更年春方对骨代谢相关基因表达的影响

目的:观察更年春方对去卵巢(OVX)大鼠骨髓微环境中骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA表达的影响,探讨更年春抗绝经后骨质疏松骨丢失的可能分子机制。方法:取健康10月龄雌性SD大鼠42只,随机平均分为假手术组(S),生理盐水组(N)、尼尔雌醇组(E)、更年春高剂量组(H)、更年春中剂量组(M)和更年春低剂量组(L)。假手术组仅切除卵巢周围少许脂肪,其余5组均切除卵巢。灌药3d后取腰椎冲洗骨髓提取总RNA,实时定量PCR法检测上述因子mRNA的表达情况。结果:更年春高剂量组可上调OVX大鼠骨组织中OPG的mRNA的表达,下调M-CSF的mRNA的表达,使RANKL/OPG值下降。结论:更年春方抗绝经后骨质疏松骨丢失的分子机制可能与其调控OPG和M-CSF的表达,影响RANKL/OPG值有关。     

补肾活血颗粒对去势骨质疏松大鼠OPG/RANK/RANKL系统的影响

目的:观察补肾活血颗粒对去势骨质疏松大鼠骨组织骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)mRNA表达及其骨密度的影响,探讨补肾活血颗粒治疗骨质疏松的作用机制,为临床使用补肾活血中药防治骨质疏松症(OP)提供实验依据。方法:将雌性SD大鼠80只随机分为模型组、补肾活血颗粒治疗组、倍美力阳性对照组、正常对照组4组;除正常组外,其余各组大鼠行双侧卵巢去除术,正常组大鼠行假手术处理;各组大鼠给予相应处理12 W。采用双能X线骨密度仪测定大鼠右股骨上干骺端骨密度、HE染色观察骨组织形态改变、免疫组织化学染色方法及荧光定量PCR检测骨组织OPG、RANK、RANKL相关蛋白和基因的表达。结果:补肾活血颗粒能够显著增加去势骨质疏松大鼠的骨密度;提高其骨组织OPG、RANK mRNA及蛋白的表达水平,降低RANKL mRNA及蛋白的表达水平;作用与阳性对照组相当。结论:补肾活血颗粒可显著增强去势骨质疏松大鼠的骨密度,促进OPG、RANK mRNA和蛋白的表达及抑制RANKL mRNA和蛋白表达是其部分作用机制。     

脉冲电磁场对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

目的:探讨脉冲电磁场(PEMFs)对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、PEMFs组,去卵巢组和PEMFs组大鼠行双侧卵巢切除术,术后PEMFs组给予脉冲电磁场治疗,干预12周后进行大鼠外周血液样本生化指标、骨密度及PCR分析。结果:干预12周后,PEMFs组大鼠血清TRACP 5b水平较去卵巢组显著降低(P0.01);PEMFs组骨密度相比去卵巢组显著增高(P0.05);OPG mRNA表达显著增加(P0.01),RANKL mRNA表达显著降低(P0.05)。结论:脉冲电磁场可能通过对RANKL/RANK/OPG信号系统的调节,抑制骨吸收,对治疗去卵巢大鼠骨质疏松有良好疗效。     

左归丸联合温和灸对骨质疏松症模型大鼠骨密度、骨保护素mRNA及核因子κB受体活化因子配体mRNA的影响

目的探讨左归丸联合温和灸治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法 40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组,每组10只。模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组采用手术完整摘除双侧卵巢法制造骨质疏松症模型。造模3个月后左归丸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃,左归丸+温和灸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃+长强穴艾灸治疗,空白组和模型组予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃。各组均干预6周。干预前后测定大鼠股骨近端及第2腰椎骨密度,干预后通过PCR法检测大鼠骨组织骨保护素(OPG)mRNA和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL降低,RANKL mRNA表达上升(P0.05或P0.01);与模型组比较,左归丸组、左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均升高,RANKL mRNA表达降低(P0.05或P0.01),且左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均较左归丸组升高,RANKL mRNA表达较左归丸组降低(P0.05)。结论左归丸联合温和灸能明显升高骨质疏松症大鼠的骨密度,上调OPG mRNA表达、下调RANKL mRNA表达可能是其作用机制之一。     

