同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖与细胞凋亡的影响

目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及凋亡的影响。方法采用组织贴块法体外培养人VSMCs,将不同浓度Hcy与VSMCs孵育不同时间,应用MTT法检测VSMCs细胞增殖、流式细胞术(FCM)检测VSMCs细胞凋亡。结果体外培养的人VSMCs在终浓度为500μmol/L Hcy的培养液中孵育0h、6h、12h、24h、48h后的A值分别为0．504±0．053、0．586±0．043、0．625±0．031、0．683±0．087、0．812±0．147,细胞凋亡率分别为2．39％±0．47％、2．45％±0．96％、7．58％±2．02％、13．37％±4．71％、17．69％±3．13％,表明Hcy呈时间依赖性诱导人VSMCs细胞增殖和细胞凋亡；在终浓度分别为0、100、200、500、1000μmol/L Hcy的培养液中孵育24h后的A值分别为0．549±0．067、0．616±0．121、0．644±0．095、0．685±0．139、0．846±0．142,细胞凋亡率分别为2．68％±0．23％、2．79％±0．89％、8．45％±2．41％、13．41％±4．98％、17．75％±5．56％,表明Hcy呈浓度依赖性诱导人VSMCs细胞增殖和细胞凋亡。结论Hcy可以诱导VSMCs增殖和细胞凋亡,这一双重作用可能是Hcy致动脉粥样硬化作用的机制之     

同型半胱氨酸诱导离体培养的血管内皮细胞凋亡

目的 :了解同型半胱氨酸 (HCY)对血管内皮细胞 (VEC)凋亡的形响。方法 :用不同浓度的HCY处理离体培养的大鼠VEC24h ,用末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)介导的荧光素d -uTP缺口末端标记方法 (TUNEL)原位检测细胞凋亡 ,以TUNEL指数 (TUNELI)表示凋亡。结果 :正常对照培养条件下 (2 %FBS)VEC经历低频凋亡 ,其TUNELI为5.8±2.5。培基中加入浓度为0.1mmol/L的HCY ,凋亡细胞数开始增加 (TUNELI为12.6±4.4) ,但差异无显著性 (与对照比P>0.05) ;培基中HCY浓度为0.5mmol/L时 ,凋亡细胞明显增加 (TUNELI为22.4±6.4 ,与对照比 ,P<0.05) ,当培基中HCY浓度增加到1.0mmol/L时 ,将近一半的VEC经历凋亡性细胞死亡 (TUNELI为44.5±11.2 ,与0.1mmol/LHCY组比 ,P<0.05)。结论 :HCY浓度依赖性诱导VEC凋亡 ,VEC凋亡异常可能是动脉粥样硬化 (AS)发生的重要原因之一。     

细胞流式术检测同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 应用流式细胞术检测同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管平滑肌细胞凋亡,进一步探索同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制.方法 采用组织贴块法培养人血管平滑肌细胞,FITC荧光标记PI/Annexin V染色后,流式细胞术检测Hcy诱导的平滑肌细胞凋亡率.结果 在Hcy不同浓度下(100、200、500、1 000 μmol/L)培养24 h后平滑肌细胞的凋亡率分别是2.64%±0.14%、8.36%±2.47%、12.97%±4.86%、24.15%±5.46%,对照组在0 μmol/L的Hcy培养液中细胞的凋亡率为2.58%±0.32%;用终浓度(1 000 μmol/L)的Hcy培养液分别培养0、6、12、24、48 h后平滑肌细胞的凋亡率分别是2.29%±0.52%、8.45%±2.42%、13.45%±4.42%、24.15%±5.46%、32.75%±4.72%.Hcy诱导人血管平滑肌细胞凋亡成时间及浓度依赖性增加.结论 同型半胱氨酸可诱导平滑肌细胞过度凋亡,促进平滑肌细胞过度凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化及斑块不稳定性的机制之一.     

