枸橼酸莫沙必利片杂质研究

目的 建立测定枸橼酸莫沙必利片有关物质检测条件下特定杂质莫沙必利柠檬酰胺2个色谱峰的超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法。方法 HPLC条件，色谱柱为Agilent C₁₈柱(150 mm×4.6 mm,5μm)，流动相为枸橼酸盐溶液-乙腈(梯度洗脱)，流速为1.0 mL/min，检测波长为274 nm，柱温为30℃，进样量为10μL;UPLC-Q-TOF-MS条件，色谱柱为YMC-Triant C₁₈柱(150 mm×2.1 mm,1.9μm)，检测器为DAD检测器，流动相为含0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸铵(A)-乙腈(B)、梯度洗脱，流速为0.5 mL/min，检测波长为274 nm，柱温为40℃，进样量为0.5μL。电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI⁺)，二级质谱碰撞能量30 e V，毛细管电压4 k V，锥孔电压45 V，碎裂电压60 V，干燥气流速8 mL/min，干燥气温度300℃，雾化气压力35 psi，扫描模式MS/MS；扫描范围m/z 50～700；按不加校正因子的...     

液质联用技术用于醋酸阿托西班注射液中杂质结构鉴定

目的:采用高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱-四极杆串联静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q Orbitrap MS)技术对醋酸阿托西班注射液中杂质结构进行鉴定。方法:HPLC法采用Inertsil ODS-2 C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为乙腈-甲醇-三氟乙酸溶液(pH 3.2)(15∶10∶75),流动相B为乙腈-甲醇(60∶40),梯度洗脱，流速1.2 mL·min^-1,检测波长220 nm。UPLC-Q Orbitrap MS法采用BEH300 C₁₈色谱柱(150 mm×2.1 mm, 1.7μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱，流速0.2 mL·min^-1;采用电喷雾离子源，选择正离子模式进行Full MS/dd-MS²扫描。结果:对5家企业各1批醋酸阿托西班注射液进行了有关物质测定，以面积归一化计算，含量>0.1%的杂质峰个数分别为9、10、13、9和6,总杂含量分别为0.35...     

超高效液相色谱串联质谱法同时测定当归补血汤中6种成分含量

目的 建立同时测定当归补血汤中6种成分含量的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法。方法 色谱条件，色谱柱为Waters BEH C₁₈柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱)，流速为0.3 m L/min，柱温为40℃，进样量为2μL；质谱条件，电喷雾离子源(ESI)，正负离子模式同时采集，多反应检测模式(MRM)，碰撞气为氩气，离子源温度为150℃，毛细管电压为3.0 k V，去溶剂气流量为700 L/h，去溶剂气温度为350℃。结果 阿魏酸、藁本内酯、芒柄花素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮和黄芪甲苷质量浓度分别在0.52～50.62μg/m L(R²=0.999 3)、0.82～80.34μg/m L(R²=0.999 2)、0.31～30.06μg/m L(R²=0.999 6)、0.62～60.23μg/m L(R²=0.999 8)、0.34～33.65μg/m L(R²=0.999...     

基于特征性成分的肾石通颗粒中金钱草投料真实性考察

目的 建立肾石通颗粒中广金钱草的掺伪检测方法。方法 以常见混伪品广金钱草中夏佛塔苷为特征性成分，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-PDA）法进行筛查与含量测定，色谱柱为Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（10∶90,V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为340 nm，柱温为35℃。采用液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）法进行确证试验，色谱柱为Ultimate LP-C18柱（100 mm×2.1 mm,1.8μm），流动相为乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液（梯度洗脱），流速为0.2 mL/min，柱温为30℃；电喷雾负离子多反应监测模式，毛细管电压为3.5 kV，鞘气流速为11 L/min，辅助气流速为7 L/min，脱溶剂温度为300℃，离子传输管温度为350℃，以质荷比（m/z）563.0→353.0和563.0→383.0为特征离子对，碰撞能量为38 V和32 V。结果 夏佛塔苷进样量在0.030 8～0.615 5μg范围内与峰面积积分值线性关系良好（R2=0.999 4,n=6）；精密...     

