Tumstatin肽对条件培养基下视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移的影响

目的 模拟糖尿病视网膜病变(DR)的体内环境,观察血管形成抑制因子Tumstatin肽(T8肽)对高糖视网膜Müller细胞条件培养基(HGMCM)诱导的视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移的影响.方法 采用细胞划痕实验,观察不同质量浓度的T8肽对HGMCM诱导的RF/6A细胞迁移的抑制作用.结果 加入不同质量浓度的T8肽后,RF/6A细咆24 h、48 h迁移的距离显著降低,迁移距离随着T8肽质量浓度的增大而逐渐降低(P＜0.01).结论 Tumstatin肽能够抑制HGMCM诱导的视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移,可能是Tumstatin肽抗血管生成的机制之一.     

重组canstatin蛋白抑制体外视网膜微血管内皮细胞的迁移和增殖

目的 观察重组血管能抑素(canstatin)蛋白对体外培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)迁移、增殖及磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phospho-extracelluar regulated protein kinases,pERK)、磷酸化Akt表达的影响,初步探讨重组canstatin蛋白抑制视网膜新生血管的作用机制.方法 体外培养RF/6A细胞系,在培养基中分别添加重组canstatin蛋白和等量的PBS,采用Transwell小室法检测各组发生迁移的内皮细胞并计数;铺Matri-gel胶,行体外成管实验,观察canstatin蛋白对内皮细胞成管的抑制作用;用MTT法检测重组canstatin蛋白对内皮细胞增殖的影响;Western blotting检测重组canstatin蛋白对血清刺激30 min后RF/6A细胞pERK、磷酸化Akt蛋白表达的影响.结果 加入重组canstatin蛋白后,显著抑制了细胞的迁移,重组canstatin蛋白组迁移的细胞数每视野(7.75±1.50)个显著低于PBS组(25.25±2.36)个(t=12.505,P=0.000);两组内皮细胞成管数分别为重组canstatin组每视野(18.67±7.02)个,也显著低于PBS组每视野(44.67±2.52)个(t=6.036,P=0.004).与PBS组相比,重组canstatin蛋白组的内皮细胞的增殖也受到抑制,后者48 h后平均吸光度A490为0.286 9±0.014 0,低于前者0.3349±0.021 7(t=3.723,P=0.01).同时,重组canstatin蛋白降低了RF/6A细胞中pERK蛋白的表达水平.结论 重组canstatin蛋白能通过下调pERK蛋白的表达抑制RF/6A细胞的迁移和增殖,具有潜在抑制视网膜新生血管形成的作用.     

Twist基因干扰抑制猴视网膜微血管内皮细胞的迁移

目的 观察Twist基因干扰对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)迁移及磷酸化Akt(pAkt)蛋白表达的影响.方法 体外培养的RF/6A细胞系,并构建Twist干扰质粒和对照质粒.分为Twist干扰质粒组、阴性对照组、磷酸盐缓冲液(PBS)组,各组应用脂质体基因转染方法,转入相应的质粒表达载体,采用Transwell小室法检测发生迁移的内皮细胞并计数;铺Matrigel胶,行内皮细胞体外成管实验,观察Twist基因干扰对内皮细胞成管的抑制作用;蛋白质免疫印迹检测Twist基因干扰对RF/6A细胞pAkt蛋白表达的影响.结果 Transwell小室计数结果表明,转染Twist干扰质粒后,迁移的细胞数显著低于阴性对照组和PBS组(F=23.786,P=0.000).体外成管实验结果表明,Twist干扰质粒组内皮细胞成管数显著低于阴性对照组和PBS组(F=7.159,P=0.014).Ttwist干扰质粒组的pAkt蛋白表达明显减少.结论 Twist基因干扰可显著抑制视网膜微血管内皮细胞的迁移,可能机制是通过抑制pAkt蛋白的表达发挥作用.     

