富血小板纤维蛋白对牙髓干细胞体外增殖与分化特性的影响

目的:探讨不同浓度富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)对犬牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)体外增殖及成牙本质/成骨分化能力的影响.方法:酶消法分离培养犬DPSCs,经流式细胞术和多向分化鉴定后分别在含自体PRF体积比为1/8、2/8、3/8的3种浓度的培养基中进行培养;采用MTT法检测1、2、3、4、5、6、7d各时间点的细胞增殖活性;实时定量PCR检测培养7、14、21 d时ALP、DSPP、DMPl mRNA的表达水平.结果:成功分离并获得克隆化培养的犬DPSCs,DPSCs具有成骨和成脂分化能力;3种浓度PRF均能促进DPSCs的增殖,1周内促增殖作用有时间依赖性而无PRF浓度依赖性;不同浓度PRF可通过上调成牙本质/成骨早期标志基因ALP、DSPP mRNA及晚期标志基因DMP1mRNA的表达来促进犬DPSCs成牙本质/成骨向分化,该效应既具时间依赖性又具有PRF浓度依赖性.结论:自体PRF可以不同方式同时促进犬DPSCs的增殖及分化.     

富血小板纤维蛋白对牙髓细胞增殖与分化的影响

目的:评估牙髓细胞在富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)存在下的体外增殖及成骨分化的能力,为PRF作为支架材料、牙髓细胞作为种子细胞构建组织工程骨,进行前期研究。方法:3月龄比格犬拔除乳磨牙获得乳牙牙髓细胞;恒牙牙髓细胞从16月龄成年比格犬磨牙获得。静脉取血离心10 min获得PRF。实验分4组:对照组(普通培养基不加入PRF);实验组A(普通培养基加入PRF);实验组B(成骨诱导培养基不加入PRF);实验组C(成骨诱导培养基加入PRF)。分别于1、4、7和11d测定细胞数量、MTT值、半定量碱性磷酸酶值、成骨相关基因Q-PCR值,并于21d测定钙结节吸光度值。结果:PRF是一种可以促进牙髓细胞增殖的,无毒性作用的纤维网状支架结构;细胞水平上PRF促进了两种细胞的成骨分化:钙结节以及碱性磷酸酶半定量数值都明显上调(P<0.05);基因水平上,4个时间点成骨相关基因的表达量都显著增加(P<0.05),且乳牙牙髓细胞的表现均优于恒牙牙髓细胞。结论:可使用PRF和牙髓细胞复合构建组织工程骨。     

富血小板纤维蛋白对人牙槽骨成骨细胞增殖和分化的影响

目的:研究富血小板纤维蛋白(plate-rich fibrin,PRF)体外对人牙槽骨成骨细胞(human alveolar osteoblasts,HAOB)增殖分化的影响,探讨HAOB与PRF构建临床组织工程骨的可能性。方法 :收集临床拔牙过程中的牙槽骨,采用改良酶消化法体外分离培养HAOB,根据成骨细胞形态学特征及成骨特性对所培养出的细胞进行鉴定,后加入志愿者的PRF分组培养;而后在不同的实验时间点进行细胞增殖CCK-8检测、碱性磷酸酶(ALP)定性检测、钙结节茜素红染色以及成骨相关基因RT-PCR检测。结果:HAOB具有典型的成骨细胞的形态;随时间的延长,细胞数目明显增加(P<0.05),实验组(PRF组)细胞数量明显高于对照组。实验组ALP染色较对照组颜色更深,ALP活性相对较高。经茜素红染色,实验组镜下观察形成的钙结节数量较对照组多。在第7和11天发现实验组成骨相关基因的表达量均高于对照组。结论:采用改良酶消化法分离培养的HAOB具有典型的成骨细胞生物学特性,且成分较为单一;PRF体外具有促进HAOB增殖分化的能力。     

