蓝光对离体培养人视网膜色素上皮细胞结构、吞噬功能及bc1-2表达的影响

【目的】观察中强蓝光对离体培养的人视网膜色素上皮（RPE）细胞超微结构、吞噬功能和bc1-2表达的影响.【方法】第一代RPE细胞置于蓝光下照射40 min,透射电镜观察细胞内部超微结构;将提取的色素颗粒加入第7代细胞,采用灰度分析定量检测蓝光照射后细胞吞噬色素颗粒的量;第3代细胞用于免疫组化法检测蓝光对RPE细胞bc1-2表达的影响.【结果】蓝光照射第一代RPE后,细胞出现线粒体水肿、染色质边集、浓缩;蓝光照组和对照组离体培养的RPE细胞均具有吞噬色素颗粒的功能.加入色素颗粒24 h后,即有色素颗粒进入细胞胞浆,到d4几乎所有细胞内都可见色素颗粒,两组细胞吞噬色素颗粒的时间和量无显著差异.对照组RPE细胞浆中bc1-2蛋白表达呈深浅不一的棕黄色,光照组细胞浆染色较浅,差异有显著性（P〈0.05）.【结论】蓝光损伤离体培养人RPE细胞的微结构,出现凋亡改变;对RPE细胞的吞噬功能无显著影响：蓝光抑制离体培养人RPE细胞bc1-2的表达.     

HIF-1α、Caspase-3及Survivin在胸腺瘤中的表达及意义

目的研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、Caspase-3及Survivin在胸腺瘤的发生、发展中的作用。方法应用免疫组织化学SP法检测60例上皮性胸腺肿瘤和30例非肿瘤胸腺组织中HIF-1α、Caspase-3、Survivin蛋白的表达。结果HIF-1α蛋白在胸腺瘤组织中的阳性率为61．67％（37／60）,显著高于非肿瘤胸腺组织阳性率3．33％（1／30）（P〈0．01）;在侵袭性胸腺瘤中的阳性率为84．62％（33／39）,显著高于非侵袭性胸腺瘤阳性率19．05％（4／21）（P〈0．01）;在恶性胸腺瘤中的阳性率为73．91％（34／46）,显著高于良性（或低度恶性）胸腺瘤中的阳性率21．43％（3／14）（P〈0．01）。Caspase-3蛋白在胸腺瘤组织中的阳性率为28．33％（17／60）,显著低于非肿瘤胸腺组织阳性率96．67％（29／30）（P〈0．01）;在侵袭性胸腺瘤中的阳性率为5．13％（2／39）,显著低于非侵袭性胸腺瘤阳性率71．43％（15／21）（P〈0．01）;在恶性胸腺瘤中的阳性率为10．87％（5／46）,显著低于良性（或低度恶性）胸腺瘤中的阳性率85．71％（12／14）（P〈0．01）。Survivin蛋白在胸腺瘤组织中的阳性率为73．33％（44／60）,显著高于非肿瘤胸腺组织阳性率6．67％（2／30）（P〈0．01）;在侵袭性胸腺瘤中的阳性率为92．31％（36／39）,显著高于非侵袭性胸腺瘤阳性率38．10％（8／21）（P〈0．01）。在恶性胸腺瘤中的阳性率为84．78％（39／46）,显著高于良性（或低度恶性）胸腺瘤中的阳性率35．71％（5／14）（P〈0．01）。结论HIF-1α、Caspase-3及Survivin与胸腺瘤的发生有关;与胸腺瘤的恶性程度及侵袭性有关。检测HIF-1α、Caspase-3与Survivin可作为判断胸腺瘤生物学行为的客观指标。     