Twist基因干扰抑制猴视网膜微血管内皮细胞的迁移

目的 观察Twist基因干扰对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)迁移及磷酸化Akt(pAkt)蛋白表达的影响.方法 体外培养的RF/6A细胞系,并构建Twist干扰质粒和对照质粒.分为Twist干扰质粒组、阴性对照组、磷酸盐缓冲液(PBS)组,各组应用脂质体基因转染方法,转入相应的质粒表达载体,采用Transwell小室法检测发生迁移的内皮细胞并计数;铺Matrigel胶,行内皮细胞体外成管实验,观察Twist基因干扰对内皮细胞成管的抑制作用;蛋白质免疫印迹检测Twist基因干扰对RF/6A细胞pAkt蛋白表达的影响.结果 Transwell小室计数结果表明,转染Twist干扰质粒后,迁移的细胞数显著低于阴性对照组和PBS组(F=23.786,P=0.000).体外成管实验结果表明,Twist干扰质粒组内皮细胞成管数显著低于阴性对照组和PBS组(F=7.159,P=0.014).Ttwist干扰质粒组的pAkt蛋白表达明显减少.结论 Twist基因干扰可显著抑制视网膜微血管内皮细胞的迁移,可能机制是通过抑制pAkt蛋白的表达发挥作用.     

Twist基因干扰抑制猴视网膜微血管内皮细胞的迁移

目的 观察Twist基因干扰对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)迁移及磷酸化Akt(pAkt)蛋白表达的影响.方法 体外培养的RF/6A细胞系,并构建Twist干扰质粒和对照质粒.分为Twist干扰质粒组、阴性对照组、磷酸盐缓冲液(PBS)组,各组应用脂质体基因转染方法,转入相应的质粒表达载体,采用Transwell小室法检测发生迁移的内皮细胞并计数;铺Matrigel胶,行内皮细胞体外成管实验,观察Twist基因干扰对内皮细胞成管的抑制作用;蛋白质免疫印迹检测Twist基因干扰对RF/6A细胞pAkt蛋白表达的影响.结果 Transwell小室计数结果表明,转染Twist干扰质粒后,迁移的细胞数显著低于阴性对照组和PBS组(F=23.786,P=0.000).体外成管实验结果表明,Twist干扰质粒组内皮细胞成管数显著低于阴性对照组和PBS组(F=7.159,P=0.014).Ttwist干扰质粒组的pAkt蛋白表达明显减少.结论 Twist基因干扰可显著抑制视网膜微血管内皮细胞的迁移,可能机制是通过抑制pAkt蛋白的表达发挥作用.     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增生的影响

在视网膜新生血管性疾病血管新生过程中,内皮细胞的增生和迁移直接影响眼内血管的消长,抑制内皮细胞增生和迁移是抑制视网膜新生血管形成的关键[1].Tumstatin是人类Ⅳ型胶原的α3链的非胶原结构域1(NC1)功能区,是最新发现的来源于人基底膜胶原的肿瘤血管形成抑制因子,具有有效的抗新生血管活性,而T8肽是指Tumstatin接近N端的69～95位氨基酸大约25个氨基酸的一个活性片段[2].我们使用Muller细胞在高糖条件下培养的上清液作为条件培养基,培养视网膜微血管内皮细胞,模拟糖尿病视网膜病变的体内环境,观察了T8肽对高糖条件培养基下视网膜微血管内皮细胞增生的影响,现将结果报道如下.     

曲安奈德对缺氧条件下恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞VEGF表达的影响

目的:研究曲安奈德对缺氧条件下恒河猴视网膜脉络膜内皮细胞VEGF表达的影响,探讨曲安奈德治疗视网膜脉络膜新生血管的作用机制。方法:采用免疫组化图像分析和半定量RT-PCR方法,检测曲安奈德对正常和缺氧条件下RF/6A细胞VEGF表达的影响。结果:缺氧条件下VEGF蛋白在细胞胞质中的染色强度明显增强,加入曲安奈德后VEGF蛋白在细胞胞质中的染色强度明显减弱,正常条件下的VEGF蛋白的A值为276.8±8.6;正常加药组的A值为137.1±10.2;缺氧条件下的A值为406.1±8.8;缺氧加药组的OD值244.2±12.8。半定量RT-PCR表明VEGFmRNA在正常对照组RF/6A细胞中的相对表达量为1.38±0.05;缺氧对照组RF/6A细胞中的相对表达量为5.41±0.06;正常加药组RF/6A细胞中的相对表达量为0.70±0.06;缺氧加药组RF/6A细胞中的相对表达量为4.23±0.05,以上两种方法,缺氧对照组与正常对照组比较、缺氧对照组与缺氧加药组比较、正常对照组与正常加药组比较差异均有显著性意义(P=0.000)。结论:缺氧状态下RF/6A细胞中VEGF的表达明显增高,曲安奈德能显著抑制正常和缺氧状态下RF/6A细胞中VEGF的表达。     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增生和迂移的影响

