白细胞介素37对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感性的增强作用

目的：通过将白细胞介素37（IL-37）基因转染到宫颈癌HeLa细胞中,探讨IL-37对宫颈癌细胞的杀伤作用及其对宫颈癌细胞化疗敏感性的增强作用。方法：将重组pIRES2-EGFP/IL-37质粒（IL-37组）和pIRES2-EGFP质粒（NC组）分别转染到HeLa细胞。Q-PCR和Western blotting法检测IL-37基因和蛋白表达水平;CCK8法检测NC组、IL-37组、顺铂（DDP）组及IL-37+DDP组细胞活性,计算细胞抑制率;RT-PCR法检测信号转导和转录激活因子3（STAT3）及细胞周期蛋白D1（Cyclin D1） mRNA表达水平。结果：与NC组比较,IL-37组IL-37 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P < 0.01）。给药后24~72 h,5~15 mg·L^-1 DDP组HeLa细胞活性受到明显抑制（P < 0.01）;与DDP组比较,IL-37+DDP组HeLa细胞抑制率在处理后48 h内明显升高（P < 0.05）;与IL-37组比较,IL-37+DDP组HeLa细胞抑制率在处理后96 h内均有升高（P < 0.05）。与NC组比较,IL-37组STAT3和Cyclin D1 mRNA表达水平明显下降（P < 0.01）。结论：IL-37高表达可抑制宫颈癌细胞的增殖,并能增强DDP对宫颈癌细胞的放疗效果,这种效应的发挥可能与IL-37使STAT3和Cyclin D1表达下调有关。     

野生型p53基因转染对宫颈癌HeLa细胞生长及药物敏感性的影响

目的　探讨转染外源野生型 p5 3基因对宫颈癌 He L a细胞生长的抑制作用 ,并了解 p5 3基因与He L a细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法　利用脂质体介导 ,将含人野生型 p5 3c DNA的 p CB6 .p5 3质粒导入人宫颈癌 He L a细胞株中 ,筛选阳性克隆 ,用免疫组化 ABC法检测 p5 3基因的表达情况。加入顺铂 72小时后 ,用四唑盐比色试验检测存活的 He L a细胞数。结果　在 G418选择培养基中培养两周后 ,成功地生长出阳性细胞克隆。免疫组化法证实外源性 p5 3基因在瘤细胞中稳定存在并传给子代 ,p5 3基因转染对 He L a细胞的生长有明显的抑制作用。p5 3表达阳性的 He L a细胞对顺铂的敏感性明显增强。结论　野生型 p5 3基因转染能使 He L a细胞出现生长抑制和化疗敏感性增强     

钙离子在顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞自噬反应中的作用

目的：采用钙释放抑制剂联合化疗药物作用于宫颈癌HeLa细胞,探讨钙离子（Ca²⁺）在肿瘤细胞自噬反应中的作用,为辅助肿瘤治疗和药物研发提供依据。方法：选择处于对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞,随机分为对照组、顺铂组、2-APB组和顺铂联合2-APB组（联合组）。MTT法检测HeLa细胞生存率,钙离子荧光探针法检测HeLa细胞胞浆和线粒体中游离Ca²⁺水平,共聚焦显微镜检测HeLa细胞中自噬相关蛋白LC3和P62的共定位情况。结果：MTT法检测,与对照组比较,顺铂组和联合组HeLa细胞生存率明显降低（P<0.05）;与顺铂组比较,联合组HeLa细胞生存率明显升高（P<0.05）。钙离子荧光探针法检测,与顺铂组比较,联合组细胞株胞浆和线粒体中游离Ca²⁺水平及LC3和P62蛋白共定位荧光强度明显降低。结论：化疗药物可诱导肿瘤细胞发生自噬,联合钙释放抑制剂给药可以降低肿瘤细胞自噬水平,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