富血小板纤维蛋白在牙体牙髓治疗中的应用进展

再生医学作为一门旨在修复、替换或再生人体各种组织和器官的全新学科,其在口腔领域的研究和应用日趋深入,为分子生物学领域增添了新动力。在口腔再生医学中,血小板浓缩制品的再生潜力已得到确认。富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)为第二代血小板浓缩制品,其纤维蛋白基质中富含血小板、白细胞、多种生长因子和细胞因子,可在血管生成、组织再生和骨组织愈合中发挥重要的作用。本文在回顾相关文献的基础上,就PRF在牙体牙髓临床治疗中的应用现状及研究进展进行综述。     

富血小板纤维蛋白的临床应用

富血小板纤维蛋白(PRF)是一种免疫和血小板聚集物,包含了所有能促进伤口愈合和增强免疫反应的成分。属于新一代的血小板聚集物,处理简单,不需要任何生化处理。在纤维蛋白结构中聚集了大量的血小板和白细胞,这种结构有利于细胞迁徙,促进细胞的增殖和分化。该文就PRF的发展过程、生物学特性以及临床应用做一综述。     

富血小板纤维蛋白的研究进展

富血小板纤维蛋白(Platelet-Rich Fibrin, PRF)是一种富含细胞因子和生长因子的自体来源的新型生物材料,被誉为新一代血小板浓缩物。本文就PRF的生物学特点及其医学研究作用作一综述。     

富血小板血浆对牙髓成纤维细胞附着、增殖的影响

目的 :探讨富血小板血浆 (PRP)对牙髓成纤维细胞附着、增殖的影响。方法 :利用原代细胞体外培养技术、PRP提取技术及四唑盐比色法 (MTT)检测 5 %PRP对牙髓成纤维细胞附着的影响和不同浓度PRP(5 %、10 %、2 0 %、30 %、4 0 %、5 0 % )对牙髓成纤维细胞增殖的影响。结果 :在附着实验中 ,5 %PRP组所测得的平均光密度值 (OD值 )明显高于空白对照组 (P <0 .0 1)。在增殖实验中 ,各不同浓度PRP组所测得的平均OD值均明显高于对照组 (P <0 .0 1)。结论 :PRP可促进牙髓成纤维细胞的附着及增殖     

富血小板纤维蛋白用于年轻恒牙牙髓血运重建术效果的系统评价与Meta分析

目的 系统评价富血小板纤维蛋白（platelet rich fibrin, PRF）、富血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）用于年轻恒牙牙髓血运重建术的效果。方法 检索PubMed、Ovid、Web of sciences、Sinomed、中国知网、万方等数据库,检索时限为建库至2022年5月,搜索PRF用于年轻恒牙牙髓血运重建术效果的随机对照试验,筛选文献,提取数据,用RevMan5.4软件和Stata16进行Meta分析。结果 纳入12个随机对照试验,共455例患者。Meta分析结果显示,PRF牙髓血运重建术、PRP牙髓血运重建术和常规牙髓血运重建术的临床成功率相似,均利于牙髓活力的恢复、根尖孔闭合及根尖直径的缩小,差异无统计学意义。与常规牙髓血运重建术相比,PRF牙髓血运重建术更有利于增加根管壁厚度[P=0.002,MD=0.28,95%CI(0.10,0.46)]和牙根长度[P<0.00001, MD=1.55, 95%CI(0.96,2.13)],诱导牙骨质样组织沉积（P<0.05）,而与PRP无显著差异。结论 当前证据显示,PRF用于牙...     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞增殖和迁移的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对体外培养人牙髓细胞增殖、迁移活性的影响。方法以常规组织块培养法体外获得人牙髓细胞,实验组分别加入终浓度为1.0、5.0、10.0和50.0ng/ml的bFGF,对照组仅加入等量的空白培养基,采用CCK-8法分别测定450nm下各组光吸收度A值,研究bFGF对牙髓细胞增殖活性的影响;应用Transwell小室培养法,研究bFGF对牙髓细胞迁移活性的影响。结果与对照组相比,bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下可促进牙髓细胞的增殖（P〈0.05）,bFGF最低显效浓度为1.0ng/ml,最佳显效浓度为10.0ng/ml。bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下诱导细胞迁移（P〈0.05）。结论 bFGF可诱导体外培养人牙髓细胞的增殖和迁移,在牙髓牙本质复合体修复中可能发挥重要作用。     