目的探讨Tumstatin肽对视网膜血管内皮细胞增生和迁移的影响,了解其抑制血管生成的途径。方法采用MTT比色法观察1mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1、20mg.L-1和40mg·L-1的Tumstatin肽(T8肽)对恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增生的影响;采用流式细胞仪检测20mg·L-1的T8肽对RF/6A细胞细胞周期的影响;采用划痕修复实验观察0mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和20mg·L-1的T8肽对RF/6A细胞迁移的影响。结果5mg·L-1以上浓度的T8肽对RF/6A细胞增生有抑制作用且呈剂量依赖性,1mg·L-1、5mg.L-1、10mg·L-1、20mg·L-1和40mg·L-1浓度的T8肽抑制率分别为(2.69±1.10)%、(6.58±1.91)%、(16.77±3.05)%、(31.60±7.57)%和(40.05±8.43)%,各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。未加入T8肽时,RF/6A处于G0～G1期、S期和G2～M期的细胞比例分别为(43.66±1.37)%、(44.13±0.99)%和(12.21±0.39)%,而加入20mg·L-1的T8肽后则分别为(55.27±0.63)%、(28.51±0.68)%和(16.23±1.00)%,细胞凋亡率也由原来的0增加到(7.18±0.25)%,2组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。培养基中加入0mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和20mg·L-1的T8肽后RF/6A细胞24h的迁移距离分别为(248.09±2.28)μm、(175.27±3.22)μm、(120.81±3.59)μm和(44.65±1.83)μm,而48h时则为(393.68±2.21)μm、(341.62±4.27)μm、(254.65±2.93)μm和(118.69±5.96)μm,在同一时段,各组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论T8肽能够抑制RF/6A细胞的增生和迁移,使细胞阻滞于G0～G1期及诱导细胞凋亡是其抑制RF/6A细胞生长的原因。     

PI3K抑制剂对体外培养的眼底血管内皮细胞的作用

目的 观察PI3K激酶抑制剂LY294002对体外培养的视网膜脉络膜血管内皮细胞增生和迁移抑制以及诱导凋亡的作用。方法 四唑盐（MTT）比色法检查对照组和LY294002干预组干预72h后RF／6A细胞增生的抑制，Transwell分析法检查不同浓度的LY294002对VEGF诱导的RF／6A细胞迁移的抑制效果，流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果 LY294002以浓度依赖性方式抑制VEGF诱导的RF／6A细胞增生和迁移，各个LY294002干预组与对照组相比，增生和迁移能力降低，差异有统计学意义（P〈0．05），流式细胞仪分析结果显示LY294002可以诱导细胞的凋亡。结论 LY294002可抑制体外培养的RF／6A细胞的生长和迁移，并诱导细胞的凋亡，有望为临床上新生血管性疾病提供新的治疗方法。     

Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞血管形成的影响及其机制研究

目的　探究Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A血管形成的影响及其可能作用机制。方法　RF/6A细胞随机分为3组，其中CO组:正常培养RF/6A细胞24 h；CH组:RF/6A细胞与10 μg·L^-1 Chemerin混合培养24 h；CN组:在CH组基础上+200 μmol·L^-1N-乙酰半胱氨酸混合培养24 h。通过荧光探针-二氢乙啶(DHE)法、MTT法、细胞划痕实验、基质胶(Matrigel)法、Western blot等检测CO组、CH组、CN组RF/6A细胞活性氧（ROS）表达水平、增殖情况、迁移能力、管腔形成、p38MAPK蛋白表达的差异。结果　CH组RF/6A细胞中ROS表达水平、细胞增殖数量均显著高于CO组、CH组（均为P<0.05）。CO组、CH组、CN组RF/6A细胞迁移面积(像素)分别为31 268±1397、56 489±2653、39 684±1864，细胞管腔形成数量分别为（1.06±1.12）个、（6.04±2.24）个、（3.08±3.67）个，3组间细胞迁移面积、管腔形成数量比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示，CH组RF/6A细胞中p38MAPK蛋白相对表达量显著高于CO组、CN组，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　Chemerin对RF/6A细胞血管形成有促进作用，其机制与ROS介导的MAPK通路激活有关。     

