解脲脲支原体基因型的检测及其意义

目的 了解解脲脲支原体(Uu)基因分型情况,探讨其基因分型临床意义.方法 选择2010年8月-2011年2月在绍兴县中心医院门诊380例女性生殖道感染患者,以及同期无自觉症状的240例健康体检者,分别收集宫颈拭子标本,运用荧光定量PCR技术(RT-PCR)筛选出Uu阳性的初诊样本,设计分型引物,运用反向点杂交技术进行基因分型检测.结果 患者组Uu阳性270例,阳性率为71.05％,健康组阳性104例,阳性率为43.33％;患者组单纯U.parvum群感染率为63.77％,低于健康组的78.79％,差异有统计学意义(P＜0.05);健康组中解脲脲支原体parvum群以其中的1、3、6基因型的单型别为主;患者组中Uu两群感染率较健康组高,差异有统计学意义(P＜0.05);患者组U.urealyticum群与1型的多型别感染率高于健康组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 U.parvum群,尤其是其中的1、3、6型别是正常人群携带的可能性较大,U.urealyticum则有可能和1型起协同作用或独自导致疾病.     

单克隆抗体免疫荧光法检测解脲支原体

非淋性尿道炎 (ＮＧＵ)是指由淋球菌以外的其他病原体所引起的尿道炎。解脲支原体 (ＵＵ)是ＮＧＵ最常见的病原体。ＵＵ的实验检测方法有 :培养法 ,细胞学检查 ,直接荧光抗体检查 ,酶免疫法 ,分子生物学方法 ,血清学检查等。快速、简便、价廉、特异性好是临床检验的基本要求 ,自 2 0 0 0年 6月至 2 0 0 0年 12月对 10 0例泌尿、生殖系感染患者 ,应用单克隆抗体免疫荧光法检测ＵＵ。同时做ＵＵ培养对照。现报告如下。1　材料与方法1·1　标本采集　先用消毒棉签将尿道或宫颈口分泌物擦干净 (女性患者需用扩阴器 ) ,再换一支棉签将其深入到尿…     

培养法检测解脲支原体感染

非淋球菌性尿道炎是国外目前发病率最高的一种性传播疾病，近年来国内发病也日渐增多。许多资料表明，解脲支原体与人型支原体与非淋球菌性尿道炎有关。我院对性病门诊483例可疑非淋球菌性尿道炎患者进行了支原体液体培养，现将结果报告如下：     

性病病人解脲支原体检测分析

解脲支原体(Uu)是性病的重要病原体之一,近年来,其感染有上升的趋势.开展解脲支原体检测在握性病病人的感染状况及其变化规律,对于指导临床治疗、预防传播非常重要.为此,将我站性病门诊1997年就诊病人解脲支原体的检测情况报告如下:1 材料与方法1.1 病人来源 均为1997年在我站性病门诊就诊的病人,绝大多数来自市区,年龄3～68岁.1.2 培养基 解脲支原体肉汤购自中国药品生物制品检定所,批号960307.按配方要求,加蒸馏水溶解,116℃灭菌20分钟,冷至50℃每100ml加小牛血清10ml、20%尿素1ml、青霉素20万lU、两性霉素100μg,混匀,无菌分装试管,-20℃保存备用.固体培养基:在液体培养基灭菌前,每100ml加入日本产琼脂粉1.1g,其余同液体培养基,倒平板,4℃保存备用.1.3 样品采样、培养及鉴定 用无菌棉拭子采集病人尿道、阴道和子宫颈分泌物,部份病人采前段尿,立     

单克隆抗体免疫荧光法检测解脲支原体

<正> 非淋菌性尿道炎(NGU)是指由淋球菌以外病原体引起的尿道炎。解脲支原体(UU)是NGU最常见的病原体之一。UU的实验室检测方法有培养法、细胞学检查、直接荧光抗体检查、酶免疫法、分子生物学方法、血清学检查等。快速、简便、价廉、特异性好是临床检验的基本要求,自2000年6月～12月对100例泌尿、生殖道感染患者,应用单克隆抗体免疫荧光法检测UU,同时做UU培养对照。现报告如下。     