人脐带间充质干细胞与牙髓细胞体外共培养对细胞生物学的影响

目的: 研究人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs）与经骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）诱导后的人牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）共培养对细胞生物学特性的影响。方法: 分别取原代培养的hUCMSCs和hDPCs,分别通过流式细胞术、成骨诱导、成脂诱导以及免疫组织化学染色鉴定细胞;使用BMP2诱导hDPCs,14 d后检查其DSPP、ALP、DMP1的mRNA表达情况;按照1∶1、1∶5、5∶1的比例直接共培养hUCMSCs与经BMP2诱导后的hDPCs,实时定量PCR检测其DSPP、ALP、DMP1、OCN、VEGF、HGF、Nanog的mRNA表达情况。根据实时定量PCR结果选取1∶1组与单独培养hUCMSCs组、hDPCs组比较,分别培养21 d后进行茜素红染色,在酶标仪上于562 nm处检测沉淀物形成情况。采用SPSS21.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 直接共培养14 d后,1∶1细胞组的DSPP、ALP、DMP1、OCN、VEGF、HGF的mRNA表达量比单独培养的hUCMSCs组显著升高（P<0.05）,而Nanog mRNA表达量比单独培养的hUCMSCs组降低（P<0.05）。茜素红染色结果显示,1∶1组的OD值显著高于hUCMSCs组（P<0.05）。结论: 将hUCMSCs与经BMP2诱导后的hDPCs按照1∶1比例共培养,可以诱导细胞向成牙本质细胞方向分化,并促进血管生成因子的表达。     

传代的人牙髓成纤维细胞在体外培养下的增殖和表型变化

观察和比较了在ＤＭＥＭ加１０％ＦＣＳ；ＤＭＥＭ加１０％ＦＣＳ和５０μｇ／ｍｌＶｉｔＣ和１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－磷酸甘油钠两种培养条件下，第５代人牙髓细胞的某些生物学特征，观察时间为３、９、１５、２１ｄ，通过ＣｏｎＡ和ＷＧＡ凝集素受体表达观察细胞的分化情况。结果表明第５代的人牙髓细胞可能是单一基因表型的细胞，其多层生长的能力减弱，牙髓细胞的凝集素受体（ＣｏｎＡ和ＷＧＡ）表达随培养时间延长未见明显改变。说明随着人牙髓细胞传代培养，人牙髓细胞的某些生物学特征发生了变化。     

纤维蛋白封闭剂对人牙髓细胞生长的影响

目的：观察fibrin sealant(FS)对人牙髓细胞贴壁率、生长曲线、增殖以及碱性磷酸酶活性的影响。方法：体外培养人牙髓细胞并鉴定，采用细胞记数法计算细胞贴壁率，绘制细胞生长曲线；采用MTT法测定细胞增殖；采用碱性磷酸酶试剂盒测定碱性磷酸酶活性。结果：FS组细胞的早期贴壁率明显高于对照组。FS组的细胞贴壁率在2h时是对照组的4．6倍，8h时FS组细胞的贴壁率超过100％(102．6％)，而对照组在24h超过100％(103％)。进入对数生长期后，FS组和对照组两条曲线曲度大致相似，实验组与对照组的MTT和ALP的A值无显著差异。结论：FS具有良好的生物相容性，有利于体外培养的牙髓细胞的早期贴壁和存活，但对细胞增殖速度及细胞分化无显著影响。     

