLPA)技术和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)技术，建立了一种能够鉴别白花蛇舌草、伞房花耳草的多重连接探针扩增-实时荧光定量PCR(MLPA-qPCR)方法。结果:对扩增产物进行熔解曲线分析，结果显示，所设计的MLPA探针具有良好的特异性，探针之间不存在交叉反应，白花蛇舌草探针的特异性熔解曲线T_m值为(81.8±0.2)℃,伞房花耳草探针的熔解曲线T_m值为(84.0±0.2)℃;灵敏度分析结果表明，该方法检出白花蛇舌草和伞房花耳草的最低模板量均为0.1 ng;掺伪检测试验结果表明，当白花蛇舌草探针与伞房花耳草探针比例为1.0∶0.6时，白花蛇舌草中掺杂1%的伞房花耳草仍可被有效检出。对收集的39份样品进行检测，成功鉴别白花蛇舌草25份、伞房花耳草12份、白花蛇舌草与伞房花耳草混合样品2份。结论:本研究所建立...     

基于网络药理学白花蛇舌草治疗胰腺神经内分泌肿瘤作用机制探讨及体外实验验证

目的 采用网络药理学方法探讨白花蛇舌草治疗分化良好的胰腺神经内分泌肿瘤（pNET）的作用机制,并通过体外细胞实验进行验证。方法 应用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）获取白花蛇舌草的活性成分和作用靶点,通过GEO、GeneCards、OMIM、PharmGkb、Drugbank数据库获取pNET的疾病相关靶点,通过R软件对共同靶点进行基因本体（GO）和京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。以CCK-8法和Western blotting体外实验观察白花蛇舌草提取物对人胰腺神经内分泌肿瘤BON-1、QGP-1细胞的增殖抑制作用及对细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响。结果 筛选得到白花蛇舌草活性成分7个,成分相关靶点158个;获得pNET疾病相关靶点2 870个,成分与疾病共同相关靶点119个。共同靶点的GO功能富集分析共得到2 099个条目,KEGG富集分析共得到162条信号通路,包括细胞凋亡、PI3K/Akt、P53等信号通路。不同质量浓度［0（对照）、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 mg·mL^-1］白花蛇舌草提取物干预BON-1、QGP-1细胞48 h后,细胞增殖明显受到抑制,且抑制作用具有明显的浓度相关性。与对照组比较,随着白花蛇舌草提取物质量浓度增加,BON-1、QGP-1细胞的增殖受到明显抑制,漂浮死亡细胞数增加;与对照组比较,高质量浓度白花蛇舌草提取物可显著降低BON-1、QGP-1细胞Bcl-2蛋白表达（P < 0.05）。结论 白花蛇舌草提取物能够有效抑制人胰腺神经内分泌肿瘤BON-1、QGP-1细胞增殖,通过抑制Bcl-2蛋白表达促进细胞凋亡;白花蛇舌草能够通过多成分、多靶点、多通路的途径治疗胰腺神经内分泌肿瘤。     

基于生物可给性和靶器官毒性剂量法的乌梢蛇中铅和砷联合暴露评估

目的 通过考察乌梢蛇Zaocys dhumnades（Cantor）中铅（Pb）和砷（As）的生物可给性,并探索靶器官毒性剂量（TTD）法在评估中药中重金属联合暴露风险中的应用,为限量标准的制定提供参考。方法 通过胃-肠两步模拟消化（in vitro PBET）联合电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法对乌梢蛇中Pb和As的生物可给性进行考察,根据其生物可给性计算其日暴露量。采用危害指数（HI）法对于Pb和As联合暴露产生的健康风险进行初步筛查;进一步针对不同毒理学终点,采用TTD法对Pb和As的累积风险进行更加精确的评估。结果 8批乌梢蛇中Pb和As的合格率为100%。HI法的初步评估结果表明,所有批次乌梢蛇中Pb和As的HI值均＜1。TTD法评估结果表明,作用终点心血管系统、神经系统、肾脏、血液和睾丸,所有批次乌梢蛇的HI值均＜1,健康风险可接受。结论 基于生物可给性,探索乌梢蛇中Pb和As的累积风险评估方法,为中药外源性有害残留物风险评估的方法开发提供新的思路,为制定更加科学的限量标准提供技术支撑。     