120株解脲支原体耐药性检测

非淋菌性尿道炎 (NGU)是我市主要的性传播疾病 ,由于其可并发前列腺炎、附睾炎、输卵管炎、不育等 ,严重危害人们健康。解脲支原体 (UU)是NGU主要的病原体之一 ,近年来其耐药株屡见报导 ,为了解我市UU耐药情况 ,对 12 0株UU进行药物敏感试验 ,结果报告如下。材料与方法1　检测试剂　采用广东天洋电子生物有限公司生产的泌尿生殖道支原体药敏试剂盒 ,该试剂盒选用的 12种抗菌药物分别为 :四环素、螺旋霉素、红霉素、罗红霉素、强力霉素、泰利必妥、美满霉素、交沙霉素、阿奇霉素、克拉霉素、司帕沙星、可妥必妥。2　标本来源　 12 0例N…     

泌尿生殖道解脲脲支原体、人支原体检测与耐药性分析

目的 了解解脲脲支原体(Uu)和人支原体(Mh)在绍兴地区泌尿生殖道感染中的检测及耐药情况.方法 采用法国生物梅里埃公司的试剂盒进行Uu、Mh的检测和药敏试验.结果 2678例疑似泌尿生殖道感染的患者,有980例支原体(My)培养阳性,阳性率为36.6%,其中Uu阳性763例占28.5%;Mh阳性116例占4.3%;Uu和Mh混合阳性101例占3.8%;药敏试验Uu和Mh对抗菌药物敏感性最高的是普那霉素(原始霉索)、交沙霉素、多西环素和四环素,对环丙沙星、氧氟沙星、红霉素、克拉霉素和阿奇霉素耐药率最高.结论 临床上支原体感染的治疗应根据实验室的药敏结果选择合适的抗菌药物.     

阴道分泌物解脲支原体检测结果分析

目的:了解本地区解脲支原体(UU)所致妇女生殖道感染现状,探讨其危险因素,以便制定相应的预防措施,保障妇女的生殖健康。方法:2005年1～11月到我单位妇科门诊就诊的有自觉症状的妇女为研究对象,按年龄分组:<20岁组、21～30岁组、31～40岁组、41～50岁组、>51岁组,并进行问卷调查、妇科检查和解脲支原体培养。结果:916例中检出UU阳性者217例,检出率23.68%。UU感染的病例中以21～30岁组最多,检出率30.39%(138/454),占全部检出的63.59%(138/217),检出率远远高于其他年龄组,差别有显著性(P<0.05)。配偶或其本人有婚外性行为者,UU检出率显著高于无婚外性行为者(P<0.05)。未避孕者或采用其他方式避孕者UU检出率显著高于避孕套避孕者(P<0.05)。结论:UU是生殖道感染较为常见的病原体,以年轻性活跃期、有婚外性行为或未婚多性伴、未采用安全套避孕者感染率为高。     

男性非淋患者CT DNA和UU DNA流行病学比较

目的:为了研究男性非淋患者CT DNA和UU DNA流行病学特征。方法:FQ-PCR用于定量检测男性生殖道样本中的UU DNA和CT DNA。结果:非淋病原体感染率UU DNA(26.64%,517/1941)显著高于CT DNA(9.26%,177/1911)(χ2=196.78,P=1.05E-44),而载量比较显示UU DNA(4.47±1.36)显著低于CT DNA(4.72±1.85)(t=4.913,P=9.47E-7);UU DNA阳性率逐年上升(r=+0.87,p=0.028),载量逐年下降(r=-0.75,P=0.020);CT DNA阳性率无统计学变化(r=+0.48,P=0.19),载量逐年下降(r=-0.88,P=0.0016)。结论:UU是男性非淋菌性尿道炎的主要病原体,CT急性感染的比例高于UU,UU感染流行有增加的趋势,CT感染趋势较为稳定。     