Involvement of MAPKs in endostatin-mediated regulation of blood-retinal barrier function

PURPOSE: This study aimed to evaluate the effects of endostatin on tight junction (TJ) integrity in retinal microvascular endothelial cells (RMECs) in vitro and in vivo. Moreover, it was hypothesized that endostatin-induced occludin upregulation regulated VEGF165-mediated increases in endothelial cell permeability and involved activation of the MAPK signaling cascade. Endostatin is a 20-kDa fragment of collagen XVIII that has been shown to be efficacious in the eye by preventing retinal neovascularization. Endostatin is a specific inhibitor of endothelial cell proliferation, migration, and angiogenesis and has been reported to reverse VEGF-mediated increases in vasopermeability and to promote integrity of the blood-retinal barrier (BRB). In order to determine the mechanism of endostatin action on BRB integrity, we have examined the effects of endostatin on a number of intracellular pathways implicated in endothelial cell physiology. METHODS: C57/Bl6 mice were injected with VEGF165 and/or endostatin, and the distribution of occludin staining was determined using retinal flatmounts. Western blot analysis of RMECs treated with VEGF165 and/or endostatin was used to determine changes in occludin expression and p38 MAPK and extracellular regulated kinase (ERK1/ERK2 MAPK) activation, while FD-4 flux across the RMEC monolayer was used to determine changes in paracellular permeability. RESULTS: Endostatin prevented the discontinuous pattern of occludin staining observed at the retinal blood vessels of mice administered an intraocular injection of VEGF165. It was shown that endostatin activated p38 MAPK 5 min after addition to RMECs and continued to do so for approximately 30 min. Endostatin was also shown to activate ERK1/ERK2 5 min after addition and continued to do so, albeit with less potency, up to and including 15 min after addition. Inhibition of p38 MAPK and ERK1/ERK2 prevented endostatin's ability to upregulate levels of occludin expression. Inhibition of these key signaling molecules was shown to prevent endostatin's ability to protect against VEGF165-mediated increases in paracellular permeability in vitro. However, it appears that p38 MAPK may play a more important role in VEGF-mediated permeability, as inhibition of ERK1/ERK2 will not prevent VEGF165-mediated permeability compared with control (untreated) cells or cells treated with both a p38 MAPK inhibitor and VEGF165. CONCLUSIONS: Occludin is important for the maintenance of tight junction integrity in vivo. In a p38 MAPK and ERK1/ERK2 dependent manner, endostatin was shown to upregulate the levels of expression of the tight junction protein occludin. Inhibition of these key MAPK components may prevent endostatin's ability to decrease VEGF165-induced paracellular permeability.     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1抑制视网膜血管新生的实验研究

背景寻求有效的血管内皮生长因子（VEGF）抑制剂是治疗和预防新生血管性眼病的关键。胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1（IGFBP—rP1）是一种新发现的抑血管新生因子,推测其在眼内有抑制VEGF的作用。目的探讨IGFBP—rP1对VEGF体外诱导视网膜新生血管形成的抑制作用及其机制。方法使用含质量分数10％FBS的DMEM对猕猴视网膜／脉络膜血管内皮细胞株（RF／6A）进行扩增培养,利用免疫荧光细胞化学染色法观察RF／6A细胞表达IGFBP—rP1的情况。RF／6A细胞血清饥饿法培养24h后分为对照组、10mg／LVEGF组,50、100、200mg／LIGFBP—rP1＋10mg/L VEGF组进行干预,分别利用MTS比色法、Transwell实验和流式细胞术比较IGFBP—rP1（0、50、100、200mg／L）联合VEGF（10mg／L）作用后,RF／6A细胞在增生、移行和凋亡等生物学行为方面的变化。结果RF／6A细胞用不同质量浓度的IGFBP—rP1培养后细胞质呈FITC激发后的绿色荧光,细胞核呈PI激发后的红色荧光,而对照组细胞仅见细胞核的红色荧光。10mg／LVEGF组RF／6A细胞的A490值、移行细胞数与对照组相比明显增加,差异均有统计学意义（t=-15．191,P=0．000;t=-21．274,P=0．000）,细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义（t=10．228,P=0．000）。与10mg／LVEGF组相比,IGFBP—rP1（50、100、200mg／L）＋10mg／LVEGF组RF／6A细胞的A490值、移行细胞数明显下降（均P〈0．05）。50、100、200113geLIGFBP—rPl＋10mg／LVEGF组RF／6A细胞的细胞凋亡率分别提高了（1．26±0．04）％、（1．50±0．07）％和（1．93±0．27）％,各组的总体差异有统计学意义（F=274．273,P=0．000）。结论IGFBP—rP1作为一种内源性因子,通过促细胞凋亡机制抑制VEGF诱导的视网膜血管的生成。     

