siRNA干扰LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭的影响及机制

目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制胃癌细胞中LOXL2的表达情况,并探讨LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭能力影响及机制.方法 QRTPCR及蛋白印迹(Western blot)技术检测人胃癌细胞株BGC823、正常胃上皮细胞株GES-1中LOXL2表达;合成针对LOXL2的siRNA,并转染胃癌细胞株BGC823;应用Transwell实验检测BGC823细胞侵袭能力;检测转染前后BGC823侵袭相关基因基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化.结果 LOXL2在BGC823细胞中的表达明显高于胃上皮细胞株(P<0?.01);与未转染和转染阴性对照质粒组相比转染组胃癌细胞BGC823中LOXL2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05),侵袭实验显示LOXL2-siRNA转染组胃癌细胞BGC823穿膜细胞数显著低于阴性对照质粒组和未转染组(P<0.05);转染后BGC823中MMP-2、MMP-9表达均较转染前降低(均P<0.05).结论 抑制胃癌细胞BGC823 LOXL2表达可降低细胞的侵袭能力.     

pten基因对人胃癌BGC823细胞PI3'K/AKT耐药通路的影响

目的:研究外源性pten基因转染对人胃癌BGC823细胞PI3'K/AKT耐药通路的影响。方法:以无内源性pten表达的人胃癌BGC823细胞株转染PEAK8空载质粒和PEAK8-pten质粒,给予足叶乙苷和阿霉素诱导,RT-PCR方法分析目的基因的表达,免疫沉淀后Western-blot检测AKT活性。结果:RT-PCR显示转染pEAK8-pten质粒组有pten强表达。pten基因的导入对化疗药诱导的AKT活性有抑制作用。结论:pten基因转染能抑制人胃癌BGC823细胞体外生长,促进凋亡,并通过抑制AKT活性加强化疗药物的疗效。     

RNAi对人胃癌BGC-823细胞中HPA基因表达的影响

目的探讨RNAi（RNA interference,RNAi）对人胃癌BGC-823细胞中肝素酶（heparanase,HPA）mRNA表达的影响。方法针对HPA不同基因位点设计合成寡核苷酸然后转录为小干扰RNA（siRNA）,分别用浓度为10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L的siRNA经LipofectamineTM2 000脂质体介导转染BGC-823细胞72h,同时设无关序列组及不转染组。采用完整细胞原位杂交技术观察各组BGC-823细胞中HPA mRNA的表达。结果 siRNA可有效抑制人胃癌BGC-823细胞中HPA mRNA的表达,以20μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义（P〉0.05）,不同浓度siRNA对HPA mRNA表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组（P〈0.05）。结论 RNAi技术可有效抑制人胃癌BGC-823细胞中HPA mRNA表达,为进一步运用RNAi技术治疗胃癌等恶性肿瘤奠定了一定的理论基础。     

PRNCR1基因沉默对于胃癌细胞BGC-823增殖活性的影响

目的：比较胃癌及其癌旁组织中PRNCR1含量;设计并合成针对PRNCR1基因的siRNA,转染人胃癌细胞BGC-823,观察PRNCR1含量改变对BGC-823细胞增殖活性的影响。方法 Real Time-PCR检测10对胃癌及其癌旁组织中PRNCR1含量;化学法合成针对PRNCR1的siRNAs,脂质体法转染至BGC-823细胞,转染分为细胞对照组、转染对照组、错义序列组和siRNA转染组。转染后48 h收集细胞,Real Time-PCR检测转染后细胞内PRNCR1含量变化;CCK-8检测肿瘤细胞对数生长期基因干预对于增殖活性的影响。结果 PRNCR1在胃癌组织中含量明显高于癌旁组织(P<0．05)。与细胞对照组比较,siRNA转染组细胞中PRNCR1含量明显降低,细胞增殖活性明显受到抑制(P<0．01);而转染对照组、错义序列组与细胞对照组比较,PRNCR1含量、细胞增殖活性均无明显差异(P>0．05)。结论 PRNCR1沉默可显著抑制BGC-823细胞增殖活性。     