HPLC-MS/MS法测定风湿关节炎片中松香酸的含量

目的:建立测定风湿关节炎片中松香酸含量的方法。方法:采用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法。HPLC色谱柱为ZORBAX SB-C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸(82∶18,V/V),流速为1.0 ml/min,检测波长为241 nm,柱温为30℃,进样量为10μl;MS/MS色谱柱为ZORBAX SB-C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸(80∶20,V/V),流速为0.2 ml/min,柱温为30℃,进样量为0.5μl,离子化模式为ESI+,雾化气压力为25 psi,气体流量为8.0 L/min,毛细管电压为4 000 V,毛细管出口电压为120 V,母离子为303 m/z,扫描范围为50~500 m/z,干燥气温度为350℃。结果:松香酸检测质量浓度线性范围为2.5~100.0μg/ml;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;回收率为96.75%~98.11%,RSD为0.53%(n=6)。结论:该方法简便、结果准确、重复性好,适用于风湿关节炎片中松香酸的含量测定。     

高效液相色谱和液质联用技术用于人干扰素α2b中甲硫氨酸氧化的研究

目的:采用高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)技术对人干扰素α2b中甲硫氨酸的氧化情况进行研究.方法:HPLC法采用Jupiter 5U C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm,300 ?),流动相A为乙腈-水-三氟乙酸(300∶700∶2),流动相...     

富马酸丙酚替诺福韦片中有关物质测定及杂质鉴定

目的 建立检测富马酸丙酚替诺福韦片中有关物质含量的高效液相色谱法,以及鉴定制剂中未知湿热降解杂质化学结构的二维液相色谱-三重四极杆串联质谱法。方法 有关物质测定中,色谱柱为Waters XTerra MS C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.02 mol/L磷酸盐(1 mol/L氢氧化钾溶液调pH至6.0)-甲醇(95∶5,V/V)-甲醇(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。化学结构鉴定中,色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C₁₈柱(50 mm×3.0 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇(55∶45,V/V),流速为0.4 mL/min,柱温为35℃,采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,质荷比(m/z)扫描范围为100～1 000,雾化气体(氮气,N₂)压力为45 psi,干燥气(N₂)流速为6 L/min,温度为350℃,碎裂电压为150 V,二级质谱碰撞裂解能量...     

聚山梨酯指纹图谱建立及成分鉴定

目的 建立聚山梨酯的超高效合相色谱（UPCC）指纹图谱并指认其成分。方法 采用超高效合相色谱质谱联用（UPCC-MS）法。MS条件，离子化模式为ESI+；雾化气温度为500℃、流速为800 L/h，源温度为120℃，毛细管电压为2.5 kV，锥孔电压为40 V，采集模式为MSE，扫描范围m/z 50～3 000;UPCC条件，色谱柱为ACQUITY UPC2Torus Diol柱（100 mm×3.0 mm,1.7μm），流动相为CO2-甲醇/乙腈（30∶70,V/V），离子化溶剂为甲醇+5 mmol/L甲酸铵（流速为0.2 mL/min），梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温为50℃，背压为2 500 psi，进样量为1μL。测定12批不同来源的聚山梨酯80样品及其美国药典（USP）标准品的UPCC图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012.130723版）进行相似度评价，确定共有峰，计算相似度，并指认成分。结果 样品的UPCC图谱有22个共有峰，均指认出具体成分，相似度为0.884～0.966；经验证，样品UPCC图谱与对照指纹图谱一致性较好。结论 建立的UPCC-M...     