BAMBI过表达抑制缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和迁移

目的　探讨过表达激活素膜结合抑制剂（ｂｍｐａｎｄａｃｔｉｖｉｎｍｅｍｂｒａｎｅ-ｂｏｕｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＢＡＭＢＩ）对缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞（ＲＦ／６Ａ）增殖和迁移的影响。方法　将ＲＦ／６Ａ细胞分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧＋ｐＦＬＡＧ组和缺氧＋ＢＡＭＢＩ组。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中ＢＡＭＢＩ的表达,倒置显微镜观察各组细胞形态和密度,ＣＣＫ-８法和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和周期情况,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测细胞的迁移,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达。结果　与对照组相比,缺氧组细胞数目明显增多,增殖增加,培养１２０ｈ后,对照组细胞增殖倍数为５．００±０．２８,缺氧组为７．６４±０．３２（Ｐ＜０．００１）;缺氧组Ｓ期进程显著加快,占（１０．４４±２．６１）％,对照组Ｓ期占（２０．７９±２．２３）％（Ｐ＜０．０５）;细胞迁移增加,缺氧组细胞数目为３３．８０±４．２０,对照组为８．３５±２．５０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显增加（Ｐ＜０．０５）。缺氧＋ＢＡＭＢＩ组:缺氧处理的细胞转染ｐＦＬＡＧ-ＢＡＭ-ＢＩ后,与缺氧组相比,ＢＡＭＢＩ蛋白表达显著上调,细胞数目明显减少,增殖显著降低,培养１２０ｈ后,增殖倍数为５．５３±０．２７（Ｐ＜０．００１）,细胞Ｓ期受到阻滞,占（１８．７５±２．９２）％,迁移显著下降,数目为１３．００±２．８０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显下调（Ｐ＜０．０５）。结论　过表达ＢＡＭＢＩ可抑制缺氧诱导的ＲＦ／６Ａ细胞的增殖和迁移,进而有望抑制视网膜血管新生。     

Pigment epithelium-derived factor suppresses ischemia-induced retinal neovascularization and VEGF-induced migration and growth

PURPOSE: To determine the effect of pigment epithelium-derived factor (PEDF) in a mouse model of ischemia-induced retinal neovascularization and on vascular endothelial growth factor (VEGF)--induced migration and growth of cultured microvascular endothelial cells. METHODS: Human recombinant PEDF was expressed in the human embryonic kidney 293 cell line and purified by ammonium sulfate precipitation and cation exchange chromatography. C57BL/6 mice were exposed to 75% oxygen from postnatal day (P)7 to P12 and then returned to room air. Mice received intravitreal injections of 2 microg PEDF in one eye and vehicle in the contralateral eye on P12 and P14. At P17, mice were killed and eyes enucleated for quantitation of retinal neovascularization. The mitogenic and motogeneic effects of VEGF on cultured bovine retinal and adrenal capillary endothelial cells were examined in the presence or absence of PEDF, using cell counts and migration assays. RESULTS: Two species of human recombinant PEDF, denoted A and B, were purified to apparent homogeneity. PEDF B appeared to comigrate on SDS-PAGE with PEDF from human vitreous samples. Changes in electrophoretic mobility after peptide-N-glycosidase F (PNGase F) digestion suggest that both PEDF forms contain N-linked carbohydrate. Analyses of the intact proteins by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry (LC-ESMS) revealed the major molecular weight species for PEDF A (47,705 +/- 4) and B (46,757 +/- 5). LC-ESMS analysis of tryptic peptides indicated that PEDF A and B exhibit differences in glycopeptides containing N-acetylneuraminic acid (NeuAc) and N-acetylhexosamine (HexNAc). Intravitreal administration of either species of PEDF significantly inhibited retinal neovascularization (83% for PEDF A and 55% for PEDF B; P = 0.024 and 0.0026, respectively). PEDF A and B (20 nM) suppressed VEGF-induced retinal microvascular endothelial cell proliferation by 48.8% and 41.4%, respectively, after 5 days (P < 0.001) and VEGF-induced migration by 86.5% +/- 16.7% and 78.1% +/- 22.3%, respectively, after 4 hours (P = 0.004 and P = 0.008, respectively). CONCLUSIONS: These data indicate that elevated concentrations of PEDF inhibit VEGF-induced retinal endothelial cell growth and migration and retinal neovascularization. These findings suggest that localized administration of PEDF may be an effective approach for the treatment of ischemia-induced retinal neovascular disorders.     