白花蛇舌草注射液诱导SKOV-3细胞株凋亡的研究

目的研究白花蛇舌草注射液对体外培养条件下卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖的影响以及诱导其凋亡的情况。方法取对数生长期的SKOV-3细胞（细胞数为5X104^／mL）分别接种于不同细胞培养板上,试验组每孔加入200μL不同质量浓度的白花蛇舌草注射液,空白对照组加入等体积PRMI-1640培养液孵育,采用四甲基偶氮唑盐（MTF）比色法检测吸光度（A490值）并计算SKOV-3细胞增殖抑制率;Annexin—V—FITC／PI染色细胞后,用流式细胞仪技术检测空白对照组与试验组的细胞凋亡率,并置荧光显微镜下观察不同组细胞的凋亡形态变化。结果MTT法检测结果显示,随着白花蛇舌草注射液质量浓度和作用时间的增加,SKOV-3细胞增殖抑制率均明显增大,12mL／L的试验组培养48h的抑制率最高,达（35．67±2．16）％;流式细胞仪检测显示,白花蛇舌草注射液处理后可引起SKOV-3细胞凋亡率随着白花蛇舌草注射液质量浓度的增加呈升高趋势,且荧光镜下试验组细胞可呈现典型凋亡改变。结论白花蛇舌草注射液能诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡。     

Caco-2细胞对酸枣仁皂苷A的跨膜转运

目的研究酸枣仁皂苷A（Jujuboside A,JuA）在Caco-2细胞的跨膜转运特性。方法采用体外培养的Caco-2细胞单层模型,考察时间、介质pH值、药物浓度、抑制剂对JuA在Caco-2细胞上转运的影响。结果 Caco-2细胞转运JuA呈时间及浓度依赖性;在pH为5.0～8.0范围内,Caco-2细胞对JuA的转运不受pH值的影响;P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）抑制剂维拉帕米（Verapamil,Ver）对Caco-2细胞转运JuA无影响;线粒体呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮化钠（Sodium azide）对Caco-2细胞转运JuA有抑制作用;JuA的AP-BL侧的Papp与BL-AP侧的Papp的两组均数比较无统计学意义。结论 JuA不是P-gp的底物,其跨膜转运是被动转运与主动转运共同参与的过程。     

西洋参破壁饮片中重金属及有害元素的测定及其风险评估

目的通过分析西洋参破壁饮片中重金属及有害元素的残留量,并通过风险评估,为建立破壁饮片的残留限量标准提供依据。方法采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法对西洋参破壁饮片中的Pb、Cd、As、Hg、Cu的残留量进行测定,并进行随行质量控制。同时,对西洋参破壁饮片中Pb、Cd、As、Hg的健康风险进行评估。结果参照《中华人民共和国药典》2015年版对于西洋参等植物药重金属及有害元素的限量标准,西洋参破壁饮片的合格率均为100%。风险评估的结果显示,每日服用西洋参破壁饮片的风险较低。结论若能够严格控制从中药材到破壁饮片的生产环节,中药破壁饮片中重金属及有害元素的风险基本可控。本文作者进一步完善了中药中重金属及有害元素的风险评估方法,建议以风险评估的结果为依据,完善中药破壁饮片的残留限量标准。     

LC-MS测定雷公藤甲素及其在Caco-2细胞上的转运特征

目的：建立体外模拟体内肠道细胞的Caco-2细胞Transwell模型,以此研究雷公藤甲素在Caco-2细胞模型上的跨膜转运特征。方法：采用聚酯碳酸酯膜连续培养Caco-2细胞21天,形成致密的单层细胞模型。然后对影响雷公藤甲素在Caco-2细胞模型上转运特征的因素包括浓度、时间及跨膜转运蛋白（P-糖蛋白,多药耐药蛋白,乳腺癌耐药蛋白）进行考察;同时采用LC-MS对溶液中的雷公藤甲素的含量进行测定。结果：雷公藤甲素主要以主动转运的方式进行吸收,且随着时间和药物浓度的增加,转运量明显增加。结论：雷公藤甲素在Caco-2细胞上转运存在一定的浓度及时间依赖性,且P-gp介导雷公藤甲素在Caco-2细胞上转运。     