凝溶胶蛋白gelsolin对人牙髓细胞增殖及迁移的影响

目的研究凝溶胶蛋白gelsolin（GSN）对人牙髓细胞（hDPC）增殖及迁移的影响。 方法激光共聚焦检测gelsolin在hDPC中的表达。以小干扰RNA（siRNA）沉默hDPC中的gelsolin,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期;Transwell实验观察细胞的迁移情况。采用单因素方差分析数据。 结果激光共聚焦显示gelsolin普遍表达于hDPC胞浆。沉默gelsolin,hDPC的增殖率在24、48、72 h时分别下降47.8%（F= 6.182,P= 0.035）、48.9%（F= 5.520,P= 0.044）、64.1%（F= 15.440,P= 0.004）;流式结果显示干扰gelsolin,hDPC的凋亡率增加约4.5%（F= 21.162,P= 0.002）,而细胞周期未发生明显阻滞,S期细胞比例升高约5%（F= 4.526,P>0.05）,G1期细胞比例下降约8%（F= 4.743,P>0.05）;Transwell结果显示,24 h内hDPC的迁移能力降低约60%（F= 12.781,P<0.001）。 结论gelsolin对hDPC的增殖及迁移具有调控作用。     

体外持续培养对人牙髓细胞分化能力的影响

目的：探讨人牙髓细胞在体外持续培养时，其分化能力的变化趋势。方法：体外持续培养人牙髓细胞，检测不同代次细胞的碱性磷酸酶活性、钙化能力及Ⅰ型胶原表达，并对比分析。结果：随着体外培养细胞代次的增多，在同等刺激分化条件下，人牙髓细胞的碱性磷酸酶活性整体呈下降趋势，钙化结节的数目和面积逐渐减少，Ⅰ型胶原表达合成逐渐减少。结论：人牙髓细胞在体外持续培养时，分化能力逐渐下降，可能与其含有的未分化细胞（人牙髓干细胞）数目逐渐减少有直接关系。     

人牙髓干细胞在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的实验研究

目的：探讨矿化液诱导条件下人牙髓干细胞( human dental pulp stem cells,HDPSCs)在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的潜力。方法将HDPSCs接种于钛金属板表面,于第3、7d时观察其增殖状态。将HDPSCs接种于钛金属板表面进行矿化液诱导,于诱导的第0、3、5、7、14、21、28d时,采用RT-PCR检测其牙本质涎磷蛋白( DSPP)、碱性磷酸酶( ALP)、骨涎蛋白( BSP)和骨钙素( OCN)的基因表达。 Western印迹分析、免疫荧光检测BSP及OCN蛋白表达。对照组为矿化液诱导培养皿中的HDPSCs,检测指标、方法基本相同,免疫细胞化学染色检测OCN蛋白表达。结果钛金属板上 HDPSCs增殖迅速,表现出良好的生物相容性。两组细胞均自诱导第3天ALPmRNA呈高表达、DSPP始终不表达。培养皿组BSP、OCNmRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高;钛金属组BSP、OCNmRNA表达于第14天出现第一峰值,随后有所下降,28天再次升高。两组BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致,第5天 OCN染色阳性。结论钛金属表面 HDPSCs 经矿化液诱导向成骨细胞样细胞分化。     

The effect of electromagnetic fields on survival and proliferation rate of dental pulp stem cells

Abstract

Aims: Extremely low-frequency electromagnetic fields (ELF-EMF) can affect biological systems and alter some cell functions like proliferation rate. Dental pulp tissue is known as a source of multipotent stromal stem cells (MSCs), which can be obtained by a less invasive and more available process compared to bone marrow-derived stem cells (BMSCs). This study aimed to consider the effect of ELF-EMF on proliferation rates of human dental pulp stem cells (hDPSCs).

Material and methods: ELF-EMF was generated by a system including autotransformer, multi-meter, solenoid coils, teslameter and its probe. The effect of ELF-EMF with the intensity of 0.5 and 1?mT and 50?Hz on the proliferation rate of hDPSCs was assessed in 20 and 40?min per day for 7?days. MTT assay and DAPI test were used to determine the growth and proliferation of DPSCs.

Results: Based on MTT, ELF-EMF has maximum effect with the intensity of 1?mT for 20?min/day on the proliferation of hDPSCs. The survival and proliferation rate in all exposure groups were significantly higher than the control group. Based on the data obtained from MTT and DAPI assay, the number of viable cells in the group exposed to 1?mT for 20?min/day was higher than other groups (p?<?.05).

Conclusions: Regarding to the results of this study, 0.5 and 1?mT ELF-EMF can enhance survival and proliferation rates of hDPSCs.