大蒜素对胃癌BGC823细胞株PPARγ基因的影响

目的观察大蒜素对胃癌BGC823细胞生长以及对PPARγmRNA表达的影响,探讨大蒜素抑制BGC823细胞增殖的可能作用机制。方法不同浓度的大蒜素处理胃癌BGC823细胞,MTT法观察细胞增殖抑制作用;RT-PCR法检测胃癌BGC823细胞中PPARγmRNA表达的变化。结果大蒜素抑制BGC823细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;大蒜素作用72h后明显抑制胃癌BGC823细胞PPARγmRNA表达,呈浓度依赖性。结论大蒜素可能通过下调PPARγmRNA表达抑制胃癌BGC823细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。     

青果多糖提取物对人胃癌5-FU耐药细胞的逆转作用

目的：建立胃癌5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）耐药细胞BGC823/5-FU,探讨青果多糖提取物对BGC823/5-FU的逆转作用及机制。方法：采用逐步递增5-FU浓度、体外间歇诱导法诱导胃癌BGC823细胞,建立胃癌5-FU耐药细胞BGC823/5-FU;CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）检测青果多糖提取物对BGC823/5-FU细胞增殖的抑制作用;不同药物处理BGC823/5-FU细胞后,qRT-PCR分析对谷胱甘肽S-转移酶π（GST-π）和多药耐药基因MDR1 mRNA的表达,Western blot检测GST-π和P糖蛋白（P-gp,由MDR1基因所表达）的表达。结果：历时5个月建立BGC823/5-FU,对5-FU耐药性稳定,耐药指数为6.28,对顺铂、长春新碱和阿霉素也有不同程度的交叉耐药性;青果多糖提取物对BGC823/5-FU的5-FU耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.11倍;与BGC823/5-FU细胞对照组比较,5-FU处理组对GST-π和MDR1的mRNA表达及GST-π和P-gp的蛋白表达无明显影响,但青果多糖提取物组及青果多糖提取物+5-FU组GST-π和MDR1 mRNA及GST-π和P-gp的表达明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：青果多糖提取物对BGC823/5-FU有逆转作用,其机制可能与降低耐药基因GST-π和MDR1 mRNA及GST-π和P-gp的表达有关。     

胃癌中MTLC基因的表达

为研究MTLC(c-myc target from laryngeal cancer cells)基因在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞系BGC823生长的影响，用RT—PCR法检测了MTLC mRNA在胃癌组织及配对对照组织中的表达，并将表达载体pcDNA3．1-MTLC用脂质体转染BGC823细胞，G418筛选后手工计数，绘制生长曲线，用TUNEL法检测细胞凋亡。结果表明，15例胃癌组织中有9例(60％)MTLCmRNA表达下调。表达MTLC的BGC823细胞生长速度与对照细胞无明显差异，但细胞凋亡显著增加。结论：MTLC基因在大多数胃癌中表达下调并可促进胃癌细胞凋亡，提示MTLC可能在胃癌发生过程中起重要作用。     

苦参碱促进胃癌细胞凋亡及对STAT3、Cleaved-caspase3、MMP-2蛋白表达的影响研究

目的　探讨苦参碱对胃癌细胞凋亡的影响及对信号转导与转录活化因子3（STAT3）、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Cleaved-caspase 3）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达的影响。方法　以胃癌细胞SGC-7901、BGC823 为研究对象,用0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL、3.2 mg/mL浓度的苦参碱作用于胃癌细胞48 h,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖情况,并计算出半数抑制浓度为1 mg/mL。用1 mg/mL苦参碱作用胃癌细胞12 h、24 h、48 h、72 h、96 h,MTT 检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测苦参碱作用后胃癌细胞的凋亡情况。Western blot 检测苦参碱对胃癌细胞STAT3、Cleaved-caspase 3、MMP-2 蛋白表达的影响。结果　不同浓度（0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL、3.2 mg/mL）苦参碱作用于胃癌细胞后,细胞存活率均显著下降。1 mg/mL苦参碱作用于胃癌细胞12 h、24 h、48 h、72 h、96 h后,细胞增殖均受到抑制,与作用前比较,差异有统计学意义（P<0.05）。1 mg/mL苦参碱作用48 h 后,胃癌细胞SGC-7901、BGC823 凋亡率明显增加,与作用前比较,差异有统计学意义（P<0.01）。1 mg/mL苦参碱作用后,胃癌细胞SGC-7901、BGC823 中STAT3 蛋白表达无显著变化（P>0.05）,p-STAT3、MMP-2 蛋白表达明显下降,Cleaved-caspase 3 蛋白表达明显增加,与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论　苦参碱可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制胃癌细胞中p-STAT3、MMP-2 蛋白表达,促进Cleaved-caspase 3 蛋白表达。     