甲状腺癌组织中Caspase-9、Livin表达的临床意义

目的探讨甲状腺癌组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-9和凋亡抑制蛋白因子(Livin)表达的临床意义。方法检测65例甲状腺癌组织和40例正常甲状腺组织中Caspase-9、Livin表达情况,分别比较Caspase-9、Livin在两种不同组织中表达的阳性率,分析Livin、Caspase-9在甲状腺癌组织中表达情况与临床病理因素的关系,应用Spearman等级相关检验分析Livin、Caspase-9在甲状腺癌组织表达的相关因素。结果 Livin、Caspase-9阳性染色主要位于细胞质内,表现为小片状分布的棕黄色或黄褐色颗粒;甲状腺癌组织中Caspase-9阳性表达率低于正常甲状腺组织(χ2=38.149,P=0.000),Livin阳性表达率高于正常甲状腺组织(χ2=43.161,P=0.000);Livin、Caspase-9在甲状腺癌组织中的表达与患者的年龄、性别及肿瘤的大小、病理类型无关(P0.05),而与肿瘤的临床分期、淋巴转移和包膜浸润有关(P0.05);Livin、Caspase-9在甲状腺癌组织中的表达呈负相关(r=-0.346,P0.05)。结论甲状腺癌组织中Caspase-9表达下调,Livin表达升高,二者的异常表达参与甲状腺癌的发生和发展过程,Livin、Caspase-9联合检测可作为判断甲状腺癌患者预后的重要参考指标。     

MMP-9、HIF-1和SIRT1在急性肺损伤中的研究进展

基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)9是MMPs家族成员之一,参与炎症、血管形成和肿瘤侵袭转移等病理生理过程.低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor,HIF-1)是具有转录活性的核蛋白,由功能亚基HIF-1α和结构亚基HIF-1β组成的异源二聚体,它在缺血坏死后新生血管的形成和低氧诱导的细胞凋亡过程当中起着非常关键的作用.沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator2-related enzymes 1,Sirtuin 1,SIRT1)是一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucletide,NAD)依赖性的去乙酰化酶,属于Sirtuin蛋白家族成员之一,参与衰老、细胞死亡和肿瘤发生等病理生理过程.本文就MMP-9、HIF-1和SIRT1在急性肺损伤中所起作用的最新研究进展作一综述.     

丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及对MMP-9、TIMP-1及Caspase-3表达的影响

目的探讨丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响以及对基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平的影响。方法将54只KM小鼠随机均分为假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组(20 mg/kg)、丁苯酞中剂量组(40 mg/kg)、丁苯酞高剂量组(80 mg/kg)。模型组和丁苯酞组采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型假手术组同样手术操作但不进行线栓。观察各组小鼠神经功能损伤、脑梗死、脑水肿、氧化应激、炎性反应、脑组织凋亡情况以及MMP-9、TIMP-1表达水平。结果与假手术组比较,模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞中剂量组、丁苯酞高剂量组小鼠神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、细胞凋亡率、伊文思蓝(EB)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Caspase-3、Bax蛋白水平、MMP-9、TIMP-1相对表达量明显升高(P <0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活性、Bcl-2蛋白水平明显降低(P<0.05);与模型比较,丁苯酞低剂量组、丁苯酞中剂量组、丁苯酞高剂量组小鼠神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、细胞凋亡率、EB、MDA、NO、TNF-α、Caspase-3、Bax蛋白水平、MMP-9相对表达量明显降低(P<0.05),SOD活性、Bcl-2蛋白水平、TIMP-1相对表达量明显升高(P <0.05),呈剂量依赖性。结论丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注脑损伤有保护作用,可能与调节小鼠脑组织氧化应激、细胞凋亡以及血脑屏障有关。     

金纳多注射液对脑缺血/再灌注后caspase-3和caspase-9表达的影响

目的：观察金纳多注射液对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9蛋白及mRNA表达的影响。方法：40只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、金纳多小剂量治疗组及金纳多大剂量治疗组,每组10只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。应用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测神经元凋亡;应用免疫组化检测caspase-3和caspase-9的蛋白表达;应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果：与假手术组比较,缺血组、金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数以及caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著增高（P均〈0.01）;与缺血组比较,金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著减少（P均〈0.01）;与金纳多小剂量治疗组比较,金纳多大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均明显减少（P均〈0.05）。结论：金纳多注射液能显著减少脑缺血/再灌注后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达,疗效表现为剂量依赖性。     

