抑制lncRNA TUG1下调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1炎症小体在延缓阿尔茨海默病进展的作用

目的 探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)抑制核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体在缓解阿尔茨海默病进展中的作用。方法 选取9～10周龄遗传背景为C57/BL6的野生型小鼠(WT组,10只)或淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(30只)。APP/PS1转基因小鼠随机分为模型(model)组,模型+敲低lncRNA TUG1组[model+lncRNA TUG1短发夹RNA (shRNA)组]和model+shRNA非靶标(NT)组,每组10只。分别采集12周龄第1天(3月龄)和32周龄第1天(8月龄)小鼠外周血和脑皮质组织,并分离皮质中的原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞,每个时间点每组5只小鼠。Real-time PCR分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF) mRNA的水平,以及原代星形胶质细胞中补体蛋白C1r和C1s mRNA的水平。ELISA法测定其外周血浆中MIF含量。对3月龄和8月龄小鼠脑皮质原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞共培...     

创伤性脑损伤后白细胞介素1β在星形胶质细胞中的表达

目的:探究创伤性脑损伤后白细胞介素1β(IL-1β)在星形胶质细胞中的表达。方法:采用免疫印迹半定量检测创伤性脑损伤后IL-1β、星形胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光双重染色检测IL-1β在星形胶质细胞中的定位表达。结果:IL-1β表达在损伤后8 h就有增高,1 d时最高,4 d时有所降低,且1 d和4 d时可定位表达在星形胶质细胞中。结论:损伤后增高的IL-1β表达可能对促进星形胶质细胞的活化具有重要的调节作用。     

炎性因子IL-1β对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响

目的:本研究应用原代培养星形胶质细胞,探讨炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响。方法:在原代星形胶质细胞培养中分别加入1 ng/ml IL-1β,流式细胞仪检测不同作用时间(0、24、48、72 h)细胞线粒体膜电位改变,激光共聚焦显微镜观察活性氧(ROS)生成,分光光度法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,RT-PCR、Western Blot检测星形胶质细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达变化。结果:1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24~72 h,细胞线粒体膜电位无明显改变,细胞未出现明显损伤。IL-1β孵育24 h,细胞内ROS生成减少,GSH生成增加;48 h细胞内ROS生成增加,GSH较24 h组减低(P0.05);72 h,原代培养星形胶质细胞内ROS生成明显增加,GSH较0 h组降低(P0.05)。1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24 h,细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平较0 h组升高(P0.05);但仅是一过性反应,IL-1β孵育72 h后,原代培养星形胶质细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平均较0 h组降低(P0.05)。结论:持续炎性因子刺激下,星形胶质细胞抗氧化应激能力呈现动态改变,并且细胞内抗氧化物参与此变化过程。     

IL-1β影响大鼠星形胶质细胞中SSeCKS表达的研究

目的:研究Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在IL-1β激活的星形胶质细胞中的表达.方法:以炎性因子IL-1β刺激大鼠体外培养的星形胶质细胞,观察细胞中SSeCKS的表达及其细胞内的亚定位的改变.结果:IL-1β可上调大鼠原代培养星形胶质细胞中SSeCKS的表达,诱导其丝氨酸磷酸化.在亚细胞水平,IL-1β还能引起SSeCKS向核周、细胞星状突起聚集,而蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220能抑制IL-1β对细胞中SSeCKS亚细胞定位及磷酸化水平的影响.结论:在IL-1β的影响下,大鼠星形胶质细胞中SSeCKS的表达增加,磷酸化水平增强,细胞内定位发生改变,这种改变与PKC的功能相关,提示SSeCKS可能作为PKC的下游分子参与到炎性因子引起的星形胶质细胞活化的过程中.     