白花蛇舌草在裸鼠胶质瘤间质化疗的实验研究

目的　探讨白花蛇舌草在可移植性人脑胶质瘤间质化疗的剂量及疗效 ,并探讨其作用机制。方法　将低分化人脑胶质瘤体外细胞系SHG 4 4移植于裸小鼠 ,制作成可移植性实体瘤模型 ,用不同剂量的白花蛇舌草及以博莱霉素为对照组 ,肿瘤间质内注射药物 ,观察实体瘤的瘤重及组织细胞形态的变化。结果　将白花蛇舌草每 1ml含总黄酮以芦丁计算不少于 0 2 5mg时 ,每日 1次 ,间质注射 0 5ml持续 12日后 ,肿瘤生长有明显抑制作用 (P <0 0 5 )。结论　白花蛇舌草有明显抑制肿瘤生长的作用。     

潮汕地区3种中草药中10种有机磷农药残留分布特征及风险评估

目的:建立潮汕地区3种中草药中10种有机磷农药的选择性多残留检测方法。方法:采用Qu ECh ERS法处理潮汕地区常用中草药白花蛇舌草、茅根和臭花,以气相色谱-串联质谱法为分析检测手段,建立10种有机磷农药的选择性多残留检测方法,分析不同中草药中有机磷农药总体残留水平、分布特征,并对其有机磷农药残留进行风险评估。结果:10种有机磷农药质量浓度在0.01~1.0μg/ml范围内,有机磷农药质量浓度与其峰面积之间呈良好线性关系,相关系数(r2)为0.9993~0.9997;检出限为1.0~3.0μg/kg,定量限为3.3~10.0μg/kg;加标回收率为90.3%~98.8%,相对标准偏差为1.2%~3.4%;潮汕地区随机采样的白花蛇舌草、茅根和臭花中,10种有机磷农药均未检出残留,不会对普通人群造成不可接受的长期膳食摄入风险。结论:该法准确度高、精密度好,适用于3种中草药中10种有机磷农药残留分布特征及风险评估。     

Caco-2细胞模型在药物吸收研究中的应用

Caco-2细胞(thehumancoloncarcino-maline)模型是最近十几年来国外广泛采用的一种研究药物肠吸收的体外模型,它具有如下优点:与动物试验相比,培养细胞要比培养动物更省时更经济;可测定药物的细胞摄取及胯膜转运;Caco-2细胞内有药物代谢酶,可在有代谢状况下测定药物的胯膜转运;Caco-2细胞易于培养且生命力强;Caco-2细胞来源是人结肠癌细胞,同源性好;可用于区分肠腔内不同吸收途径的差别。1.Caco-2细胞模型建立Caco-2细胞适宜在37℃、含5%CO2的环境中培养,采用DMEM培养基,且在培养基中应含有10%胎牛血清、1%非必需氨基酸、1%谷氨酰胺和青…     

药物纳米晶的制备及其口服转运机制研究进展

现阶段提高难溶性药物口服生物利用度是药剂学研究的热点内容，其中药物纳米晶化凭借较高的载药量、较高的口服生物利用度以及易于工业化生产等优点受到广泛关注。药物纳米晶是指采用粉碎法（Top-down法）或纳米沉淀法（Bottom-up法）制备的除稳定剂外无其他药用载体的纳米级微粒。通常认为药物纳米晶口服给药后通过内吞作用吸收入血或通过M细胞介导转运至肠系膜淋巴循环，但目前尚未透彻研究药物纳米晶跨肠道上皮细胞的转运机制。综述系统介绍了纳米晶的定义、制备方法、相关的体外细胞培养模型（Caco-2,MDCK,Caco-2/HT29-MTX,Caco-2/HT29-MTX/Raji-B）以及影响纳米晶跨膜转运的因素，并通过体外细胞培养模型从分子水平上深入分析药物纳米晶跨膜转运机制。