细胞色素C、caspase-8及caspase-9在肝癌中的表达及意义

目的 观察细胞色素C（Cyt C）及凋亡相关因子caspase-8和caspase-9在原发性肝癌中的表达,探讨线粒体凋亡途径在肝癌发生发展中的关系及临床病理意义.方法 应用原位分子杂交方法对45例原发性肝癌及30例正常肝组织中Cyt C、caspase-8和caspase-9 mRNA进行了检测.结果 Cyt C、caspase-8在正常组与肝癌组的表达阳性率分别为63.33%（19/30）、88.36%（38/44）和60.00%（18/30）、84.10%（37/44）,均呈升高趋势,两组比较均P＜0.05,差异有统计学意义.caspase-9基因在正常组及肝癌组的表达阳性率分别为80.00%（24/30）和75.00%（33/44）,均呈高表达,两组比较P＞0.05,差异无统计学意义.肝癌组caspase-8及caspase-9阳性表达与性别、年龄、肿瘤大小等因素无关.肝癌组Cyt C阳性率与性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型及远处转移等因素无关;但随着分化程度的升高,阳性表达率也逐渐升高,高、中和低分化者阳性率分别为100%（7/7）、91.18%（31/34）和25%（1/4）,高、中分化者之间差异无统计学意义;但高、中分化与低分化者相比,均P＜0.01,差异有统计学意义.结论 肝癌组织中凋亡基因Cyt C、caspase-8、caspase-9的高表达表明,线粒体内源性凋亡途径在原发性肝癌细胞凋亡过程中发挥重要作用：并且肿瘤分化程度越好,CytC表达率也越高,提示Cyt C表达程度有可能成为判断肝癌预后的参考指标之一,并成为通过内源性凋亡途径靶向治疗的主要靶点.     

幽门螺杆菌感染及HIF-1α表达与胃癌的关系研究

目的探讨幽门螺杆菌感染及低氧诱导因子(HIF)-1α表达与胃癌的关系。方法采用免疫组化检测胃癌石蜡切片标本60例、慢性胃炎标本20例中HIF-1α在慢性胃炎、早期胃癌和中晚期胃癌组织中的表达;酶联免疫吸附法检测幽门螺杆菌感染阳性率,并分析检测幽门螺杆菌感染与HIF-1α表达之间的关系。结果慢性胃炎患者中,幽门螺杆菌感染阳性率为35.0%(7/20);胃癌患者幽门螺杆菌感染阳性率为78.3%(47/60),两者之间有显著性差异(P<0.05);慢性胃炎患者中,HIF-1α表达阳性率为40.0%(8/20);胃癌患者HIF-1α表达阳性率为80.0%(48/60),两者之间有显著性差异(P<0.05);而在早期胃癌患者HIF-1α表达阳性率为54.5%(6/11);中晚期胃癌患者HIF-1α表达阳性率为85.7%(42/49),两者之间有显著性差异(P<0.05);胃癌组织中,幽门螺杆菌阳性感染率与HIF-1α表达呈正相关(r=0.344,P=0.007)。结论幽门螺杆菌感染能诱导HIF-1α表达,与胃癌的发生发展有关。     

低分子肝素对COPD模型大鼠肺组织HIF-1α、HO-1及VEGF表达的影响

目的研究低分子肝素（LMWH）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠肺组织中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、血红素加氧酶-1（HO-1）表达的影响。方法将60只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、COPD模型组及LMWH干预组。采用烟熏联合气管内注入脂多糖的方法建立COPD动物模型;LMWH组在建立COPD模型同时皮下注射低分子肝素干预。观察3组大鼠肺组织病理变化,并应用免疫组化的方法检测LMWH干预前后肺组织中HIF-1α、VEGF、HO-1的表达情况。结果 COPD组及LMWH组大鼠肺组织中HIF-1α、VEGF及HO-1的表达均较正常对照组明显升高,差异有显著性（F=58.97～88.12,q=6.70～18.65,P〈0.01）;与COPD模型组相比,LMWH干预组大鼠肺组织的病理改变较轻,HIF-1α、VEGF及HO-1表达下降,差异有显著性（q=8.64～11.19,P〈0.01）。结论 HIF-1α、VEGF和HO-1可能均参与COPD发生发展,参与气道炎症及气道重塑;LMWH可以减轻气道炎症及气道重塑。     