荧光定量PCR检测生殖道内沙眼衣原体感染的应用

目的评价DNA定量测定技术在生殖道衣原体感染诊断中的应用价值。方法比较荧光定量DNA测定与传统检测手段对衣原体感染的检测结果。结果用荧光定量PCR法测定DNA来检测沙眼衣原体（CT）感染,其敏感性和特异性均比传统的方法高。结论CT—DNA定量测定不宜用作短期判愈,在沙眼衣原体诊断中具有巨大的潜力。     

解脲支原体和沙眼衣原体感染与输卵管阻塞性不孕的临床研究

目的研究支原体、衣原体感染患者与输卵管阻塞性不孕之间的关系。方法2005年10月至2008年10月笔者所在科室不孕不育患者150例，妇科门诊术前检查患者150例，分为不孕症患者组和门诊患者组。采用多聚酶链反应技术（PCR）和细菌培养法对两组患者宫颈分泌物沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU）进行检测。发现有UU、CT感染后，给予针对性治疗，复查结果证实感染治愈后，行输卵管造影。结果（1）两组UU和CT感染率相比，不孕症患者组高于门诊患者组，有显著差异（P〈0．01）；（2）不孕症患者组未感染者和感染者输卵管阻塞发病率比较有显著差异（P〈0．01）。结论说明UU和CT感染与输卵管阻塞呈正相关。     

异常妊娠者阴道加德纳菌和解脲脲原体DNA检测结果分析

目的探讨阴道加德纳菌、解脲脲原体与异常妊娠的关系。方法采用套式聚合酶链反应（n-PCR）法对96例异常妊娠者、104例足月正常妊娠者进行加德纳菌和解脲脲原体联合分子检测。结果96例异常妊娠者加德纳菌DNA、解脲脲原体DNA阳性率及总阳性（有任一阳性者）率分别为39．58％，66．67％，81．25％；104例足月正常妊娠者分别为18．27％，18．27％，30．77％，两组比较，差异均有显著性（P〈0．005）。单独加德纳菌阳性或解脲脲原体阳性导致早产和俄胎膜早破的发生率分别为22．22％和60．37％，风险指数（RR）为1．9和9．9；而上述两菌均阳性时，早产和俄胎膜早破的发生率达66．67％，RR为13．0。结论加德纳菌和解脲脲原体感染与不良妊娠结局相关，两者混合感染可协同增加早产和域胎膜早破的危险性。     

标本存放时间对荧光定量PCR检测HBV-DNA结果的影响

目的 探讨标本存放时间及温度对PCR检测乙肝病毒DNA（HBV-DNA）结果的影响.方法 收集乙型肝炎表面抗原阳性的血清标本64例,采用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术对不同时间点及不同温度条件下的同批标本进行HBV-DNA定量检测.结果 在室温和2 ℃～8 ℃条件下存放7 d、14 d和30 d的血清标本,其HBV-DNA定量结果均无显著性差异（P＆gt;0.05）.而在-20 ℃条件下更可长期保存.结论 在本室实验条件下,标本存放时间及温度对HBV-DNA的检测结果无明显影响.若资源有限可放宽标本保存条件来较长期的保存所需标本以供临床及科研等所需.     