同型半胱氨酸诱导人血管平滑肌细胞组织因子的表达

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)诱导人血管平滑肌细胞(VSMCs)表达组织因子(TF)的作用。方法采用组织贴块法培养人脐动脉 VSMCs,应用α-actin 免疫组化法鉴定细胞；将不同浓度的 Hcy 与 VSMCs 孵育,采用半定量 RT-PCR 检测细胞 TF mRNA 表达,流式细胞技术(FCM)检测细胞表面 TF 蛋白水平。结果终浓度分别为0、10、100、 500、1000μmol/L 的 Hcy 作用4 h,Hcy 浓度为10μmol/L 时,TF 表达开始升高,500μmol/L 达峰值,Hcy 呈剂量依赖性诱导 VSMCs 表达 TF mRNA；100μmol/L Hcy 作用0、1、2、3、4、8、24 h,2 h 时 TF 表达明显增加,8 h 达峰值,24 h 表达回到基础水平,Hcy 呈时间依赖性诱导 VSMCs 表达 TF mRNA；VSMCs 细胞膜表面有低水平的 TF 蛋白表达,终浓度分别为0、 10、100、500、1000μmol/L Hcy 作用4 h,10μmol/L 即可诱导 VSMCs 表达 TF 蛋白,1000μmol/L 达高峰,Hcy 呈剂量依赖性诱导 VSMCs 表达 TF 蛋白；终浓度为100μmol/L Hcy 作用0、1、2、4、8、16、24 h,2 h 时 TF 开始表达升高,Hcy 呈时间依赖性诱导 VSMCs 表达 TF 蛋白。结论 Hcy 呈时间依赖性和剂量依赖性诱导 VSMCs 表达 TF,可能是 Hcy 导致 AS 和冠心病等疾病发生发展的重要机制。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖规律及凋亡的影响。方法：用MTT、细胞计数和^3H-TdR掺入法研究不同浓度和作用时间下AngⅡ对VSMCs增殖的影响；用流式细胞技术研究AngⅡ对VSMCs周期与凋亡的影响；用透射电镜观察AngⅡ作用下VSMCs超微结构的变化。结果：AngⅡ能促进VSMCs增殖，在一定范围内，其作用强度与AngⅡ浓度及作用时间呈正相关；AngⅡ在高浓度(10^-4mol／L)时，使VSMCs凋亡率增加：AngⅡ促使细胞周期由G0／G1向S／G2-M期转变，使细胞由收缩表型向合成表型转变。结论：AngⅡ对VSMCs的促增殖作用具有剂量和时间依赖性，大剂量AngⅡ有诱导VSMCs凋亡的倾向。     

同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞致动脉粥样硬化的研究

1969年Mc Cully等报告了年轻的心血管疾病患者血浆中同型半胱氨酸(Hcy)水平较高,首次提出高Hcy和动脉粥样硬化(AS)之间可能存在病理联系。在以后近四十年的研究中,人们通过大量的流行病学调查提出高同型半胱氨酸血症(HHC)是致AS的一个新的、独立的危险因素,从而解释了一些冠心病患者在排除年龄、血脂异常、高血压、吸烟、糖尿病或糖耐量异常、肥胖等传统的危险因素以外,也罹患冠心病的原因。血管平滑肌细胞(VSMCs)是AS过程中的主要细胞成分之一,现将VSMCs在Hcy致AS中的研究综述如下。1高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinaem ia,HHC)的成因Hcy是一种含巯     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖周期的影响

目的研究表明,动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的独立危险因子,同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）,能通过促进血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖而影响AS的发生,但Hcy与VSMCs增殖之间的关系,目前并不清楚。本研究采用不同浓度的Hcy刺激原代培养的脐静脉VSMCs,分析Hcy对VSMCs增殖周期的影响。方法常规培养人脐带VSMCs,将培养的VSMCs分为,0、50、100、200、500及1000μmol／LHcy组,其中Opmol／LHcy组为对照组。当VSMCs细胞长满80％瓶底时,各组加入不同浓度的Hcy,继续培养细胞24h和48h,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态,采用MTT法检测VSMCs的增殖活力,采用流式细胞技术分析VSMCs的增殖周期。结果当Hey刺激VSMCs24h和48h后,VSMCs的数目增多,细胞的活力增加（P〈0．05）;同时VSMCsS期细胞减少,G2／M期细胞增多,G0／G1细胞基本不变。结论1．Hcy可直接诱导VSMCs的增殖;2．Hcy促进VSMCs从S期向G2／M期转变。     