西洛他唑对慢性脑缺血大鼠皮层HIF-1α、HO-1影响

目的观察西洛他唑对慢性脑缺血大鼠皮层中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和HO-1表达的影响并探讨其发病机制。方法采用大鼠双侧颈总动脉永久性阻断法（2-VO）建立动物模型,Wistar大鼠随机分为假手术组、2-VO组和西洛他唑组,选取9周（n=10）时间点,应用Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力,采用免疫组化法检测大鼠皮层HIF-1α和HO-I蛋白的表达。结果 2VO组和西洛他唑组大鼠逃避潜伏期和游泳路程均显著增加,但西洛他唑组大鼠的学习记忆成绩显著优于2VO组;2VO组和西洛他唑组大鼠皮层HIF-1α和HO-1的表达均较假手术组明显增高,但西洛他唑组两种蛋白的表达均较2VO组明显降低。结论西洛他唑可提高缺血脑组织细胞内氧浓度,改善学习记忆功能,对慢性脑缺血具有确切的保护作用。     

HIF-1α、VEGF及MMP-9在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义

[目的]探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达.[方法]采用免疫组化法检测91例NSCLC组织及相对应的癌旁正常组织中hIF-1α、VEGF及MMP-9的阳性表达,并分析其与NSCLC临床病理参数的关系.[结果]NSCLC中HIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率均显著高于癌旁正常组织(P<0.05);低分化NSCLC中hIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率高于中高分化(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期的NSCLC中hIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05),有淋巴结转移的NSCLC中hIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率高于无淋巴结转移的(P<0.05);而NSCLC中HIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率与年龄、性别、肿瘤直径及病理类型无关(P>0.05);NSCLC中hIF-1α、VEGF及MMP-9阳性表达呈两两正相关(P<0.05).[结论]HIF-1α、VEGF及MMP-9在NSCLC组织中高表达,且与病情的发生发展相关,三者联合检测可能为NSCLC的预后评估及靶向治疗提供依据.     

不同诱导条件对体外培养视网膜色素上皮细胞表达血小板源性生长因子A的影响

目的:血小板源性生长因子由多种细胞产生。为验证视网膜色素上皮细胞是血小板源性生长因子A的分泌细胞,在蛋白水平检测不同诱导条件对人视网膜色素上皮细胞表达血小板源性生长因子A的影响。方法:实验于2007-01/04在吉林大学第一临床医院传染科研究室完成,实验方法符合医学伦理学要求。①实验对象:人视网膜色素上皮细胞株(HRPED407)购自广州中山大学细胞库。②实验方法:分别应用体积分数为0.1的血清、50%巨噬细胞调理液、与单核细胞共培养的方法诱导视网膜色素上皮细胞,24h后撤掉各刺激因素继续培养。③实验评估:通过细胞免疫化学方法检测各种培养条件下血小板源性生长因子A在视网膜色素上皮细胞中的表达情况。结果:细胞免疫化学结果显示,有无诱导因素情况下,视网膜色素上皮细胞中血小板源性生长因子A的表达均呈阳性。结论:有无诱导因素情况下,视网膜色素上皮细胞均分泌血小板源性生长因子A,提示视网膜色素上皮细胞是血小板源性生长因子A的分泌细胞。     