一氧化氮对星形胶质细胞轴突生长因子-1表达及迁移的影响

目的 探讨一氧化氮(NO)对星形胶质细胞中轴突生长因子-1(netri-1)的表达变化以及对细胞迁移的影响。方法 采用硝普钠（SNP）作为NO供体处理星形胶质细胞,通过振荡培养和差速贴壁法分离纯化新生SD大鼠星形胶质细胞,接种至培养板,分为实验组和对照组,每组6个样本,实验组用50μmol/L SNP处理星形胶质细胞,通过划痕法观察细胞的迁移,并采用Western blotting 和免疫细胞化学方法分别检测处理前后的星形胶质细胞中netrin-1蛋白的表达变化。 结果 SNP处理后,实验组的星形胶质细胞与对照组相比,划痕区细胞明显增多,星形胶质细胞netrin-1表达随着时间的推移出现先升高后降低趋势,于48 h达到峰值 (P<0.01)。 结论 SNP使星形胶质细胞netrin-1表达水平发生变化和影响星形胶质细胞迁移,提示netrin-1可能通过NO的调控而影响星形胶质细胞迁移。     

腺苷A1受体拮抗剂DPCPX对低氧复氧脑星形胶质细胞影响的实验研究

目的:观察腺苷A1受体拮抗剂1,3-二丙基-环戊黄嘌呤(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine, DPCPX)对体外培养低氧复氧(hypoxia and reoxygenation, H/R)大鼠脑星形胶质细胞促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)释放量、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthase, GS)、超氧化物歧化酶(superoxide dimutase, SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)活性的影响,探讨腺苷A1受体在H/R星形胶质细胞神经保护中的作用.方法:对大鼠大脑皮层星形胶质细胞进行体外培养并建立H/R模型,在低氧同时加入终浓度为100 nmol/L DPCPX 12 h后复氧1,6,12,24 h,检测EPO释放量,GS,SOD和GSH-PX活性的变化.结果:与对照组比较,DPCPX组H/R星形胶质细胞的EPO释放量显著减少;GS,SOD和GSH-PX的活性降低.结论:腺苷A1受体参与H/R星形胶质细胞的神经保护作用.     

皮质酮对大鼠脊髓背角星形胶质细胞活动的影响

目的:探讨皮质酮(corticosterone,CORT)对培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞活性的调节作用。方法:培养纯化新生SD大鼠脊髓背角星形胶质细胞,荧光双重标记技术检测培养的星形胶质细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)共表达;免疫印迹技术检测星形胶质细胞GFAP表达的变化;高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测星形胶质细培养液中谷氨酸含量。结果:培养的脊髓背角星形胶质细胞均表达GR;CORT孵育3 h可降低脊髓背角星形胶质细胞GFAP表达,GR拮抗剂RU38486可阻断CORT的作用;但CORT对星形胶质细胞谷氨酸释放无显著影响。结论:CORT可降低脊髓背角星形胶质细胞GFAP表达,但对谷氨酸释放无显著影响。     

TAAR1-EAAT2通路抑制乳鼠星形胶质细胞的谷氨酸摄取能力北大核心CSCD

目的研究多巴胺(DA)对原代星形胶质细胞谷氨酸(Glu)摄取能力的影响,以及DA通过痕量胺相关受体1-兴奋性氨基酸转运体2(TAAR1-EAAT2)信号通路对星形胶质细胞Glu摄取能力的影响。方法采用Amplex Red谷氨酸测定试剂盒测定经过DA处理的原代星形胶质细胞对Glu摄取含量的变化,反转录PCR检测TAAR1、EAAT2 mRNA水平,Western blot法检测TAAR1、EAAT2蛋白水平;采用TAAR1小干扰RNA(siRNA)和TAAR1质粒转染DA处理后的原代星形胶质细胞,Western blot法检测EAAT2表达水平并采用Amplex Red谷氨酸测定试剂盒测定培养上清液Glu含量。结果 DA处理的原代星形胶质细胞EAAT2水平降低,TAAR1水平增加,培养上清液Glu含量上升。DA处理经TAAR1 siRNA转染后的原代星形胶质细胞,上调EAAT2水平,培养上清液中Glu含量减少;DA处理经TAAR1质粒转染后的原代星形胶质细胞,则EAAT2降低,培养上清液中Glu的含量增加。结论 DA通过影响星形胶质细胞TAAR1-EAAT2信号通路,减弱细胞Glu摄取能力,引起细胞外Glu蓄积,从而损伤星形胶质细胞的功能。     