补肾壮骨中药复方对去卵巢骨质疏松症大鼠骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达的影响

目的:通过骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达,探讨绝经后骨质疏松症(PMOP)的发病机制以及补肾壮骨中药复方的疗效机理。方法:去卵巢复制骨质疏松症大鼠模型按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、补肾组、钙尔奇D组、骨疏康组,灌胃12周检测骨密度、Dlx5 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组股骨骨密度明显降低,骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显降低;与模型组比较,补肾组、骨疏康组股骨骨密度明显升高,补肾组、骨疏康组骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显上调。结论:PMOP的发病机制之一可能是骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达降低,补肾壮骨中药复方可能通过上调骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达,有效防治绝经后骨质疏松症。     

补肾中药对去卵巢大鼠骨组织ER、OPG表达的促进作用

通过检测去卵巢大鼠给予补肾中药后腰椎内ERmRNA及OPG mRNA的表达,进一步探讨补肾中药防治骨质疏松的分子机制.将雌性3月龄SD大鼠48只,随机分为卵巢切除 补肾中药防治(HDP),卵巢切除 雌激素(倍美力)防治(ER),骨质疏松(卵巢切除)(OVX)及正常对照组(SHAM)4组,每组12只.术后12周处死大鼠,取L3椎体,异硫氰酸胍一步法提取总RNA,嵌套式反转录聚合酶链反应(NRT-PCR),扩增待检测各组ERmRNA及OPGmRNA的表达.同时取L4椎体,行骨组织形态计量学检测.结果显示HDP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率分别为75.0%和66.7%;EP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均为83.3%;OVX组各例ER mRNA均无表达,2例OPG mRNA呈弱阳性表达(阳性率为16.7%);SHAM组呈ER mRNA及OPG mRNA阳性表达.χ2检验,HDP组与ER组比较ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均无显著性差异(P＞0.05);该两组与OVX组比较,ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均有高度显著性差异(P＜0.01);而与SHAM组比较,HDP组ERmRNA,ER组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率无显著性差异(P＞0.05),但HDP组OPG mRNA阳性表达率有显著性差异(0.01＜P＜0.05).骨组织形态计量学检测,OVX组骨体积、骨小梁厚度及骨小梁数目均比SHAM组显著减少,而骨小梁间隔显著增大.同EP组相似,HDP组骨体积、骨小梁厚度显著增加,虽也使骨小梁间隔稍有减少,但与OVX组比较无统计学差异.表明补肾中药通过直接作用于骨组织中ER,增强ER mRNA的表达,并刺激OPG的分泌,从而有望替代雌激素,对去卵巢大鼠的骨质疏松有明显的防治作用.     

温肾通络止痛汤对去卵巢模型大鼠骨密度与血清生化指标的影响

目的:通过观察温肾通络止痛汤对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响,探究其治疗绝经后骨质疏松症的机制。方法:选用3个月龄SD雌性大鼠72只,60只行双侧卵巢切除(OVX)后,随机分为模型组(OVX组),戊酸雌二醇组,温肾通络止痛汤高剂量组、中剂量组、低剂量组,其余12只为假手术组。通过骨密度和骨代谢生化指标测定,评价温肾通络止痛汤治疗绝经后骨质疏松症的效果。结果:温肾通络止痛汤可以防止去卵巢SD雌性大鼠胫骨骨密度降低,减少血清白细胞介素-6(IL-6)、核因子κB受体活化因子配基(RANKL)表达,提高血清骨保护素(OPG)水平,从而降低血清RANKL/OPG比值,达到抗骨质疏松的作用。结论:温肾通络止痛汤治疗绝经后骨质疏松症的作用机制主要为下调血清IL-6、降低RANKL/OPG比值,从而抑制破骨细胞活性,提高骨密度。     

