奥曲肽抑制人肝癌BEL-7402细胞生长的实验研究

目的　探讨生长抑素类似物奥曲肽 (OCT)在体内对人肝癌BEL - 74 0 2细胞生长的影响。方法　建立人肝癌细胞株BEL - 74 0 2裸鼠移植瘤模型 ,实验组皮下注射奥曲肽 10 0 μg·kg- 1 ·d- 1 ,对照组给予生理盐水 2 0μl d ,给药 2 8天后处死裸鼠。取瘤 ,测量瘤重、瘤体积后 ,检测移植瘤组织中血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、微血管密度 (MVD)的表达。结果　奥曲肽组瘤重、瘤体积与生理盐水组间有显著性差异 (P <0 .0 5 )。奥曲肽组VEGF的表达明显低于生理盐水组 (P <0 .0 5 ) ,而MVD在奥曲肽组的表达虽然低于生理盐水组 ,但统计学差异无显著性 (P =0 .0 5 5 )。结论　生长抑素类似物奥曲肽能够抑制裸鼠人肝癌移植瘤的生长 ,并能抑制瘤组织中VEGF的表达 ,同期移植瘤组织中微血管密度呈下降趋势。     

雄黄抗人肝癌BEL-7402细胞作用

目的:观察雄黄体外抗人肝癌BEL-7402细胞作用和作用机制.方法:采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对BEL-7402细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位.结果:与阴性对照组比,雄黄能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的生长和...     

小白菊内酯诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

小白菊内酯属于倍半萜内酯,是墨西哥、印度药用植物的活性成分,也是欧洲小白菊这一常用草药的活性成分[1],主要用于治疗偏头痛、炎症和各种肿瘤。20世纪90年代末,中国学者从中国特有药用植物观光木树皮中分离得到这一抗肿瘤活性物质,并且经过体外抑瘤实验证实,小白菊内酯(10.0μg/mL)对人肝癌细胞的体外抑制率为67.17%,可见其对人肝癌细胞抑制作用比较明显[2]。近年来,随着医学技术和分子生物学技术的发展及各种检测手段的出现,发现小白菊内酯可抑制NF-κB的激活[3,4],诱导细胞凋亡[1],产生细胞毒作用[5,6]。但有关从分子生物学水平研究小…     

胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响

目的 了解胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响.方法 12.5 μmol/L胡桃醌作用于BEL-7402细胞24h后固定,分别行HE染色、考马斯亮蓝染色、扫描电镜及透射电镜样品制备.结果 12.5 μmol/L胡桃醌处理组细胞形态和细胞骨架发生改变.扫描电镜结果显示BEL-7402细胞胞体体积缩小,与周围细胞群脱离,表面微绒毛卷曲、畸变、小球结构逐渐增多,细胞间连接逐渐断裂,细胞间隙增宽,有凋亡小体形成.透射电镜结果显示胡桃醌作用BEL-7402细胞24 h后,细胞内质网扩大,线粒体结构疏松,胞核核仁裂解,凋亡小体形成.结论 胡桃醌能有效改变人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构,诱导细胞凋亡.     

奥曲肽对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤凋亡的影响

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽（OCT）对裸鼠人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤凋亡的影响。方法建立人肝癌细胞株BEL-7402裸鼠移植瘤模型,实验组皮下注射OCT100μg/kg.d-1,对照组给予相同容积的无菌生理盐水皮下注射,免疫组织化学染色检测OCT作用后裸鼠人肝癌BEL-7402组织中Bcl-2、Bax表达情况的改变,透射电镜观察OCT作用后裸鼠人肝癌BEL-7402组织超微结构的改变。结果 OCT作用后,移植瘤组织中凋亡抑制基因Bcl-2阳性表达率比对照组明显下降（P〈0.05）,凋亡促进基因Bax阳性表达率比对照组显著升高（P〈0.05）。电镜下可见OCT组移植瘤细胞表面微绒毛减少或消失,凋亡细胞多见等改变。结论 OCT能引起人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤组织中凋亡基因Bcl-2及Bax的表达发生改变,诱导组织细胞发生凋亡;OCT能引起裸鼠人肝癌BEL-7402组织超微结构发生典型的凋亡改变。     

奥曲肽抑制肝癌生长的实验研究

目的研究生长抑素类似物奥曲肽在体外、体内对肝癌生长及凋亡的影响.方法采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、DNA末端原位标记染色(TUNEL)及流式细胞技术检测奥曲肽对体外培养的肝癌细胞生长影响及凋亡的诱导作用.利用SMMC-7721肝癌细胞株建立裸鼠肝癌原位种植瘤模型,实验组皮下注射奥曲肽100μg@kg-1@d-1;对照组予生理盐水20μg@d-1;共给药8周.结果培养细胞经不同浓度的奥曲肽作用48h后,对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,且肝癌细胞3H-TdR掺入值与奥曲肽的浓度呈负相关(r=-0.97,P<0.01).TUNUL显示,1×10-6mol/L的奥曲肽作用24h后,肝癌细胞凋亡率为15.2%±2.4%;流式细胞检测可见明显的凋亡峰.奥曲肽治疗组裸鼠肝癌原位种植瘤重量明显低于对照组(0.27±0.05vs0.85±0.37,P<0.01).结论体内及体外实验表明,奥曲肽能有效抑制肝癌生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关.     