TFPI-2对缺氧大鼠星形胶质细胞生物学特性及机制的研究

目的:研究组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)对缺氧大鼠星形胶质细胞生物学特性的影响,探讨其对大鼠星形胶质细胞缺氧保护的机制。方法:从大鼠脑组织中分离培养星形胶质细胞,将细胞作缺氧处理,分别采用qRT-PCR和Western blot法检测星形胶质细胞中TFPI-2表达水平。在星形胶质细胞中转染TFPI-2 siRNA后,采用qRT-PCR和Western blot法检测TFPI-2基因沉默效果,MTT检测星形胶质细胞增殖,流式细胞术检测星形胶质细胞凋亡情况,qRT-PCR检测星形胶质细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)mRNA表达水平。结果:Hypoxia组星形胶质细胞中TFPI-2 mRNA水平和蛋白水平明显高于Control组星形胶质细胞,转染TFPI-2 siRNA后,si-TFPI-2组星形胶质细胞中TFPI-2 mRNA和蛋白表达水平明显低于si-control组细胞,差异有统计学意义(P0. 05)。缺氧星形胶质细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中β-catenin、c-myc、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,与正常培养的星形胶质细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。对缺氧星形胶质细胞敲减TFPI-2后,细胞存活率升高,细胞凋亡率和细胞中β-catenin、c-myc、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,与缺氧星形胶质细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:下调TFPI-2可以促进缺氧星形胶质细胞增殖,抑制细胞凋亡,其作用机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

蛋白激酶B受体在大鼠脑星形胶质细胞的表达及其磷酸化

目的:研究大鼠脑星形胶质细胞蛋白激酶B受体(TrkB)的表达及其信号转导通路。方法:用生后2~3dSD大鼠,在无菌条件下取脑,制备细胞悬液,以胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定星形胶质细胞;以RT-PCR法研究星形胶质细胞TrkB、ERK1、ERK2 mRNA表达,用蛋白印迹和免疫细胞化学法研究星形胶质细胞TrkB、ERK1、ERK2蛋白表达。用蛋白印迹法检测脑源性神经营养因子(BDNF)作用后的星形胶质细胞p-TrkB。结果:星形胶质细胞的纯度达95%以上,RT-PCR结果显示星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2 mRNA,蛋白印迹及免疫细胞化学法显示星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2蛋白。BDNF作用1h后TrkB磷酸化,K252a可阻止TrkB磷酸化。结论:培养的大鼠星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2;BDNF可使TrkB磷酸化,TrkB与星形胶质细胞信号转导有关。     

细胞外调节蛋白激酶在体外培养下大鼠大脑皮质星形胶质细胞的表达

目的:研究大鼠大脑皮质星形胶质细胞细胞外调节蛋白激酶(ERK)表达.方法:用生后2～3d SD大鼠,在无菌条件下取大脑皮质,制备细胞悬液,以GFAP鉴定星形胶质细胞;用免疫细胞化学方法研究星形胶质细胞ERK1表达.结果:星形胶质细胞的纯度达95%以上,ERK1免疫阳性物质呈棕黄色,分布于星形胶质细胞胞体与突起中.结论:培养的大鼠星形胶质细胞表达ERK1,其可能与星形胶质细胞信号转导有关.     

天麻素对缺血缺氧大鼠星形胶质细胞MCP1表达的影响

目的:通过建立新生大鼠缺血缺氧脑损伤(HIBD)模型和体外星形胶质细胞系TNC1细胞糖氧剥夺(OGD)模型，从体内体外探索天麻素(GAS)对星形胶质细胞缺血缺氧损伤后单核细胞趋化因子1(MCP1)表达的影响。方法:将星形胶质细胞TNC1随机分为对照组(control)、糖氧剥夺组(OGD)、糖氧剥夺+天麻素(OGD+G)。将3 d新生SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血缺氧脑损伤模型组(HIBD)、HIBD模型+天麻素干预组(HIBD+G)。使用免疫荧光双标染色和Western Blot检测各组细胞及大鼠左侧损伤皮质半暗区MCP1的表达变化。结果:体外免疫荧光染色和Western Blot结果显示，与control组相比，OGD组TNC1细胞MCP1表达明显增加(P<0.05),GAS可减轻OGD损伤后MCP1的表达(P<0.05);体内免疫荧光双标染色和Western Blot结果也显示：GAS干预显著降低了HIBD后星形胶质细胞MCP1的表达(P<0.05)。结论:GAS可以通过降低星形胶质细胞MCP1的表达对HIBD发挥保护作用。     