不同剂量顺铂对宫颈癌SiHa细胞周期和凋亡影响的研究

目的 检测不同剂量顺铂(DDP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡及周期的影响,探讨DDP治疗宫颈癌的作用机制. 方法 采用WST-8方法 检测DDP对人宫颈癌SiHa细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态;用流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡和周期变化. 结果 DDP对SiHa细胞增殖的抑制作用,一定程度上呈浓度依赖性和时间依赖性,但0.01～1.00 μg/ml的DDP作用24 h和0.01～0.10 μg/ml的DDP作用48 h对细胞的抑制增殖作用不明显(P＞0.05).5.00 μg/ml 的DDP作用24 h时,Hoechst 33258荧光染色可见典型的凋亡细胞形态;1 μg/ml 的DDP作用SiHa细胞24 h时,使SiHa细胞产生明显的S期阻滞,S期细胞比率为(53.17±7.50)%,与对照组、DDP 5.00 μg/ml组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),致凋亡作用不明显(P＞0.05);而5.00 μg/ml DDP作用24 h时,细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率分别为(5.88±1.64)%和(5.18±1.26)%,与对照组、DDP1 μg/ml组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05). 结论 DDP抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,但对小剂量DDP存在一定的耐药,其耐药机制可能与S期阻滞有关;高剂量DDP抗宫颈癌细胞作用机制主要表现为致凋亡作用.     

chk1反义寡核苷酸增加HeLa细胞顺铂作用下凋亡敏感性

目的:通过反义封闭chk1基因,阻断细胞周期检测点信号传导通路,从而增加宫颈癌HeLa细胞对顺铂(DDP)的敏感性. 方法:采用MTT法检测梯度浓度DDP作用人宫颈癌细胞株HeLa 24,48和72 h后对细胞的生长抑制率. 以脂质体为载体将chk1正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western Blot测量Chk1蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测DDP作用后细胞凋亡率. 结果:DDP对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性. 反义封闭chk1基因可抑制Chk1蛋白表达(P＜0.01), DDP作用下细胞凋亡率为54.1%,高于转染正义链的34.2%(P＜0.01). 结论:反义封闭chk1基因可增加HeLa细胞对DDP的凋亡敏感性.     

野生型p53基因转染对宫颈癌HeLa细胞生长及药物敏感性的影响

目的：探讨转染外源野生型p53基因对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用。并了解p53基因与HeLa细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法：利用脂质体介导，将含人野生型p53cDNA的cCB6.p53质粒导入人宫颈癌HeLa细胞株中，筛选阳性克隆，用免疫组化ABC法检测p53基因的表达情况，加入顺铂72小时后，用四唑盐比色试验检测存活的HeLa细胞数。结果：在G418选择培养基中培养两周后，成功地生长出阳性细胞克隆，免疫组化法证实外源性p53基因在瘤细胞中稳定存在并传给子代，p53基因转染对HeLa细胞的生长有明显的抑制作用。p53表达阳性的HeLa细胞对顺铂的敏感性明显增加，结论：野生型p53基因转染能使HeLa细胞出现生长抑制和化疗敏感性增强。     

顺铂诱导的喉癌细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的 探讨顺铂对喉癌Ｈｅｐ２细胞株诱导细胞调恨的作用,为抗肿瘤药物的筛选和用药方式提供理论依据。方法 体外培养的Ｈｅｐ２细胞与不同浓度顺铂作用２小时,利用充式细胞仪,荧光显微镜和ＤＮＡ凝胶电泳技术,研究不同时间细胞凋亡的发生,形态学改变和对细胞周期的影响。     

丙戊酸钠联合顺氯氨铂对子宫颈癌的作用机制研究

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)联合化疗药物顺铂(DDP)对子宫颈癌作用机制.方法 采用3 mmol/L VPA及不同浓度(0.5、1、2.5 μg/ml)DDP单独或联合作用于子宫颈癌HeLa细胞,对照组仅加溶媒;VPA 300 mg/(kg·d)-1,DDP 2 mg/kg,每周2次,作用于HeLa细胞接种后成瘤的裸鼠...     

