酪氨酸激酶抑制剂STI571靶向治疗Bcr-Abl+白血病研究

STI571是通过计算机辅助设计、人工合成的Abl激酶ATP结合位点竞争性抑制剂。体外试验证实:STI571高度选择性抑制Bcr-Abl、c-kit和PDGF受体酪氨酸激酶或底物蛋白的酪氨酸磷酸化而使其灭活;选择性抑制Bcr-Abl阳性细胞生长;诱导Bcr-Abl阳性细胞凋亡和分化;与IFN、DNR、Ara-C和HU有协同作用。对BCR-ABL基因转化小鼠有特异性的治疗作用。Ⅰ、Ⅱ期临床试验STI571治疗慢性期慢性粒细胞白血病(CML)效果显著,对CML急变和Ph~+急性白血病也有一定的疗效。白血病细胞对STI571体外耐药与靶基因扩增导致Bcr-Abl蛋白的过度表达有关,与P糖蛋白(Pgp)的过度表达也有关。体内耐药的机制与酸性糖蛋白(AGP)增加有关。     

BCR／ABL阳性细胞对STI571耐药机制的研究进展

在慢性粒细胞白血病、成人急性淋巴细胞白血病以及儿童急性淋巴细胞白血病中常常发现染色体t(9;22)(q34;q11)易位。这种易位在22号染色体产生BCR／ABL融合基因，导致细胞恶性的扩增。STI571（以前称谓CGP57148B）抑制Bcr/Abl酪氨酸激酶活性。然而人们在对BCR／ABL阳性细胞研究中发现了对STI571耐药的细胞株，目前的研究认为BCR／ABL基因的扩增与过度表达是对STI571耐药的主要机制。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571靶向治疗Bcr—Abl^＋白血病研究

STI571是通过计算机辅助设计、人工合成的Abl激酶ATP结合位点竞争性抑制剂。体外试验证实：STI571高度选择性抑制Bcr-Abl、c-kit和PDGF受体酪氨酸激酶或底物蛋白的酪氨酸磷酸化而使其灭活；选择性抑制Bcr-Abl阳性细胞生长；诱导Bcr-Abl阳性细胞凋亡和分化；与IFN、DNR、Ara-C和HU有协同作用。对BCR－ABL基因转化小鼠有特异性的治疗作用。Ⅰ、Ⅱ期临床试验STI571治疗慢性期慢性粒细胞白血病（CML）效果显著，对CML急变和Ph^ 急性白血病也有一定的疗效。白血病细胞对STI571体外耐药与靶基因扩增导致Bcr-Abl蛋白的过度表达有关，与P糖蛋白（Pgp）的过度表达也有关。体内耐药的机制与酸性糖蛋白（AGP）增加有关。     

BCR/ABL阳性细胞对STI571耐药机制的研究进展

在慢性粒细胞白血病、成人急性淋巴细胞白血病以及儿童急性淋巴细胞白血病中常常发现染色体t(9;22)(q34;q11)易位。这种易位在22号染色体产生BCR/ABL融合基因,导致细胞恶性的扩增。ST1571(以前称谓CGP57148B)抑制Bcr/Abl酪氨酸激酶活性。然而人们在对BCR/ABL阳性细胞研究中发现了对STI571耐药的细胞株,目前的研究认为BCR/ABL基因的扩增与过度表达是对STI571耐药的主要机制。     

BCR／ABL融合基因致白血病作用研究进展

BCR/ABL联合基因是一个重要的凋亡抑制基因，在大多数慢性粒细胞白血病(CML)，Ph^ 急性淋巴细胞白血病(ALL)及其他一些白血病均有该基因的表达。预示BCR/ABL融合基因可能是上述白血病发生的重要原因。     

STI571在白血病治疗中耐药机制的研究

应用STI571治疗白血病,开创了肿瘤靶向治疗的新时代,临床研究表明STI571治疗慢性期慢性粒细胞白血病患者有极好疗效,然而在治疗慢粒急变及Ph+的急性淋巴细胞白血病患者时效果却并不理想.目前研究认为STI571耐药机制包括以下几个方面通过点突变、BCR-ABL基因扩增等使酪氨酸激酶重新活化;Src家族中LYN激酶高表达、Bruton酪氨酸激酶及ATP合成酶高表达等旁路激活ABL激酶下游信号传导途径;多药耐药基因扩增,使靶部位药物浓度降低及血浆中出现能与STI571结合的α1酸糖蛋白.     