大鼠脊髓星形胶质细胞的分离与纯化

目的:纯化培养和鉴定新生大鼠的脊髓星形胶质细胞,建立稳定的星形胶质细胞培养体系,为研究创伤后慢性神经病理性痛的脊髓机制奠定基础。方法:根据成纤维细胞与星形胶质细胞生长倍增时间的差异,用阿糖胞苷(Ara-C)抑制成纤维细胞生长分裂的方法获取星形胶质细胞,用胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光法对其鉴定。同时与差速贴壁培养法进行对比。结果:用Ara-C处理后,可获得较高纯度的星形胶质细胞,经鉴定其纯度可达90%以上,而对照组几乎全部为成纤维细胞。结论:Ara-C处理能彻底清除成纤维细胞,从而保持星形胶质细胞的正常生长繁殖,达到纯化星形胶质细胞的目的。     

EAAT_2调节异氟烷长时程处理对星形胶质细胞的损伤作用

目的:验证吸入麻醉剂异氟烷长时程处理对星形胶质细胞的毒性作用并探讨其可能的分子机制。方法:将原代星形胶质细胞在异氟烷中进行长时程暴露,通过MTT检测星形胶质细胞的活性,利用Western Blot和qRT-PCR检测EAAT_2的表达。利用慢病毒构建EAAT_2体外过表达和沉默模型并探索干预后对异氟烷诱导星形胶质细胞毒性作用的影响。结果:(1)异氟烷长时程处理损害星形胶质细胞的活性,并呈剂量(P0.01)和时间(P0.001)依赖性;(2)异氟烷长时程处理引起EAAT_2表达增加,且增加程度与异氟烷剂量(P0.05)和暴露时间(P0.001)呈正相关;(3)下调星形胶质细胞EAAT_2的表达可以减轻异氟烷长时程处理对星形胶质细胞的损伤(P0.05)。结论:EAAT_2可调节异氟烷长时程处理对星形胶质细胞的损伤作用。     

星形胶质细胞在髓鞘形成与修复中作用的研究进展

星形胶质细胞(AST)是中枢神经系统(CNS)内最主要的胶质细胞类型,为神经元的代谢提供物质支持。中枢神经系统损伤后,星形胶质细胞经过复杂的变化形成反应性星形胶质细胞,反应性星形胶质细胞对中枢神经系统的修复有着支持和抑制的双重作用。随着星形胶质细胞在大脑中作用的深入研究,目前对星形胶质细胞在髓鞘形成与修复中的作用逐渐明确。本文就星形胶质细胞在髓鞘形成与修复中的作用进行综述。     

低氧刺激诱导体外培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞内neuregulin-1表达上调

Neuregulin-1(NRG-1)是神经胶质及神经元产生的细胞间信号转导蛋白。该蛋白通过与ErbB受体结合,对神经系统的正常发育、成熟发挥重要作用,也在缺血性脑损伤时起神经保护作用。为探讨体外培养的星形胶质细胞受缺氧刺激后NRG-1的表达特点,本实验利用体外培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞,采用免疫组织化学和Westernblot方法,比较了正常培养和低氧复氧条件下星形胶质细胞中NRG1的表达。结果显示:正常培养的星形胶质细胞中有NRG-1的表达,但含量不高;低氧复氧培养后星形胶质细胞NRG1的表达量随着复氧时间的延长缓慢增加,至复氧8h,其表达量陡然升高,达到峰值后又逐渐降低,甚至降至正常水平以下。本研究表明,在低氧缺血性脑损伤后,星形胶质细胞反应性大量产生NRG1的时间相对滞后。由此提示,低氧缺血性脑损伤后,立即使用外源性神经保护剂为宜。     

大鼠腰髓背角星形胶质细胞对外伤性疼痛刺激的反应及其与神经元关系的免疫电镜研究

本研究采用抗缝隙连接蛋白 43 ( Cx43 )和抗缝隙连接蛋白 3 2 ( Cx3 2 )免疫电镜双标记方法 ,观察了一侧胫、腓骨骨折后大鼠腰髓背角星形胶质细胞与神经元的超微结构改变。结果发现 ,在脊髓背角星形胶质细胞与神经元之间的结合区域存在着如下的超微结构 :( 1)轴突终末直接与星形胶质细胞突起 ( Cx43阳性 )形成一种突触样结构 ;( 2 )由神经元突触前膜、突触后膜及星形胶质细胞突起形成的“三方突触结构”;( 3 )星形胶质细胞与星形胶质细胞之间的缝隙连接 ;( 4 )新发现的由一侧的神经元( Cx3 2阳性 )和另一侧的星形胶质细胞突起 ( Cx43阳性 )组成的一种超微结构 ,骨折后此结构数目显著增高 ,可能是缝隙连接的同源结构 ,暂称为异源性缝隙连接。结果提示 :异源性缝隙连接结构可被疼痛刺激激活 ,并极有可能是神经元与星形胶质细胞之间密切接触并进行物质交流的结构基础之一     