新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素修饰位点研究

目的:建立新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)修饰位点的研究方法,为该类新型修饰技术产物的质量评价提供依据。方法:采用MALDI-TOF质谱分析修饰产物中聚乙二醇(PEG)的修饰个数及修饰肽段的质量数;采用LC-Q-TOF质谱分析修饰位点,分析色谱柱为UPLC色谱柱(Protein ACQUITY BEH C₄ Column, 150 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?),以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相,进行梯度洗脱,柱温为40℃。质谱数据采集条件为MS~E模式,一级质谱能量4 eV,二级碎裂电压30～55 eV。结果:修饰蛋白中PEG的平均相对分子质量为30 000,并且每个PEG-rhGH分子中仅存在1个PEG修饰;原型蛋白重组人生长激素中第134位精氨酸被替换为赖氨酸,且该赖氨酸的ε-氨基与连接子HOOC-O-CH₂-CH₂-N₃中的羧基端共价结合,连接子另一端的叠氮基团与活化后的PEG偶联后生成修饰产物。结论:联合运用多种质谱技术,通过比对...     

LC-MS/MS测定氨苄西林原料及制剂的杂质谱

目的 建立LC-MS/MS法测定并比较氨苄西林/氨苄西林钠原料及制剂的杂质谱。方法 采用ACE C₁₈(2.1 mm×100 mm,1.7μm)，以10 mmol/L醋酸铵水溶液(用甲酸调节pH值至5.2)-乙腈(98:2, V/V)为流动相A，以10 mmol/L醋酸铵水溶液(用甲酸调节pH值至5.2)-乙腈(50:50, V/V)为流动相B，流速0.3 mL/min，梯度洗脱，柱温30℃，自动进样器6℃；分别以光二极管阵列检测器(PDA)与电喷雾离子化质谱法，采集杂质谱的PDA数据、质谱的母离子及子离子数据，结合杂质的色谱行为，比较氨苄西林/氨苄西林钠原料及制剂的杂质谱。结果 该方法对氨苄西林及其杂质具有良好的分离能力，可以检测19个主要杂质，其中13个已知杂质准分子离子峰与EP杂质对照品一致，推测了6个未知杂质结构。厂家B与厂家C氨苄西林胶囊(均尚未通过一致性评价)杂质谱与日本参比制剂基本一致；厂家D(尚未通过一致性评价)检出杂质谱与厂家E(通过一致性评价)略有差异，厂家E未检出杂质F和杂质14号。结论 建立的LC-MS/MS法能有效地洗脱、分离氨苄西林降解...     

聚乙二醇干扰素α2b质控方法探讨

目的：采用分子量为30KD的聚乙二醇（PEG）对干扰素α2b进行N端定点修饰获得聚乙二醇干扰素α2b（PEG—IFNα2b）．并建立PEG—IFNα2b的质控方法。方法：采用Wish细胞-VSV病毒系统,以细胞病变抑制法（CPE）测定PEG—IFNα2b的生物学活性,Lowry法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量,高效液相凝胶过滤色谱法测定纯度,胰蛋白酶消化法测定肽图,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱,地高辛（DIG）标记的核酸探针法测定外源性DNA残留量,ELISA法测定宿主茵菌体蛋白残留量。结果：聚乙二醇干扰素α2b的比活性为1．39×10^7IU·mg^-1蛋白,蛋白含量为420μg·ml,相对分子质量约为65000道尔顿,纯度超过99．0％,紫外最大吸收峰约在278nm波长处,外源性DNA残留量小于100pg／剂量,宿主菌菌体蛋白残留量为0．01027％。结论：该质控方法可用于聚乙二醇干扰素α2b的检定。     