Amide isosteres in structure-activity studies of antibacterial minor groove binders

Antibacterial minor groove binders related to the natural product, distamycin, are development candidates for novel antibiotics. Alkenes have been found to be effective substitutes for the isosteric amide links in some positions and alkyl groups larger than methyl have been found to increase binding to DNA in both selectivity and affinity. However the impact of other isosteres such as diazenes and the position of an alkyl group with respect to DNA binding and antibacterial activity are not known. The effects of some systematic variations in the structure of polyamide minor groove binders are investigated. Isosteres of the amide link (alkenes and diazenes) are compared: it is shown that all three are competent for binding to DNA but that alkene links give the tightest binding and highest antibacterial activity; no significant antibacterial activity was found for compounds with a diazene link. Within a series of alkene linked compounds, the effect of branched N-alkyl substituents on binding to DNA and antibacterial activity is investigated: it was found that C3 and C4 branched chains are acceptable at the central pyrrole residue but that at the pyrrole ring adjacent to the basic tail group, a C4 branched chain was too large both for DNA binding and for antibacterial activity. The active branched alkyl chain compounds were found to be especially active against Mycobacterium aurum, a bacterium related to the causative agent of tuberculosis.     

240例不孕症患者解脲支原体和衣原体检测结果分析

目的:了解不孕症患者解脲支原体(UU)和衣原体(CT)的感染状况及其与不孕症的关系。方法:对240例行输卵管造影的不孕患者(观察组)和152例正常生育的孕妇(对照组)进行宫颈分泌物的UU和CT检测。结果:UU感染率观察组为65.8%,对照组为44.1%,两组比较差异有统计学意义(P<0.001)。其中有输卵管炎症的不孕症患者中解脲支原体感染明显高于输卵管正常的不孕症患者,差异有统计学意义(P<0.001)。观察组中仅2例存在衣原体感染。结论:UU与不孕症密切相关,对不孕症患者行UU常规检测和及时治疗是必要的,CT检测可不作为常规检查项目。     

荧光定量PCR鉴别检测U.Urealyticum和U.Parvum方法的建立

目的:建立定量检测U.Urealyticum(UU)、U.Parvum(UP)的灵敏、特异的荧光定量PCR方法.方法:选择uu和UP的尿素酶基因设计两对引物和对应的探针组建2个TaqMan PCR反应体系,应用克隆的质粒建立系列标准品,作为模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做重复性试验和特异性分析.结果:UU和uP两标准曲线具有良好的线性关系,相关系数分别为0.9895和0.9956,无非特异性扩增.结论:应用实时TaqMan PCR法定量检测UU、UP,具有快速、特异、灵敏、便捷的特点,为解脲脲原体感染的流行病学和病理机制的研究奠定了基础.     

肝组织中HBV cccDNA荧光定量聚合酶链反应检测法的建立

目的 建立和优化一种灵敏、特异的检测肝组织中乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)荧光定量聚合酶链反应(荧光定量PCR).方法 设计检测HBV DNA(tDNA)和cccDNA特异性引物及探针,用3.44×10⁰-3.44×10⁹copies/μl含HBV全基因组序列(C基因型)质粒作为标准品,建立荧光定量PCR检测标准曲线.取33例乙肝肝癌患者肝组织标本、13例慢性乙肝患者肝活检组织标本和10例非乙肝患者肝组织标本,验证该法灵敏度和特异度.提取肝组织中DNA,取一部分进行质粒安全ATP依赖的DNA酶(PSAD)酶切;另一部分不酶切作为tDNA和β-globin检测样本,分别进行HBV cccDNA、tDNA和p-globin定量检测,以β-globin为参比,对每个细胞的HBV cccDNA和tDNA含量进行标准化.结果 检测肝组织中HBV cccDNA和tDNA定量的线型范围均为3.44 × 10⁰-3.44×10⁹ copies/μl.检测HBV cccDNA和HBV DNA下限均为3.44×10⁰copies/μl.33例乙肝肝癌患者和13例慢性乙肝患者的肝组织中HBV cccDNA最低含量分别为0.003 copies/cell和0.031 copies/cell;检测10份非乙肝肝癌患者的肝组织标本均为阴性.应用PSAD消化肝组织中提取的DNA可减少假阳性,提高cccDNA检测法特异度达7.24× 10²倍.对2例乙肝肝癌患者的肝组织标本重复检测5次,Ct值的变异系数为0.224%～0.609%.结论 该方法灵敏度和特异度高,重复性好,可用于检测肝组织中HBV cccDNA.     