蜕皮甾酮对同型半胱氨酸诱导人血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨蜕皮甾酮对同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞株CRL-1730凋亡的影响.方法 体外常规培养人血管内皮细胞CRL-1730,细胞计数试剂盒法检测蜕皮甾酮对CRL-1730细胞增殖活力的影响;Hcy处理人血管内皮细胞CRL-1730建立损伤模型,分组为空白对照组、蜕皮甾酮高剂量组(Hcy+1.5μmol/L蜕皮甾酮)、蜕皮甾酮中剂量组(Hcy+1.0μmol/L蜕皮甾酮)、蜕皮甾酮低剂量组(Hcy+0.5μmol/L蜕皮甾酮)、Hcy组;流式细胞术检测CRL-1730细胞凋亡率,并利用荧光染色进行细胞凋亡形态学观察;RT-PCR法检测CRL-1730细胞内Bax、Bcl-2及Caspase-3基因的表达;采用Western blot法检测CRL-1730细胞内Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3蛋白表达.结果 所选浓度蜕皮甾酮对CRL-1730细胞增殖活性无明显影响;流式细胞术结果显示经Hcy处理后的CRL-1730细胞凋亡率明显增高,但经过不同浓度的蜕皮甾酮处理后,Hcy诱导的CRL-1730细胞凋亡率明显下降;与空白对照组比较,Hcy组CRL-1730细胞Bax和cleaved-Caspase-3的表达明显增高,Bcl-2的表达明显降低,差异有统计学意义.与Hcy组比较,经过低、中、高剂量蜕皮甾酮处理后,Hcy诱导的CRL-1730细胞Bcl-2表达上调,Bax和cleaved-Caspase-3表达下调;与空白对照组比较,Hcy组CRL-1730细胞Bax mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显增高,Bcl-2 mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义.与Hcy比较,经过低、中、高剂量蜕皮甾酮处理后,CRL-1730细胞Bcl-2 mRNA表达上调,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA表达下调.结论 蜕皮甾酮对Hcy诱导人脐静脉内皮细胞CRL-1730凋亡具有保护作用,这为其治疗心血管疾病提供了依据.     

血管活性肽对同型半胱氨酸刺激平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 观察对兔主动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖起负调节作用的Ｃ－型利钠利尿肽（ＣＮＰ）、肾上腺髓质素（Ａｄｍ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、生长抑素（ＳＳＴ）和甲状旁腺素相关蛋白（ＰＴＨｒＰ）等活性肽对同型半胱氨酸（Ｈｃｙ）刺激的ＶＳＭＣ增殖的影响。方法 ６只大耳白兔胸主动脉贴块法离体培养平滑肌细胞;分对照及Ｈｃｙ加不同处理因素组;＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入测定ＶＳＭＣ增殖;差速离心分离细胞膜、胞浆及胞     

维生素E抑制同型半胱氨酸介导的血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨在同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中,活性氧(ROS)的作用和维生素E的影响.方法 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷掺人法测定细胞DNA合成率,锥虫蓝染色计数细胞数量,DCF-DA荧光探针测定细胞内ROS.结果 (1)同型半胱氨酸诱导VSMC的DNA合成增加,促进细胞增殖和ROS水平升高;尽管半胱氨酸诱导VSMC内ROS水平升高,但是对细胞DNA合成和增殖无影响.(2)过氧化氢酶抑制同型半胱氨酸介导的VSMC内ROS升高,而对VSMC增殖无影响.(3)α-生育酚、β-生育酚均可抑制同型半胱氨酸诱导VSNC内ROS水平升高,但是只有α-生育酚显著抑制VSMC增殖.结论 ROS升高不是同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖的原因之一.维生素E降低同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖可能与抑制蛋白激酶C活性有关,而与它的抗氧化性无关.     