高压氧干预对大鼠肾缺血再灌注损伤肾组织低氧诱导因子-1αmRNA表达的影响

目的研究肾缺血再灌注损伤(IRI)时肾组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达的变化,探讨高压氧(HBO)对肾IRI的作用及其机制。 方法42只Wistar大鼠分为对照组、肾IRI组和HBO治疗组,对照组6只,其余2组各18只,建立大鼠肾IRI模型。肾IRI组和HBO治疗组分别于再灌注后1,3,5 h（每个时间点6只）采血测定肾功能,荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测肾组织HIF-1α mRNA的表达,同时用电镜观察组织超微结构的变化。 结果①随着再灌注时间的延长,血清Cr的水平逐渐增高,显著高于对照组(P<0.05);HBO治疗后血清Cr水平显著降低(P<0.05)。②肾IRI组在再灌注1 h时肾组织HIF-1α mRNA表达量明显低于正常水平,3 h时明显高于对照组(P<0.05),5 h时基本恢复至正常水平(P&rt;0.05);与肾IRI组相比,HBO治疗组再灌注后1 h和3 h时HIF-1α mRNA表达量明显增加(P<0.05),5 h时显著减少(P<0.05)。③随着时间的延长,肾IRI组肾小管上皮细胞内质网扩张、线粒体肿胀等损伤逐渐加重;HBO治疗后肾损伤的程度明显减轻,线粒体基本恢复正常,再灌注1 h和3 h时肾损伤减轻的程度明显优于再灌注5 h时。 结论HIF-1αmRNA参与了肾IRI的病理生理过程。HBO通过提前启动和上调HIF-1α mRNA的表达,明显减轻了肾IRI,保护了肾功能。HBO早期干预更有利于肾IRI的治疗。     

高脂饮食对大鼠脑微血管内皮细胞HIF-1α及Claudin-5表达的影响

目的研究高脂饮食对大鼠脑微血管内皮细胞HIF-1α及Claudin-5表达的影响,初步探讨高脂毒性对大鼠脑微血管的损伤机制。方法 (1)40只SD大鼠随机分为高脂组与正常对照组,每组20只,分别予以高脂饲料和普通饲料喂养8周。(2)测定各组大鼠基础、第4周、第8周时体重及代谢指标变化。(3)8周时处死各组大鼠,免疫组化检测各组大鼠脑微血管内皮细胞上HIF-1α及Claudin-5蛋白表达情况,伊文氏蓝(EB)染色检测血-脑屏障(BBB)的通透性。结果 (1)高脂组大鼠体重由基础值(165.00±12.100)g增加至8周时的(401.30±66.827)g;对照组大鼠体重由基础值(163.00±10.100)g增加至8周时的(321.10±18.300)g,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)高脂组大鼠空腹血总胆固醇(TC)由基础值(1.576±0.138 9)mmol/L升高为8周时的(2.032±0.365 0)mmol/L,甘油三酯(TG)由基础值(0.601±0.117 2)mmol/L升高至8周时的(2.679±1.087 6)mmol/L,且显著高于相应时间点正常对照组(P<0.05)。(3)8周时高脂组大鼠脑皮质微血管内皮细胞上,HIF-1α表达强于正常对照组(P<0.05),Claudin-5表达呈弱阳性,正常对照组大鼠Claudin-5呈强阳性表达(P<0.05)。(4)8周时高脂组大鼠EB含量较正常对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高脂可通过上调HIF-1α蛋白的表达水平使紧密连接蛋白Claudin-5的表达下降,导致微血管病变及增加BBB的通透性。     

电针结合超短波疗法对大鼠全横断脊髓损伤后GAP-43和Caspase-3表达的影响

目的:观察电针结合超短波疗法对脊髓全横断损伤大鼠损伤部位神经生长相关蛋白(GAP-43)、神经细胞凋亡相关蛋白(Caspase-3)的影响。探讨电针结合超短波疗法对脊髓全横断损伤大鼠运动功能恢复的机制。方法:复制并评价SCI大鼠模型。将75只大鼠随机分为5组:假手术组、脊髓损伤组(SCI组)、SCI+电针治疗组(电针组)、SCI+超短波治疗组(超短波组)、SCI+电针治疗组+超短波治疗组(联合组),每组15只大鼠。检测各组1周、2周、3周、4周、5周5个时间点GAP-43、Caspase-3的表达,对各组大鼠进行BBB评分。结果:在不同时间点各治疗组的脊髓损伤大鼠BBB评分均有所提高(P0.05)。与SCI组相比,电针组、超短波组和联合组GAP-43的表达显著增加,Caspase-3的表达显著减少(P0.05)。联合组在术后第1周、2周、3周、4周、5周较其他组GAP-43的表达显著增加,Caspase-3的表达显著减少(P0.05)。结论:(1)电针疗法和超短波疗法都可以促进大鼠损伤区脊髓组织内GAP-43表达增多和抑制大鼠损伤区脊髓组织内Caspase-3表达增多。(2)联合治疗对大鼠运动功能的恢复更为有效。     