STI 571治疗慢性粒细胞白血病患者的护理

慢性粒细胞性白血病 (chronicgranulocyticleukemia,CML)是 4种常见白血病的类型之一 ,95 %CML患者体内的第 9号和第 2 2号染色体发生易位 ,形成所谓Ph染色体。两个癌基因融合后形成bcr abl基因 ,该基因具有酪氨酸激酶的活性 ,从而刺激粒细胞异常增生 ,导致慢性粒细胞白血病的发生。STI 5 71(商品名 :格列卫 )是一种分子水平的基因靶向性抗肿瘤药物 ,是一种信号传导抑制剂 ,能特异性作用于由Ph染色体产生的异常蛋白P2 10 ,诱导白血病细胞凋亡 ,对正常造血细胞几乎无抑制作用。我科从 2 0 0 1年 10月至 2 0 0 2年 2月采用STI 5 71治疗…     

STI571治疗Ph染色体阳性急性髓性白血病

本研究目的探讨用酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗Ph染色体阳性急性髓性白血病。2例Ph染色体阳性急性髓性白血病患者中1例经常规化疗未获缓解后口服STI571治疗，另1例仅接受常规化疗。2例在缓解后均进行了异基因造血干细胞移植。结果表明，1例病人经常规化疗达到血液学缓解，另1例经常规联合化疗未缓解但经STI571治疗后达到血液学和遗传学缓解。2例病人分别于异基因造血干细胞移植后18天和11天骨髓恢复造血，均未出现严重的移植物抗宿主病。1例病人在移植后8个月死于间质性肺炎，另1例现在仍无病存活5月。结论：Ph染色体阳性急性髓性白血病预后较差，STI571可用于治疗此类疾病，根治仍须进行造血干细胞移植。     

慢性粒细胞白血病患者外周血BCR/ABL融合基因表达水平及意义

目的观察慢性粒细胞白血病(CML)初发和急变患者外周血BCR/ABL基因的表达变化。方法建立实时定量RT-PCR同时检测b2a2和b3a2两种融合基因亚型,检测25例CML初发和25例CML急变患者的外周血样本中BCR/ABL融合基因的表达。结果BCR/ABL及GAPDH标准曲线的相关系数均为1.0,灵敏度为2pgRNA,根据熔解温度的不同可以区分b2a2和b3a2两种融合基因亚型。CML急变患者外周血BCR/ABL融合基因的表达水平是初发患者的4.72倍。结论本法简便、敏感、特异,可以相对定量BCR/ABL融合基因表达水平,有助于反映白血病细胞负荷,评价疗效及判断预后。     

伊马替尼联合化疗治疗初治BCR/ABL阳性急性淋巴细胞白血病的临床分析

目的:探讨伊马替尼联合化疗治疗初治BCR/ABL+-急性淋巴细胞性白血病(ALL)的疗效。方法:我院2004年1月至2009年1月荧光原位杂交检查确诊为初治BCR/ABL+-ALL48例,随机分为两组,治疗组24例,用VDLP加伊马替尼方案诱导化疗,对照组24例单用VDLP方案诱导化疗,治疗组完全缓解后伊马替尼与化疗交替进行巩固及强化治疗,对照组单用化疗进行巩固及强化治疗。结果:治疗组经第1疗程诱导治疗后获完全缓解率(CR)共20例(83.3%),对照组经第1疗程诱导治疗后获CR共13例(54.2%),(P<0.05)。治疗组20例完全缓解的患者,中位缓解期13(7～19)个月,对照组13例CR,中位缓解期6(3～9)个月(P<0.05)。含伊马替尼治疗组与不含伊马替尼治疗组2a总生存率(OS)分别是45.8%和12.5%(P<0.05)。结论:伊马替尼联合化疗诱导治疗BCR/ABL+-ALL,CR较常规化疗明显提高。化疗与伊马替尼交替进行巩固及强化治疗,中位缓解时间及生存时间也较单用化疗明显延长。     

酪氨酸激酶抑制剂通过下调Mcl-1和Bcl-xl诱导K562细胞凋亡

本研究观察酪氨酸激酶抑制剂STl571对CML细胞增殖和凋亡以及抗凋亡蛋白Mcl—l表达的影响，探讨Mcl一1在BCR／ABL抗凋亡信号传导中的作用。应用STl571处理慢性髓系白血病K562细胞株，采用台盼蓝拒染法和MTT法检测STl571对K562细胞增殖的影响，用AnnexinV和碘化丙锭双染法及流式细胞术检测K562细胞凋亡情况，蛋白印迹法检测STl571对细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达的影响。结果发现：STl57l可有效地抑制K562细胞增殖并诱导K562细胞凋亡，这种作用呈剂量和时间依赖性，同时降低细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和下调抗凋亡蛋白Mcl—l和Bcl-xl的表达。STl571抑制K562细胞增殖和诱导凋亡与抗凋亡蛋白Mcl—l和Bcl—xl的表达下调一致。结论：STl571通过阻断CML细胞内信号传导途径，下调Mcl—l和Bcl—xl的表达，抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，表明Mcl—l和Bcl—xl一起在CML抗凋亡过程中发挥重要作用.     

酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗慢性粒细胞白血病的研究

目的:研究特异性酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)细胞增殖、凋亡、周期调控及bcr-abl融合基因表达的影响,为慢粒的基因治疗提供理论依据。方法:细胞培养慢粒急变细胞系K562细胞株,通过MTT检测STI571作用下细胞存活率,流式细胞仪检测周期变化,电镜及DNA电泳检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测STI571对bcr-abl融合基因表达的影响。结果:STI571作用后K562细胞中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少。流式细胞图中的二倍体峰前可见一明显亚二倍体峰———凋亡峰(apoptosispeak),提示STI571能明显诱导K562细胞凋亡。电镜发现STI571作用于K562细胞12～72h后,诱导出各期凋亡细胞及凋亡小体。半定量PCR灰度扫描结果显示bcr-abl基因的mRNA表达下降,电泳检测扩增产物,荧光亮度减弱。结论:STI571能明显抑制白血病细胞增殖,细胞阻滞于G0/G1期,且具有明显的诱导凋亡作用,反馈抑制bcr-abl融合基因的表达。     

BCR／ABLDCDF—FISH信号特征与染色体核型的关系及其在慢性粒细胞白血病中的意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）BCR／ABL DCCF—FISH的信号特点及其与染色体核型的关系。结果使用BCR／ABL的DCDF探针对65例慢性粒细胞白血病骨髓标本进行荧光原位杂交及染色体核型检查。结果65例CML核型43例Ph阳性,1例阴性,其余21例未行核性检查或无可分析分裂相;FISH结果65例均为BCR／ABL阳性,其中9例伴ASS基因缺失,5例复杂易位,1例＋Ph伴ASS基因缺失。结论传统核型与DCDF-FISH,应互相结合,方可对遗传学特征作出更准确分析。     

STI571联合三氧化二砷对K562细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Bcl-xL表达的影响

本研究旨在探讨STI571单独应用及与三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合应用对K562细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子caspase-3、bcl-xL mRNA表达的影响。用MTT法检测各组K562细胞在药物作用各时间点(24、48、72小时)的OD值,以评估药物对细胞增殖的作用;AnnexinV/PI荧光标记法检测K562细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测K562细胞caspase-3、bcl-xL mRNA的表达。结果表明:STI571单独应用及与As2O3联用均可抑制K562细胞的增殖。各实验组的OD值随着实验时间的延长而降低,各时间点之间的差异具有显著性(p0.05),且各实验组均在72小时时OD值降低最明显。在同一时间点,与对照组相比较,各实验组的OD值均逐渐降低(p0.05),其中实验5组下降最明显。流式细胞仪检测发现,对照组的凋亡率随着时间的延长无明显变化;各实验组的凋亡率随着时间的延长逐渐上升,各时间点之间的差异具有显著性(p0.05),以72小时时上升最为明显;在同一时间点,与对照组相比较,各实验组的凋亡率均逐渐上升(p0.05),其中以实验5组的凋亡率上升最明显。实时荧光定量PCR检测发现,与对照组相比,各实验组bcl-xL mRNA的表达减弱,出现了2-ΔΔCT值的减小,且减小程度实验3组大于实验2组(p0.05);与对照组相比,各实验组caspase-3 mRNA的表达增强,出现了2-ΔΔCT值的增大,且增大的程度实验3组大于实验2组(p0.05)。结论:STI571单独应用时能够抑制K562细胞增殖,加速其凋亡。STI571联合As2O3对K562细胞抑制增殖及加速凋亡的作用加强。两药联合后Caspase-3 mRNA的表达较STI571单独应用时增强而bcl-xL mRNA的表达减弱。影响凋亡相关因子caspase-3、bcl-xL mRNA的表达,可能是As2O3与STI571联合抗白血病细胞产生协同作用的分子机制之一。     