一氧化氮诱导VSMC凋亡观察

目的研究动脉粥样硬化和冠脉气囊成形术后再狭窄中血管平滑肌细胞数量异常增多的机制,并初步探讨ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用。材料和方法　以ＳＮＡＰ作为ＮＯ供体,采用ＨＥ,ＴＵＮＥＬ,荧光双染后光镜观察以及电镜、流式细胞术、细胞ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳对ＳＮＡＰ作用下的细胞凋亡进行鉴定和检测。结果　观察发现, ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ　 ＳＮＡＰ作用 ８－１０ ｈ即能明显地诱导培养的血管平滑肌细胞凋亡。结论 ＳＮＡＰ以浓度依赖方式诱导血管平滑肌细胞凋亡;细胞爬片的ＨＥ染色结合ＴＵＮＥＬ标记是检测凋亡的较为准确且简单的方法。     

同型半胱氨酸对大鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的： 验证同型半胱氨酸（Hcy）是否具有促进大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）去分化的作用。 方法： SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4～7代细胞用于实验。VSMCs分为对照组、100 μmol/L Hcy干预组、500 μmol/L Hcy干预组、1 000 μmol/L Hcy干预组共4组。MTT法测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况;ICC法检测各组VSMCs的细胞形态;Western blot法检测各组VSMCs中SM-actin、SM-MHC、Calponin、骨桥蛋白（OPN）的表达情况。 结果： 相比于对照组,Hcy组VSMCs增殖迁移增加;细胞形态变圆;SM-MCH和Calponin表达减少（ P＜0.01〉;OPN表达增加（ P＜0.01）,Hcy的这一作用与浓度呈正相关。 结论：Hcy可以促进VSMCs去分化,这可能是其促进VSMCs增殖和迁移的机制之一。     

平滑肌细胞凋亡对血管球囊损伤后内膜增殖的影响

目的：探讨血管球囊损伤后内膜增殖的机制。方法：采用电镜、末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学技术检测球囊损伤后血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）凋亡及新生内膜面积的变化。结果：球囊损伤后血管壁增生,球囊损伤后第３天,血管中层出现凋亡的平滑肌细胞（ＳＭＣ）;损伤后第７天,新生内膜形成内膜面积的变化。结果：球囊损伤后血管壁增生,球囊损伤后第３天,血管中层出现凋亡     

大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 观察大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法 采用培养的兔血管平滑肌细胞，应用^3H～TdR掺入法，观察在血管紧张素Ⅱ促进VSMC增殖过程中，大蒜素对血管平滑肌细胞DNA合成的影响及其时间效应。结果 血管紧张素Ⅱ可促进处于静止状态的兔血管平滑肌细胞DNA的合成，36h时细胞DNA的合成达到高峰。大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用，并呈现出明显的浓度依赖关系，随着大蒜素表度的升高其对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用也逐渐增加，在24h时，10．00g／L的大蒜素对血管平滑肌细胞增殖的抑制率为13．46％。结论 大蒜素可抑制血管紧张素Ⅱ诱导兔血管平滑肌细胞的增殖，并存在一定的量效依赖关系及时间反应性。     

雷公藤甲素对兔血管平滑肌细胞增生和凋亡的影响

目的 研究雷公藤甲素（TP）是否具有抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖并诱导其发生凋亡的作用,为临床开发新型药物洗脱支架提供实验依据。方法主动脉SMCs体外培养和流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳。结果TP组与阳性对照地塞米松相比,凋亡率有显著提高;TP干预组凝胶电泳谱型呈凋亡特征性梯状条带。结论TP可抑制指数生长期SMCs增殖并诱导其凋亡。     

他汀类药物对血管平滑肌细胞的影响及机制

心血管疾病尤其是冠状动脉硬化性心脏病具有很高的死亡率和发病率,对这些冠脉疾病的病因分析,认为动脉粥样硬化是主要原因。动脉壁脂质沉积和血管平滑肌细胞的异常迁移与增殖是动脉粥样硬化形成的两个关键步骤。目前抗动脉粥样硬化以调脂药物如三羟基三甲基戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶抑制剂（即他汀类药物）为主,临床实验和基础研究表明：他汀类药物不仅具有调控血浆胆固醇的主要作用,而且还涉及其非调脂的抗动脉粥样硬化作用,如抗炎症反应、抑制血小板聚集、抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移、促进血管平滑肌细胞凋亡和改善内皮功能等。本文主要就他汀类药物对血管平滑肌细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其机制做如下综述。     