血清HO-1、HIF-1α及FGF23对腹膜透析患者血管钙化的影响CSCD

目的探讨血清血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor23,FGF23)对腹膜透析患者血管钙化的影响。方法选取2019年5月—2022年5月焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院收治的109例腹膜透析患者,采用腹部侧位X线平片检测腹膜透析患者血管钙化情况。根据是否发生腹主动脉钙化分为钙化组、无钙化组。比较2组血清HO-1、HIF-1α、FGF23水平、临床资料,采用Logistic回归分析腹膜透析患者腹主动脉钙化的影响因素,采用ROC曲线分析血清HO-1、HIF-1α、FGF23水平对腹主动脉钙化的预测价值。结果钙化组血清HO-1水平低于无钙化组(t=5.762,P<0.001),HIF-1α、FGF23水平高于无钙化组(t=8.176、9.382,均P<0.001、<0.001);Logistic回归分析显示年龄(OR=1.359,95%CI 1.048~1.763,P<0.001)、血磷(OR=1.994,95%CI 1.123~3.539,P<0.001)、HO-1(OR=0.857,95%CI 0.762~0.964,P<0.001)、HIF-1α(OR=2.211,95%CI 1.156~4.228,P<0.001)、FGF23(OR=3.916,95%CI 1.957~7.836,P<0.001)是腹膜透析患者发生腹主动脉钙化的影响因素;HO-1、HIF-1α、FGF23及三者联合预测腹主动脉钙化的AUC分别为0.789、0.868、0.902、0.972。结论血清HO-1、HIF-1α、FGF23水平是腹膜透析患者腹主动脉钙化的独立影响因素,三者均对腹主动脉钙化具有一定预测价值,联合预测价值更高。     

盐酸右美托咪定调控HIF-1α对高糖诱导心肌线粒体损伤与细胞凋亡的影响

目的探讨盐酸右美托咪对高糖诱导的心肌线粒体损伤与细胞凋亡的影响及作用机制。方法用葡萄糖浓度为33 mmol/L的培养基培养H9C2细胞作为高糖组,正常培养基培养的细胞作为正常对照组;用1μmol/L的盐酸右美托咪定预处理H9C2细胞1 h后用葡萄糖浓度为33 mmol/L的培养基培养作为盐酸右美托咪定+高糖组;将con小干扰RNA(si-con)、HIF-1α小干扰RNA(si-HIF-1α)质粒分别转染至H9C2细胞中用1μmol/L的盐酸右美托咪定预处理H9C2细胞1 h后用葡萄糖浓度为33 mmol/L的培养基培养作为盐酸右美托咪定+si-con+高糖组、盐酸右美托咪定+si-HIF-1α+高糖组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性;蛋白质印迹(Western Blot)法检测裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素c(Cyt-C)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;JC-1荧光标记法检测线粒体膜电位;2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测活性氧(ROS)荧光强度;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测细胞HIF-1αmRNA水平。结果与正常对照组相比,高糖组心肌细胞活力显著降低,LDH活性显著升高,Cleaved caspase-3、Bax表达水平显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,线粒体膜电位降低的细胞比率显著升高,Cyt-C蛋白表达水平显著升高,ROS荧光强度显著升高,HIF-1αmRNA和蛋白表达显著降低(P <0. 05)。与高糖组相比,盐酸右美托咪定+高糖组心肌细胞活力显著升高,LDH活性显著降低,Cleaved caspase-3、Bax表达水平显著降低,Bcl-2表达水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,线粒体膜电位降低的细胞比率显著降低,Cyt-C蛋白表达水平显著降低,ROS荧光强度显著降低,HIF-1αmRNA和蛋白表达显著升高(P <0. 05)。与盐酸右美托咪定+si-con+高糖组相比,盐酸右美托咪定+si-HIF-1α+高糖组可逆转上述盐酸右美托咪定对高糖诱导的心肌细胞线粒体损伤与细胞凋亡的抑制作用。结论盐酸右美托咪定可促进心肌细胞存活,抑制LDH的漏出和ROS的产生,抑制细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,减轻高糖对线粒体和细胞凋亡的影响,其机制可能与HIF-1α有关。     