CART肽通过激活ERK抑制氧糖剥夺诱导的星形胶质细胞AQP-4上调

目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录(CART)肽抑制星形胶质细胞氧糖剥夺(OGD)性损伤及调节水通道蛋白4(AQP-4)表达的分子机制。方法:体外培养新生ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色鉴定细胞。所得细胞随机分为4组:对照组、模型组、CART组和CART+PD98059 (ERK信号通路特异性阻断剂)组,MTT法检测星形胶质细胞活力,Western blot检测ERK及AQP-4的表达。结果:OGD处理后,CART肽能显著提高OGD后星形胶质细胞的活力(P0.01);CART肽能够提升星形胶质细胞内ERK的磷酸化水平(P0.05);PD98059能够阻断CART肽诱导的ERK磷酸化(P0.01),并减弱CART肽抑制AQP-4表达的作用(P0.05)。结论:CART肽提高OGD处理后星形胶质细胞的活力,并通过激活ERK通路抑制OGD处理后细胞AQP-4的表达。     

Ski在大鼠活化星形胶质细胞中表达的变化

目的:探究Ski在大鼠正常及活化星形胶质细胞中的表达及随时间变化的规律。方法:提取大鼠大脑皮质,分离星形胶质细胞,体外培养。采用LPS刺激和细胞划痕损伤2种方法活化星形胶质细胞,均采用Western blot法检测各个时点2种活化星形胶质细胞中Ski和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白表达情况,利用间接免疫荧光法检测Ski蛋白在星形胶质细胞中的表达定位。结果:GFAP蛋白在星形胶质细胞中固有表达,LPS活化和划痕损伤后表达均上调。Ski在正常星形胶质细胞中呈低表达状态,1 mg/L LPS活化星形胶质细胞后,Ski表达开始增加,4 d时表达量最高(P0.05),6 d时开始下降,但仍高于未活化组;细胞划痕损伤后Ski蛋白表达情况与上述情况高度一致。Ski在正常及LPS活化6 d星形胶质细胞中表达主要集中在胞核,LPS活化后2和4 d时在胞质中出现明确的Ski表达。结论:Ski蛋白表达于星形胶质细胞,并在活化星形胶质细胞中表达上调。由此,我们推测Ski蛋白可能调控星形胶质细胞的活化、增殖等过程。     

异丙酚通过抑制p38激活下调氨处理的大鼠脑星形胶质细胞AQP4的表达并减轻细胞水肿

目的:研究异丙酚对氨处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响以及相关机制。方法:原代培养Sprague Dawley大鼠大脑皮质星形胶质细胞。用细胞免疫荧光标记星形胶质细胞特异性的神经胶质酸性蛋白,星形胶质细胞纯度达95%以上的细胞备用。实验分为正常对照组(N)、氯化铵(5mmol/L)处理24h组(NH4Cl-24h)、p38抑制剂SB203580(10μmol/L)预处理组(SB)、异丙酚(10μmol/L)预处理组(P)和溶剂二甲亚砜(DMSO)对照组(C)。p38抑制剂、异丙酚和溶剂均预处理星形胶质细胞30min后再加入氯化铵作用24h。用光学显微镜观察各组细胞水肿情况,同时用Western blotting检测AQP4、p38和磷酸化p38的表达情况。结果:光学显微镜观察发现氯化铵处理后星形胶质细胞较正常对照组细胞肿胀明显,异丙酚和p38抑制剂预处理能明显减轻星形胶质细胞水肿。Western blotting检测发现各组星形胶质细胞总p38蛋白表达无明显变化(P0.05)。异丙酚预处理组和SB预处理组磷酸化p38蛋白和AQP4蛋白表达均较氯化铵处理组和溶剂对照组明显降低(P0.05)。结论:AQP4蛋白表达受p38信号途径的调节,异丙酚可通过抑制p38信号途径的激活,降低氨引起的星形胶质细胞AQP4蛋白表达上调,减轻细胞水肿。