小鼠去卵巢骨质疏松模型的建立及OPG／RANKL的表达

目的：建立小鼠去卵巢骨质疏松模型，并检测骨基因调控因子的表达水平。方法：取小鼠行切除卵巢手术和假手术后3周，测定子宫重量系数，进行石蜡切片病理学检查，并采用RT—PCR测定护骨素（OPG）和细胞核因子-κB受体激活物配基（RANKL）的相对表达水平。结果：小鼠去卵巢后3周，与假手术组相比，去卵巢组的子宫重量系数、骨小梁分布密度和骨皮质厚度降低，骨组织中的OPG和RANKL mRNA相对表达水平分别显著性降低和升高，其比例极其显著性降低。结论：成功建立了小鼠去卵巢骨质疏松模型，并展开骨基因调控因子的检测，为实验室研究药物对骨质疏松的影响提供方法学基础。     

左归丸对去势大鼠骨密度及骨组织TNF-α、IL-1和IL-6表达的影响

目的:观察左归丸对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度及骨组织TNF-α、IL-1和IL-6 m RNA表达的影响。方法:取雌性SD大鼠45只,随机分为假手术组、模型组与左归丸组,每组15只。模型组与左归丸组大鼠行双侧卵巢切除制备骨质疏松症模型,假手术组大鼠行假手术处理。造模成功后,3组分别予以0.9%氯化钠注射液、0.9%氯化钠注射液及左归丸混悬液灌胃,12周后,观察大鼠骨密度、骨组织病理学及骨组织TNF-α、IL-1和IL-6 m RNA表达变化。结果:1与模型组相比,左归丸组大鼠全身及腰椎骨密度明显提高,差异有统计学意义(P0.05)。左归丸组与假手术组相比,大鼠全身及腰椎骨密度无明显统计学差异(P0.05)。2HE染色显示模型组骨小梁数目明显减少,排列不整齐,可见微骨折,髓腔增大,左归丸组骨质疏松状态明显改善,接近假手术组。3与模型组相比,左归丸组大鼠腰椎骨组织中TNF-α、IL-1和IL-6 m RNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。左归丸组与假手术组相比,腰椎骨组织中TNF-α、IL-1和IL-6 m RNA表达无明显统计学差异(P0.05)。结论:左归丸具有明显抗去势大鼠骨质疏松作用,调节骨组织中TNF-α、IL-1和IL-6表达是其可能作用机制。     

益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的：观察益骨胶囊治疗用药对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达的影响，以探讨益骨胶囊治疗骨质疏松症的可能机理。方法：36只10月龄SD雌性大鼠随机抽取12只为假手术组，剩余24只待手术造馍后随机分为2组：模型组、益骨胶囊组；以双侧卵巢切除法复制骨质疏松模型：采用RT—FQ—PCR方法检测骨组织Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果：益骨胶囊组骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达明显高于模型组（P〈0．05），与假手术组相近（P〉0．05）。结论：益骨胶囊能促进骨组织Ⅰ型胶原mRNA基因表达。     

针药并用对绝经后骨质疏松症大鼠血清E2、骨密度的影响

目的观察电针、药物并用对绝经后骨质疏松模型大鼠血清E2、骨密度的影响。方法制备大鼠模型,并将其随机分为模型组、电针组、药物组、针药组,分别进行电针、药物、针药治疗后观测指标S-E2及腰椎L1-L4、右侧股骨骨密度(BMD)。结果针药组与模型组、电针组、药物组比较,S-E2、腰椎L1-L4和右侧股骨骨密度(BMD)升高明显(P<0.05)。结论针药并用可以有效调节绝经后骨质疏松大鼠S-E2的含量,增加腰椎L1-L4和右侧股骨骨密度,改善骨质疏松。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠BMP2/Smad信号通路的影响

目的:研究补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨形态发生蛋白2(BMP2)/Smad信号通路的影响。方法:72只6月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组(24只),手术组(48只),双侧卵巢切除法造模,术后3个月两组各随机选取12只检测骨密度验证造模成功。手术组剩余的36只大鼠随机分为双侧卵巢切除模型组(OVX),补肾健脾活血方组(BSJPHX,给药剂量2.979 g·kg~(-1)),阿仑膦酸钠维D3片(Ⅱ)组(ALN,给药剂量1.02 mg·kg~(-1)),假手术组,OVX组给与等体积生理盐水灌胃。12周后处死各组大鼠,双能X射线法检测大鼠全身骨密度,生物力学试验进行胫骨三点弯曲试验,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BMP2,Smad1,Runt相关转录因子2(Runx2),骨保护素(OPG)基因的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BMP2,p-Smad1,Runx2,OPG蛋白的表达。结果:造模3个月后,与假手术组比较,OVX组大鼠骨密度明显降低,最大载荷及刚度均降低,BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平显著降低(P0.05);给药3个月后,与OVX组比较,BSJPHX组,ALN组骨密度均明显增高,最大载荷及刚度均增加,能显著提高BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平(P0.05)。结论:补肾健脾活血方既能通过调控BMP2/Smad通路的信号转导,又能上调OPG的表达,这可能是补肾健脾活血方防治绝经后骨质疏松症的机制之一。     