靶向Ang-1的siRNA片段逆转人胃腺癌细胞株BGC-823侵袭表型的研究

【摘要】目的 利用RNA干扰技术沉默人胃腺癌细胞株BGC-823中血管生成因子1（Ang-1）的表达,观察其对肿瘤侵袭性的抑制效果。方法 设计靶向Ang-1的siRNA片段并转染人胃腺癌细胞株BGC-823;RT-PCR方法检测Ang-1的mRNA水平;Western Blot和细胞免疫荧光方法检测整合素β1、CD44V6和Ang-1的蛋白表达量和细胞定位;细胞黏附试验检测转染前后细胞黏附能力;Matrigel胶及Transwell双室培养体系检测癌细胞侵袭能力。结果 RTPCR结果显示所设计的siRNA片段可有效沉默Ang-1的mRNA表达;整合素β1、CD44V6和Ang-1蛋白主要定位于肿瘤细胞胞浆和胞膜,其表达水平较转染siRNA片段前均有不同程度降低;细胞黏附能力和侵袭能力均明显降低（P<0.01）。结论 靶向Ang-1的siRNA技术可有效降低人胃腺癌细胞株BGC-823的侵袭能力,为胃癌基因治疗提供了新的思路。     

靶向Akt1小干扰RNA对人喉癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究Akt1基因沉默对人喉癌细胞系（Hep-2）增殖和凋亡的影响。方法：设计并合成针对Akt1的特异性小干扰RNA（siRNA）序列,利用转染试剂转入体外培养人Hep-2细胞,48h后收集细胞,RT-PCR和Westernblot验证siRNA的沉默效应,MTT法检测细胞增殖活性、台盼蓝细胞染色法计数细胞存活率、AnnexinV/PI检测细胞凋亡和坏死。结果：设计的Akt1siRNA能够有效抑制体外培养Hep-2细胞内Akt1表达实现其基因沉默效应;Akt1siRNA干扰组Akt1mRNA转录和蛋白表达水平均低于空白和阴性对照组;Akt1siRNA干扰组细胞增殖活性下降,细胞存活率下降,Akt1siRNA干扰后细胞凋亡率和坏死率增加。结论：RNA干扰Akt1基因沉默具有抑制喉癌细胞增殖,促进细胞凋亡的作用,Akt1可作为喉癌基因治疗的后选新靶点。     

表没食子儿茶素没食子酸醋对人胃癌细胞迁移、袭和FoxM1基因表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸醋（表没食子儿茶素没食子酸醋,EGCG）对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的EGCG处理人胃癌BGC823细胞后,以划痕试验方法检测癌细胞迁移能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹方法检测FoxM1基因蛋白水平变化。结果人胃癌BGC823细胞经EGCG处理后,迁移和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性（P〈0.01）。EGCG处理组FoxM1基因蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性。结论 EGCG可降低人胃癌细胞侵袭能力,下调FoxM1基因表达,是其重要机制之一。     

siRNA沉默胃癌SGC-7901细胞COX-2基因对VEGF-C表达与细胞迁移的影响

目的：探讨RNA干扰技术（RNAi）沉默环氧化酶-2（COX-2）基因对血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达及细胞迁移能力的影响。方法：利用siRNA干扰胃癌SGC-7901细胞COX-2基因,RT-PCR和免疫荧光检测干扰前后COX-2基因和VEGF-C基因在mRNA和蛋白水平表达差异;细胞划痕实验比较COX-2基因对细胞迁移能力变化的影响。结果：COX-2基因干扰后,胃癌SGC-7901细胞中COX-2基因和VEGF-C基因的mRNA和蛋白水平明显下调,组间差异具有统计学意义（P〈0.05）,且COX-2与VEGF-C的表达呈显著正相关性（P〈0.05）;同时胃癌细胞的迁移能力也明显降低。结论：siRNA能特异性地抑制胃癌SGC-7901细胞COX-2基因的表达,进而抑制VEGF-C的表达,降低胃癌细胞的迁移能力,减少胃癌细胞转移。     