高效液相色谱串联质谱法快速检测淫羊藿药材中47种农药残留

目的 建立快速检测淫羊藿药材中47种农药残留的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法。方法 色谱条件，色谱柱为Kromasil 100-5 C₁₈柱(150 mm×3.9 mm,5μm)，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱)，流速为0.4 mL/min，柱温为40℃，进样量为10μL；质谱条件，扫描模式为多反应监测(MRM)模式，电喷雾离子源正离子模式(ESI⁺)，雾化气温度为450℃，气帘气压力为30 psi，碰撞气压力为5 psi，离子源电压为4 500 V，辅助气1,2压力均为30 psi。结果 47种农药对照品质量浓度均在2～20 ng/mL范围内与峰面积线性关系良好(r>0.997)；检测限为0.04～6.50μg/kg；精密度、稳定性试验结果的RSD均小于4.0%;47种农药的加样回收率分别为72.23%～96.33%,RSD为1.40%～4.90%(n=9)；基质效应考察结果表明，40种农药存在负基质效应，且38种农药的基质效应不可忽略。25批药材样品中有10批检出农药(共4种)残留。结论 该方法具有分析速...     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中阿托伐他汀的浓度

目的:建立一种快速、准确、灵敏度高、专属性强的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中阿托伐他汀的浓度。方法:以氟伐他汀为内标,血浆样本经乙腈(含0.05%甲酸)沉淀蛋白后进行LC-MS/MS分析测定。色谱条件：采用MSCB-2C (3.0 mm×50 mm, 3.3μm) C₁₈为色谱柱,以0.05%甲酸-10%甲醇-水为流动相A,0.05%甲酸-40%甲醇-60%乙腈为流动相B,等度洗脱(流动相A∶B=36∶64,V/V),流速为0.5 mL·min^-1,柱温为45℃,进样量为5μL;质谱条件：采用电喷雾(ESI)正离子模式,多反应监测(MRM)方式进行检测,阿托伐他汀及氟伐他汀(内标)的离子对分别为559.45→250.20,412.25→224.15。结果:阿托伐他汀在1.0～100 ng·mL^-1范围内线性关系良好(R²≥0.999 5),定量下限为1.0 ng·mL^-1;低、中、高3水平血浆质控浓度批间及批内精密度在±10%以内,准确度在92.9%～...     

HPLC法在干扰素α-2b的纯化和蛋白纯度测定中的应用研究

目的:为开发干扰素α-2b新剂型提供纯化和质控的技术指标.方法:用反相离子对色谱法对千扰素α-2b的粗品进行分离纯化;用分子排阻色谱法测定其蛋白纯度.结果:反相离子对色谱法可使纯度为85%粗品提高到95%以上:分子排阻色谱法可通过峰面积比,快速、客观地确定表达蛋白的百分比,对主峰、次峰的分离度大于1.5.结论:反相离子对HPLC法可作为干扰素α-2b的纯化方法;分子排阻色谱法是鉴定基因工程干扰素的不可缺少的指标之一,它可对提纯工艺起到有效的监控作用.     

HPLC MALDI-TOF质谱法检测IFN-α2b二硫键结构

目的 采用TPCK胰酶酶切、高效液相色谱(HPLC)法与MALDI-TOF MS质谱法联用解析重组人干扰素α2b(recombinant human interferon α2b,rhIFN-α2b)的二硫键连接位置;建立活性多肽/蛋白质二硫键连接位置定位的分析方法.方法 首先验证rhIFN-α2b是否有游离半胱氨酸,然后通过TPCK胰蛋白酶酶切rhIFN-α2b蛋白质,HPLC-RPC法分离酶切样品并按峰分别收集各个肽段样品;采用质谱解析分子量和二次质谱肤段氨基酸系列测序,获得rhIFN-α2b的胰酶肽图;比对还原型与非还原型的胰酶肽图,找出差异肽段,并于理论胰酶酶切肽段比较,最终确定rhIFN-α2b的二硫键位置.结果 rhIFN-α2b的二硫键位置与文献报道的天然人干扰素α2b的二硫键位置一致,为Cys1-Cys98、Cys29-Cys138.结论 建立了胰酶酶切、高效液相色谱(HPLC)法与MALDI-TOF MS质谱法联用测定活性多肽/蛋白质二硫键的分析方法,为今后蛋白质类药物的二硫键位置定位提供可靠分析手段.     