p38δ对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响

【摘要】 目的 探讨p38δ对HeLa细胞顺铂敏感性的影响。方法 采用细胞转染方法在HeLa细胞中过表达p38δ蛋白;采用Annexin V FITC/PI双染色检测细胞凋亡水平;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达水平;采用免疫沉淀法纯化p38δ蛋白,并采用蛋白质印迹法检测其磷酸化水平。结果 与转染对照质粒HeLa细胞相比,转染p38δ表达质粒HeLa细胞在正常培养条件下和顺铂处理条件下的细胞凋亡水平都显著上升（P均＜001）。在顺铂处理条件下,与转染对照质粒HeLa细胞相比,转染p38δ表达质粒HeLa细胞Bcl 2蛋白表达水平下降,Bax和p53蛋白表达水平上升（P均＜001）。顺铂处理HeLa细胞中p38δ磷酸化水平显著上升（P＜001）。与转染野生型p38δ（WT）HeLa细胞相比,转染激酶失活突变体p38δ（K54R）HeLa细胞在正常培养条件下和顺铂处理条件下的细胞凋亡水平都显著下降（P均＜001）。结论 p38δ促进HeLa细胞凋亡并增强其对顺铂的敏感性,且p38δ对HeLa细胞凋亡的调控依赖于其蛋白激酶活性。     

靶向沉默ATRX对辐射诱导宫颈癌HeLa细胞周期阻滞和凋亡的作用

目的:靶向沉默HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白(ATRX),探讨其对辐射诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用.方法:利用RNA干扰(RNAi)技术建立稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,命名为shATRX1-HeLa,以shCon-HeLa为阴性对照.分别给予0、2和8 Gy X射线照射后,...     

chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:观察卵巢癌SKOV-3细胞转染chk2反义寡核苷酸后在顺铂作用下细胞凋亡的变化.方法:用MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV-3细胞的抑制率,Western Blot法检测SKOV-3细胞中Chk2蛋白的表达. 流式细胞仪及TUNEL法检测转染chk2反义寡核苷酸后顺铂作用下SKOV-3细胞凋亡情况.结果:顺铂对SKOV-3细胞的生长抑制率随浓度增高和时间延长而升高. Western Blot法检测证实转染chk2反义寡核苷酸后SKOV-3细胞中Chk2蛋白表达受到明显抑制. 流式细胞仪检测抑制chk2基因表达后SKOV-3细胞凋亡率为(77.6±1.7)%,明显高于正常组(24.7±1.76)%,空脂质体组(35.6±1.4)%及转染正义寡核苷酸细胞组(47.6±1.2)%. TUNEL法检测结果与流式细胞法一致.结论:chk2可作为卵巢癌增敏治疗的有效靶点.     

木脂素对MGC-803胃癌细胞的抗增殖作用及其与细胞周期相关蛋白的相关性

[目的]研究木脂素对MGC-803胃癌细胞的抗增殖作用及其与细胞周期相关蛋白之间的相关性．[方法]采用MTT方法检测对照组和实验组各时间段的细胞生存率,利用流式细胞技术检测木脂素对细胞周期的影响,采用免疫细胞化学染色方法检测p53,CDK2,cyclinE及cyclinD1蛋白的表达．[结果]MTT方法检测结果见,药物浓度为25μmol／L时实验组在24,48,72h的生存率分别为82．6％±2．7％,69．1％±4．5％,50．5％±1．7％,与对照组相比较差异均具有统计学意义（P〈0．01）,并具有浓度依赖性．利用流式细胞仪检测细胞周期结果见,G1期细胞增多,S期及G2期细胞减少．免疫细胞化学染色结果见,在24,48,72h时实验组胃癌细胞突变型p53,cyclinD1,cyclinE和CDK2蛋白的阳性表达率与对照组相比较明显降低,各组间差异均具有统计学意义（P〈0．01）．[结论]木脂素对MGC-803胃癌细胞具有明显的抗增殖作用,其机制之一与下调突变型p53,cyclinD1,cyclinE和CDK2蛋白的表达,阻止胃癌细胞从细胞周期G1期进入S期,从而抑制胃癌细胞DNA合成有关．     