STI571体外对急性非淋巴细胞白血病患者骨髓细胞c-kit表达的影响

为了探讨STI571体外对急性非淋巴细胞白血病患骨髓细胞c—kit表达的影响，采用逆转录—聚合酶使反应及流式细胞术分别测定不同浓度STI571处理前后骨髓细胞c—kit mRNA及CD117的表达。结果表明：c—kit mRNA及CD117的表达于STI571作用后呈浓度依赖性下降，培养后各药物浓度组与培养前及对照组之间都存在显性差异(P＜0．05)，且0．1μmol/L组的表达明显高于10μmol/L组，而空白对照组与培养前差异不显。结论：STI571在体外对急性非淋巴细胞白血病患骨髓细胞c—kit mRNA及CD117抗原的表达有明显的抑制作用，且具药物浓度依赖性。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571与P21WAF基因克隆治疗慢性粒细胞白血病的实验研究

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂ST1571和P21^WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K562细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用。RT—PCR扩增P21^WAF基因，胶纯化回收后连接到T载体测序，序列正确后构建P21—pcDNA3．1栽体，将P21—pcDNA3．1与空载体分别以脂质体转染入P21蛋白表达缺如的K562细胞，经筛选得到G418抗性的K562细胞株，Westernblot证实转染后有P21蛋白表达，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果表明：表达外源性P21蛋白的P21—pcDNA3．1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株，流式细胞仪显示G0／G1期细胞增多，MTT法显示P21—pcDNA3．1-K562细胞与ST1571联合应用后，与单用ST1571作用的K562细胞相比，凋亡细胞比例轻度减少，细胞存活率下降较慢。结论：表达外源P21蛋白能抑制K562细胞增殖，同时对ST1571的促凋亡作用有轻度抑制，并降低K562细胞对ST1571的敏感性。     

As2O3对慢性粒细胞白血病原代细胞BCR-ABL蛋白水平及信号转导的影响

目的：阐述As2O3对慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞BCR－ABL及信号转导的影响。方法：采用免疫沉淀、蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase,PTK)活性测定和Western印迹、实时定量PCR等方法。结果：1．0μmol/L和2．0μmol/L As2O3作用48h,CML患者骨髓单个核细胞BCR／ABL蛋白含量下调,0．5μmol/L时无明显改变。在0．5μmol/L As2O3作用下STAT1蛋白下调,1．5μmol/L和2．0μmol/L时下调更明显。P27蛋白无变化。As2O3作用60h,可使CML患者骨髓单个核细胞BCR－ABL蛋白PTK活性轻度下降。As2O3对bcr-abl融合基因的mRNA表达无明显影响。结论：As2O3下调BCR－ABL蛋白STAT1蛋白水平,减弱BCR－ABL信号的下传。As2O3下调PTK活性。     

应用筑巢式RT—PCR检测BCR—ABL融合基因的探讨

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测２０例ＣＭＬ血或／及骨髓中ＢＣＲ／ＡＢＬ基因的表达，证实较普通ＲＴ－ＰＣＲ其为一种快速、敏感而准确的检测方法。同时以ＡＢＬ基因为ＲＮＡ及ｃＤＮＡ质量对照，有效地排除了因标本质量欠佳而致的假阴性或因标本污染所致的假阳性。我们还发现在ＣＭＬ中Ｐ２１０ＢＣＲ／ＡＢＬ的表达接近为１００％，且与化疗无明显相关。     

慢性粒细胞性白血病患者骨髓源bcr/abl融合基因阳性Flk1+CD31-CD34-干细胞体外抗STI571机制的初步研究

为进一步了解STI571对慢性粒细胞性白血病（CML）患者体内bcr/abl融合基因阳性的原始及定向白血病干/祖细胞分化及增殖的影响,更深入阐明部分CML患者在经历一段血液学甚至是细胞遗传学水平上的完全缓解后复发及对STI571的耐药机制,利用从CML患者骨髓分离到的具有血管母细胞特性、bcr/abl融合基因阳性、免疫表型为Flk1＋CD31-CD34-细胞,体外检测了STI571对其在造血集落培养基中的分化及处于分化阶段时的增殖抑制作用.结果显示：浓度为5 μmol/L STI571,维持作用96小时（病人体内维持96小时的STI571浓度只可能达到1-2 μmol/L）,即可有效抑制定向造血祖细胞的增殖.没有充分的证据显示,相对原始的bcr/abl融合基因阳性、免疫表型为Flk1^＋CD31^-CD34^-细胞的分化及增殖受到明显的抑制作用.结论：CML患者体内的原始白血病干/祖细胞对STI571具有一定的抗性,临床上所观察到的CML患者在运用STI571一段时间后出现正常的造血恢复现象,可能仅仅是因为STI571杀死或抑制了定向恶性白血病祖细胞的增殖,但随着时间的推移,在经历了短暂的血液学甚至是细胞遗传学水平上的缓解后,对STI571耐药的原始白血病干/祖细胞终究会再次导致CML的复发.