超声辐照对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察超声波辐照对培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响,筛选防止介入治疗后血管再狭窄的辐照参数,并探讨其机理.方法:单声源压电陶瓷超声辐照系统声强连续可调,台盼蓝排斥实验分析辐照后即刻细胞存活率;MTT比色法描述辐照后5天VSMCs的生长动力学变化;BrdU掺入法检测辐照对VSMCs S期DNA复制的影响;ELISA法检测辐照后VSMCs凋亡情况.结果:1.超声辐照对培养的VSMCs有直接杀伤作用,该作用随辐照强度和辐照时间的增加而增加,相同辐照强度和时间下,低频超声该作用更显著.2.超声辐照组较对照组VSMCs生长曲线平缓,0.705MHz组以0.5W/cm2,5min辐照最为明显.3.BrdU掺入法测定S期细胞增殖发现,0.705MHz,0.5W/cm2,5min辐照组BrdU%低于对照组(40.5%±6.8%vs55.8%±3.3%,P＜0 05).4.0.705MHz,0.5W/cm2,5min辐照的凋亡富积因子与阳性对照相比为1.851±0.087vs1.924±0.074,P=0.836.结论:0.705MHz,0.5W/cm2,5min超声辐照在无明显杀伤细胞的情况下诱导培养的VSMCs凋亡,阻止VSMCs S期DNA复制,提示USE是一种潜在的治疗介入治疗后血管再狭窄的手段.     

巨噬细胞ADAM8诱导血管平滑肌细胞去分化

目的研究巨噬细胞去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)过表达对血管平滑肌细胞去分化的影响。 方法利用生物信息学筛选小鼠腹主动脉瘤和人胸主动脉夹层差异表达基因。巨噬细胞转染ADAM8过表达质粒,并收集巨噬细胞培养基处理血管平滑肌细胞。qPCR和Western blotting检测细胞ADAM8表达水平;细胞划痕实验、Edu染色实验分别检测血管平滑肌细胞迁移能力和增殖能力。qPCR检测过表达ADAM8的巨噬细胞培养基对血管平滑肌细胞分化标志基因表达水平的影响。 结果ADAM8基因在人胸主动脉夹层和小鼠腹主动脉瘤病变过程中显著上调(P＜0.05),且在脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应过程中也显著增加(P＜0.05)。巨噬细胞过表达ADAM8诱导细胞炎症反应和基质金属蛋白酶(MMP)表达,同时过表达ADAM8的巨噬细胞培养基促进血管平滑肌细胞的迁移和增殖能力,但显著抑制血管平滑肌细胞分化标志基因α-actin和α-tropomyosin的表达水平(P＜0.05)。 结论巨噬细胞ADAM8促进炎症因子和MMP表达并诱导血管平滑肌细胞的去分化。     

腺病毒介导过表达ANT1基因诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的利用腺病毒载体转染体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),研究过表达腺嘌呤核苷酸转位酶1(adenine nucleotide translocase 1,ANT1)对大鼠VSMCs凋亡的影响。方法用携带ANT1的腺病毒载体(Ad-ANT1)或空载体腺病毒载体(Ad-GFP)感染VSMCs,采用激光共聚焦观察Hoechst33258染色后细胞凋亡情况,流式细胞术检测Annexin V标记细胞凋亡率。Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果激光共聚焦观察转染Ad-ANT1后48 h细胞出现凋亡,且凋亡率[(13.40±1.14)%]与转染空载体对照组[(1.80±0.84)%]相比较差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术检测转染Ad-ANT1后48 h细胞凋亡率[(10.66±1.75)%]明显高于转染空载体组细胞[(3.13±0.37)%](P<0.05)。Western blot结果显示转染Ad-ANT1后Bax蛋白表达明显高于转染空载体组,Bcl-2蛋白表达2组比较无明显差异。结论腺病毒介导过表达ANT1可诱导大鼠VSMC的凋亡,其机制可能通过上调Bax实现。