胡桃醌对宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 探讨胡桃醌对人宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响,阐明胡桃醌在宫颈癌治疗中的作用。方法: 选取处于对数生长期的SiHa细胞,随机分为对照组和10、20、40、60、80和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组。倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性和细胞生长抑制率,流式细胞术检测SiHa细胞的细胞周期。结果: 与对照组比较,胡桃醌处理组SiHa细胞体积缩小,连接消失,与周围细胞脱离。与对照组比较,胡桃醌处理组细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞生长抑制率升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC₅₀)为20.7 μmol·L^-1;流式细胞术检测,与对照组比较,10和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组SiHa细胞的亚二倍体峰(SubG₁)比率增加,G₀/G₁和S期细胞比率降低,G₂/M期细胞比率先升高后降低。结论: 胡桃醌对SiHa细胞增殖具有抑制作用,并可使细胞周期SubG₁比率增加。     

皮肤鳞状细胞癌细胞周期调节因子的研究

采用免疫组化染色检测３０ 例皮肤鳞癌组织细胞周期蛋白Ｄ１（ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１） 、细胞周期蛋白依赖性激酶４（ＣＤＫ４） ,ｐ１６ 及Ｒｂ 的表达,阳性率依次为６６－７ ％ ,５３－３ ％ ,３３－３ ％ 和３６－７ ％ ;ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 及ＣＤＫ４ 于癌巢边缘细胞表达强于中央癌细胞,且其分化程度越低,阳性着色细胞越多,着色越深。提示细胞周期尤其Ｇ１ 期的正向调节因子的过度表达及负向调节因子的低表达在皮肤鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用。     

青蒿琥酯诱导人前列腺癌PC-3细胞分化及周期阻滞

目的：探讨青蒿琥酯（artesunate，ART）对人前列腺癌细胞株PC-3分化及周期阻滞的影响。方法：培养人前列腺癌PC-3细胞至对数生长期，ART处理PC-3细胞48h后，流式细胞术（flow cytometry．FCM）检测PC-3细胞的细胞周期分布状况，酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液前列腺特异性抗原（prostate specific antigen，PSA）含量．透射电镜观察细胞形态学变化。结果：与空白对照组比较，ART高剂量组PC-3细胞G0／G1＋S期比率减少明显（P〈0．05）。ART高剂量组和中剂量组PC-3细胞G2／M比例高于顺铂组和空白对照组（P〈0．05）；ART各剂量组细胞上清液中PSA水平均低于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。透射电镜观察显示细胞胞浆内出现空泡，细胞极性增强，细胞核靠向细胞一侧，对侧的微绒毛明显增多。结论：青蒿琥酯有诱导人前列腺癌PC-3细胞周期阻滞的作用，并能一定程度地诱导前列腺癌PC-3细胞分化。     

辣椒素诱导人膀胱癌RT4细胞细胞周期阻滞的实验观察

目的 了解辣椒素对膀胱癌RT4细胞生长的影响及可能机制.方法 采用细胞计数kit-8(CCK-8)试剂盒观察辣椒素(50、100、150、200、250μmol/L)对膀胱癌RT4细胞生长的影响,以辣椒素(0 μmol/L)为对照组;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫荧光检测瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)的表达;Western印迹检测细胞周期蛋白P53、P21、细胞周期依赖性激酶(CDK)2表达水平.结果 100 μmol/L辣椒素明显抑制RT4细胞生长,细胞成活率为82.0%±6.2%,低于对照组(100.0%±12.4%,P=0.036),且生长抑制呈剂量依赖性,250μmol/L时细胞成活率仅为7.8%±2.9%(P=0.000).辣椒素能诱导RT4细胞G0/G1期阻滞,同样呈剂量依赖性,对照组G0/G1期细胞比例为37.4%±5.6%,而250 μmol/L时达到72.4%±5.3%(P=0.000).RT4细胞表达TRPV1受体mRNA和蛋白.与对照组比较,辣椒素处理后48 h,P53、P21表达上调,而CDK2表达下调.结论 辣椒素可以通过TRPV1受体调节P53、P21、CDK2表达以诱导人膀胱癌RT4细胞G0/G1期阻滞而抑制其生长.     