补肾宁心方对小鼠绝经后骨质疏松的影响

目的 探讨补肾宁心方防治绝经后骨质疏松的作用.方法 建立BALB/c小鼠绝经后骨质疏松模型,灌服补肾宁心方浓缩液（简称补肾方组）,并以17 β-雌二醇为阳性对照（简称E2组）,以生理盐水为阴性对照（简称模型组）.12周后处死,取血测Th1/Th2型细胞因子;取椎骨（L3-4）和左股骨测骨密度（BMD）;取右股骨行骨组织形态计量分析;胫骨提取总RNA,半定量RT-PCR分析护骨素（OPG）的mRNA表达.计算子宫对体重的比值,并行子宫组织切片观察.结果 补肾方组的IFN-γ水平较模型组明显升高（P＜0.01）,而IL-4水平低于模型组（P＜0.05）.补肾方组与E2组小鼠的BMD均改善,骨小梁面积增加,OPG mRNA表达增加;但补肾方组小鼠的子宫明显小于E2组（P＜0.05）,与模型组比较差异无显著性.结论 补肾方能够选择性地防治绝经后骨质疏松,对子宫无或仅有轻微的刺激作用.其机制可能与调节Th1/Th2的偏移及提高OPG的表达,抑制破骨细胞的活性有关.     

活血补肾方对去卵巢大鼠骨密度及骨力学性能的影响

目的研究活血补肾方对去卵巢大鼠骨密度和生物力学性能的影响。方法将雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和实验组。采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制绝经后骨质疏松症模型,应用活血补肾方防治12周后进行取材和实验指标检测:用双能X线骨密度仪检测腰椎骨密度;用力学试验机检测股骨力学性能。结果与模型组比较,实验组腰椎骨密度显著升高(P0.01),股骨近端生物力学水平明显改善(P0.05)。结论活血补肾方可以明显改善去卵巢大鼠腰椎骨密度及股骨近端生物力学性能。     

针刺干预对去卵巢大鼠血清胃饥饿素和骨密度的影响

目的:观察针刺对卵巢切除大鼠血清胃饥饿素(ghrelin)和骨密度的影响,探讨针灸治疗绝经后骨质疏松症的可能机制。方法:60只3月龄SD健康雌性大鼠,其中40只行双侧卵巢摘除术,20只做假手术,3个月后骨密度检测证实骨质疏松造模成功后各处死10只。剩余卵巢摘除大鼠随机分为模型组、针刺组、雌激素组,每组各10只。针刺组取①"关元""三阴交",②"肾俞""后三里",两组穴位交替电针治疗(连续波、2Hz、1～3mA),每次治疗20min,每日1次,连续治疗3个月。雌激素组于大鼠后腿部皮下注射苯甲酸雌二醇(0.1mg/kg),每周1次,连续3个月。应用骨密度仪测定腰椎及股骨骨密度,采用ELISA法检测血清ghrelin含量。结果:模型组大鼠血清中ghrelin的水平明显升高,骨密度值显著下降(均P<0.05);与模型组比较,针刺组和雌激素组血清中ghrelin的水平明显降低(P<0.05),同时骨密度值也有明显的提高(P<0.05);针刺组对ghrelin和骨密度的作用不及雌激素组(P<0.05)。结论:针刺干预能提高卵巢切除大鼠骨密度,下调血清ghrelin的水平,但整体作用不及雌激素。     