HIF-1在早期糖尿病小鼠视网膜上的表达及作用

目的:探讨糖尿病NOD小鼠视网膜HIF-1α表达及其作用。方法:NOD小鼠随机分为正常对照组和糖尿病组,分别于糖尿病2、4、6、8和12周处死糖尿病组和正常对照组小鼠,摘除眼球后分离视网膜。Westernblot方法检测视网膜HIF-1α的表达,免疫组化方法检测视网膜上HIF-1α的表达。结果:(1)与正常对照组相比,糖尿病组小鼠血糖明显增高,体重明显下降(P<0.01)。(2)Westernblot显示糖尿病6周时视网膜HIF-1α低水平表达,12周时HIF-1α表达增高。(3)免疫组化显示糖尿病组12周时视网膜内层HIF-1α表达增加,而未见视网膜外层HIF-1α表达。结论:(1)糖尿病早期视网膜HIF-1α表达增高,说明在糖尿病早期视网膜发生缺血缺氧。(2)HIF-1α可能参与了糖尿病早期视网膜缺血缺氧的继发损害过程。     

GLUT1和HIF-1α蛋白表达与食管癌癌细胞增殖性的相关性研究

目的探讨葡萄糖转运蛋白（GLUT1）和缺氧诱导因子-1α（HIF—1α）表达与食管癌发生、发展及其生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学sP法检测60例食管癌及其癌旁不典型增生组织、上切缘正常食管粘膜中GLUT,和HIF—1α的表达。结果GLUT1在食管癌癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管粘膜组织中的阳性表达率分别为91．67％、58．82％和20．00％,三组间两蕊比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;三组的强阳性表达率分别为78．18％、40．00％和8．33％,三组间两两比较,差异亦均有统计学意义（P〈0．05）。HIF—1α在食管癌癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管粘膜组织中的阳性表达率分别为80．00％、38．24％和6．67％,三组间两两比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;三组的强阳性表达率分别为81．25％、38．46％和0．00％,王组间两两比较,差异亦均有统计学意义（P〈0．05）。结论GLUT。和HIF-1α蛋门的过度表达可能共同参与了食管癌的发生、发展过程。     

皮肤鳞癌组织HIF-1α和MMP-2表达及意义

目的研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、基质金属蛋白酶-2（MMP2）在皮肤鳞癌组织表达及相关性。方法应用免疫组化法检测42例皮肤鳞癌、13例BOWEN病、11例正常皮肤组织中HIF-1α、MMP-2的表达。结果HIF-1α和MMP-2在正常皮肤、BOWEN病及皮肤鳞癌组织中的表达率分别为0、61．54％、73．81％及0、38．46％、50．00％,差异有统计学意义（χ^2=23．675、12．955,P〈0．05）。HIF-1α、MMP-2在皮肤鳞癌和BOWEN病组织中的表达均高于正常皮肤组织,差异有统计学意义（χ^2=16．638、7．139,P〈0．05;P=0．02、0．04）。在皮肤鳞癌组织中HIF-1α与MMP-2的表达呈正相关（χ^2=0．379,P〈0．05）。结论HIF-1α、MMP-2在皮肤鳞癌组织高度表达,且两者的表达密切相关。