莲心碱对膀胱癌细胞T24增殖及其周期的调控

目的：通过莲心碱作用于膀胱癌细胞T24,研究其对膀胱癌细胞T24增殖的影响。方法使用不同浓度的莲心碱处理膀胱癌细胞T24,通过CCK-8实验及克隆形成实验,检测莲心碱对细胞增殖的影响;对细胞进行 PI染色后,使用流式细胞仪,检测莲心碱对T24细胞周期的影响;通过实时定量PCR,检测莲心碱作用后T24细胞的 p21基因mRNA的改变。结果莲心碱对膀胱癌细胞T24增殖有明显的抑制作用,各剂量组（1．5625、3．1250、6．2500、12．5000、25．0000μg/mL）与甲醇对照组差异有统计学意义（P＜0．05）,并呈剂量依赖性;细胞周期检测结果显示,莲心碱将 T24细胞阻滞在 S期;实时定量 PCR检测结果显示,莲心碱提高T24细胞 p21基因的mRNA。结论莲心碱对膀胱癌细胞T24具有增殖抑制并将其阻滞在 S期,该作用机制可能与 p21表达上调有关。     

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的 :观察蝎毒抗癌多肽 (APBMV)对CNE 2Z细胞生长周期和p5 3表达的影响。方法 :采用流式细胞仪双标法。结果 :APBMV处理CNE 2Z细胞 48h后 ,进入S期的细胞明显减少 ,处于G1期和G2期的细胞明显增多 ,APBMV 16mg/L处理CNE 2Z细胞 48h后 ,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为 5 9.7%、32 .3 %和 7.9% ,空白对照组的百分比分别为 5 3 .3%、45 .2 %和 1.5 % ,二者比较差异有显著性 (P <0 .0 1或P <0 .0 0 1)。空白对照组CNE 2Z细胞P5 3蛋白 2 4h和 48h表达量处于较高水平 (2 7.2 3± 0 .93)和 (31.6 7± 1.75 ) ,经APBMV处理 2 4h或 48h后 ,P5 3蛋白表达量明显下降 ,与空白对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :APBMV能够阻止CNE 2Z细胞周期的移行 ,并抑制抑癌基因p5 3的表达     

塞来昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞周期进程及诱导凋亡的作用

目的观察选择性COX-2抑制剂塞莱昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞周期进程及诱导凋亡的作用。方法采用不同浓度塞来昔布处理Tca8113细胞后,采用流式细胞仪检测细胞周期变化;应用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞早期凋亡,透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果塞来昔布抑制Tca8113细胞生长增殖的作用,与阻滞细胞周期进程有关,其主要阻滞Tca8113细胞从G1期细胞向S期细胞进程,导致G0/G1期细胞的数量增加,S期和G2/M期细胞数量减少。Annexin V-FITC/PI双标记法结果显示,塞来昔布组与对照组相比,早期凋亡细胞增多有显著性意义。透射电镜观察显示,随着塞来昔布浓度的增加及作用时间的延长,Tca8113细胞出早期凋亡细胞至中后期凋亡细胞的变换。结论COX-2抑制剂塞来昔布以剂量依赖的方式,通过抑制细胞周期进程、诱导凋亡抑制Tca8113细胞生长、增殖,其作用机制有待进一步研究。