人参皂苷肠道代谢物诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的探讨一种新的人参稀有皂苷20-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-20(S)-原人参二醇皂苷(IH-901)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法以0、6.25、12.5、25、50、75、100μmol/L的IH-901作用于体外培养的BEL-7402细胞,通过MTT法检测IH-901对细胞生长的抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,AO/EB的荧光核染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果MTT实验显示IH-901抑制BEL-7402细胞的生长,呈时间及浓度依赖的方式;显微镜下观察到典型的凋亡形态变化和生化特征:细胞固缩,核染色质凝聚,出现凋亡小体;AO/EB的荧光核染色后,观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在G0/G1期。结论IH-901能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,稀有人参皂苷IH-901可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

奥曲肽对人胃癌细胞SGC-7901增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的：观察不同浓度的奥曲肽(octreotide)单药或联合氟尿嘧啶(Fu)对人胃癌细胞SGC-7901生长的影响及能否阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡；同时探讨其对P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法：分别或联合应用奥曲肽或Fu作用于SGC-7901细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察细胞生长抑制，应用流式细胞技术检测细胞周期、凋亡及P-gp的表达。结果：奥曲肽可抑制SGC-7901细胞生长，其抑制作用呈浓度和时间依赖性，并具有饱和性；各浓度组奥曲肽均未引起细胞周期阻滞和凋亡；联合用药产生拮抗作用；奥曲肽能显著下调SGC-7901细胞P-gp的表达。结论：奥曲肽可能通过非凋亡途径抑制SGC-7901细胞增殖，由于拮抗作用因而不主张与Fu合用，奥曲肽有可能通过下调肿瘤细胞P-gp的表达而逆转耐药。     

蜂毒素对肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的影响

目的 :了解蜂毒素诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法 :肝癌细胞BEL 74 0 2经不同浓度的蜂毒素处理后 ,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖的抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白的表达。结果 :16 μg/ml蜂毒素作用肝癌细胞系BEL 74 0 2 ,12h抑制率为 (78.13±6 .15 ) % ,2 4h抑制率为 10 0 % ;4 ,8μg/ml蜂毒素对细胞的生长也有抑制作用 ,并且可诱导细胞凋亡的产生 ,能够增加细胞Fas蛋白的表达。结论 :蜂毒素高剂量有杀伤肿瘤细胞作用 ,低剂量可诱导细胞凋亡     

转铁蛋白与Bel-7402肝癌细胞耐药性关系的研究

目的 研究转铁蛋白与Bel-7402肝癌细胞耐药性的关系.方法 根据已知转铁蛋白序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测其在敏感Bel-7402细胞株、阿霉素抗性Bel-7402细胞株之间的表达水平差异.结果 成功扩增Bel-7402肝癌细胞转铁蛋白基因片段,荧光定量PCR表明转铁蛋白基因在阿霉素抗性Bel-7402细胞株的表达量是敏感Bel-7402细胞株4.83倍.结论 转铁蛋白基因对肝癌细胞的耐药发生发展存在一定的作用,可为研究肝癌耐药性的备选基因,以及为肝癌耐药性检测提供新的靶标.     

胡桃醌不同给药途径对人肝癌细胞BEL-7402裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的采用裸鼠皮下移植瘤模型,通过不同给药途径对胡桃醌抗肿瘤活性和毒性进行评价。方法建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过腹腔注射和局部注射两个给药途径观察胡桃醌抑制肿瘤生长的效果。结果①以600、300和150μg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,发现该剂量胡桃醌对肿瘤生长没有明显的影响;NK细胞活性检测发现,600、300μg/kg胡桃醌对裸鼠免疫功能有影响(P均<0.01),150μg/kg胡桃醌则没有影响(P>0.05);与阳性对照组(5-Fu)相比,600μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异无显著性(P>0.05),300和150μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异有显著性(P<0.05,P<0.01),结果提示胡桃醌对小鼠免疫系统有一定的损伤作用。②以4.5、3和1.5 mg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,抑瘤率分别为为78.24%、66.57%、48.94%;4.5、3 mg/kg胡桃醌的抑瘤作用可与阳性对照组比拟(P均>0.05)。但4.5 mg/kg胡桃醌组裸鼠出现明显的皮下脂肪减少、消瘦,并有死亡现象。③以pH...     

绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞株BEL-7402的杀伤效应

目的探索绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402的杀伤效应。方法采用MTT法检测不同浓度的绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402增殖的作用,同时利用电子显微镜、透射电镜观察细胞BEL-7402的形态学变化。结果MTT检测表明：绿脓杆菌制剂为10×107/mL、5×107/mL、2.5×107/mL时对肝癌细胞生长杀伤作用与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）;电子显微镜、透射电镜观察发现肝癌细胞BEL-7402于12、24 h出现凋亡形态学改变,40 h形态学表现为凋亡与坏死并存。结论绿脓杆菌制剂对肝癌细胞BEL-7402生长有抑制作用,诱导细胞凋亡及坏死可能是主要作用机制。     

人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株的建立及其生物学特性观察

目的:建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。方法:采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的诱导方法建立5-FU获得性BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。MTT法检测耐药细胞株对多种化疗药物的交叉耐药性。观察其细胞形态学、生长曲线、倍增时间、平板克隆形成率、贴壁率、细胞周期分布、染色体核型以及裸鼠致瘤性。流式细胞术检测阿霉素在亲本及耐药细胞株内的积聚量。免疫细胞化学法检测胸苷酸合酶在耐药细胞内的表达。结果:成功建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株模型。该耐药细胞对阿霉素、长春新碱、奥沙利铂及甲氨蝶呤均有不同程度的交叉耐药性,但对羟基喜树碱仍较敏感。体外培养见细胞趋向群集性生长。耐药细胞株倍增时间较亲本细胞株长,克隆形成率则较亲本细胞株低,差异有统计学意义。耐药细胞贴壁率在23、h明显低于亲本细胞株,其G0/G1期细胞分布比率较低而S期比率明显增加。阿霉素在耐药细胞株内的积聚量低于亲本细胞株,耐药细胞株胸苷酸合酶的蛋白表达量较亲本细胞株明显增强。结论:人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株可以成为研究5-FU获得性耐药机制及开展多药耐药逆转剂筛选较好的体外模型。     

人肝癌细胞系BEL-7402的放射敏感性

目的　评估人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２的放射敏感性。方法　体外培养人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２,应用集落形成法测　　　　定经０～１０Ｇｙ　６　ＭＶ　Ｘ线照射后细胞的存活率并计算细胞放射敏感性参数。结果　　ＢＥＬ－７４０２的Ｄ０为　１．６　Ｇｙ,Ｄｑ为　１．３　　　　Ｇｙ,ｎ为２．４,ＳＦ２为（０．６３±０．０５）Ｇｙ。结论ＢＥＬ－７４０２具有较高的放射敏感性。     

黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响

目的探讨黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响及其机制.方法应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,不同浓度黄芩甙处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其侵袭力、粘附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞MMP2、TIMP2、integrin β1、E-cd表达的改变.结果黄芩甙能明显抑制肝癌细胞侵袭力、粘附力及运动能力(P＜0.05),随浓度提高作用增强.形态学观察发现,黄芩甙处理组细胞形态较圆,伪足数目较少.黄芩甙处理组MMP2阳性表达细胞减少,TIMP2阳性表达细胞增多,MMP2/TIMP2比值下降;integrin β1表达增加,E-cd的表达则减低(P＜0.05).结论黄芩甙能抑制肝癌BEL-7402细胞侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达及抑制粘附分子E-cd的表达,促进integrin β1表达有关.     

BEL-7402肝癌细胞株的生长抑素受体放射分析

目的探讨生长抑素受体在肝癌细胞株中的表达. 方法用125I-[Tyr3]-octreotide作为生长抑素受体的放射性配体,检测肝癌细胞株BEL-7402上受体位点数和亲和常数.结果受体放射分析显示肝癌细胞株BEL-7402上的生长抑素受体与125I-[Tyr3]-octreotide的结合可以达到较满意的饱和曲线;表达的生长抑素受体位点数为1.0×105个/细胞,位点数多;与octreotide的平衡解离常数(Kd)为0.24×10-9 mol/L,亲和力强. 结论肝癌细胞株上有生长抑素受体表达,密度高,且与临床常用药octreotide有较好的亲和力.     

肝肿瘤细胞中环氧合酶2与血管内皮生长因子表达的关系

目的：探讨肝肿瘤细胞环氧合酶2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)关系。方法：培养肝癌细胞株(BEL-7402)提取mRNA,用ELISA方法检测细胞培养基中VEGF水平,用RT-PCR分别检测COX-2和VEGF的mRNA。结果：正常培养的肝癌细胞能同时检测到COX-2和VEGF的mRNA;COX-2抑制剂赛来昔布(celecoxib,商品名：西乐葆)能抑制VEGF的表达;COX-2在mRNA水平调控VEGF的表达。结论：COX-2在VEGF的分泌与合成中起重要作用,从而影响肿瘤新生血管生成及肿瘤生长。