复方血栓通对猴脉络膜一视网膜内皮细胞增生、移行和管腔形成的作用

目的探讨复方血栓通干预猴脉络膜．视网膜内皮细胞（Rr／6A）参与血管生成的作用及机理。方法实验研究。本研究分为四部分：①取对数生长期RF／6A细胞进行培养,设立空白对照组、阳性对照组以及不同浓度的复方血栓通观察组．每组均加入终浓度为10ng／ml的血管内皮生长因子（VEGF）．阳性对照组加入终浓度0．20mg／ml的硫酸鱼精蛋白,复方血栓通观察组设立0．39～50．00mg／ml的多个不同浓度组。培养24h后采用酶联免疫检测仪测定各组吸光度4值,观察不同浓度的复方血栓通对VEGF诱导的RF／6A细胞增殖的影响。②设立空白对照组和终浓度为3．13、6．25、12．50mg／ml的复方血栓通组,培养24h后检测不同浓度复方血栓通对RF／6A细胞移行的影响。⑧设立空白对照组和终浓度为0．39、0．78、1．56mg／ml的复方血栓通组,培养12h后检测不同浓度的复方血栓通对RF／6A细胞管腔形成的影响;④设立空白对照组、终浓度为0．20mg／ml的硫酸鱼精蛋白阳性对照组和终浓度为1．56、3．13、6．25mg／ml的复方血栓通组,培养24h后,运用Western Blot和实时定量逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）的方法,分别检测不同浓度的复方血栓通对RF／6A细胞表达VEGF、基质金属蛋白酶2（MMP．2）蛋白和mRNA的影响。对多组计量资料进行单因素方差分析。结果①各组间4值差异有统计学意义（F=158．669,P〈0．01）,同空白对照组比较,0．78～25．00mg／ml浓度的复方血栓通对VEGF诱导的RF／6A细胞增殖具有明显抑制作用（尸均〈0．011;②复方血栓通浓度为0、3．13、6．25和12．50mg／ml时,RF／6A细胞移行数分别为123．3±13．8、114．3±15．5、54．0±6．1和40．3±10．1,组间差异有统计学意义（B36．918,P〈0．01）;与空白对照组比较,6．25和12．50mg／ml浓度的复方血栓通对RF／6A细胞移行具有明显的抑制作用（P均〈0．01）;③复方血栓通浓度为0、0．39、0．78和1．56mg／ml时RF／6A细胞内皮管腔形成数分别为20．3±2．5、12．7±2．1、9．7±1．2和0．7±0．6,组间差异有统计学意义（F=64．324,P〈0．01）;与空白对照组比较,0．39、0．78和1．56mg／mA浓度的复方血栓通对RF／6A细胞内皮管腔形成均具有明显的抑制作用（P均〈0．01）,且抑制作用随浓度增加而增强;④空白对照组、阳性对照组以及1．56、3．13和6．25mg／ml浓度的复方血栓通组VEGF和MMP．2蛋白相对含量组间差异均有统计学意义（F=343．346、1670．505,P均〈0．01）;与空白对照组比较,其余各组均具有显著抑制RF／6A细胞VEGF和MMP-2蛋白表达的作用（P均〈0.01）,复方血栓通的抑制作用随浓度增加而增强;各组VEGF和MMP-2mRNA相对含量的差异也有统计学意义（F=228．130,208．579,P均〈0．01）,与空白对照组比较,其余各组均具有显著抑制RF／6A细胞VEGFmRNA表达的作用（P均〈0．01）,复方血栓通的抑制作用随浓度增加而增强。结论复方血栓通可能通过抑制RF／6A细胞增殖、移行以及管腔形成来抑制其参与新生血管生成．其机理可能与抑制RF／6A细胞VEGF、MMP-2的表达有关。