强力霉素对胃癌细胞增殖及Notch1、 MMP-9表达的影响

【摘要】目的 研究强力霉素对胃癌细胞BGC-823细胞的增殖及 Notch1、MMP-9 蛋白表达的影响,为胃癌的治疗提供新的抗肿瘤药物。方法 分别以 0、5、10、20、40 μg/mL 终浓度的强力霉素作用于人胃癌细胞系 BGC-823,运用 MTT 法检测细胞增殖程度;流式细胞仪检测细胞周期分布的影响; Western Blot 检测 Notch1、MMP-9 蛋白水平的表达。结果 强力霉素能够抑制人胃癌细胞BGC-823细胞的增殖,且与药物的剂量及作用时间呈正相关（P＜0.01）;强力霉素能够改变胃癌细胞BGC-823周期的分布,随着浓度的增加,S 期所占比例降低（P＜0.01）;并且随着浓度的增加,Notch1 的表达增强,MMP-9 的表达降低（P＜0.01）。结论 强力霉素能够抑制胃癌细胞BGC-823的增殖,Notch1上调为可能的机制之一     

特异性抑制环氧合酶-2表达的siRNA筛选

目的筛选有效抑制环氧合酶-2(COX-2)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并观察其对细胞中COX-2表达的抑制作用。方法设计针对COX-2的3对(siRNA24,siRNA954,siRNA1553)及一条FAM荧光标记的阴性对照siRNA(称为HK)。在Lipofectamine2000介导下转染人胃癌细胞系SGC-7901。同时采用RT-PCR法和Western blot方法检测细胞中COX-2含量,以β-actin蛋白做内参照。结果当Lipofectamine2000浓度在50μmol.L 1时能实现最大转染效果。与其他各组相比,转染了siRNA954的人胃癌细胞中,编码COX-2 mRNA的含量明显减少(P<0.01)。结论成功设计了针对COX-2的siRNA,并从中筛选出siRNA954,能够有效抑制人胃癌细胞COX-2表达,为肿瘤治疗及其临床应用奠定了基础。     

Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用

目的:建立胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株,研究Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用。方法:使用顺铂逐步增加剂量法诱导胃癌BGC-823细胞,以建立其多药耐药细胞株BGC-823/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用;半定量RT-PCR检测Oct-4基因的表达;基因转染干扰Oct-4表达;Western blot实验检测Oct-4蛋白的表达改变。结果:经过30～34周的诱导我们建立了胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对BGC-823和BGC-823/DDP细胞的IC50值分别为(2.33±0.12)和(21.46±0.97)μmol/L(P<0.01),与BGC-823细胞比较,BGC-823/DDP细胞对顺铂耐药是其9.21倍;半定量RT-PCR检测显示胃癌耐药株BGC-823/DDP高表达Oct-4基因;Western blot结果显示化学合成的siRNA可以靶向下调Oct-4蛋白的表达;siRNA干扰BGC-823/DDP细胞Oct-4基因的表达后,BGC-823/DDP细胞对顺铂的的IC50值从(22.04±1.84)μmol/L减小到(6.15±0.53)μmol/L,二者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:研究结果表明,Oct-4基因的高表达在胃癌顺铂的耐药中起着重要的作用。     

微小RNA-588靶向调控脾酪氨酸激酶的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的作用

目的 探讨微小RNA-588(miR-588)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响以及潜在的作用机制.方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-588的表达水平;将胃癌细胞SGC-7901、BGC-823分为anti-miR-NC组...