左、右归丸对去卵巢骨质疏松症大鼠模型骨密度及骨代谢的影响

目的:观察左、右归丸对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度及骨代谢的影响。方法:通过切除6月龄SPF级SD雌性大鼠双侧卵巢的方法建立绝经后骨质疏松症大鼠模型。造模10周后,将80只模型大鼠随机分为左归丸高、中、低剂量组(n=10),右归丸高、中、低剂量组(n=10),阳性药组(n=10),模型组(n=10),造模时只切除腹腔内部分脂肪组织而未切除卵巢的实验大鼠设为假手术组(n=10),并分别ig给予相应药物或蒸馏水,各给药剂量分别为左、右归丸高剂量组20 g·kg-1·d-1;左、右归丸中剂量组10 g·kg-1·d-1;左、右归丸低剂量组5 g·kg-1·d-1;阳性药组为戊酸雌二醇片0.1 mg·kg-1·d-1;假手术组和模型组ig 10 m L·kg-1·d-1生理盐水。干预10周后,检测实验大鼠股骨骨密度(BMD)、骨组织形态学改变,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、骨保护素(OPG)的含量。结果:与假手术组相比较,模型组大鼠BMD,OPG显著降低,而BALP,OC显著升高(P0.05),其病理改变与绝经后骨质疏松症患者改变一致;与模型组相比较,左、右归丸干预组大鼠BMD增加,骨组织形态改善,血清OPG含量升高、血清BALP,OC含量降低(P0.05)。结论:左、右归丸能够抑制骨吸收,纠正骨代谢失衡对绝经后骨质疏松症具有一定的治疗作用。     

益妇宁软胶囊对去势大鼠骨组织雌激素受体表达的影响

目的:研究不同剂量的益妇宁软胶囊(YFN)对去势大鼠骨组织中雌激素受体(ER)表达的影响,探讨该方对绝经后骨质疏松症(PMO)的治疗机制.方法:采用3月龄SD雌性大鼠60只,50只行双侧卵巢切除术,随机分为YFN大剂量组(相当于原生药0.8 g/kg)、YFN中剂量组(相当于原生药0.4 g/kg)、YFN小剂量组(相当于原生药0.2 g/kg)和阳性药对照组(己烯雌酚0.1 mg/kg)、模型对照组,每组10只;另10只为假手术组.术后4周开始给药,给药12周后收集标本.采用放免法测定血清雌二醇水平,Western blotting免疫印迹法检测胫骨组织中ER表达情况.结论:YFN能明显提高去势大鼠体内雌激素水平及骨组织雌激素受体的表达量,通过这两条途径起到治疗绝经后骨质疏松症的作用.     

一种新型人甲状旁腺素相关肽对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用

 目的 观察一种新型人甲状旁腺素相关肽（ 8L -hPTH ）对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。 方法 88 只 3 月龄 SD 健康雌性大鼠其中 64 只行双侧卵巢摘除术 16 只做假手术。 3 个月后各取 8 只测定腰椎及股骨骨密度。将余下的 56 只卵巢摘除大鼠随机分为 7 组每组 8 只,分别为 8L -hPTH 高、中、低剂量治疗组 ( 剂量分别为 20 , 10 , 5 μg·kg^-1·d^-1) ; hPTH(1-34) 高、中、低剂量对照组 ( 剂量分别为 20 , 10 , 5 μg·kg^-1·d^-1) ;生理盐水组（ 0.5 mL·d^-1 ）,各组均为皮下注射。假手术组余下的 8 只以及剩余 8 只未做任何手术的大鼠,给药方式及剂量均同生 理盐水组。连续给药 3 个月后,比较各组大鼠股骨、腰椎骨密度并用扫描电镜观察股骨情况。 结果 双侧卵巢摘除 3 个月后,大鼠腰椎及股骨骨密度均明显低于假手术组 ( P<0.01) ,说明造模成功。给药 3 月后, 8L -hPTH 各治疗组大鼠与生理盐水组相比较,股骨、腰椎骨密度均显著升高 ( P<0.05) ,骨小梁宽度有极显著增加 ( P<0.001) ,效果呈剂量依赖性。 结论 皮下注射 8L -hPTH(5~20 μg·kg^-1·d^-1) 对去卵巢骨质疏松大鼠有明显的治疗作用。