液-质联用法同时测定复方鹿角颗粒中18种氨基酸的含量

目的:建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法,同时测定复方鹿角颗粒水解后18种氨基酸的含量。方法:样品经过150℃水解1 h处理后直接进样,无需进行衍生化和固相萃取等烦琐的前处理步骤。液相色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse AAA (4.6 mm×150 mm, 5 μm)。采用0.1%甲酸水溶液和90%乙腈水溶液为流动相进行梯度洗脱;洗针液为50%乙腈水溶液(含0.1%甲酸),流速为0.2 ml·min^-1。结果:18种氨基酸的检出限(LOD)为3.00~30.0 ng·ml^-1,线性相关系数均大于0.997 8,峰面积测定的相对标准偏差(RSD)在5%以内。结论:该方法分析效率高、灵敏度和选择性高,适用于复方鹿角颗粒氨基酸的定性定量分析。     

LC-MS/MS法同时检测筋骨痛消胶囊中非法添加的醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬

目的:采用LC-MS/MS联用技术建立检测筋骨痛消胶囊中非法添加醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬的方法。方法:色谱柱为SHIMADZU shim-pack VP-ODS（250mm×4.6mm,5μm）,0.02mol·L^-1醋酸铵0.1%醋酸水溶液:乙腈（53:47）为流动相,流速1.0ml·min^-1;Agilent6310离子阱质谱仪,电喷雾离子源（ESI）,雾化气压力38psi,干燥气温度350℃,流速9ml·min^-1,扫描范围50～500m/z。结果:在高效液相色谱、质谱中,样品出现与醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬成分一致的色谱峰、质谱峰。结论:本方法选择性强,灵敏度高,可用于筋骨痛消胶囊中非法添加醋酸泼尼松、双氯芬酸及布洛芬的定性鉴别。     

高效液相色谱-串联质谱法同时检测中药软膏剂中9种糖皮质激素

目的 建立同时检测中药软膏剂中非法添加的9种糖皮质激素的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法.方法 色谱柱为Shimadzu Shim-pack VP-ODS C18柱(150 mm×2.1 mm,3μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为5μL;...     

高效液相色谱-质谱联用测定人血清地红霉胺浓度及其药动学研究

进行高效液相色谱-质谱联用测定人血清中地红霉胺浓度的方法学及其药动学研究.血清样品经0.1mol·L-1氢氧化钠溶液0.1ml碱化,乙酸乙酯提取,采用Hypersil ODS2色谱柱;乙腈:甲醇:水(62:30:8,V/V/V)流动相;流速为1.0ml·min-1.质谱条件为AP-ESI离子源,正离子模式,电喷雾电压35psig,干燥气(N2)流速10.0L·min-1,干燥气温度320℃,毛细管电压4000V,碎片电压170V,选择性监测质荷比(M/Z)为735.5的分子离子峰(M H).结果:在5.0～1200.0ng·ml-1范围内地红霉胺血清浓度呈线性关系,方法回收率大于90%.试验制剂地红霉素肠溶胶囊相对生物利用度F为97.03%±9.98%.高效液相色谱-质谱联用测定人血清中地红霉胺浓度,灵敏、准确,可用于地红霉素的药动学研究.     

UHPLC-MS/MS法测定盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔

目的 建立盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法。方法 Waters ACQUITY UPLC CSH^TM C₁₈色谱柱(3.0 mm×150 mm, 1.7μm),10 mmol·L^-1甲酸铵的水溶液(含0.1%甲酸)作为流动相A,乙腈溶液(含0.1%甲酸)作为流动相B,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^-1,柱温为50℃,进样器温度为5℃,进样体积为10μL,采用多反应监测(MRM)模式,对盐酸普萘洛尔缓释片中的N-亚硝基普萘洛尔进行定量检测。结果 N-亚硝基普萘洛尔在1～20 ng·mL^-1范围内具有良好的线性关系。低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)在98.4%～103.2%之间,RSD≤2.7%。检测限和定量限分别为0.09 ng·mL^-1和0.3 ng·mL^-1。检出盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔含量为1.8μg·g^...