肝组织中HBV cccDNA荧光定量聚合酶链反应检测法的建立

目的 建立和优化一种灵敏、特异的检测肝组织中乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)荧光定量聚合酶链反应(荧光定量PCR).方法 设计检测HBV DNA(tDNA)和cccDNA特异性引物及探针,用3.44×100-3.44×109copies/μl含HBV全基因组序列(C基因型)质粒作为标准品,建立荧光定量PCR检测标准曲线.取33例乙肝肝癌患者肝组织标本、13例慢性乙肝患者肝活检组织标本和10例非乙肝患者肝组织标本,验证该法灵敏度和特异度.提取肝组织中DNA,取一部分进行质粒安全ATP依赖的DNA酶(PSAD)酶切;另一部分不酶切作为tDNA和β-globin检测样本,分别进行HBV cccDNA、tDNA和p-globin定量检测,以β-globin为参比,对每个细胞的HBV cccDNA和tDNA含量进行标准化.结果 检测肝组织中HBV cccDNA和tDNA定量的线型范围均为3.44 × 100-3.44×109 copies/μl.检测HBV cccDNA和HBV DNA下限均为3.44×100copies/μl.33例乙肝肝癌患者和13例慢性乙肝患者的肝组织中HBV cccDNA最低含量分别为0.003 copies/cell和0.031 copies/cell;检测10份非乙肝肝癌患者的肝组织标本均为阴性.应用PSAD消化肝组织中提取的DNA可减少假阳性,提高cccDNA检测法特异度达7.24× 102倍.对2例乙肝肝癌患者的肝组织标本重复检测5次,Ct值的变异系数为0.224%～0.609%.结论 该方法灵敏度和特异度高,重复性好,可用于检测肝组织中HBV cccDNA.

Abstract：

Objective To establish and optimize a sensitive and specific quantitative realtime polymerase chain reaction(PCR)method for detection of hepatitis B virus covalently closed circular DNA(HBV cccDNA)in liver tissue. Methods Specific primers and probes were designed to detect HBV DNA(tDNA)and cccDNA. A series of plasmids(3.44 × 100-3.44 × 109 copies/μl)containing a full double-stranded copies of HBV genome(genotype C)were used to establish the standard curve of real-time PCR. Liver samples of 33 patients with HBV related hepatocellular carcinoma(HCC), 13 Chronic hepatitis B patients(CHB)and 10 non-HBV patients were collected to verify the sensitivity and specificity of the assay. A fraction of extracted DNA was digested with a Plasmid-Safe ATP-dependent Dnase(PSAD)for HBV cccDNA detection and the remaining was used for tDNA and β-globin detection. The amount(copies/cell)of HBV cccDNA and tDNA were measured by a real-time PCR, using β-globin housekeeping gene as a quantitation standard. Results The standard curves of real-time PCR with a linear range of 3.44 × 100 to 3.44 × 109 copies/μl were established for detecting HBV cccDNA and tDNA, and both of the lowest detection limits of HBV cccDNA and tDNA were 3.44 × 100 copies/μl. The lowest quantitation levels of HBV cccDNA in liver tissues tested in 33 HBV related HCC patients and 13 CHB patients were 0.003 copies/cell and 0.031copies/cell, respectively. HBV cccDNA and tDNA in liver tissue of 10 non-HBV patient appeared to be negative. The true positive rate was increasing through the digestion of HBV DNA by PSAD, and the analytic specificity of cccDNA detection improved by 7.24 × 102 times. Liver tissues of 2 patients were retested 5 times in the PCR for detecting cccDNA and the coefficience of variations on cycle threshold (Ct)were between 0.224%-0.609%. Conclusion A highly sensitive and specific quantitative real time PCR method for the detection of HBV cccDNA in liver tissue was established and could be used for clinical and epidemiological studies.